الصدمة الدماغ الحاد هو إصابة الشديدة التي لا يوجد لديه العلاج المناسب حتى الآن. Multiphoton المجهري يسمح دراسة طوليا عملية التنمية الصدمة الدماغ الحادة وسبر الاستراتيجيات العلاجية في القوارض. وأظهرت نموذجين من الصدمة الدماغ الحادة درس في الجسم الحي مع اثنين من الفوتون التصوير من الدماغ في هذا البروتوكول.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الصدمة الحادة الدماغ في الفئران تليها الطولية التصوير ثنائي الفوتون
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
على الرغم من الصدمة الدماغ الحادة غالبا ما ينجم عن تلف الرأس في حوادث مختلفة ويؤثر على جزء كبير من السكان، لا يوجد علاج فعال لذلك حتى الآن. القيود المفروضة على نماذج حيوانية المستخدمة حاليا تعيق فهم آلية الأمراض. Multiphoton المجهري يسمح دراسة الخلايا والأنسجة داخل أدمغة الحيوانات سليمة طوليا في ظل الظروف الفسيولوجية والمرضية. هنا، نحن تصف نموذجين من إصابات الدماغ الحادة درس عن طريق التصوير ثنائي الفوتون من السلوك خلايا الدماغ في ظل ظروف ما بعد الصدمة. وأصيب المنطقة من المخ اختيارها بإبرة حادة لإنتاج الصدمة بعرض للرقابة وعمق في لحمة الدماغ. يستخدم أسلوب لدينا وخز التجسيمي مع إبرة حقنة، والتي يمكن دمجها مع التطبيق المتزامن المخدرات. نقترح أن هذه الطريقة يمكن أن تستخدم أداة متقدمة لدراسة الآليات الخلوية من العواقب المرضية في جسم المريض من صدمة حادة في الدماغ في الثدييات
المقدمة
إصابات الدماغ الحادة مشكلة صحية عامة كبيرة مع ارتفاع معدل الإصابة في حوادث السيارات، والسقوط أو الاعتداءات، وارتفاع معدل انتشار الإعاقة المزمنة لاحقة. يبقى النهج العلاجي لعلاج إصابات الدماغ أعراض تماما، مما يحد من فعالية الرعاية قبل دخول المستشفى والجراحية والحرجة. وهذا يجعل الأثر الاجتماعي والاقتصادي للإصابات الدماغ الحادة بشكل خاص. لمجموعة متنوعة من الأسباب، فإن معظم التجارب السريرية لم تثبت تحسنا في الانتعاش بعد إصابات الدماغ باستخدام أساليب علاجية جديدة.
النماذج الحيوانية ذات أهمية حاسمة لتطوير استراتيجيات علاجية جديدة نحو مرحلة حيث يمكن التنبؤ نجاعة الأدوية في المرضى الذين يعانون من إصابات في المخ. في الوقت الحاضر، العديد من النماذج الحيوانية راسخة من صدمات الرأس موجودة، بما في ذلك تأثير تسيطر القشرية 1، السائل إصابة قرع 2، تشوه القشرية ديناميكية 3، الوزن الإفلات4، وإصابة 5 الصورة. وقد استخدمت عدد من نماذج تجريبية لدراسة بعض الجوانب الشكلية والجزيئية والسلوكية للرئيس علم الأمراض المرتبطة الصدمة. ومع ذلك، لا يوجد نموذج حيوان واحد هو ناجحة تماما في التحقق من صحة استراتيجيات علاجية جديدة. تطوير نماذج حيوانية يمكن الاعتماد عليها، والتي تسيطر استنساخه من إصابات الدماغ هو ضروري لتقييم العمليات المرضية المعقدة.
