يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

رواية في الجسم الحي تقنيات نقل الجينات و في المختبر فحوصات وبناء خلية لدراسة فقدان العظام في اضطرابات العضلات والعظام

11.3K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/51810

⸱

يونيو 8, 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Rheumatology, Allergy and Clinical Immunology, University of California, Davis, 2Institute for Pediatric Regenerative Medicine, Shriners Hospitals for Children - Northern California, 3Department of Dermatology, University of California, Davis

في هذه المقالة

ملخص

يتم تنظيم تمايز الخلايا السليفة إلى ناقضات العظم بواسطة السيتوكينات وعوامل النمو. هنا ، يتم وصف تقنية جديدة لنقل الجينات لتمايز ناقضات العظم في الجسم الحي وبروتوكولات زراعة الخلايا لتمييز الخلايا السليفة إلى ناقضات العظم في المختبر كطريقة لدراسة تأثيرات السيتوكينات على تكوين العظم.

الملخص

يلعب التمايز وتنشيط ناقضات العظم دورا رئيسيا في تطور أمراض العضلات والعظام حيث تشارك هذه الخلايا بشكل أساسي في ارتشاف العظام. يمكن إنشاء ناقضات العظام في المختبر من الخلايا السلائف أحادية / البلاعم في وجود بعض السيتوكينات ، والتي تعزز البقاء والتمايز. هنا ، يتم عرض كل من تقنيات in vivo و in vitro ، والتي تسمح للعلماء بدراسة مساهمات السيتوكين المختلفة في تمايز ناقضات العظم والإشارات والتنشيط. يوفر نظام نقل الجينات لتوصيل الحمض النووي للدائرة الصغيرة طريقة بديلة لإنشاء نموذج متعلق بهشاشة العظام وهو مفيد بشكل خاص لدراسة فعالية المثبطات الدوائية المختلفة في الجسم الحي. وبالمثل ، فإن بروتوكولات الزراعة في المختبر لإنتاج ناقضات العظم من الخلايا السلائف البشرية في وجود سيتوكينات معينة تمكن العلماء من دراسة تكوين العظم في الخلايا البشرية للتطبيقات الانتقالية. مجتمعة ، تتمتع هذه التقنيات بالقدرة على تسريع جهود اكتشاف الأدوية للعلاجات المستهدفة الخاصة بناقضات العظم ، والتي قد تفيد الملايين من مرضى هشاشة العظام والتهاب المفاصل في جميع أنحاء العالم.

المقدمة

أمراض العضلات والعظام تؤثر على الملايين من الناس في الولايات المتحدة وعواقب وخيمة الحاضر على النظم الصحية الوطنية والمحلية 1. وتتميز هذه الاضطرابات بسبب فقدان العظام وظيفة مشتركة التي تتطلب معالجة مكثفة وفترات طويلة من الانتعاش. عادة، زيادة نسبية في عدد و / أو نشاط الخلايا الآكلة، وخلايا متخصصة ليرتشف العظام، في ترقق العظام والتهاب المفاصل لوحظ 2. في ظل الظروف الفسيولوجية وينظم عدد ونشاط الخلايا الآكلة بواسطة مستقبلات عامل منشط النووية κ-B يجند (RANKL)، الذي تنتجه الخلايا بانية العظم. Osteoprotegerin (OPG)، وينتج مستقبلات شرك لRANKL أيضا بانيات 3 في الجسم الحي النماذج الحيوانية التي تنطوي من overexpression النظامية من sRANKL، أو حذف OPG هي قيمة للغاية في مجال البحوث هشاشة العظام.؛ ومع ذلك، وهذه الأساليب تتطلب جيل من الفئران المعدلة وراثيا 4،5. هنا، بديل الروايةيوصف أسلوب overexpressing sRANKL لدراسة الاضطرابات المرتبطة العضلات والعظام. على وجه التحديد، واستخدمت minicircle (MC) تكنولوجيا الحمض النووي وطرق التسليم الهيدروديناميكية لتحقيق نقل الجينات من sRANKL في الجسم الحي وoverexpress الماوس sRANKL جهازيا 6.

