يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

بناء غرف بخار يستخدم لفضح الفئران إلى الكحول خلال ما يعادلها من جميع الأثلاث الثلاثة للتنمية البشرية

14.6K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/51839

⸱

يوليو 13, 2014

 ,  ,  , 
1Department of Neurosciences, School of Medicine, University of New Mexico Health Sciences Center

في هذه المقالة

ملخص

ونحن لشرح بناء غرف بخار الكحول باستخدام مواد متوفرة بسهولة في وقت واحد التي تضم 6 أقفاص الماوس. وصفنا مزيد من استخدامها في نموذج الفأر من التعرض للكحول الجنين يعادل كل الأثلاث 3 من الحمل الإنسان. هذا النموذج يعرض الحيوانات أثناء الحمل وبعد الولادة 1-12 أيام.

الملخص

التعرض للكحول أثناء التطور يمكن أن يؤدي إلى كوكبة من التشوهات المورفولوجية والسلوكية التي تعرف باسم اضطرابات الكحول الجنينية الطيف (FASDs). في نهاية أشد من الطيف هو متلازمة الكحول الجنينية (FAS)، وتتميز تأخر النمو، dysmorphology القحفي، والعجز السلوك العصبي. وقد أوضحت الدراسات مع النماذج الحيوانية، بما فيها القوارض، العديد من الآليات الجزيئية والخلوية المشاركة في الفيزيولوجيا المرضية لFASDs. وقد استخدمت الإدارة الإيثانول إلى القوارض الحوامل لنموذج تعرض الإنسان خلال الثلث الأول والثاني من الحمل. تم غرار الثالث استهلاك الإيثانول الثلث في البشر باستخدام القوارض حديثي الولادة. ومع ذلك، فقد اتسمت دراسات قليلة القوارض تأثير التعرض الإيثانول خلال يعادل كل الأثلاث الثلاثة من الحمل الإنسان، وجود نمط من التعرض الذي هو شائع في النساء الحوامل. هنا، وتبين لنا كيفية بناء غرف بخار من بسهولة سالمواد btainable التي يمكن أن تستوعب كل ما يصل الى ستة أقفاص الماوس القياسية. وصفنا نموذجا غرفة بخار والتي يمكن استخدامها لنموذج التعرض لالإيثانول، مع الحد الأدنى من التعامل، خلال جميع الأثلاث الثلاثة. أثبتت دراستنا أن السدود الحوامل وضعت التسامح الأيضية كبيرة في الايثانول. ومع ذلك، لم الفئران حديثي الولادة لا تتطور التسامح الأيض وعدد من الأجنة، ووزن الجنين، الوزن المشيمة، عدد من الجراء / القمامة، وعدد من الجراء القتلى / القمامة، والوزن الجرو لم تتأثر بشكل كبير من التعرض الايثانول. ومن المزايا المهمة لهذا النموذج هو انطباقه على الدراسات على الفئران المعدلة وراثيا. بالإضافة إلى ذلك، هذا النموذج يقلل من التعامل مع الحيوانات، وإرباك كبيرة في مجال البحوث الكحول الجنينية.

المقدمة

يمكن شرب أثناء الحمل تضر الجنين، مما تسبب تغيرات المستمرة في العديد من الأجهزة والأنظمة التي تقلل بشكل كبير من نوعية الحياة بالنسبة للأفراد المتضررين وأسرهم. وتشير التقديرات إلى أن ما يقرب من 10-30٪ من النساء خلال فترة الحمل شرب في الولايات المتحدة، مع 1-8٪ 1،2 الشرب في نمط بنهم. مجموعة من الآثار التي تنتجها التعرض الإيثانول أثناء التطور الجنيني والتي تعرف باسم اضطرابات طيف الكحول الجنيني (FASDs). وتشير التقديرات الأخيرة التي FASDs هي مشكلة صحية عامة رئيسية مع انتشار عالية مثل 2-5٪ في الولايات المتحدة 3. مظهر من مظاهر أكثر شدة من FASDs هو متلازمة الكحول الجنينية (FAS)، والتي تتميز تأخر النمو، تشوهات القحفي، والعجز السلوك العصبي، بما في ذلك صعوبات التعلم. ويقدر انتشار FAS أن يكون 0،2-0،7٪ في الولايات المتحدة 3. العلاجات المتاحة حاليا لFASDs تكون فعالة جزئيا فقطوتطوير علاجات أكثر فعالية محدودة بسبب سوء فهم الأسس الخلوية والجزيئية من هذا الطيف معقدة من الاضطرابات.

وتشير البيانات الوطنية من العيوب الخلقية دراسة الوقاية (NBDPS) أن النساء الحوامل شرب الأكثر شيوعا خلال الأشهر الثلاثة شارع 1، قبل أن يتم الكشف عن الحمل، تليها الامتناع عن ممارسة الجنس خلال مراحل لاحقة من الحمل 2. وجدت NBDPS أيضا أن نمط الثانية الأكثر شيوعا للاستهلاك الإيثانول أثناء الحمل ينطوي الشرب في جميع الثلث من الحمل 2. وأسباب ذلك نقص الوعي حول الآثار الضارة المحتملة للتعرض الجنين الإيثانول (حتى في الجرعات المنخفضة)، محدودية فرص الحصول على الرعاية ما قبل الولادة، والتاريخ إيجابية للاضطرابات العصبية والنفسية، وتعاطي أو الاعتماد على الايثانول 4. ومن المثير للاهتمام، ذكرت وNBDPS أن النمط الثالث الأكثر شيوعا للاستهلاك المعنية الامتناع عن ممارسة الجنس أثناء 1 الحادي و2 الثلث الثاني يليه الاستهلاك خلال الربع الثالث 3، في كثير من الأحيان عندما يفترض أن شرب آمنة بسبب توالد تم الانتهاء معظمها. ومع ذلك، فإن الثلث الثالث 3 هي فترة قابلية عالية لالإيثانول الناجم عن تلف النظام العصبي لأن هذه هي الفترة التي يخضع الدوائر العصبية العميقة صقل 2. كما حددت NBDPS الأخرى، وأنماط أقل تواترا من استهلاك الكحول التي تحدث أثناء الحمل، بما في ذلك الاستهلاك في جميع أنحاء شارع 1 و 2 الثلث الثاني تليها الامتناع عن ممارسة الجنس خلال الأشهر الثلاثة الثالثة 3 2.