مزيج رواية من أحدث تقنيات التصوير المجهري وصحفيين الفلورسنت المشفرة وراثيا يوفر فرصة غير مسبوقة لتحقيق في جميع مراحل إصابات الدماغ، والتي تشمل الإصابة الأولية، وانتشار الإصابة الأولية والإصابة الثانوية، والتجدد. على وجه الخصوص، في الجسم الحي اثنين من الفوتون المجهري هو التكنولوجيا البصرية غير الخطية الفريدة التي تسمح التصور في الوقت الحقيقي من الهياكل الخلوية وحتى التحت خلوية في الطبقات القشرية العميقة من الدماغ القوارض. عدة أنواع من الخلايا وورشولا يمكن تصوير nelles في وقت واحد من خلال الجمع بين علامات الفلورسنت مختلفة. باستخدام هذه الأداة القوية، يمكننا تصور التغيرات المورفولوجية والوظيفية الحيوية في الدماغ يعيشون في ظل ظروف ما بعد الصدمة. وقد أظهرت مزايا في الجسم الحي اثنين من الفوتون المجهري في دراسة إصابات الدماغ مؤخرا كيروف والزملاء 6. باستخدام نموذج كدمة خفيفة التنسيق القشرية، أظهر الباحثون أن هذه الإصابة شجيري الحاد في القشرة pericontusional وبوابات من انخفاض في تدفق الدم المحلية. وعلاوة على ذلك، فإنها أظهرت أن القشرة للخطر عملية الأيض حول الموقع كدمة تلف مزيد من الاستقطاب الانتشار. هذا الضرر الثانوي يؤثر الدوائر متشابك، مما يجعل عواقب إصابات في الدماغ أكثر شدة.
هنا، نقترح طريقة وخز التجسيمي مع إبرة حقنة، والتي يمكن أن تكون مجتمعة في وقت واحد مع تطبيق المخدرات الموضعية، كنموذج متقدم للدماغ المحليةإصابة وكأداة لدراسة العواقب المرضية في جسم المريض من الصدمة الحادة في الدماغ في الثدييات في الجسم الحي.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم تنفيذ كافة الإجراءات المعروضة هنا وفقا لتوجيهات المحلية لرعاية الحيوانات (والقانون الفنلندي على التجارب على الحيوانات 62/2006). تم الحصول على رخصة الحيوان (ESAVI/2857/04.10.03/2012) من السلطة المحلية (ELÄINKOELAUTAKUNTA-إيلا). الفئران البالغة من 1-3 أشهر العمر والوزن 24-38 غرام، تم وضعهم في أقفاص الفردية في منشأة الحيوان الجامعة معتمدة وتوفير الغذاء والماء بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية.
1. الدماغ التصوير الإصابات من خلال نافذة القحف
- التخدير الحيوانات وإعداد مجال العملية
- تخدير الفئران عن طريق الحقن البريتوني من مزيج من الكيتامين (Ketalar، 80 ملغ / كلغ) وزيلازين (Rompun، 10 ملغ / كلغ) المذاب في فلتر تعقيم العازلة الفوسفات المالحة (PBS)، ودرجة الحموضة 7.4. تحقق ردود الفعل الماوس، بانتظام (الذيل وأخمص القدمين قرصة التحقيق) للتحقق من عمق التخدير. زيادة الجرعة عند الاقتضاء، للحفاظ على التخدير المناسب ولكن تجنب overdبيئة نظام التشغيل.
- الحفاظ على الحيوانات في 37.0 درجة مئوية باستخدام وسادة التدفئة أثناء العملية الجراحية، ودورة التصوير وساعة الأولى بعد التعافي من التخدير.
- لحماية العينين الماوس، من الجفاف، وتطبيق مواد التشحيم العين.
- إدارة ديكساميثازون (Rapidexon التعليم والتدريب المهني، 2 ملغ / كلغ) عن طريق الحقن تحت الجلد لتخفيف الالتهاب والوذمة الدماغية.
- إدارة مسكن (على سبيل المثال، Ketoprophene الغشاء البريتونى) ما يصل إلى 30 دقيقة قبل أو مباشرة بعد الجراحة. إذا يسلك الحيوان أي أعراض الألم، مثل عدم الرغبة في التحرك، وتناول الطعام أو الشراب، أو فقدان الوزن، واللعاب، انتصاب الشعر، أو غير طبيعية في الجهاز التنفسي يبدو بعد الجراحة، كرر حقن مسكنة.
- يحلق 'رئيس الماوس مع آلة الحلاقة (انظر المواد والمعدات). تجنب إتلاف شعيرات.
- علاج الجلد على الرأس الماوس، مع 70٪ محلول الإيثانول لتنظيف المنطقة حليق.
- باستخدام مقص جراحي (انظر المواد والمعدات) وملقط (انظر المواد والمعدات)، وقطع الجلد من خط الوسط بين الأذنين إلى جبهته.
- كشط بلطف بعيدا النسيج الضام تعلق على الجمجمة بشفرة حادة المجهرية.
