يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

طريقة مبتكرة من الدواء إلى عدة الزرد ( دانيو rerio) والكمي لسحب

11.9K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/51851

⸱

نوفمبر 12, 2014

 ,  , 
1Department of Psychology, MacEwan University

في هذه المقالة

ملخص

< p class = 'jove_content'> يتم شرح طريقة جديدة لتقليل التباين عند تعريض الأسماك للأدوية. تم العثور على الأسماك التي تعرضت لأنماط مختلفة من التعرض للإيثانول قد غيرت مستويات القلق أثناء الانسحاب في مقايسة سكوتوتكاسية فاتحة / داكنة.

الملخص

غالبا ما تتم دراسة اختبار القلق

بالاشتراك مع تطبيق المواد الدوائية. في هذه الدراسات ، يتم شباك الأسماك بشكل روتيني ونقلها بين الأحياء المائية المنزلية وخزانات الجرعات. من أجل تعزيز سهولة إعطاء المركب ، تم تطوير طريقة جديدة لنقل الأسماك بين الخزانات لإعطاء الأدوية. تم استخدام الإدخالات المصممة للتفريخ لنقل مجموعات من الأسماك إلى محلول الدواء ، مما يسمح بالجرعات الدقيقة لجميع الأسماك في المجموعة. هذا يزيد من دقة وكفاءة الجرعات ، والتي تصبح مهمة جدا في الجداول الزمنية الطويلة لإدارة الأدوية المتكررة. قمنا بتنفيذ هذا الإجراء لاستخدامه في دراسة تفحص سلوك الزرد في اختبار الضوء / الظلام بعد إعطاء الإيثانول بجداول زمنية مختلفة مدتها 21 يوما. في الأسماك المعرضة لكميات معتدلة يوميا من الكحول ، كان هناك اختلاف كبير في تفضيل الموقع بعد يومين من الانسحاب مقارنة بالمجموعة الضابطة. ومع ذلك، لم يلاحظ اختلاف يعتد به في تفضيل الموقع في مجموعة معرضة للإعطاء الأسبوعي للإفراهة.

يمكن تعميم هذا البروتوكول للاستخدام مع جميع أنواع المركبات القابلة للذوبان في الماء ويمكن استخدامه في أي موقف يتم فيه فحص سلوك الأسماك أثناء أو بعد الجداول الزمنية الطويلة لإدارة الدواء. يعد اختبار الضوء / الظلام أيضا طريقة قيمة لتقييم التغيرات الناجمة عن الانسحاب في القلق.

المقدمة

الزرد (دانيو rerio) هو نوع مكتملة العظام الصغيرة الناشئة في الهند الذي هو كائن نموذجا مفيدا للالسلوكي (1) والبحوث الطبية 2،3. كما تستخدم عادة في الزرد اختبار المواد الدوائية المختلفة من أجل تميز تأثيرها على السلوك. وقد تم استخدام الجرعات وجداول إدارة المخدرات المختلفة للتحقيق في سلوك الزرد بعد إدارة المركبات مثل المنشطات 4، 5 مزيلات القلق والإيثانول 6-8.