هذا الأسلوب هو أيضا مكملة للأخرى في الجسم الحي نماذج من ترقق العظام، مثل التشكيل الهرمونية من الآكلة التالية استئصال المبيض 7 والتدخل الغذائي من خلال اتباع نظام غذائي منخفض الكالسيوم 8. هذه النماذج هي مفيدة جدا لدراسة جوانب مختلفة من الاضطرابات العضلية الهيكلية ذات الصلة إلا أنها تتطلب عمليات جراحية ويمكن أن يستغرق فترة تصل الى عدة أشهر، بتكلفة كبيرة 9. مستأصلة المبيض (وفك) نموذج القوارض هو نموذج على حيوانات التجارب حيث إزالة المبايض يؤدي إلى نقص هرمون الاستروجين بعد سن اليأس وهشاشة العظام وبالتالي محاكاة الإنسان 10. الإنسان بهشاشة العظام بعد انقطاع الطمث، شرط فيها هرمون الاستروجين deficiency يؤدي إلى زيادة خطر كسور العظام وهشاشة العظام يؤثر على ما يقرب من ثمانية ملايين امرأة في الولايات المتحدة وحدها. على الرغم من أن نموذج وفك مفيد لهشاشة العظام بعد انقطاع الطمث أنه يوفر مزايا محدودة في دراسة هشاشة العظام بشكل عام. الاستروجين يمنع فقدان العظام، عن طريق حفز ناقضة العظم وتثبيط بناء العظم موت الخلايا المبرمج، وبالتالي في غيابها لوحظ زيادة النشاط ناقضة العظم 10-12. ويلاحظ وجود RANKL-OPG نسبة الخلل الذي يفضل ارتشاف العظام أيضا 13. ومع ذلك، ويرافق نقص هرمون الاستروجين في الجسم الحي أيضا من انخفاض مستويات عامل النمو تحويل β (TGF β)، وزيادة انترلوكين 7 (IL-7) وTNF، IL-1 و IL-6 14،15. لأن هذه السيتوكينات قد عرفت وظائف تغييري إعادة تشكيل العظام مستقلة عن المسار RANKL، فإنه من المستحيل أن ينسب أي تفعيل ناقضة العظم فقط إلى المحور RANKL رتبة. نموذج صفها في هذه الورقة تمكن الباحثون للدراسة في فيفس محور RANKL رتبة في osteoclastogenesis وفقدان العظام دون السيتوكينات الموالية للالتهابات مقارنة نماذج القوارض وفك.

بالإضافة إلى ذلك، في المختبر تقنيات osteoclastogenesis هي أدوات أساسية لدراسة تفعيل ناقضة العظم لعلاج العلاجية المحتملة للأمراض العضلات والعظام. وقد أظهرت الدراسات السابقة أيضا أن زراعة نخاع العظم الضامة الماوس المستمدة (BMMs) مع الماوس بلعم مستعمرة عامل تحفيز (M-CSF) والماوس sRANKL يمكن أن تؤدي إلى التمايز ناقضة العظم 3،16،17. هنا، يتم وصف البروتوكولات لتوليد الخلايا ناقضة العظم مثل الماوس متعددة النوى من نخاع العظم وكذلك من الخلايا المحيطية وحيدات النوى الإنسان الدم (PBMCs) في المختبر 18. كما وصفها بإيجاز المقايسات خلية مقرها المطلوبة لتحديد ناقضة العظم متباينة عضال وتعمل بكامل طاقتها ناضجة. هذه في المختبر تقنيات تكمل الرواية في الجسم الحي والنهج معا بمثابة عأدوات التحقيق owerful لدراسة التمايز ناقضة العظم والتنشيط. باستخدام هذه الأنظمة، والعلماء قادرون على توليد الخلايا الآكلة في الجسم الحي في المختبر وتحديد المحفزات والإشارات اللازمة لانتشارها وتفعيل وكذلك اختبار فعالية مثبطات الدوائية والبيولوجية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. التسليم هيدرودينامي من sRANKL MC الحمض النووي