في محاولة لوضع نموذج لأنماط مختلفة من استهلاك الايثانول لوحظ في النساء الحوامل، وقد وضعت عددا من النماذج التنموية التعرض الإيثانول باستخدام الأنواع الحيوانية المختلفة، مع الجرذان والفئران كونها 5،6 الأكثر شيوعا. مدة الحمل في هذه الحيوانات عادة لاسنهاية الخبر ما يقرب من 3 أسابيع، والتي تتطابق مع شارع 1 و 2 الثلث الثاني من الحمل الإنسان. وتقييم العديد من الدراسات القوارض تأثير جرعات وأنماط التعرض الإيثانول مختلفة خلال هذه الفترة. أمثلة من الأساليب المستخدمة بشكل متكرر لإدارة الإيثانول إلى الفئران والجرذان الحوامل وتشمل الإدارة عن طريق الوجبات الغذائية السائلة 7،8، إضافة الإيثانول إلى مياه الشرب 9،10 والشرب الطوعية للحلول المحلاة السكرين 11، التغذية الأنبوبية المعدة 12، واستنشاق بخار 13 ، وتحت الجلد أو الحقن داخل الصفاق 14. وقد لخص نتائج هذه الدراسات العديد من العجز التي لوحظت في البشر مع FASDs، مما يدل على أن التعرض أثناء المراحل الأولى من الحمل هو كاف لتلف الدوائر العصبية في الدماغ (إعادة النظر في 6،15).

وقد أثبتت التجارب أيضا مع القوارض أن التعرض أثناء يعادل الثالثة 3 الثلث من الحمل الإنسان، والتي تتطابق تقريبا الأسابيع 1-2 الأولى من الحياة بعد الولادة في الجرذان والفئران، ويمكن أن يضعف بشكل كبير نمو المخ. تم غرار التعرض خلال هذه الفترة عن طريق إعطاء الإيثانول إلى الفئران حديثي الولادة أو الفئران. وقد تم إعطاء الإيثانول لهذه الحيوانات باستخدام مجموعة متنوعة من الأساليب، بما في ذلك عن طريق تغذية المعدة في الحيوانات المرباة اصطناعيا-16-18، التنبيب المعدة 19، الحقن تحت الجلد 20، وبخار استنشاق 21،22. وقد أثبتت هذه الدراسات أن النمو مقنع طفرة الدماغ هو فترة من الضعف الشديد للآثار التنموية من الايثانول 6.

كما ذكر أعلاه، الشرب خلال جميع الأثلاث الحمل هو نمط مشترك من استهلاك الإيثانول في النساء 2. ومع ذلك، فقد قيمت دراسات قليلة نسبيا من تأثير هذا النمط من التعرض باستخدام نماذج حيوانية. وقد اتخذت بعض هذه الدراسات الميزه(ه) من الحيوانات الكبيرة حيث يحدث 3 الثالثة الثلث مكافئ في الرحم بدلا من فترة الوليد كما في حالة الجرذان والفئران. وتشمل هذه النماذج الحيوانية الرئيسيات غير البشرية 23،24 والأغنام 25-27. ومع ذلك، لم يتم استخدام هذه النماذج الحيوانية على نطاق واسع في مجال البحوث FASDs، في جزء منه، وذلك بسبب التكلفة العالية والحاجة إلى مرافق الرعاية المتخصصة. تم القوارض أكثر شيوعا لوصف تأثير كل الثلث التعرض الإيثانول على نمو الجنين 5. كانت خنازير غينيا من المفيد بشكل خاص في هذا الصدد نظرا استحداثها قبل الولادة واسعة والتشابه في نضوج الدماغ إلى أن من البشر 28،29. مع خنازير غينيا، فقد كان من الممكن لتوصيف تأثير التعرض الإيثانول في الرحم الذي يتضمن فترة التنمية يعادل الثلث الثالث الإنسان 3. التكلفة العالية نسبيا من هذه الحيوانات، وكذلك مدة طويلة نسبيا من الحمل(~ 67 يوما)، ويقتصر استخدامها على عدد قليل من المختبرات العاملة في مجال البحوث FASDs.