- الشريحة حدود الجلد وسحب قضبان جانبية الأذن قليلا في فتحات أذني من الجمجمة لتثبيت الرأس والجلد.
- تنظيف الجمجمة مع برنامج تلفزيوني العقيمة وعلاج موقع الجراحة على رأس الفأر مع 0.5٪ الكلورهيكسيدين digluconate، ثم تجف على سطح الجمجمة باستخدام مزيج من مسحات القطن المعقم والهواء المضغوط.
- إلحاق إصابة وخز
- وضع وثيقة التجسيمي الحيوانات الصغيرة مع صاحب الحيوان (انظر المواد والمعدات).
- ضبط موضع المجهر مجهر بجانب أداة التجسيمي للتركيز على سطح الجمجمة الحيوان.
- باستخدام مجهر مجهر، تحديد موقع نقطة bregma على الجمجمة.
- تحديد الناحيةن الاهتمام باستخدام الإحداثيات التجسيمي.
ملاحظة: تجنب تلك المناطق من الفائدة التي تقع مباشرة على السفن القشرية السطحية. تدمير هذه يمكن أن تؤثر بشدة على تطور الصدمة. - وضع إبرة G 30 فوق المنطقة المختارة وبمناسبة الموقع المستهدف من قبل خدش سطح الجمجمة.
- حفر الجمجمة مع جميع الاحتياطات الممكنة لتجنب اتساع لا لزوم لها من المساحة العظام المتضررة. استخدام الحفر الجراحية بسرعة عالية (انظر المواد والمعدات) تحت المجهر. وقف الحفر إذا ظهر السائل في منطقة حفر.
- تلمس الجزء السفلي من حفر جيدا مع الإبرة.
- تراجع الإبرة بسلاسة في الدماغ (معدل الإدراج 5-10 ملم / دقيقة)، على عمق 0.5-2.0 ملم وفقا لإحداثيات موقع التطبيق وخز.
- إزالة الإبرة مباشرة بعد الوصول إلى العمق المطلوب (معدل التراجع 5-10 ملم / دقيقة) ويمسح الدم التي تظهر بعد وخز مع حشا الصغيرة (حد ذاتهاالمواد الإلكترونية والمعدات).
- أداء Microinjection من 100 ميكرومتر Sulforhodamine 101 أو مركب آخر من الاهتمام إلى موقع الآفة باستخدام مضخة محقنة مكروية (WPI) و 10 ميكرولتر حقنة هاميلتون التجمع مع الزجاج ماصة.
ملاحظة: أثناء إعداد ماصة الزجاج من الزجاج البورسليكات الشعرية، وشحذ طرف ليبلغ قطرها 10-20 ميكرون. - يبث 250-1،500 NL من الحل حقن بمعدل 2-5 NL / ثانية.
ملاحظة: اترك ماصة بعد نهاية التسريب لمدة 5 دقائق على الأقل في حمة الدماغ، ثم إزالته ببطء وبلطف لمنع تدفق الحل.
- حج القحف لنافذة الجمجمة المزمن
- حفر الجمجمة برفق وبعناية لجعل نافذة دائرة حول موقع الإصابة. استخدام قطرها 3-3.5 ملم من النافذة.
- تطبيق قطرة من العازلة القشرة (125 ملي مول كلوريد الصوديوم، 5 ملي بوكل، 10 ملي الجلوكوز، 10 ملي HEPES، 2 مم CaCl 2 و 2 ملي MgSO 4 في المقطر H 2 O) لتغطية واينداو.
- ضع ساترة الزجاج الجولة (# 1.5 سمك) على نافذة الجمجمة.
- إزالة الزائدة من العازلة القشرة حول ساترة.
- ختم حواف ساترة مع الغراء polyacrylic (انظر المواد والمعدات).
ملاحظة: تأكد من أن لا يتم تطبيق الغراء على السطح العلوي للساترة. إذا لوثت غطاء زجاجي مع الغراء، والانتظار حتى يتم لصقها على الزجاج ثابت في الجمجمة والغراء على سطح الزجاج يحصل الجافة، ثم إزالة بعناية الغراء تلويث مع microblade. - الانتظار لمدة 5 دقائق للسماح للالغراء تجف.
- باستخدام مسامير ارتفاع شريط الأذن، وضبط الموقف الرأس بحيث يمكن وضعها على حامل معدني.
