نصف مقايسة matrigel لتوضيح إمكانات تولد الأوعية الدموية لمجموعة من العوامل التي تفرزها الخلايا السرطانية باستخدام طريقتين للتصوير التكميلي ، الموجات فوق الصوتية والفحص المجهري. يتم استخدام matrigel ، وهو هلام مقلد خارج الخلية (ECM) ، لإدخال المضيف (الفأر) بعوامل الأوعية الدموية التي تفرز في الوسائط التكييف (CM).
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
مراقبة وظائف والصرف من الأوعية الدموية تجنيده من قبل العوامل التي يفرزها الخلايا المولدة للورم النمو السريع
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وmatrigel تحت الجلد المكونات الفحص في الفئران هو الأسلوب المفضل لفي التقييم في الجسم الحي من العوامل المؤيدة والمضادة للعائية. في هذه الطريقة، يتم إدخال العوامل المطلوبة في السائل البارد ECM تقليد الجل الذي، بعد الحقن تحت الجلد، يتصلب لتشكيل بيئة محاكاة الوسط السرطان. هذه المصفوفة تسمح تغلغل الخلايا المضيفة، مثل الخلايا البطانية، وبالتالي، وتشكيل الأوعية الدموية.
وهنا نقترح تعديل مقايسة matrigel المكونات الجديدة التي يمكن استغلالها لتوضيح إمكانات عائية من مجموعة من العوامل التي يفرزها الخلايا السرطانية، بدلا من عامل معين (على سبيل المثال، bFGF وVEGF) أو وكيل. ويستخدم المكونات التي تحتوي على ECM تقليد هلام لتقديم المضيف (أي الماوس) مع مجموعة من العوامل يفرز إلى CM خلايا ورم أرومي دبقي مدرة للورم سريعة النمو. وصفناها سابقا المقارنة واسعة من إمكانيات عائية منU-87 MG ورم أرومي دبقي البشري واستنساخ لها نائمة المشتقة، في هذا النموذج نظام، والتي تبين الأوعية الدموية التي يسببها في U-87 خلايا MG الأبوية. تم إعداد CM من خلال تصفية وسائل الإعلام التي تم جمعها من لوحات زراعة الأنسجة متكدسة إما خط الخلية التالية 48 ساعة الحضانة. وبالتالي، فإنه يحتوي على العوامل الوحيدة التي يفرزها الخلايا، دون الخلايا نفسها. الموصوفة هنا هو مزيج من اثنين من طرائق التصوير، microbubbles محسنة النقيض التصوير بالموجات فوق الصوتية وحيوي داخلي-فيبيريد متحد البؤر endomicroscopy، لدقيقة، في الوقت الحقيقي توصيف ما، مورفولوجيا وظائف الأوعية الدموية التي شكلت حديثا داخل المقابس.
المقدمة
ووصف الأوعية الدموية matrigel المكونات فحص أول مرة من قبل Kibbey وآخرون في عام 1992، حيث كان يستخدم لتقييم تحفيز الأوعية الدموية التي SIKVAV الببتيد (سر إيل-ليز-فال-علاء-فال) 1. وعلى النقيض من غيرها من فحوصات الأوعية الدموية في الجسم الحي، مثل الأوعية الدموية القرنية الماوس أو فرخ المقايسات غشاء سقائية مشيمائية، هذا الاختبار هو سهل نسبيا لأداء 2. قد تحتوي على حقن ECM تقليد هلام الخلايا، الموالية للعائية أو المركبات المضادة للعائية و / أو عوامل. عند تقييم نشاط مركب المضادة للعائية، والمكونات يحتوي عادة على مزيج من العوامل الوعائية البطانية النمو (VEGF)، وعامل نمو الخلايا الليفية (جمعية جيل....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية ويؤديها في الامتثال للمعايير مدرسة جامعة تل أبيب ساكلر الطب المؤسسي رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام (IACUC).
1. مكيفة تحضير الوسائط
- البذور 2 × 10 6 U-87 خلايا MG في لوحة الثقافة 10 سم في حجم 8 مل المتوسطة المعدلة النسر Dulbecco لفي (DMEM) تستكمل مع المصل 10٪ بقري جنيني (FBS) و 1٪ محلول pencillin / الستربتومايسين / نيستاتين.