بسبب استخدام فعالية التكاليف واسعة في مجال البحوث الطبية الحيوية، استخدمت محققين الفئران لنموذج التعرض لالإيثانول خلال جميع الأثلاث من الحمل. في الدراسات الأولية، تعرضت الجرذان أثناء الحمل عن طريق الوجبات الغذائية السائلة تليها إدارة الإيثانول عن طريق المعدة لتربيتها صناعيا حديثي الولادة (ثلاثة أيام بعد الولادة (P) 1-10) مما أدى إلى ذروة مستويات الإيثانول في الدم (BEC) في السدود من 0.08 غ / دل وفي الجراء 0.16 غ / دل. تسبب هذا النموذج تعديلات طويلة الأمد في العصب البصري تكون الميالين وقللت من عدد من الألياف الدبقية بيرجمان في المخيخ 30-32. وبالمثل، ماير والمتعاونين باستخدام ظروف تربية الاصطناعية تدار الإيثانول إلى إناث الفئران الحوامل بطريقة تشبه بنهم عبر التنبيب المعدة تليها الإدارة حديثي الولادة خلال جزء من 3 الثالثة الثلث أي ما يعادل (P4-9) 33،34. Pكانت EAK BECS الأم والجرو 0.3 غ / دل في كل يوم الحمل 20 و P6. أدى هذا التعرض نموذج عن الثلث في تأخر النمو التي كانت أكبر بكثير من تلك التي لوحظت في الجراء تتعرض خلال فترات مختارة من الحمل 33. بالإضافة إلى ذلك، الفئران المعرضين للإيثانول خلال يعادل كل الأثلاث أظهرت انخفاضا في عدد المخيخ العصبية والخلايا الحبيبية التي كانت أكبر من تلك التي لوحظت في الحيوانات التي تعرضت خلال فترات أخرى 34. ولم يبلغ عن وتخفيضات في أعداد الخلايا الحصين أيضا مع هذا النموذج، ولكن يبدو أن هذه الآثار أن تكون في المقام الأول نتيجة لتعرض خلال الأشهر الثلاثة الثالثة 3-يعادل 35. والأسلوب الذي ينطوي على إدارة الإيثانول عن طريق التغذية الأنبوبية المعدة إلى كل من الفئران الحوامل والفئران حديثي الولادة قد استخدمت أيضا لنمذجة جميع التعرض الثلث 36. هذا الأسلوب، والتي أسفرت عن BECS 0.13 غ / دل في السدود (يوم 17 الحملي) و 0.24 جم / ديسيلتر في الجراء P6، خط الطول يسببهاالتعديلات الأمد في مستويات الناقل العصبي ز مونوامين في الحصين والمهاد، وزيادة التعبير عن ميثيل الحمض النووي والبروتين الميثيل الدليل السياسي الشامل 2 ملزمة في قرن آمون 37،38. باستخدام نموذج التعرض مماثلة (BEC = ،14-0،2 غ / دل في السدود و 0.2 غ / دل في الجراء)، جيل، Mohapel وآخرون 39 الكشف عن زيادة في عدد الخلايا العصبية غير ناضجة جديدة في التلفيف المسنن الجرذان الكبار التي قد تمثل آلية تعويضية لالإيثانول الناجم عن تلف الخلايا العصبية أو تغيير في نضوج الخلايا العصبية المولد الكبار. وقد حاول المحققون أيضا إلى نموذج عن التعرض الثلث الايثانول من خلال تعريض السدود عبر النظم الغذائية السائلة أو مياه الشرب على حد سواء أثناء الحمل والرضاعة 9،40. ومع ذلك، فإن فائدة تعريض الجراء عن طريق حليب الأم هو محدودة لأنه يؤدي عادة في BECS منخفضة الجرو (على سبيل المثال، ،002-،05 غ / دل؛ 41،42).

كما استخدمت الفئران وتمديدively لتوصيف آثار التعرض الايثانول التنموية. هذا نموذج حيواني أسهم العديد من نقاط القوة المذكورة أعلاه لنموذج حيواني الفئران، مع ميزة إضافية هي أن العديد من سلالات الفئران المعدلة وراثيا المتوفرة 5. وقد استخدمت الفئران بنجاح لوصف آثار الإيثانول خلال شارع 1، 2 أو 3 الثلث الثاني من الحمل الثالث 43،44. ومع ذلك، فإن تأثير التعرض الثلث على جميع هذه الحيوانات لم تتميز جيدا لأنه من الناحية التقنية أكثر صعوبة لفضح الفئران خلال يعادل الثلث من الحمل عن الإنسان. على سبيل المثال، تربية الاصطناعي والتغذية الأنبوبية المعدة، والتي تم استخدامها بنجاح في الفئران، تتطلب إجراءات أكثر تخصصا في الفئران 45. إلى حد علمنا، وقد حاولت دراسة واحدة فقط حتى الآن لدراسة تأثير كل التعرض الثلث الإيثانول باستخدام الفئران؛ تعرضت هذه الحيوانات إلى حل الإيثانول في شرب الماء الدورينانوغرام الحمل والرضاعة 46. كانت BECS الأمهات لم يتحدد 0.07 غ / دل والجرو BECS، ولكن من المتوقع أن يكون جزء من تلك الموجودة في السدود.

هنا، نحن تصف نموذجا جديدا للتعرض جميع الثلث الإيثانول من الفئران حيث يدار الكحول على كل من السدود الحوامل وحديثي الولادة عن طريق استنشاق بخار غرف. بنيت غرف بخار بناء على التصميم السابق 47. نحن نقدم تعليمات مفصلة حول كيفية بناء غرف الاستنشاق وتنفيذ الإجراءات التعرض. ونحن أيضا تقديم معلومات عن BECS التي يمكن تحقيقها، وتأثير التعرض على البقاء على قيد الحياة والنمو الجرو.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوان من جامعة العلوم المكسيك الصحة جديد مركز المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام اللجنة.