- تنطبق على كمية صغيرة من الغراء polyacrylic على عصابة من حامل الصلب (انظر المواد والمعدات).
- الغراء حلقة حامل الصلب إلى ساترة الزجاج مع مقبض حامل معدني موجهة إلى الوراء.
- الانتظار لمدة 5 دقائق للسماح للالغراء تجف.
- Mالتاسع الاسمنت الأسنان (انظر المواد والمعدات) مع الغراء polyacrylic في طبق بيتري 3.5 سم (أو التناظرية) لتحقيق شروط لزج.
- ختم حدود النافذة في الجمجمة مع خليط الأسمنت الغراء + وتغطية السطح المعرض من الجمجمة مع نفس الخليط حتى الحدود الجلد.
- الانتظار لمدة 15 دقيقة للسماح للاسمنت + خليط الغراء تجف ثم قم بإزالة قضبان الأذن.
- أداء ثنائي الفوتون الإثارة المجهرية (TPEM) التصوير لمنطقة الفائدة ومنطقة التحكم كما هو موضح في البروتوكول 3.
- بعد التصوير، والسماح للحيوان للتعافي من التخدير على وسادة التدفئة والحفاظ عليه في قفص الفردية تحت الملاحظة حتى الشفاء التام. يمكن إعطاء الطعام الرطب لتسهيل المضغ والماء.
2. إصابات الدماغ من خلال التصوير ضعفت الجمجمة
- تخدير الحيوانات وإعداد مجال العملية
- تخدير الماوس ويكون جاهزا لصدمة الاستقراءكما هو موضح في الخطوة 1.1.
- ترقق الجمجمة وإلحاق إصابة وخز
- وضع وثيقة التجسيمي الحيوانات الصغيرة مع صاحب الحيوان (انظر المواد والمعدات).
- ضبط موضع المجهر مجهر بجانب أداة التجسيمي للتركيز على سطح الجمجمة الحيوان.
- تحديد موقع نقطة bregma على الجمجمة باستخدام مجهر مجهر، وتحديد منطقة الدماغ ليتم تصويرها على أساس الإحداثيات المجسم ووضع علامة عليه بواسطة الخدش.
ملاحظة: يجب أن لا يكون موجودا الجمجمة موقف رقيق فوق أو قريب الغرز الجمجمة، كما هو خطر على استقرار الجمجمة في تلك المناطق. علاوة على ذلك، السفن والسحايا تقع تحت الغرز الجمجمة القشرية أو سحائي كبير من المحتمل أن يسبب التحف التصوير. - وضع حامل معدني مغلف مع الغراء فوق منطقة الفائدة على جمجمة الحيوان، وتطبيق الضغط الخفيف والانتظار لمدة 5 دقائق حتى يتم لصقها على حامل معدني بحزم في الجمجمة.
- خلط الاسمنت الأسنان (انظر المواد والمعدات) مع الغراء polyacrylic في 3.5 سم طبق بتري (أو التناظرية) لتحقيق شروط لزج.
- ختم حدود حامل معدني مع خليط الأسمنت الغراء + وتغطية السطح المعرض من الجمجمة مع نفس الخليط حتى الحدود الجلد.
- الانتظار لمدة 15 دقيقة للسماح للخليط الأسمنت والغراء تجف.
- شطف المنطقة الجمجمة ضعيفة والأجزاء المحيطة بها من حامل معدني عدة مرات مع برنامج تلفزيوني، بحيث يتم غسلها بقايا الغراء nonpolymerized بعيدا.
ملاحظة: ومن الأهمية بمكان لضمان مرفق مستقرة من الجمجمة إلى حامل. وهذا يتيح استقرار الإعداد خلال التصوير. - باستخدام وضع التكبير عالية من المجهر مجهر، وإزالة الطبقات العليا من عظم الجمجمة مع سرعة عالية الحفر الصغيرة لإنشاء منطقة الجمجمة ضعيفة من 0.5-1.5 ملم ~ في القطر. استخدام الهواء المضغوط أثناء الحفر لإزالة حطام العظام. أداء intermittentl الحفرذ أثناء إجراء رقيق من أجل تجنب الاحتكاك الناجم عن ارتفاع درجة الحرارة. تبريد باستخدام مثقاب الحل درجة حرارة الغرفة وتطبيق دوري عازلة لمنطقة ضعيفة لامتصاص الحرارة.
