أجيال جديدة من المقايسات وظيفية مثل انترفيرون غاما (الإنترفيرون γ) ELISPOT، الذي كشف عن إنتاج السيتوكينات على مستوى خلية واحدة وتقديم كل من توصيف الكمي والنوعي للاستجابات الخلايا التائية يمكن استخدامها لتقييم الاستجابات بوساطة الخلايا المناعية الموجهة ضد الحماق النطاقي فيروس (جدري الماء).
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
وضع النطاقي الحماقي الفيروسات محددة بوساطة خلية الحصانة ELISPOT الفحص لتقييم الإنترفيرون γ-عقب الحبل السري زرع الدم
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الفيروس النطاقي الحماقي (VZV) هو سبب كبير من المراضة والوفيات التالية السري زرع دم الحبل السري (UCBT). لهذا السبب، يتم إدارتها بشكل منهجي الوقاية antiherpetic إلى المستلمين UCBT الأطفال لمنع المضاعفات المرتبطة عدوى جدري الماء، ولكن ليس هناك والتوافق على أساس أدلة قوية على أن يحدد مدته الأمثل. لأن الخلايا التائية الحصانة بوساطة هي المسؤولة عن السيطرة على العدوى الفيروس النطاقي الحماقي، وتقييم إعادة تشكيل استجابات الخلايا التائية VZV المحددة التالية UCBT يمكن أن توفر مؤشرات حول ما إذا كان ينبغي الحفاظ على الوقاية أو يمكن وقفها. تحقيقا لهذه الغاية، تم تطوير انترفيرون غاما VZV محددة (الإنترفيرون γ) انزيم مرتبط immunospot (ELISPOT) مقايسة لتوصيف إنتاج الإنترفيرون γ بواسطة الخلايا اللمفية تي ردا على التحفيز في المختبر مع المشع الحية الموهنة لقاح جدري الماء. ويوفر هذا الاختبار قياس السريع، واستنساخه وحساسة من VZV ج محددةالذراع بوساطة الحصانة مناسبة لرصد إعادة تشكيل VZV الحصانة محددة في عملية إعداد سريرية وتقييم الاستجابة المناعية لمستضدات الفيروس النطاقي الحماقي.
المقدمة
أجريت لأول مرة في عام 1989، ويستخدم UCBT متزايد كجزء من علاج مختلف اضطرابات الدم والأورام لدى الأطفال nonneoplastic 1. جدري الماء هو alphaherpesvirus الإنسان والذي يسبب الاعتلال الخلوي اثنين من أمراض مختلفة، الحماق (بعد العدوى الأولية) والهربس النطاقي (بعد إعادة تنشيط). بعد الإصابة الأولية، VZV استمرت طوال حياة المضيف محمية داخل الأعصاب الحسية من العقد الجذرية الظهرية. واحد من المضاعفات المعدية الأكثر تهديدا التالية UCBT يرتبط مع VZV 2-4. في مركز السريرية لدينا، في غياب VZV الاتقاء، وكان معدل التراكمي للمرض جدري الماء مرض جدري الماء في 3 سنوات postUCBT 46٪ 2. في هؤلاء المرضى، وغالبا ما يترافق مع....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على هذا البروتوكول من قبل مجلس البحوث المؤسسية أخلاقيات استعراض CHU سانت جوستين في مونتريال، كندا، حيث أجريت الدراسة. وطلب الموافقة المسبقة والتي تم الحصول عليها من جميع المشاركين في الدراسة، والديهم أو الأوصياء القانونيين. كافة الإجراءات التي أجريت على أيام 1 و 2 يجب أن تتم تحت ظروف معقمة (أي تحت غطاء تدفق الصفحي). ينبغي مراعاة إجراءات السلامة القياسية للتعامل مع الدم البشري بدقة.