1. بخار الجمعية غرفة

  1. صفائح البولي مع قطع منشار دائري أو بانوراما للأبعاد المقدمة في الفيديو لأعلى، أسفل، الأمام والخلف، والجانبين، وباب (الشكل 1 والجدول 1).
  2. مع منشار دائري أو بانوراما، وقطع فتحة 8 بوصة عالية بنسبة 16 بوصة واسعة في وسط اللوحة الأمامية.
  3. قياس وبمناسبة الثقوب لالمفصلي البيانو على 18 بوصة بنسبة 10 بوصة ورقة البولي التي ستصبح باب الغرفة.
  4. في الباب، حفر ثقوب بالوعة مواجهة مع قليلا 5/16 بوصة الحفر، ومع قليلا 3/16 بوصة الحفر، حفر حفرة لمسامير. تأكد لحفر ثقوب بالوعة مضادة في الداخل من الباب لرؤساء المسمار.
  5. إعداد ورقة البولي لحام.
  6. تجميع جيئة وذهاباالإقليم الشمالي، والألواح إلى الوراء، والجانب على اللوحة السفلية باستخدام لحام على رقم 16.
  7. ختم أي الفجوات بين الألواح مع لحام على رقم 16.
  8. نعلق اللوحة العلوية مع لحام على رقم 16.
  9. استخدام المشابك شريط أو الكتب المدرسية الثقيلة لعقد كل شيء في المكان في حين اللحامات علاج.
  10. إرفاق 1 بوصة بواسطة قطعة 12 بوصة من البولي على اللوحة الأمامية 1 بوصة أدناه لفتح باب الحجز على المفصلي الباب.
  11. سماح لا تقل عن 24 ساعة لحام على لعلاج.
  12. خفض 2 قطعة من PEX أنابيب 12 بوصة طويلة و 1 قطعة من 1 بوصة طويلة أنابيب إغلاق الجلسة السابقة.
  13. مع 5/16 مثقاب، حفر حفرة في كل من 12 بوصة PEX الأنابيب حوالي 1 إلى 2 بوصة من نهاية واحدة.
  14. نعلق 2 × 12 بوصة PEX الأنابيب إلى 3/8 بوصة T-موصل مع الثقوب تقع بعيدا عن الموصل.
  15. سقف نهايات مفتوحة للأنابيب PEX مع 3/8 بوصة المقابس.
  16. إرفاق المفصلي البيانو إلى اللوحة الأمامية والباب باستخدام براغي آلة 4-40 والمكسرات.
  17. باستخدام الباب كدليل، متابوت الثقوب اللازمة لالمفصلي البيانو على فاصل 1 بوصة على اللوحة الأمامية للغرفة.
  18. مع قليلا 3/16 بوصة الحفر، حفر ثقوب في اللوحة الأمامية للالمفصلي البيانو.
  19. نعلق الباب والبيانو المفصلي إلى اللوحة الأمامية باستخدام 4-40 براغي آلة والمكسرات.
  20. تجميع المشابك تبديل كما هو موضح في الفيديو مع غسالة والجوز على جانبي الذراع الجانب.
  21. العلامة وحفر 3/16 بوصة فتحات لتبديل المشابك على اللوحة الأمامية ويرفق مع تبديل المشابك 4-40 براغي آلة والمكسرات.
  22. إضافة 3/8 بوصة الأختام لمبة المطاط إلى الداخل من الباب.
  23. مع 5/8 بوصة مثقاب مملة، حفر حفرة في وسط اللوحة العلوية لمدخل الميناء.
  24. حفر حفرة 1/2 بوصة في الجزء السفلي / وسط اللوحة الخلفية للمنفذ الخروج.
  25. تجميع ميناء الخروج عن طريق دفع جزء مترابطة من 3/8 بوصة محولات من خلال الجدار من خلال الجدار الخلفي للغرفة بخار في حفرة منفذ الخروج. نعلق الجوز منداخل غرفة أن تعقد في مكان.
  26. إزالة الغطاء الواقي من صفائح البولي.
  27. نعلق قطعة 1 بوصة من PEX الأنابيب إلى T-الموصل وإجبار أنابيب البورصة من خلال ثقب في الجزء العلوي من الغرفة من الداخل.
  28. إرفاق 3/8 بوصة 90 الكوع الى الجزء العلوي من 1 بوصة PEX الأنابيب من الخارج.
    ملاحظة: حفر حفرة 1/2 بوصة في الباب وإدراج 1/2 بوصة ختم حواجز في حفرة.
  29. كرر الخطوات من 1-22 للسيطرة على الهواء غرفة فقط.

2. الرف والجمعية توصيل الهواء

  1. إذا وضع الدوائر على العربة / رف المذكورة في قائمة المواد، تجميع المحتوى وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
  2. مع المكسرات الغيار والمسامير، ونعلق على قطعة خردة من البولي إلى رف لعقد المنظمين تدفق الهواء.
  3. في أي مكان على قطعة خردة من البولي، علامة والحفر 3/4 بوصة فتحات لتدفق الهواء والمنظمين إرفاق المنظمين مع المكسراتالمقدمة.
  4. نعلق 3/8 بوصة من خلال الجدار محول لمدخل ومخرج الموانئ من تدفق الهواء المنظمين.
  5. تجميع قارورة الإيثانول مع الحجر تهوية، # 8 سدادة والإفراج السريع الموصلات في خط.
  6. باستخدام 3/8 بوصة أنابيب Tygon، قم بتوصيل تدفق المنظمين لمضخة الهواء والإيثانول قارورة كما هو مبين في الشكل 1.
  7. لغرفة الهواء فقط، ونعلق ميناء خروج منظم تدفق الهواء إلى مدخل 3/8 بوصة 90 الكوع مع 3/8 بوصة أنابيب Tygon كما هو مبين في الشكل 1.