  1. توصيل ماوس الهيدروديناميكية عبر الوريد الذيل
    1. وزن الماوس قبل حقن الوريد الذيل. تمييع sRANKL أو بروتين الفلورية الخضراء (GFP) MC في حل رينغر (قبل دافئ عند 37 درجة مئوية) في إجمالي حجم ~ 10٪ من وزن جسم الفأر.
    2. الاحماء الماوس في قفص لمدة 10 دقيقة قبل الحقن وذلك لتمدد الأوعية الدموية والأوردة جعل الجانبي (لفس) مرئية. رصد الماوس بعناية لتجنب الجفاف وارتفاع الحرارة.
    3. حالما يتم المتوسعة لفس ومرئية، ونقل الماوس إلى كابح وتضاف المكونات بعيدا بما فيه الكفاية في برميل لكبح جماح الحركة. رصد الماوس للنشاط العادي مثل التنفس. ضبط المكونات من كابح إذا لزم الأمر.
    4. تطهير منطقة الحقن 3/4 من غيض من الذيل مع الكحول مسح. استخدام إبرة G 27-30 للماوس حقن الوريد الذيل. عقد ذيل بحزم مع يد واحدة وادخال الإبرة فيإلى الوريد الذيل. الضغط على حقنة واستكمال الحقن داخل 5-7 ثانية.
    5. إزالة الإبرة من الوريد الذيل والضغط مع كرة القطن على موقع الحقن لوقف النزيف. رصد الماوس ل15-30 دقيقة، ثم نقل الماوس مرة أخرى إلى الحظيرة مرة واحدة يتم خفض معدل التنفس إلى المعدل العادي.
  2. تأكيد الجهازية ماوس sRANKL التعبير والكمي لنقل ماوس سيروم TRACP5b آخر الجينات
    1. الاحماء الماوس في قفص لمدة 5-10 دقيقة من أجل تمدد الأوعية الدموية وجعل لفس مرئية. رصد الماوس بعناية لتجنب الجفاف وارتفاع الحرارة.
    2. إجراء شق صغير بشفرة إلى ذيل الماوس، في موقع واحد عليها من طرف الذيل.
    3. جمع ما يقرب من 100 ميكرولتر من الدم في أنابيب فصل المصل.
    4. احتضان أنابيب فصل المصل في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
    5. عينات الطرد المركزي في 10،000 x ج لمدة 5 دقائق وجمع المصل. ستورمصل الإلكترونية في -80 درجة مئوية لمزيد من التحليل.
    6. أداء sRANKL ELISA والماوس TRACP5b المصل فحص على عينات المصل باستخدام طقم التجارية المتاحة.

2. في المختبر الجيل ناقضة العظم من ماوس BMMs

  1. العزلة والتثقيف من BMMs
    1. العزلة من الساق وعظم الفخذ العظام: الموت ببطء الماوس المانحة مع CO 2، وتطهير الساقين مع الايثانول 70٪. تشريح من عظم العانة حتى العظم العقبي، لإزالة عظم الفخذ والظنبوب عظام سليمة.
    2. إزالة الجلد والعضلات بعناية دون الإضرار العظام. وضع عظم الفخذ والساق معالجة العظام في طبق بتري تحتوي على الفوسفات مخزنة المالحة (PBS).
    3. إزالة نخاع العظم: قطع قبالة الطرف على جانب واحد من عظم الفخذ والساق وعظام طرد نخاع العظام في أنبوب 50 مل باستخدام حقنة 1ML مع 25 G إبرة، محملة α-MEM تحتوي على 1٪ البنسلين / الستربتوميسين (ناقضة العظم الثقافة متوسطة / OCM).
      4. عملية نخاع العظم: مزيج ونقل نخاع العظام التعليق على الجديد 50 مل أنبوب بتمريرها من خلال 70 ميكرومتر الخلية النايلون مصفاة. الطرد المركزي الخلايا في 300 x ج وإعادة تعليق في α-MEM تحتوي على 1٪ البنسلين / الستربتوميسين و 10٪ FBS (ناقضة العظم الثقافة المتوسطة / OCM (+)).
  2. ثقافة الضامة
    1. عد الخلايا باستخدام عدادة الكريات أو خلية مكافحة التلقائي.
    2. لوحة 1 × 10 6 خلايا لكل بئر لوحة 6 جيدا أو 3 × 10 5 خلايا إلى coverslips الزجاج (5 ملم) أو شرائح عاج وضعها في لوحة 96 جيدا واحتضان عند 37 درجة مئوية.
    3. نضح كل وسائل الإعلام التي تحتوي على الخلايا غير ملتصقة واحتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية مع OCM الطازجة (+) التي تحتوي على 25 نانوغرام / مل الماوس M-CSF لمدة 48 ساعة.
    4. نضح جميع وسائل الإعلام واحتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية مع OCM الطازجة (+) وسائل الإعلام التي تحتوي على 25 نانوغرام / مل الماوس M-CSF، و 30 الماوس نانوغرام / مل sRANKL لبدء osteoclastogenesis. تجديد وسائل الاعلام كل 3 أيام كما هو مطلوب.
    5. تنمو الخلايالحوالي 6-8 أيام لتشكيل خلايا متعددة النووية العملاقة قادرة على resorbing العظام. حالما تظهر خلايا متعددة النوى، نفذ فخ (طرطرات الفوسفاتيز الحمضي مقاومة) تلطيخ استخدام عدة التجارية المتاحة، وعندما نضجت تماما، نفذ المقايسات الفنية. تصور حلقات F-الأكتين coverslips على استخدام وصمة عار phalloidin وصورة تعلق على الخلايا عاج شرائح بواسطة المجهر الإلكتروني (SEM) كما هو موضح سابقا 19.