ملاحظة: لتجنب إتلاف القشرة، لا حفر على مناطق واسعة (> 1.5 مم) وصولا الى طبقة رقيقة (<50 ميكرون).
ملاحظة: يتكون هيكل القوارض عظم الجمجمة اثنين من طبقات رقيقة من العظم المضغوط مفصولة طبقة سميكة من العظم الإسفنجي. تجاويف صغيرة من شكل العظام والدوائر متحدة المركز نفيق الاسفنجية، والتي تحتوي على الأوعية الدموية. استخدام microdrill لإزالة كل طبقة العظم المضغوط الخارجية ومعظم الطبقة الاسفنجية. اضطراب في الأوعية الدموية داخل العظم الإسفنجي قد يتسبب في حدوث نزيف. استخدام الارقاء الكولاجين الاسفنج لوقف هذا النزيف. - استخدام الجيل الثاني التوافقي (SHG) التصوير لدراسة ما إذا كان قد تم إزالة الغالبية العظمى من العظم الإسفنجي. كن حذرا لتجنب ترقق المفرطة، تأكد من أن العظام المتبقية هو الicker من 50 ميكرومتر في هذه المرحلة من التحضير.
- وضع قطرة من العازلة الدافئة (35-37 درجة مئوية) على رأس المنطقة ضعيفة. استخدام شفرة المجهرية أو مايكرو التشطيب بر لمزيد من إزالة طبقات العظم وتشكيل منطقة السلس لل~ 700 ميكرون في القطر مع سمك العظام من ~ 20 ميكرون. خلال هذه الخطوة، فإنه من المفيد لأداء التصوير SHG المتكررة بانتظام وقياس سماكة العظام.
- أداء التصوير TPEM للمنطقة من الفائدة ومنطقة التحكم.
- ضبط الموقف الرأس باستخدام مسامير ارتفاع شريط الأذن في مثل هذه الطريقة التي ضعفت يتم وضع المنطقة بدقة أفقيا. ضع إبرة فوق المنطقة ضعيفة وتأكد من أنه لا توجد السفن الكبيرة تحت الموقع المستهدف.
- جعل الآفة عن طريق غمس الإبرة في الدماغ، إلى عمق 0.5-2.0 مم من سطح الجمجمة ضعيفة وفقا لإحداثيات موقع التطبيق وخز.
- إزالة الإبرة وقمع نزيف تظهر بعد رانه إصابات الدماغ الحادة مع حشا مرقئ (انظر المواد والمعدات). الانتظار حتى تجلط الدم وشكل سفينة نبض في موقع الإصابة يتوقف.
- أداء Microinjection من 100 ميكرومتر Sulforhodamine 101 أو مركب آخر من الاهتمام إلى موقع الآفة، كما هو موضح أعلاه في القسم 1.2.10.
- أداء التصوير TPEM لمراقبة تطور الإصابة والانتعاش كما هو موضح في البروتوكول 3.
- بعد التصوير، والسماح للحيوان ليستعيد وعيه من التخدير على وسادة التدفئة. لا تترك الحيوان غير المراقب وإعادته إلى القفص وطنه إلا بعد التعافي البدني الكامل.
3. التصوير
- وضع الحيوان تحت المجهر عن طريق ربط حامل معدني للإطار العرف بنيت.
- التصوير، واستخدام مثل FV1000MPE المجهر ثنائي الفوتون مجهزة ماي تاي DeepSee الليزر وXLPLN 25X NA 1.05 هدف الغمر بالماء الأمثل لفي الجسم الحي اثنين الفوتونالتصوير.
- تحديد موقع الآفة تحت المجهر باستخدام الوضع مضان واسعة المجال. استخدام مرشحات تمرير طويلة لتصور الأوعية الدموية في الدماغ وتحديد المنطقة السيطرة وفقا للنمط لوحظ من الأوعية الدموية.
- لصورة الجيل الثاني التوافقي (SHG) إشارة، ضبط ليزر الفيمتو ثانية لطول الموجة 800 نانومتر وجمع الضوء المنبعث باستخدام 380-410 نانومتر تصفية الالتفافية. للتصوير مضان، استخدم مرشح تمرير النطاق (515-560 نانومتر) لجمع الضوء المنبعث، وتستخدم موجات التالية لإثارة مضان: GFP-860 نانومتر، YFP-950 نانومتر.