figure-protocol-1
الشكل 1. تمثيل تخطيطي لتكوين غرف بخار. وترد T-الموصل للمضخة الهواء وانخفاض مستوى الضجيج. ويرتبط جانب واحد من T-موصل مباشرة إلى منظم تدفق الهواء للغرفة بخار الهواء فقط. ق أخرىيتم تقسيم بيئة تطوير متكاملة مرة أخرى وتعلق على تدفق الهواء 2 المنظمين مختلفة، واحدة للهواء واحد لإنتاج الإيثانول. يتم توصيل غرفة الهواء مباشرة إلى منظم كما هو مبين. للغرفة بخار الإيثانول، يتم توصيل منظم تدفق الهواء واحدة إلى الحجر تهوية التربة مغمورة في الإيثانول السائل في قارورة التصفية. ويرتبط الميناء الذراع الجانب من القارورة فلتر مع إخراج منظم الهواء كما هو مبين. ثم يتم توصيل بخار الإيثانول اندمجت والهواء إلى مدخل غرفة بخار الايثانول. يتم توصيل الأنابيب منفذ (لا يظهر) إلى منفذ التهوية في الغرفة.

3. اختبار بخار الدوائر وضبط مستويات الإيثانول

  1. إضافة 600 مل من الإيثانول إلى 190 دليل القارورة التصفية، أدخل الحجر تهوية، وربط ما يصل الى مدخل أنبوب إلى الذراع الجانب من القارورة.
  2. وثيقة أبواب الغرفة وبدوره على مضخة الهواء.
  3. ضبط تدفق الهواء المنظمين بحيث يتدفق ما يقرب من نصف كمية الهواء من خلال الكحول السائل كما الهواء يتم مزجه مع. Adjusر الهواء تدفق الهواء فقط لتدفق مجتمعة من الكحول والهواء للغرفة الايثانول.
  4. السماح غرف للتوازن لمدة 30 دقيقة على الأقل قبل قياس تركيز الايثانول الهواء.
  5. قياس تركيز الايثانول الهواء عن طريق استخراج 5 مل من الهواء مع إبرة 18G وحقنة 60 مل من خلال الحاجز. تمييع تلك العينة مع هواء الغرفة من خلال الاعتماد على المكبس إلى 60 مل (1:12 تمييع). قياس مستوى الإيثانول الهواء باستخدام الكحول وفقا لتوجيهات المصنع. هناك حاجة إلى التخفيف من الهواء الغرفة لتحقيق مستويات بخار الكحول ضمن نطاق الكشف عن الكحول.
    ملاحظة: في حالة استخدام مستويات مختلفة من التعرض للكحول قد تحتاج التخفيف الى تعديلها.
  6. كنقطة انطلاق، وضبط تدفق الهواء حسب الحاجة المنظمين لتحقيق تركيز الكحول في الهواء من حوالي 4.5-5 غ / دل (غرام من الكحول يتبخر في الهواء دل).

4. تربية الحيوان

  1. الإناث المنزل مجموعة C578BL / 6 الفئران (2-3 أشهر من العمر) لا يقل عن 1 في الاسبوع لمزامنة دورات المبيض.
  2. منزل فردي الذكور C57BL / 6 الفئران (2-5 أشهر من العمر) لمدة 2 أسابيع على الأقل.
  3. بعد مزامنة، ووضع الإناث واحد في واحدة مع الذكور لمدة 5 أيام للسماح للتزاوج.
  4. بعد التزاوج، وإزالة الذكور والإناث كل على حدة البيت ووضعها في غرف.

5. ما قبل وبعد الولادة الإيثانول بخار التعرض

  1. فضح السدود الحوامل لبخار الإيثانول لمدة 4 ساعة يوميا ابتداء من الساعة 10:00 خلال دورة ضوء (أضواء من 06:00 حتي 06:00) باستثناء يوم الولادة لمنع الموت الجرو.
  2. تزن السدود في يوم الحمل (G) 5، ​​G13-G14، G18-G20 ورصد حالات الحمل؛ تم تغيير الفراش في أيام أن الإناث وزنه للحد من التعامل معها.
  3. كل يوم تحل محل المواد الغذائية للمجموعات المعرضة الإيثانول لتجنب استهلاك الكريات مع أي الإيثانول استيعابهم لها.
  4. في يومالولادة لا تعرض الحيوانات. بعد الولادة فضح السدود والجراء لمدة 4 ساعة يوميا ابتداء من الساعة 10:00 من P1-P12.
  5. تزن الجراء على P2، P8، P12، P25 و؛ وتغيير الفراش على P8 P12 وإلى تقليل التعامل إضافية.
  6. مباشرة بعد التعرض الماضي (P12)، ونقل الأقفاص إلى غرفة السكن الحيوانية القياسية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

ويبين الشكل 2A أن كلا من الفئران الحوامل والأطفال حديثي الولادة ذرية تعرضوا لتركيزات بخار الإيثانول مستقرة نسبيا في المجلسين. هذه تراوحت بين 4-6 غ / دل. ويبين الشكل 2B في BECS المحرز في الفئران الحوامل بوصفها وظيفة من الوقت. تم قياس BECS باستخدام نازعة الكحول قياسية استنادا مقايسة 48. في G5، ارتفع BECS بسرعة إلى ~ 60 ملم 2 ساعة بعد بدء التعرض وبلغت ذروتها في نهاية فترة التعرض 4 ساعة. انخفضت BECS تدريجيا إلى ~ 12 ملي بعد 4 ساعة إضافية بع...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