3. في المختبر الجيل ناقضة العظم من PBMCs الإنسان

  1. عزل PBMCs الإنسان
    1. إضافة 10 مل من قبل تحسنت Histopaque-1077 في أنبوب 50 مل.
    2. فارغة تصفية الكريات البيض التي تم الحصول عليها من بنك الدم مع برنامج تلفزيوني العقيمة في أنبوب 50 مل (نسبة 1:1 من الدم مع PBS). طبقة الدم المخفف على حل histopaque ببطء شديد، والتأكد من أن الدم لا يمتزج مع histopaque.
    3. عينات الطرد المركزي في 1000 x ج لمدة 20 دقيقة في 18 درجة مئوية. تابعالطرد المركزي جي، عزل بعناية طبقة معطف الشهباء البيضاء التي تحتوي على خلايا الدم البيضاء ونقل إلى أنبوب جديد 50 مل.
    4. تمييع الخلايا مع برنامج تلفزيوني وأجهزة الطرد المركزي مرة أخرى في 650 x ج لمدة 5 دقائق لجمع الخلايا.
    5. إزالة طاف والخلايا resuspend في OCM (-) وسائل الإعلام وعدد الخلايا باستخدام عداد الخلية.
  2. الطلاء وزراعة PBMCs
    1. resuspend الخلايا في OCM (+) وسائل الإعلام وصفيحة 8 × 10 6 خلية / مل لكل بئر في لوحة 6 جيدا أو 1 × 10 6 خلية / مل لكل بئر في لوحة 96 جيدا. خلايا لوحة على coverslips الزجاج (5 ملم) كما هو مطلوب للتصوير المناعي فضلا عن شرائح العظام مناسبة لفحوصات ارتشاف العظم كما هو موضح سابقا 20.
    2. التغيير سائل الإعلام والثقافة، وتجديد الخلايا مع الإنسان M-CSF كل 2-3 أيام أو حسب الحاجة. ثم انتقل إلى الخطوة التمايز في يوم 5 عن طريق إضافة 30 نانوغرام / مل من sRANKL الإنسان جنبا إلى جنب مع 25 نانوغرام / مل الإنسان M-CSF في OCM (+) وسائل الإعلام لبدء osteoclastogenesهو.
    3. تنمو الخلايا لحوالي 14 إلى 21 يوما لتشكيل خلايا متعددة النووية العملاقة. حالما تظهر خلايا متعددة النوى، ويمكن بعد ذلك أن هذه الخلايا مرقوم للشرك، وعندما نضجت تماما، المقايسات الفنية لا يمكن أن يؤديها. يمكن تصور حلقات F-الأكتين coverslips على استخدام phalloidin صمة عار. يمكن فحص مورفولوجيا الخلايا في الخلايا تعلق على عاج شرائح بواسطة SEM.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

هنا، توصف تقنية نقل الجينات الرواية لتمايز الخلايا الآكلة في الجسم الحي والبروتوكولات الثقافة خلية للتمييز بين الخلايا الآكلة في السلائف في المختبر كوسيلة لدراسة آثار السيتوكينات على osteoclastogenesis. في الشكل 1، وأظهرت نتائج ممثل نقل الجينات الناجح لGFP والماوس sRANKL MC في الفئران. في الشكل 2، وتظهر الصور ممثل الماوس نخاع العظم أو الإنسان PBMC تمايز الخلايا دوام الثقافات من الخلايا الآكلة تمهيدا لجانب مشرق المجهري الميدان.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