وقد حققت لدينا مختبر آثار اختلاف جداول إدارة الإيثانول على القلق الزرد وتنقل في التحقق جيدا الضوء / الظلام فحص 9، 20، كما يشار إلى الفحص scototaxic. وقد تم تطوير طريقة جديدة لإدارة الإيثانول لزيادة الكفاءة لالمتكررة، والإدارة اليومية على مدى فترة طويلة من الوقت (21 يوما) 6 . كانت الأساليب المستخدمة من قبل العملية، ومع ذلك، سعينا إلى تطوير طريقة التي خفضت المعاوضة، مع تكاليف الوقت المرتبط به، وسمحت في وقت واحد، والإدارة توقيتها بالضبط من المخدرات من اهتمام أعداد كبيرة من الأسماك. في البحث باستخدام الايثانول التقليدي، واحرز الزرد ونقل من خزان لآخر تحتوي على خليط مناسب من الايثانول والماء 10-12. في حين أن هذا الأسلوب هو مقبول على نطاق واسع، المعاوضة الزرد قد يزيد من تقلب في الوقت اللازم لإدخال وإزالة الأسماك من محلول الدواء. وبالتالي فإن التعرض المحدد لمجمع الفائدة قد تختلف على مدار تجربة تنطوي على جرعات متكررة. وهناك طريقة تقلل مصادر الخطأ الناجمة عن التقلبات في أوقات النقل وبالتالي مرغوب فيه. مع أسلوبنا ونحن قادرون على نقل كافة الأسماك في وقت واحد، مما أدى إلى متطابقة الوقت الجرعات في كل الأسماك. بعد التعرض الإيثانول (الموصوفة هنا)، الزرد يمكن اختبارها في أي العدد. dR من المقايسات السلوكية، بما فيها تلك التي تقيم القلق. الجرعات مجموعات من الأسماك باستخدام طريقة جديدة لديها الاستخدامات العملية تتجاوز قدرة على تكرار بدقة وتوحيد الجرعات بين المواضيع وعبر مجموعات من الأسماك. ظهور البرمجيات الجديدة التي تسمح لتتبع الأسماك متعددة في وقت واحد قد يرى الباحثون الاستفادة من الأساليب لضمان تكرارها والدقة في تجاربهم. وبالنظر إلى الانتشار الواسع لاستخدام الزرد باعتباره النموذج الحي لعلم الأعصاب السلوكي، وهذه الطريقة تزيد من الكفاءة والتطبيق العملي في الدراسات الدوائية المستقبلية.

في النموذج الحالي، كان يعمل جدول الجرعات المتكررة التي تعكس حوالي جداول الشرب الإنسان. تم تعيين الأسماك بشكل عشوائي إلى ثلاث مجموعات: السيطرة، يوميا المعتدلة، أو أسبوعي، بنهم. كان جدول الجرعات 21 يوما في المدة، واختياره لأنه تجاوز كثيرا مرات التعرض في الدراسات السابقة 7. تلقت الأسماك السيطرة الصفر جنة الموجودات والمطلوباتالحول، تلقت السمك يوميا معتدلة 0.2٪ كحول مرة واحدة في اليوم الواحد، وتلقى الأسماك أسبوعيا، حفلة 1.4٪ كحول مرة واحدة في الأسبوع. وقد استخدمت هذه المهمة الخفيفة / مظلمة لتقييم القلق 2 بعد أيام من الانسحاب. هذا اختبار بسيط نسبيا لإدارة والذي يستخدم ساحة مستطيلة فيها الجدران على جانب واحد هي بيضاء وعلى الجانب الآخر هي الداكنة 9. الزرد الكبار يفضلون بقوة الجانب المظلم من الساحة في ظل ظروف سيطرة 6،9،13. يتم تعريف تزايد القلق من الناحية العملية كما مزيدا من الوقت يقضيه في منطقة مظلمة، وانخفضت يمكن افتراض القلق عندما تنفق الأسماك أكثر نسبيا الوقت الذي يقضيه في المنطقة الخفيفة. مع برنامج حركة تتبع، والمتغيرات الإعلامية الأخرى ويمكن أيضا أن يكون كميا، بما في ذلك متوسط ​​السرعة، والجمود، التعرجات، ومنطقة التحولات 14.