هنا، نحن تصف بالتفصيل طرق لبناء غرف استنشاق بخار. هي المواد والأدوات اللازمة لبناء غرف متاحة بسهولة من عدد من الموردين التجاريين والخطوات لبناء غرف هي واضحة نسبيا. لا يحتوي النظام الذي وصفنا هنا أي فحص الصمامات في خط لمنع عودة تدفق والاختلاط. لم نتمكن من قياس أي الإيثانول يمكن كشفها في الهواء غرف فقط مما يدل على أن ليس لدينا أي خلط أو تدفق الخلفي من الإيثانول في الهواء الغرف فقط. الهواء يجب أن يتم التحقق غرف فقط للبخار الإيثانول بشكل دوري (تجدر الإشارة إلى أن غرفة الهواء ينبغي أن ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

بدعم من المعاهد الوطنية للصحة منح R01-AA015614، R01-AA014973، T32-K12-AA014127 وGM088021. المؤلفين أشكر سمانثا ل بلومكويست للحصول على المساعدة الفنية والدكاترة. كيفن كالدويل ودونالد الحجل لتقييم دقيق للمخطوطة والفيديو.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
البولي كربونات 1/4 بوصة شفافة 48 بوصة × 24 بوصةماكماستر كار8574K2310
ختم لمبة مطاطية رغوية 3/8 بوصة عرض × 7/32 بوصة ارتفاعماكماستر كار93085K6710 قدم
لحام # 16ماكماستر كار7515A113
مفصلات بيانو 12 بوصة طويلةماكماستر كار1658A112 × 1 قدم
مشابك تبديل التعليق القياسيةماكماستر كار5126A268
أنابيب PEX 1/2 "ماكماستر كار51275K88
أنبوب المحملة الشائكة 10 أقدام (أسود) Pkg 10McMaster-Carr5463K6081
تركيب القابس الشائك (أسود) Pkg 10McMaster-Carr5462K791
تركيب أنبوب الكوع الشائك (أسود) Pkg 10McMaster-Carr5463K5961
3/8 "محولات عبر الحائط ، أنبوب إلى أنبوب ملولبماكماستر كار5463K8511
برغي آلة فيليبس 4-40ماكماستر كار91772A1121
آلة برغي عرافة الجوز 4-40ماكماستر كار90480A0051
مقياس الجريان المثبت على اللوحة 2-20ماكماستر كار41945K763
قارورة ، فلتر 1,000 مل 6 / عبوةVWR89001-8002
الدقة ختم الحاجزVWR89084-4901
VWR سدادة مطاطية سوداء # 8 1 ثقبVWR59581-3671
أنبوب TYGON R3603 3 / 8X9 / 16 50'VWR89068-5561
أنبوب TYGON R3603 1 / 4X11 / 16 50'VWR89068-5021
مهوية P2120VWR32573-0071
3/8 "موصلات T" Pk من 20VWR46600-0601
VWR فواصل مدبب Pk من 10VWR46600-1101
3/8 خرطوم شوكة صمام في خط اقترانشركة المنتجات الباردةHFCD176121
مضخة هواء متوسطة السعةLMI مصنعيDB60L1
رفوف سلكية Nexelate 36 "W X 24" D X 63 "HT9A990135 الصناعية العالمية1
مجموعة عجلات جذعية من (4) 5 عجلات البولي يوريثينالعالميةT9A5005911
تركيب حجر الصناعية