1. طلاء لوحات
- Permeabilize في difluoride البولي فينيل (PVDF) الأغشية....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وقد تم تطوير بروتوكول ELISPOT-γ IFN المفصلة أعلاه والأمثل في مختبرنا لقياس حجم ونوعية الخلية بوساطة الاستجابات المناعية الموجهة ضد جدري الماء 4. مصادر متنوعة من VZV المستضد يمكن استخدامها للخطوة التحفيز. وتشمل هذه: أ) المنظفات متوفرة تجاريا مقتطفات المعطل من VZV الخلايا المصابة فيرو 18؛ ب) برك من تداخل الببتيدات الاصطناعية من البروتينات المشفرة VZV محددة، بما في ذلك IE63 15 و 19 ORF4؛ ج) يعيش الموهن لقاح الحماق النطاقي 20؛ ود).......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
التعديلات واستكشاف الأخطاء وإصلاحها: قد استخدمت المقايسات الإنترفيرون γ ELISPOT لدراسة الاستجابات بوساطة الخلايا المناعية الموجهة ضد مجموعة متنوعة من مسببات الأمراض الميكروبية، بما في ذلك فيروس نقص المناعة البشرية نوع 1 (HIV-1) 24،25، فيروس التهاب الكبد الوبائي (سي) 26، 27، والمتفطرة السلية 28،29، وهذا غيض من فيض. نحن هنا وصف وضع ELISPOT مقايسة-γ IFN لقياس المناعة الخلوية ضد، على أمل تحديد يرتبط من VZV إعادة المناعي محددة في استعادة المتلق.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
شكر وتقدير
الكتاب أود أن أشكر المشاركين في الدراسة وأولياء أمورهم. نود أيضا أن نشكر الدكتور Réjean ابونت (CHUM نوتردام، مونتريال، كندا) من أجل الوصول إلى القارئ له ELISPOT الدكتور LUBO الكسندروف للتحليل الإحصائي، ودينيس بليس، ساندرا كارون، سيلفي فالوا ومارتين لكاتي الخبراء التقنيين المساعدة. بدعم من المنح المقدمة من لو فون كوت عملية صب ليه PROJETS للبحوث كلينيك آخرون كوت دي évalution التقنيات (CHU سانت جوستين) إلى HS وPO، التي كتبها la مؤسسة مركز دي cancérologie شارل Bruneau ل، وجمعية سرطان الدم والاورام الليمفاوية من كندا. وأيد قوى الأمن الداخلي من خلال منح دراسية من مؤسسة لا CHU سانت جوستين ولو فون دي لا بحوث كيبيك-صحة (FRQS). كان AJG ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أنبوب Leucocep | VWR | 89048-936 / 89048-932 | يمكن استخدام أنابيب 12 مل أو 50 مل اعتمادا على حجم الدم. |
| Ficoll-Paque | GE Healthcare | 17-1440-02 | حماية من الضوء. |
| نوكلياز البنزوناز | نوفاجين | 70746-3 | ، احتفظ ب -20 &# 176 ؛ درجة مئوية. |
| MultiScreenHTS-IP Filter Plate | Millipore | MSIPS4W10 | معقمة بحجم مسام 0.45 µm. |
| الفأر المضاد للإنسان IFN-& gamma; التقاط الجسم المضاد | BD Biosciences | 551221 | استنساخ NIB42. |
| Pepmix VZV IE63 | JPT Peptide Technologies | PM-VZV-IE63 | قم بإذابة محتويات قارورة واحدة في 40 &# 956 ؛ ل من DMSO. يستخدم في غضون 6 أشهر. |
| الأجسام المضادة أحادية النسيلة المضادة للإي فن إن جاما | Biosciences | 554550 | 4SB3. |
| الستربتافيدين مترافق مع الفوسفاتيز القلوي ؛ | Bio-Rad Life Science | 170-3554 | مخفف للاستخدام في نفس اليوم. |
| BCIP / NBT | Bio-Rad Life Science | 170-6432 | الحماية من الضوء. |
المراجع
- Ballen, K. K., et al. Umbilical cord blood transplantation: the first 25 years and beyond. Blood. 122 (4), 491-498 (2013).
- Vandenbosch, K., et al. Varicella-zoster virus disease is more frequent after cord blood than ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