- استخدام البرمجيات Fluoview لاقتناء الصورة.
- متجر إحداثيات كل العائد على الاستثمار للتصوير المتكررة لاحقة. صورة نفس رويس مع مرور الوقت، وضبط الإحداثيات في كل مرة لتحقيق أقصى قدر من التداخل الصورة.
- تحليل الصور مع البرنامج المناسب (على سبيل المثال. يماغيج). وقد أجريت عمليات إعادة البناء المقدمة هنا باستخدام البرمجيات Imaris.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
لدينا اثنين الأمثل الإجراءات العملية: 1) نافذة الجمجمة المزمن و2) ترقق الجمجمة، لتصوير الدماغ ما بعد الصدمة في الفئران المعدلة وراثيا. ويرد تخطيطيا من التحضيرات تجريبية في الشكل 1. يتم تطبيق وخز الصدمة بواسطة إبرة الصلب من 0.3 مم OD (30 G) إلى حفر (1A الشكل) أيضا. A الجمجمة إعداد إطار ناجحة يسمح التصوير في أعماق تصل إلى 650 ميكرون تحت سطح حنوني (الشكل 1B)، في حين أن الجمجمة رقيق يميل إلى فرض حدود حوالي 300 ميكرون (الشكل 1C...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الصدمة الدماغ هو، لا يمكن التنبؤ بها الحدث المفاجئ. هنا، نحن تصف نموذج الحيوان الذي يستنسخ مجموعة من التغيرات المرضية التي لوحظت في المرضى من البشر بعد إصابات الدماغ مثل التنكس العصبي، والقضاء على التشعبات، وذمة الدماغ، ندبة الدبقية، نزيف في قشرة الدماغ إلى جانب نزيف تحت العنكبوتية التنسيق وزيادة نفاذية حاجز الدم في الدماغ. لدراسة المرضية الابتدائية والثانوية، وكذلك الانتعاش بعد الصدمة، وجنبا إلى جنب مع هذا النموذج إصابة طولية في التصور المجراة من الخلايا العصبية...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
والكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
نحن ممتنون للغاية للدكتور فرانك كيرشوف لتوفير GFAP-EGFP وسلالات الفئران CX3CR1-EGFP. وأيد العمل من المنح المقدمة من مركز الحراك الدولي من فنلندا، تيكيس، كلية الدراسات العليا الفنلندية العلوم العصبية (FGSN) وأكاديمية فنلندا.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| ملاقط غبية 2A-sa ، 115 مم | XYtronic | XY-2A-SA | |
| 30 G & frac12 ؛ في إبرة | BD | REF 304000 | |
| ماكينة حلاقة ، آلة الحلاقة | Aesculap | Isis GT420 | |
| مجهر مجهر | Zeiss | Stemi 2000 | |
| تحكم في درجة الحرارة البيولوجية مع وسادة تسخين من الفولاذ المقاوم | Supertech | TMP-5b | |
| شفرة جراحية مجهرية حادة | BD | REF 374769 | |
| أنبوب البورسليكات مع خيوط | أدوات Sutter | BF120-69-10 | لإنتاج الماصة الزجاجية |
| كاربروفين | فايزر | ريماديل البيطري | |
| الكلورهيكسيدين ثنائي جلوكونات | سيجما | C9394 | |
| أسمنت الأسنان | DrguDent ، Dentsply | REF 640 200 271 | |
| ديكساميثازون | FaunaPharma | Rapidexon البيطري | |
| مثقاب يمكن التخلص منها | Meisinger | HP 310 104 001 001 008 | |
| Dulbeco ' s PBS 10x | Sigma | D1408 | |
| Dumont # 5 ملقط ، 110 مم | FST | 91150-20 | |
| مجتذب القطب الكهربائي الصغير | Ealing | 50-2013 | مجتذب عمودي لإنتاج الماصة الزجاجية |
| مرهم | العين Novartis | Viscotears | |
| التحكم في الحفر Foredom | FM3545 | ||
| قبضة | المحرك الصغير Foredomمنصة | MH-145 | |
| للفئران | Stoelting | 50264 | مجمعة على أداة تجسيمية |
| إرقاء الكولاجين الإسفنج | Avitene ، Ultrafoam BARD | المرجع 1050050 | |
| Imaris | Bitplane | ||
| Ketamine | Intervet | Ketaminol vet | |
| Mai Tai DeepSee ليزر | أطياف الفيزياء | ||
| حامل معدني | ملقط Neurotar | ||
| Microdressing ، 105 مم | Aesculap | BD302R | |
| Microfil | WPI | MF34G-5 | حقنة صغيرة ملء الشعيرات الدموية |
| الزيوت المعدنية | Sigma | M8410 | |
| مجهر المسح الضوئي بالليزر متعدد الفوتون | أوليمبوس | FV1000MPE | |