ظروف العضلات والعظام تقود أسباب الاعتلال والعجز وتتألف من أكثر من 150 من الأمراض والمتلازمات؛ التي تؤثر على ما يقرب من 90 مليون أميركي اليوم. التهاب المفاصل وتدمير العظام هي السمات الغالبة من الحالات العضلية الهيكلية، بما في ذلك التهاب المفاصل وهشاشة العظام. هشاشة العظام هو شرط أن يضعف سلامة العظام، وغالبا ما تؤدي إلى كسور في العظام. التهاب المفاصل هو مرض مزمن، المنهكة مرض يتميز التهاب في المفاصل التي تصبح متورمة، والعطاء وتقييد الحركة الطبيعية شديدة ويمكن أن تؤدي إلى الإعاقة. على...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

تم دعم البحث جزئيا من خلال منح أبحاث المعاهد الوطنية للصحة R01 AR062173 و SHC 250862 إلى IEA. ES حاصلة على زمالة ما قبل الدكتوراه NIH T32 CTSC.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
alpha-MEMLife Technologies 12561-056
الإنسان M-CSFMiltenyi Biotec130-096-492
Mouse M-CSFMiltenyi Biotec130-094-643
Human RANK-Ligand - قابل للذوبانMiltenyi Biotec130-094-631
Mouse RANK-Ligand - قابل للذوبانMiltenyi Biotec130-094-076
Tailveiner Restrainer للفئرانBraintreeTV-150 STD
Mouse Trance/RANK L/TNFSF11 Quantikine ELISA Kit R & أنظمة DMTR00
حمض الفوسفاتيز ، الكريات البيض (TRAP) كيتSigma387A
ماوس فأر   ؛أنظمة التشخيص المناعيSB-TR103