طريقة الجرعات تطويرها في المختبر لدينا يمكن أن تنطبق على أي البحثية التي تدار المركبات القابلة للذوبان في الماء لzebrafi واحد أو أكثرش. ويجري حاليا اختبار العديد من وكلاء الدوائية الأخرى التي قد تستفيد من هذه المنهجية في الزرد. وتشمل مركبات اخضعت للاختبار عادة النيكوتين، الكلورديازيبوكسيد، بوسبيرون، وسكوبولامين، والتي حلت بطريقة مماثلة لالايثانول. عن طريق خلط كمية مناسبة من المواد الكيميائية في المياه. وبالتالي فإن النطاق العام من هذا الإجراء هو أوسع من ذلك بكثير، وليس مقصورا على الايثانول. وعلاوة على ذلك، وبعد الجرعات مع المخدرات لأيام متعددة، فإن المهمة الخفيفة / السوداء هي واحدة فقط من العديد من الاختبارات السلوكية التي يمكن استخدامها. بعد تناوله المخدرات أو أثناء الانسحاب، المقايسات الشعبية الأخرى التي يمكن استخدامها تشمل الغوص اختبار خزان 15 رواية واختبارات السلوك الاجتماعي مثل shoaling 16. فإن الإجراء التالي الخطوط العريضة وسيلة فعالة لنقل مرارا مجموعات من الأسماك أو الأسماك الفردية في الحلول التي تحتوي على مركب دوائي من الفائدة. بالإضافة إلى ذلك، فإن عملية الاختبار القلق مع ضوء اختبار / الظلامفي مجموعات من الأسماك الذين هم في الانسحاب بعد تعرضهم لجداول طويلة من إدارة الكحول سيتم وصفها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وتمت الموافقة على جميع الإجراءات والاختبارات السلوكية للأبحاث الحيوان أخلاقيات مجلس الجامعة MacEwan بموجب البروتوكول رقم 06-11-12، الذي هو في الامتثال مع المجلس الكندي للرعاية الحيوان المبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام حيوانات التجارب.

1. إعداد خزانات الجرعات، حلول، وإدارة الجدول الزمني

  1. إعداد جدول زمني إدارة مثل تلك الحيوانات لا مداوي في نفس البيئة، وخلال نفس الوقت من اليوم لتجنب أي يفند من الوقت أو يتحامل للمؤثرات البصرية.
  2. الحصول على أكبر عدد ممكن متطابقة، 1.5 L، واضحة خزانات البولي بروبلين وضع البيض كما الضرورية لعدد من الأحجام المجموعة. استخدام مجموعات من 8 الأسماك في الخزان، والذي يسمح لل2 مجموعات من الأسماك لفحصها يوميا في وقت لاحق في الإجراء (راجع الخطوة 3). استخدام واحد خزان وخزان واحد لكل مجموعة جرعات (2X عدد مجموعات).
    1. وضع 400 ميكرون إدراج وضع البيض في جميع الدبابات القابضة. Fسوء خزانات المياه مع الموائل أو المياه بالتناضح العكسي في درجة الحرارة الصحيحة (لالزرد، 25-28 ° C) يسكنون التي تنسجم مع الأسماك في درجة الحرارة عادة في.
      ملاحظة: يمكن أن يكون هناك تفاعلات كيميائية غير مرغوب فيها بين بعض العقاقير والمكونات الكيميائية للمياه البيئة مخزنة. في هذه الحالة، استخدام المياه التناضح العكسي مخزنة مع أملاح حوض السمك الحد الأدنى أو لا لإدارة المخدرات، وكذلك لمجموعات المراقبة.
    2. تأكد من أن الدبابات في بيئة محايدة لتجنب الأسماك تكييف للمؤثرات البصرية الخارجية خلال الجرعات.
  3. تحضير محلول الدواء. تخلط كمية مناسبة من الدواء مع الماء الموائل في أحواض التبويض. تحضير محلول الإيثانول بنسبة 0.2٪ خلال الجمع بين 3 مل من الايثانول درجة عالية (95٪ من الإيثانول غير التشويه والتحريف) مع 1497 مل من الماء. تحضير محلول الإيثانول بنسبة 1.4٪ خلال الجمع بين 21 مل من الايثانول مع 1479 مل من الماء.