المراجع

  1. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). World Health Organization Who. Alcohol use and binge drinking among women of childbearing age--United States. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 61 (28), 534-538 (2012).
  2. Ethen, M. K., et al. Alcohol consumption by women before and during pregnancy. Matern Child Health J. 13, 274-285 (2009).
  3. May, P. A., et al. Prevalence and epidemiologic characteristics of FASD from various research methods with an emphasis on recent in-school studies. Dev Disabil Res Rev. 15, 176-192 (2009).
  4. Wendell, A. D. Overview and epidemiology of substance abuse in pregnancy. Clin Obstet Gynecol. 56, 91-96 (2013).
  5. Cudd, T. A. Animal model systems for the study of alcohol teratology. Exp Biol Med (Maywood. 230, 389-393 (2005).
  6. Valenzuela, C. F., Morton, R. A., Diaz, M. R., Topper, L. Does moderate drinking harm the fetal brain? Insights from animal models). Trends Neurosci. 35, 284-292 (2012).
  7. Sliwowska, J. H., Song, H. J., Bodnar, T., Weinberg, J. Prenatal Alcohol Exposure Results in Long-Term Serotonin Neuron Deficits in Female Rats: Modulatory Role of Ovarian Steroids. Alcohol Clin. Exp. Res. 10, (2013).
  8. Sutherland, R. J., McDonald, R. J., Savage, D. D. Prenatal exposure to moderate levels of ethanol can have long-lasting effects on hippocampal synaptic plasticity in adult offspring. Hippocampus. 7, 232-238 (1997).
  9. Naassila, M., Daoust, M. Effect of prenatal and postnatal ethanol exposure on the developmental profile of mRNAs encoding NMDA receptor subunits in rat hippocampus. J Neurochem. 80, 850-860 (2002).
  10. Servais, L., et al. Purkinje cell dysfunction and alteration of long-term synaptic plasticity in fetal alcohol syndrome. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 9858-9863 (2007).
  11. Brady, M. L., Allan, A. M., Caldwell, K. K. A limited access mouse model of prenatal alcohol exposure that produces long-lasting deficits in hippocampal-dependent learning and memory. Alcohol Clin Exp Res. 36, 457-466 (2012).
  12. Bake, S., Tingling, J. D., Miranda, R. C. Ethanol exposure during pregnancy persistently attenuates cranially directed blood flow in the developing fetus: evidence from ultrasound imaging in a murine second trimester equivalent model. Alcohol Clin Exp Res. 36, 748-758 (2012).
  13. Cuzon, V. C., Yeh, P. W., Yanagawa, Y., Obata, K., Yeh, H. H. Ethanol consumption during early pregnancy alters the disposition of tangentially migrating GABAergic interneurons in the fetal cortex. J Neurosci. 28, 1854-1864 (2008).
  14. Godin, E. A., et al. Magnetic resonance microscopy defines ethanol-induced brain abnormalities in prenatal mice: effects of acute insult on gestational day 7. Alcohol Clin Exp Res. 34, 98-111 (2010).
  15. Gil-Mohapel, J., Boehme, F., Kainer, L., Christie, B. R. Hippocampal cell loss and neurogenesis after fetal alcohol exposure: insights from different rodent models. Brain Res Rev. 64, 283-303 (2010).
  16. Diaz, J., Samson, H. H. Impaired brain growth in neonatal rats exposed to ethanol. Science. 208, 751-753 (1980).
  17. Stanton, M. E., Goodlett, C. R. Neonatal ethanol exposure impairs eyeblink conditioning in weanling rats. Alcohol Clin Exp Res. 22, 270-275 (1998).
  18. West, J. R., Hamre, K. M., Pierce, D. R. Delay in brain growth induced by alcohol in artificially reared rat pups. Alcohol. 1, 213-222 (1984).
  19. Tran, T. D., Stanton, M. E., Goodlett, C. R. Binge-like ethanol exposure during the early postnatal period impairs eyeblink conditioning at short and long CS-US intervals in rats. Dev Psychobiol. 49, 589-605 (2007).
  20. Ikonomidou, C., et al. Ethanol-induced apoptotic neurodegeneration and fetal alcohol syndrome. Science. 287, 1056-1060 (2000).
  21. Heaton, M. B., Paiva, M., Madorsky, I., Siler-Marsiglio, K., Shaw, G. Effect of bax deletion on ethanol sensitivity in the neonatal rat cerebellum. J Neurobiol. 66, 95-101 (2006).
  22. Ryabinin, A. E., Cole, M., Bloom, F. E., Wilson, M. C. Exposure of neonatal rats to alcohol by vapor inhalation demonstrates specificity of microcephaly and Purkinje cell loss but not astrogliosis. Alcohol Clin Exp Res. 19, 784-791 (1995).
  23. Kraemer, G. W., Moore, C. F., Newman, T. K., Barr, C. S., Schneider, M. L. Moderate level fetal alcohol exposure and serotonin transporter gene promoter polymorphism affect neonatal temperament and limbic-hypothalamic-pituitary-adrenal axis regulation in monkeys. Biol Psychiatry. 63, 317-324 (2008).
  24. Schneider, M. L., et al. Moderate-level prenatal alcohol exposure alters striatal dopamine system function in rhesus monkeys. Alcohol Clin Exp Res. 29, 1685-1697 (2005).
  25. Ramadoss, J., Hogan, H. A., Given, J. C., West, J. R., Cudd, T. A. Binge alcohol exposure during all three trimesters alters bone strength and growth in fetal sheep. Alcohol. 38, 185-192 (2006).
  26. Ramadoss, J., Lunde, E. R., Pina, K. B., Chen, W. J., Cudd, T. A. All three trimester binge alcohol exposure causes fetal cerebellar purkinje cell loss in the presence of maternal hypercapnea, acidemia, and normoxemia: ovine model. Alcohol Clin Exp Res. 31, 1252-1258 (2007).
  27. Ramadoss, J., Tress, U., Chen, W. J., Cudd, T. A. Maternal adrenocorticotropin, cortisol, and thyroid hormone responses to all three-trimester equivalent repeated binge alcohol exposure: ovine model. Alcohol. 42, 199-205 (2008).
  28. Byrnes, M. L., Reynolds, J. N., Brien, J. F. Brain growth spurt-prenatal ethanol exposure and the guinea pig hippocampal glutamate signaling system. Neurotoxicol Teratol. 25, 303-310 (2003).