المراجع

  1. Yelin, E. Cost of musculoskeletal diseases: impact of work disability and functional decline. The Journal of rheumatology. Supplement. 68, 8-11 (2003).
  2. Boyce, B. F., Rosenberg, E., de Papp, A. E., Duong le, T. The osteoclast, bone remodelling and treatment of metabolic bone disease. European journal of clinical investigation. 42, 1332-1341 (2012).
  3. Lacey, D. L., et al. Osteoprotegerin ligand is a cytokine that regulates osteoclast differentiation and activation. Cell. 93, 165-176 (1998).
  4. Mizuno, A., et al. Transgenic mice overexpressing soluble osteoclast differentiation factor (sODF) exhibit severe osteoporosis. Journal of bone and mineral metabolism. 20, 337-344 (2002).
  5. Bucay, N., et al. osteoprotegerin-deficient mice develop early onset osteoporosis and arterial calcification. Gene., & development. 12, 1260-1268 (1998).
  6. Suda, T., Liu, D. Hydrodynamic gene delivery: its principles and applications. Molecular therapy: the journal of the American Society of Gene Therapy. 15, 2063-2069 (2007).
  7. Wronski, T. J., Dann, L. M., Scott, K. S., Cintron, M. Long-term effects of ovariectomy and aging on the rat skeleton. Calcified tissue international. 45, 360-366 (1989).
  8. Seto, H., Aoki, K., Kasugai, S., Ohya, K. Trabecular bone turnover, bone marrow cell development, and gene expression of bone matrix proteins after low calcium feeding in rats. Bone. 25, 687-695 (1999).
  9. Lelovas, P. P., Xanthos, T. T., Thoma, S. E., Lyritis, G. P., Dontas, I. A. The laboratory rat as an animal model for osteoporosis research. Comparative medicine. 58, 424-430 (2008).
  10. Sherman, B. M., West, J. H., Korenman, S. G. The menopausal transition: analysis of LH, FSH, estradiol, and progesterone concentrations during menstrual cycles of older women. The Journal of clinical endocrinology and metabolism. 42, 629-636 (1976).
  11. Hughes, D. E., et al. Estrogen promotes apoptosis of murine osteoclasts mediated by TGF-beta. Nature medicine. 2, 1132-1136 (1996).
  12. Kousteni, S., et al. Nongenotropic, sex-nonspecific signaling through the estrogen or androgen receptors: dissociation from transcriptional activity. Cell. 104, 719-730 (2001).
  13. Ominsky, M. S., et al. RANKL inhibition with osteoprotegerin increases bone strength by improving cortical and trabecular bone architecture in ovariectomized rats. Journal of bone and mineral research : the official journal of the American Society for Bone and Mineral Research. 23, 672-682 (2008).
  14. Kitazawa, R., Kimble, R. B., Vannice, J. L., Kung, V. T., Pacifici, R. Interleukin-1 receptor antagonist and tumor necrosis factor binding protein decrease osteoclast formation and bone resorption in ovariectomized mice. The Journal of clinical investigation. 94, 2397-2406 (1994).
  15. Weitzmann, M. N., Pacifici, R. Estrogen deficiency and bone loss: an inflammatory tale. The Journal of clinical investigation. 116, 1186-1194 (2006).
  16. Suda, T., Nakamura, I., Jimi, E., Takahashi, N. Regulation of osteoclast function. J Bone Miner Res. 12, 869-879 (1997).
  17. Asagiri, M., Takayanagi, H. The molecular understanding of osteoclast differentiation. Bone. 40, 251-264 (2007).
  18. Matsuzaki, K., et al. Osteoclast differentiation factor (ODF) induces osteoclast-like cell formation in human peripheral blood mononuclear cell cultures. Biochemical and biophysical research communications. 246, 199-204 (1998).
  19. Adamopoulos, I. E., et al. Synovial fluid macrophages are capable of osteoclast formation and resorption. The Journal of pathology. 208, 35-43 (2006).
  20. Adamopoulos, I. E., et al. Interleukin-17A upregulates receptor activator of NF-kappaB on osteoclast precursors. Arthritis researc., & therapy. 12, (2010).
  21. Jones, D., Glimcher, L. H., Aliprantis, A. O. Osteoimmunology at the nexus of arthritis, osteoporosis, cancer, and infection. J Clin Invest. 121, 2534-2542 (2011).
  22. Sato, K., Takayanagi, H. Osteoclasts, rheumatoid arthritis, and osteoimmunology. Curr Opin Rheumatol. 18, 419-426 (2006).
  23. Das, S., Crockett, J. C. Osteoporosis - a current view of pharmacological prevention and treatment. Drug design, development and therapy. 7, 435-448 (2013).
  24. Chen, Z. Y., He, C. Y., Ehrhardt, A., Kay, M. A. Minicircle DNA vectors devoid of bacterial DNA result in persistent and high-level transgene expression in vivo. Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy. 8, 495-500 (2003).
  25. Kay, M. A., He, C. Y., Chen, Z. Y. A robust system for production of minicircle DNA vectors. Nature biotechnology. 28, 1287-1289 (2010).
  26. Chen, Z. Y., He, C. Y., Kay, M. A. Improved production and purification of minicircle DNA vector free of plasmid bacterial sequences and capable of persistent transgene expression in vivo. Human gene therapy. 16, 126-131 (2005).
  27. Halleen, J. M., et al. Tartrate-resistant acid phosphatase 5b: a novel serum marker of bone resorption. Journal of bone and mineral research : the official journal of the American Society for Bone and Mineral Research. 15, 1337-1345 (2000).
  28. Adamopoulos, I. E., et al. IL-23 is critical for induction of arthritis, osteoclast formation, and maintenance of bone mass. J Immunol. 187, 951-959 (2011).
  29. Suda, T., Takahashi, N., Martin, T. J. Modulation of osteoclast differentiation. Endocrine reviews. 13, 66-80 (1992).
  30. Takahashi, N., et al. Osteoblastic cells are involved in osteoclast formation. Endocrinology. 123, 2600-2602 (1988).
  31. Bradley, E. W., Oursler, M. J. Osteoclast culture and resorption assays. Methods Mol Biol. 455, 19-35 (2008).
  32. Arai, F., et al. Commitment and differentiation of osteoclast precursor cells by the sequential expression of c-Fms and receptor activator of nuclear factor kappaB (RANK) receptors. The Journal of experimental medicine. 190, 1741-1754 (1999).
  33. Fuller, K., et al. Macrophage colony-stimulating factor stimulates survival and chemotactic behavior in isolated osteoclasts. The Journal of experimental medicin. 178, 1733-1744 (1993).
  34. Edwards, J. R., Mundy, G. R. Advances in osteoclast biology: old findings and new insights from mouse models. Nature reviews. Rheumatology. 7, 235-243 (2011).
  35. Weinstein, R. S., et al. Promotion of osteoclast survival and antagonism of bisphosphonate-induced osteoclast apoptosis by glucocorticoids. The Journal of clinical investigation. 109, 1041-1048 (2002).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

TRAP F actin
رواية في الجسم الحي تقنيات نقل الجينات و في المختبر فحوصات وبناء خلية لدراسة فقدان العظام في اضطرابات العضلات والعظام
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.