2. المعاوضة الأسماك وإتhanol إدارة الإجراءات

  1. صافي بعناية الأسماك من الدبابات بيئتها ونقل إلى خزان المناسب الذي يحتوي على إدراج وضع البيض. من الناحية المثالية، بيت السمك في إدراج وضع البيض للقضاء على المعاوضة تماما.
  2. مع كل الأسماك في خزانات كل منهما، ورفع بلطف وضع البيض تضاف من خزان ووضعه في خزان محلول الدواء المناسب (الشكل 1A).
    1. تسجيل الوقت الجرعات على النحو المطلوب. استخدام 30 دقيقة في محلول الإيثانول لهذا الإجراء هو موضح هنا.
    2. إذا أمكن ذلك، لدينا مساعدين مساعدة في نقل جميع المجموعات التجريبية إلى حل المخدرات في وقت واحد لضمان دقة الوقت الجرعات. بدلا من ذلك، ونقل مجموعة واحدة في وقت وتتبع مجموعات الفردية الجرعات مرات (الشكل 1A).
  3. في نهاية الفترة الجرعات المطلوبة، وإزالة الأسماك من حل الإيثانول عن طريق رفع بعناية إدراج وضع البيضمن محلول الدواء ووضع بلطف مرة أخرى إلى خزان.
  4. شبكة بلطف السمك في خزانات ووضعها مرة أخرى إلى موائلها حتى وقت الجرعة القادمة المقررة، أو مكان وضع البيض تضاف مرة أخرى إلى خزان للقضاء على المعاوضة.
  5. كما ذكر سابقا، إن أمكن في إطار معايير المعدات الإسكان الحيوان، بيت الحيوانات في الدبابة نفسها وإدراج وضع البيض الذي يتم استخدام خزان. هذا سيقضي على المعاوضة تماما أثناء إجراء الإدارة.

3. اختبار السلوكي

  1. الحصول على الضوء / الظلام الساحة 9.5 سم بنسبة 55 سم طويلة وعميقة 9.5 سم مع أرضية للماء الأبيض (الشكل 1B). يضعوا الأبيض والأسود للماء ورقة غير عاكسة على الجدران الداخلية للحلبة باستخدام فيلكرو، مع نصف الساحة مغطاة باللون الأبيض وغطت نصف باللون الأسود. ملء الساحة إلى عمق 5 سم بالماء الموائل في درجة حرارة 25-28 درجة مئوية. الصيانةعين درجة الحرارة هذه طوال الاختبار.
  2. Minimalize المحفزات البصرية الخارجية من خلال بناء سياج ثلاثة جوانب البيضاء للساحة أن يقع فيه. تأكد منطقة الاختبار قد نشر الإضاءة العلوية التي لا تسبب انعكاسات على سطح الماء، ولكن هو مشرق لتتبع حركة البرمجيات، أو آخر بما فيه الكفاية -hoc الكمي اليدوي من صور الفيديو.
  3. وضع الساحة في العلبة ووضع تسجيل وتحليل حركة المعلمات من تتبع سلوك البرامج. تعيين المدة محاكمة ل5-15 دقائق، اعتمادا على سؤال البحث.
    ملاحظة: هنا، كنا 5 دقائق.
  4. نقل مجموعة من الأسماك لفحصها إلى منطقة الأبحاث في خزان الموائل ووضعها خارج العلبة الساحة. يتأقلم السمك لمدة 10 دقيقة.
  5. صافي بلطف السمك من مجموعة ومكان المناسبة في مركز النور / الساحة المظلمة، ويجري التأكد من الافراج عن الأسماك عند وضعها بشكل مواز لمحور طويل من الساحة لآفومعرف يتحامل الأسماك إلى منطقة الضوء أو الظلام.
  6. تبدأ السلوك التسجيل فورا بعد إصدارها الحيوان. مشاهدة اي مشاكل البرامج مع تتبع الأسماك أو القفز أو تجميد الأسماك. وتناوب على الساحة 180 درجة بعد أن تم اختبارها نصف من المواضيع لمنع أي يفند بسبب التحيزات الناجمة عن الموجه نهاية الساحة نحو نهاية مفتوحة من العلبة.
  7. بعد المحاكمة قد انتهت، صافي بلطف وإزالة الأسماك من الساحة إلى خزان أو صهريج الموائل.