- احتضان خلايا في 37 ° C. 5....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
زرع سدادات هلام ECM مع تقليد CM من النمو السريع عائية خط الخلية المولدة للورم U-87 MG، والنتائج في الأوعية الدموية واسعة النطاق. هذه الأوعية الدموية يمكن استكشافها على نطاق واسع باستخدام طريقتين التصوير التكميلية.
Microbubbles التصوير الولايات المتحدة تعزيز النقيض يكشف تجنيد واسعة من الأوعية الدموية وظيفية في المكونات التي توضح تدفق الدم واسعة النطاق داخل U-87 MG CM المقابس المحملة، في مقابل تدفق الدم لا يمكن الك.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الجمع بين أساليب التصوير التكميلية يسمح تحصيل معلومات عن microvessel كثافة، وظائف الأوعية الدموية مكونات مختلفة "والتشكل. CM تحميل على المقابس هلام ECM تقليد يولد المكروية الورم، التي لا يفصلها عن السكان الخلية الأخرى، مثل الخلايا البطانية، أن يتم تجنيد ويتسرب إلى المكونات.
عن طريق أداء، في موازاة ذلك، microbubbles محسنة النقيض التصوير الولايات المتحدة وفيبيريد التصوير endomicroscopy متحد البؤر، يمكننا أن نس.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
يتم دعم مختبر أبحاث Satchi-Fainaro جزئيا من قبل جمعية أبحاث السرطان الدولية (AICR) ، والمؤسسة الألمانية الإسرائيلية (GIF) ، ومؤسسة العلوم الإسرائيلية (المنحة رقم 1309/10) ، وجائزة الجسر السويسري ، ومنح من المبادرة الوطنية الإسرائيلية لتكنولوجيا النانو (INNI) ، وبرنامج مجال التكنولوجيا البؤرية (FTA): الطب النانوي للثيرانوستيك الشخصي ، ومن قبل صندوق ليونا إم وهاري ب. هيلمسلي لأبحاث تكنولوجيا النانو.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| المبخر الفراغي الدوار | - | -- | |
| عوامل النمو خفضت Matrigel BD Bioscience الخالية من الفينول | FAL356231 | ذوبان الجليد بين عشية وضحاها ، عند 4 درجات ؛ C على | |
| كريم إزالة الشعر من | - | -- | |
| نظام التصوير الأمريكي Vevo2100 | VisualSonics Inc. | - | يتطلب معرفة سابقة في التشغيل أو مساعدة فني معتمد |
| 55 ميجاهرتز 708 مسبار | VisualSonics Inc. | - | |
| برنامج التصوير Vevo2100 | VisualSonics Inc. | - | |
| VialMix | DEFINITY Imaging | VMIX-DEFINITY | |
| microbubbles | DEFINITY Imaging | DE4 | تنشيط لمدة 45 ثانية باستخدام VialMix قبل الاستخدام |
| CellVizio (المجهر الداخلي متحد البؤر الليفي) | Mauna Kea Technologies | - | يتطلب معرفة سابقة في التشغيل أو مساعدة فني معتمد |
| ProFlex MiniO / 30 مسبار | Mauna Kea التقنيات | - | |
| 70 كيلو دالتون ديكستران | سيجما ألدريتش | 46945 | - |
| برنامج ImageCell | Mauna Kea | Technologies - | |
| مجموعة المعايرة | Mauna Kea Technologies | - | |
| Dulbecco s النسر المعدل s متوسط (DMEM) | Gibco Life Tecchnologies | 41965-039 | |
| مصل الأبقار الجنينية (FBS) | الصناعات البيولوجية | 04-007-1A | |
| محلول البنسلين / الستربتومايسين / النيستاتين | الصناعات البيولوجية | 03-032-1B |
المراجع
- Kibbey, M. C., Grant, D. S., Kleinman, H. K. Role of the SIKVAV site of laminin in promotion of angiogenesis and tumor growth: an in vivo Matrigel model. J Natl Cancer Inst. 84, 1633-1638 (1992).
- Passaniti, A., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