  29. Catlin, M. C., Abdollah, S., Brien, J. F. Dose-dependent effects of prenatal ethanol exposure in the guinea pig. Alcohol. 10, 109-115 (1993).
  30. Phillips, D. E., Krueger, S. K. Effects of combined pre- and postnatal ethanol exposure (three trimester equivalency) on glial cell development in rat optic nerve. Int J Dev Neurosci. 10, 197-206 (1992).
  31. Phillips, D. E., Krueger, S. K., Rydquist, J. E. S. hort- Short- and long-term effects of combined pre- and postnatal ethanol exposure (three trimester equivalency) on the development of myelin and axons in rat optic nerve. Int J Dev Neurosci. 9, 631-647 (1991).
  32. Shetty, A. K., Burrows, R. C., Wall, K. A., Phillips, D. E. Combined pre- and postnatal ethanol exposure alters the development of Bergmann glia in rat cerebellum. Int J Dev Neurosci. 12, 641-649 (1994).
  33. Maier, S. E., Chen, W. J., Miller, J. A., West, J. R. Fetal alcohol exposure and temporal vulnerability regional differences in alcohol-induced microencephaly as a function of the timing of binge-like alcohol exposure during rat brain development. Alcohol Clin Exp Res. 21, 1418-1428 (1997).
  34. Maier, S. E., Miller, J. A., Blackwell, J. M., West, J. R. Fetal alcohol exposure and temporal vulnerability: regional differences in cell loss as a function of the timing of binge-like alcohol exposure during brain development. Alcohol Clin Exp Res. 23, 726-734 (1999).
  35. Livy, D. J., Miller, E. K., Maier, S. E., West, J. R. Fetal alcohol exposure and temporal vulnerability: effects of binge-like alcohol exposure on the developing rat hippocampus. Neurotoxicol Teratol. 25, 447-458 (2003).
  36. Kelly, S. J., Lawrence, C. R. Intragastric intubation of alcohol during the perinatal period. Methods Mol Biol. 447, 101-110 (2008).
  37. Perkins, A., Lehmann, C., Lawrence, R. C., Kelly, S. J. Alcohol exposure during development: Impact on the epigenome. Int J Dev Neurosci. 31, 391-397 (2013).
  38. Tran, T. D., Kelly, S. J. Alterations in hippocampal and hypothalamic monoaminergic neurotransmitter systems after alcohol exposure during all three trimester equivalents in adult rats. J Neural Transm. 106, 773-786 (1999).
  39. Gil-Mohapel, J., et al. Altered adult hippocampal neuronal maturation in a rat model of fetal alcohol syndrome. Brain Res. 1384, 29-41 (2011).
  40. Popovic, M., Caballero-Bleda, M., Guerri, C. Adult rat's offspring of alcoholic mothers are impaired on spatial learning and object recognition in the Can test. Behav Brain Res. 174, 101-111 (2006).
  41. Guerri, C., Sanchis, R. Alcohol and acetaldehyde in rat's milk following ethanol administration. Life Sci. 38, 1543-1556 (1986).
  42. Matta, S. G., Elberger, A. J. Combined exposure to nicotine and ethanol throughout full gestation results in enhanced acquisition of nicotine self-administration in young adult rat offspring. Psychopharmacology (Berl. 193, 199-213 (2007).
  43. Olney, J. W. Fetal alcohol syndrome at the cellular level). Addict Biol. 9, 137-149 (2004).
  44. Sulik, K. K. Genesis of alcohol-induced craniofacial dysmorphism. Exp Biol Med (Maywood). 230, 366-375 (2005).
  45. Lewis, S. M., et al. Modifying a displacement pump for oral gavage dosing of solution and suspension preparations to adult and neonatal mice). Lab Anim (NY). 39, 149-154 (2010).
  46. Cebolla, A. M., et al. Effects of maternal alcohol consumption during breastfeeding on motor and cerebellar Purkinje cells behavior in mice. Neurosci Lett. 455, 4-7 (2009).
  47. Becker, H. C., Hale, R. L. Repeated episodes of ethanol withdrawal potentiate the severity of subsequent withdrawal seizures: an animal model of alcohol withdrawal "kindling". Alcohol Clin. Exp. Res. 17, 94-98 (1993).
  48. Galindo, R., Valenzuela, C. F. Immature hippocampal neuronal networks do not develop tolerance to the excitatory actions of ethanol. Alcohol. 40, 111-118 (2006).
  49. Workman, A. D., Charvet, C. J., Clancy, B., Darlington, R. B., Finlay, B. L. Modeling transformations of neurodevelopmental sequences across mammalian species. J Neurosci. 33, 7368-7383 (2013).
  50. Becker, H. C., Diaz-Granados, J. L., Weathersby, R. T. Repeated ethanol withdrawal experience increases the severity and duration of subsequent withdrawal seizures in mice. Alcohol. 14, 319-326 (1997).
  51. Ukita, K., Fukui, Y., Shiota, K. Effects of prenatal alcohol exposure in mice: influence of an ADH inhibitor and a chronic inhalation study. Reprod Toxicol. 7, 273-281 (1993).
  52. Varma, P. K., Persaud, T. V. Influence of pyrazole, an inhibitor of alcohol dehydrogenase on the prenatal toxicity of ethanol in the rat. Res Commun Chem Pathol Pharmacol. 26, 65-73 (1979).
  53. Balcombe, J. P., Barnard, N. D., Sandusky, C. Laboratory routines cause animal stress. Contemp Top Lab Anim Sci. 43, 42-51 (2004).
  54. Arias, C., Molina, J. C., Mlewski, E. C., Pautassi, R. M., Spear, N. Acute sensitivity and acute tolerance to ethanol in preweanling rats with or without prenatal experience with the drug. Pharmacol Biochem Behav. 89, 608-622 (2008).
  55. Nizhnikov, M. E., Molina, J. C., Varlinskaya, E. I., Spear, N. E. Prenatal ethanol exposure increases ethanol reinforcement in neonatal rats. Alcohol Clin Exp Res. 30, 34-45 (2006).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

غرف بخار الكحولنموذج جنين الفأر المعرض للكحولنموذج التعرض للإيثانولبناء غرفة من البولي كربوناتنظام تنظيم تدفق الهواءتعريض الفئران الحواملتعريض الفئران حديثة الولادةقياس نسبة الكحول في الدمسدادات المشابك القابلة للتبديلمنافذ الدخول والخروج
بناء غرف بخار يستخدم لفضح الفئران إلى الكحول خلال ما يعادلها من جميع الأثلاث الثلاثة للتنمية البشرية
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.