| حقنة NanoFil 10 مو ل | WPI | NANOFIL | Hamilton حقنة |
| مسحات محبوكة 5 × 5 | Molnlycke للرعاية الصحية | Mesoft | سدادات قطنية جراحية |
| بولي أكريليك | غراء Henkel | Loctite 401 | |
| غطاء زجاجي دائري ؛ | المجهر الإلكتروني | ||
| 1.5 سمك | |||
| أداة تجسيمية للحيوانات الصغيرة | David Kopf | Instruments 900 | |
| محول الفأر والفئران حديثي الولادة | Stoelting | 51625 | تم تجميعها على أداة تجسيمية. |
| مقص قزحية الطالب ، مستقيم 11.5 سم | FST | 91460-11 | |
| Sulforhodamine 101 | مجسات جزيئية | S-359 | |
| UMP3 مضخة حقنة دقيقة ووحدة تحكم في مضخة الحقن الدقيقة | Micro 4 WPI | UMP3-1 | حاقن دقيق ووحدة تحكم |
| Xylazine | Bayer Health Care | Rompun |
المراجع
- Lighthall, J. W. Controlled cortical impact: A new experimental brain injury model. J. Neurotrauma. 5 (1), 1-15 (1988).
- Lindgren, S., Rinder, L. Experimental studies in head injury. Biophysik. 2 (5), 320-329 (1965).
- Shreiber, D. I., et al. Experimental investigation of cerebral contusion: histopathological and immunohistochemical evaluation of dynamic cortical deformation. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 58 (2), 153-164 (1999).
- Feeney, D. M., Boyeson, M. G., Linn, R. T., Murray, H. M., Dail, W. G. Responses to cortical injury: I. Methodology and local effects of contusions in the rat. Brain Res. 211 (1), 67-77 (1981).
- Bardehle, S., et al. Live imaging of astrocyte responses to acute injury reveals selective juxtavascular proliferation. Nat. Neurosci. 16 (5), 580-586 (2013).
- Sword, J., Masuda, T., Croom, D., Kirov, S. A. Evolution of neuronal and astroglial disruption in the peri-contusional cortex of mice revealed by in vivo two-photon imaging. Brain. 136 (5), 1446-1461 (2013).
- Feng, G., et al. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28, 41-51 (2000).
- Nolte, C., et al. GFAP promoter-controlled EGFP-expressing transgenic mice: a tool to visualize astrocytes and astrogliosis in living brain tissue. Glia. 33 (1), 72-86 (2001).
- Jung, S., et al. Analysis of fractalkine receptor CX(3)CR1 function by targeted deletion and green fluorescent protein reporter gene insertion. Mol. Cell. Biol. 20 (11), 4106-4114 (2000).
- Nimmerjahn, A., Kirchhoff, F., Kerr, J. N. D., Helmchen, F. Sulforhodamine 101 as a specific marker of astroglia in the neocortex in vivo. Nat. Methods. 1 (1), 31-37 (2004).
- Carré, E., et al. Technical aspects of an impact acceleration traumatic brain injury rat model with potential suitability for both microdialysis and PtiO2 monitoring. J. Neurosci. Methods. 140, 23-28 (2004).
- Holtmaat, A., et al. Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat. Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).
- Yang, G., Pan, F., Parkhurst, C. N., Grutzendler, J., Gan, W. B. Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice. Nat. Protoc. 5, 201-208 (2010).
- Cianchetti, F. A., Kim, D. H., Dimiduk, S., Nishimura, N., Schaffer, C. B. Stimulus-evoked calcium transients in somatosensory cortex are temporarily inhibited by a nearby microhemorrhage. PloS one. 8 (5), (2013).
- Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. A polished and reinforced thinned-skull window for long-term imaging of the mouse brain. J. Vis. Exp. 61, (2012).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