4. تحليل

  1. دراسة الوقت المستغرق في ضوء مقابل المناطق المظلمة. لكل مجموعة ولكل الأسماك والحصول على الوقت النسبي الذي يقضيه في مناطق الضوء والظلام وتحليلها باستخدام عينة واحدة ر -test (أو وقعت اختبار Wilcoxon رتبة لبيانات اللامعلمية، الفرق من (نصف الوقت محاكمة الإجمالي) 150 ثانية) لتحديد ما إذا كانت مجموعات يفضلون بشكل كبير مجال واحد على الآخر.
  2. مقارنة الأفضليات، حساب prefeمؤشر rence بطرح الوقت الذي يقضيه في المنطقة الخفيفة من الوقت الذي يقضيه في منطقة مظلمة ومقارنة الاختلافات بين المجموعات. تي الاختبارات يمكن استخدامها للمقارنة بين مجموعتين. مقارنة مجموعات متعددة مع تحليل التباين في اتجاه واحد باستخدام اختبار آخر HSD خاصة توكي حيث من الضروري (أو كروسكال-اليس اختبار مع المقارنة متعددة دان اللاحق لاختبار البيانات اللامعلمية).
  3. مقارنة سرعة، عدد من التحولات منطقة، التعرجات، والجمود عبر مجموعات. استخدام تحليل التباين في اتجاه واحد باستخدام اختبار آخر HSD خاصة توكي حيث من الضروري (أو كروسكال-اليس اختبار مع المقارنة متعددة دان اللاحق لاختبار البيانات اللامعلمية).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

للحفاظ على الدقة والتحكم في الدراسات الدوائية مع الزرد من المهم أن الوقت مدة من إدارة الإيثانول باستمرار وبدقة على النحو المبين أعلاه. لدينا إجراءات يمكن أن تزيد من سهولة وسرعة إجراء الجرعات. أسفرت الإدارة من الايثانول إما على-حفلة أسبوعية أو يومية، الجدول الزمني المعتدل في مستويات القلق المتغيرة، ويقاس مع الضوء / الظلام اختبار، مقارنة مع الضوابط. عند اختبارها بعد يومين من الجرعات الماضية، الزرد في المجموعة الضابطة (الذين لم يتلقوا أي الكحول، ولكن لا تزال انتقل إلى خزانات الجرعات)...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وقد اعتمدت الدراسات السابقة التي تنطوي على إدارة المخدرات في الزرد ببساطة على المعاوضة الأسماك لنقلها من خزان منزلهم في حل المخدرات 12،16. المعاوضة ليست دائما متسقة وغالبا ما يستغرق وقتا أطول مما كان متوقعا نظرا للاستجابة الهروب من الزرد، والذي تقلب فردي كبير. طرق النقل التقليدية، في حين أن من المفيد، ويمكن تحسينها من خلال خفض كمية الوقت الإجمالي الأسماك تنفق خارج الماء، وكذلك خفض كمية التغير في وقت نقل بين الحيوانات. بالإضافة إلى تحسين العملية، ويعطي هذه الطريقة الباحث...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون تقر جوشوا غالوب للاستخدام معدات التصوير المستخدمة لله الشكل 1. وأيد هذا العمل من قبل العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث منحة (NSERC) كندا ديسكفري (لTJH).

شكر وتقدير

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
نظام مبيت فوق الطاولة بثلاث رفوفfigure-materials-1 Aquatic Habitatsغير متاح
حوض تفريخ سعة 1.5 L مع حاجز 400 μmfigure-materials-2 Aquatic Habitatsغير متاح
إيثانول حبوب نقيfigure-materials-3 Luxco, INCغير متاح
برنامج Ethovision XT لتتبع الحركةfigure-materials-4 Noldus Information Technology
ماصةfigure-materials-5 Eppendorf Canada
ساحة الضوء/الظلاممُصنّع خصيصاًتُبنى وفقاً لوصف الإجراء. عرض 9.5 cm، وعمق 9.5 cm، وطول 55 cm.

المراجع

  1. Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biological Reviews. 83 (1), 13-34 (2008).
  2. Langheinrich, U. Zebrafish: A new model on the pharmaceutical catwalk. BioEssays. 25 (9), 904-912 (2003).
  3. Santoriello, C., Zon, L. I. Hooked! Modeling human disease in zebrafish. Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2337-2343 (2012).
  4. Miller, N., Greene, K., Dydinski, A., Gerlai, R. Effects of nicotine and alcohol on zebrafish ( Danio rerio) shoaling. Behavioural brain research. , (2012).
  5. Bencan, Z., Sledge, D., Levin, E. D. Buspirone, chlordiazepoxide and diazepam effects in a zebrafish model of anxiety. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 94 (1), 75-80 (2009).
  6. Holcombe, A., Howorko, A., Powell, R. A., Schalomon, M., Hamilton, T. J. Reversed Scototaxis during Withdrawal after Daily-Moderate, but Not Weekly-Binge Administration of Ethanol in Zebrafish. PLoS ONE. 8 (5), (2013).
  7. Mathur, P., Guo, S. Differences of acute versus chronic ethanol exposure on anxiety-like behavioral responses in zebrafish. Behavioural Brain Research. 219 (2), 234-239 (2011).
  8. Dlugos, C., Rabin, R. Ethanol effects on three strains of zebrafish: model system for genetic investigations. Pharmacology Biochemistry and Behavior. , (2003).
  9. Maximino, C., et al. Scototaxis as anxiety-like behavior in fish. Nature Protocols. 5 (2), 209-216 (2010).
  10. Gerlai, R., Lee, V., Blaser, R. Effects of acute and chronic ethanol exposure on the behavior of adult zebrafish (Danio rerio). Pharmacology Biochemistry and Behavior. 85 (4), 752-761 (2006).
  11. Egan, R. J., et al. Understanding behavioral and physiological phenotypes of stress and anxiety in zebrafish. Behavioural brain research. 205 (1), 38-44 (2009).
  12. Gebauer, D. L., et al. Effects of anxiolytics in zebrafish: Similarities and differences between benzodiazepines, buspirone and ethanol. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 99 (3), 480-486 (2011).
  13. Serra, M. C., Mattioli, R. Natural preference of zebrafish (Danio rerio) for a dark environment. Braz J Med Biol Res. 32 (12), 1551-1553 (1999).
  14. Maximino, C., et al. Behavioral and neurochemical changes in the zebrafish leopard strain. Genes Brain Behav. 12 (5), 576-582 (2013).
  15. Levin, E. D., Bencan, Z., Cerutti, D. T. Anxiolytic effects of nicotine in zebrafish. Physiology & Behavior. 90 (1), 54-58 (2007).
  16. Gerlai, R., Chatterjee, D., Pereira, T., Sawashima, T., Krishnannair, R. Acute and chronic alcohol dose: population differences in behavior and neurochemistry of zebrafish. Genes, Brain and Behavior. 8 (6), 586-599 (2009).
  17. Mathur, P., Berberoglu, M. A., Guo, S. Preference for ethanol in zebrafish following a single exposure. Behavioural Brain Research. 217 (1), 128-133 (2011).
  18. Renninger, S. L., et al. Investigating the genetics of visual processing, function and behaviour in zebrafish. Neurogenetics. 12, 97-116 (2011).
  19. Crawshaw, L. I., et al. Tolerance and withdrawal in goldfish exposed to ethanol. Physiology & Behaviour. 87 (3), 460-468 (2006).
  20. Hamilton, T. J., Holcombe, A. Tresguerres, M.CO2-induced ocean acidification increases anxiety in rockfish via alteration of GABAA receptor functioning. Proceedings of the Royal Society B. , (2014).
  21. Ramsay, J. M., Feist, G. W., Varga, Z. M., Westerfield, M., Kent, M. L., Schreck, C. B. Whole-body cortisol response of zebrafish to acute net handling stress. Aquaculture. 297 (1-4), 157-164 (2009).
  22. Hamilton, T. J., Paz-Yepes, J., Morrison, R. A., Palenik, B., Tresguerres, M. Exposure to bloom-like concentrations of two marine Synechococcus cyanobacteria (strains CC9311 and CC9902) differentially alters fish behaviour. Conservation Physiology. 2 (1), (2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

طريقة مبتكرة من الدواء إلى عدة الزرد ( دانيو rerio) والكمي لسحب
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.