المنافسة في المكورات العقدية الرئوية بوساطة البكتيريا والببتيدات الصغيرة المضادة للميكروبات ذات النشاط المثبط تجاه المكورات الرئوية والأنواع الأخرى ذات الصلة. نصف هنا مقايسة تراكب بكتيرية محسنة تسمح بتوصيف نشاط البكتيريا والطيف المثبط ، والمناعة الخاصة بالبكتيريا ، والكشف عن ببتيدات استشعار النصاب المفرزة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
باستخدام تراكب الفحص لقياس نوعيا الإنتاج الجرثومي من والحساسية للالرئوية Bacteriocins
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
المكورات العقدية الرئوية تستعمر المجتمع متعدد الميكروبات المتنوع للغاية في البلعوم الأنفي حيث يجب أن تتنافس مع الكائنات الحية المقيمة. لقد أظهرنا أن الببتيدات المضادة للميكروبات المنتجة بالبكتيريا (البكتيريا) تملي نتيجة هذه التفاعلات التنافسية. تحتوي جميع سلالات المكورات الرئوية المتسلسلة بالكامل على موضع بأكتريوسين-ل إيك peptide (blp). يقوم موضع blp بتشفير مجموعة من البكتيريا المتنوعة وجميع المكونات المحفوظة للغاية اللازمة لتنظيمها ومعالجتها وإفرازها. يعد تنوع البكتيريا الموجودة في منطقة مناعة البكتيريا (BIR) في الموضع مساهما رئيسيا في منافسة المكورات الرئوية. إلى جانب البكتيريا ، توجد جينات المناعة في BIR وهي ضرورية لحماية الخلية المنتجة من تأثيرات البكتيريوسين الخاصة بها. مقايسة التراكب هي طريقة سريعة لفحص عدد كبير من السلالات للتفاعلات التنافسية بوساطة البكتيريا. يسمح اختبار التراكب أيضا بتوصيف المناعة الخاصة بالبكتيريا ، والكشف عن ببتيدات استشعار النصاب المفرزة. يتم إجراء الفحص عن طريق التلقيح المسبق لصفيحة أجار بسلالة ليتم اختبارها لإنتاج البكتيريوسين متبوعا بتطبيق تراكب أجار ناعم يحتوي على سلالة ليتم اختبارها لحساسية البكتيريا. تشير منطقة الخلوص المحيطة بالطعنة إلى أن سلالة التراكب حساسة للبكتيريا التي تنتجها السلالة الملقحة مسبقا. إذا لم يلاحظ أي منطقة تطهير ، فإما أن سلالة التراكب محصنة ضد البكتيريا التي يتم إنتاجها أو أن السلالة الملقحة مسبقا لا تنتج البكتيريا. لتحديد ما إذا كان موضع blp يعمل في سلالة معينة ، يمكن تكييف مقايسة التراكب لتقييم إفراز فرمون الببتيد بواسطة السلالة الملقحة مسبقا. في هذه الحالة ، يتم استخدام سلسلة من أربع سلالات lacZ-reporter ذات خصوصية فرمون مختلفة في التراكب.
المقدمة
العقدية الرئوية، وهي المستعمر المشترك للمجتمع متعدد المكروبات من البلعوم الأنفي، غير قادرة على المنافسة مع الآخرين، والمكورات الرئوية وثيقي الصلة من خلال إنتاج الببتيدات المضادة للميكروبات أنتجت البكتريا (bacteriocins). كل سلالة المكورات الرئوية التسلسل بالكامل بحثت حتى الآن يحتوي على نسخة من ب acteriocin- ل آيك ص eptide موضع، BLP. وقد تجلى إنتاج مبيد جرثومي من المكورات الرئوية إلى أن تكون مهمة في نتائج سواء في المختبر وفي الجسم الحي المنافسة 1-4. وتتأثر ديناميكية تنافسية من خلال التعبير عن bacteriocins المتنوعة جنبا إلى جنب مع الب....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. إعداد منتج سلالة
- خط سلالة المكورات الرئوية لفحصها لإنتاج مبيد جرثومي على 5٪ الأغنام الدم الصويا زيتية لوحة أجار من -80 ° C الأسهم الفريزر.
ملاحظة: استخدام لوحات الدم للنمو الأولي من سلالة لفحصها لتثبيط يزيد كثيرا من استنساخ للمقايسة. بالإضافة إلى ذلك، وغيرها من السلالات غير الرئوية التي تنتج bacteriocins يمكن استخدامها على الرغم من أن قد تحتاج إلى تعديل لكائن معين ظروف النمو. وقد استخدمنا العقدية الهينة وLactococcus اللبنية في مقايسة تراكب بنجاح. - احتضان لوحة بين عشية وضح....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
هناك نوعان من النتائج المحتملة في مقايسة تراكب. يجب أن يكون من الممكن أن نرى النمو من سلالة طعن بعد الحضانة بين عشية وضحاها. في الشكل 1A، سلالة تراكب حساس لbacteriocins التي يتم إنتاجها. منطقة التخليص يمكن تصور المحيطة سلالة طعن. بالإضافة إلى ذلك، دوامات من سلالة طعن في مزيج تراكب ممكنة، ويمكن مشاهدته في الشكل 1A. في الشكل 1B، سلالة تراكب هو في مأمن من bacteriocins يجري يفرز كما لاحظ غياب هالة المحيطة طعنة. ومن الممكن أيضا أن سلال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هذا الاختبار تراكب هو وسيلة سريعة لتحديد نطاق النشاط للمنتجين مبيد جرثومي وإظهار التفاعلات التنافسية التي قد تحدث بين سلالات المكورات الرئوية. الفحص تراكب يمكن تكييفها لاستخدامها لفحص سلالات متعددة لإنتاج مبيد جرثومي على لوحة واحدة. قمنا بنجاح فحص مجموعات سلالة كبيرة مع هذا الاختبار باستخدام المكرر 48 دبوس إلى تطعيم لوحات SBA من نصف واحد من لوحة 96 جيدا. بعد مرور فترة الحضانة بين عشية وضحاها، يتم تحويل النمو إلى لوحة TSA باستخدام المكرر واختراق سطح أغار من لوحة مع دبابيس من المكرر.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من قبل جائزة إليزابيث إي كينيدي للأبحاث.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| تريبتيكاز فول الصويا أجار مع 5٪ صياد دم الأغنام | B21261X | للنمو من مزارع الفريزر | |
| كاتالاز | سيجما | C100-500mg | 4،741 وحدة لكل طبق |
| مرق تود هيويت + مستخلص الخميرة (THY) | فيشر | DF0492-17-6 ؛ | 30 جم من THB ، 5 جم من مستخلص الخميرة ، 1 لتر ddH 2< / sub>O الأوتوكلاف |
| مرق الصويا Trypticase + أطباق أجار (TSA)Fisher | B11768 | 30 جم من TS ، 15 جم أجار ، 1 لتر DDH 2< / أوتوكلاف فرعي >O | |
| 5-bromo-4-chloro-3-indolyl & beta ;-D-galactopyranoside (X-gal) | Sigma | B4252-50MG | تذوب في أطباق بتري ثنائي ميثيل فورماميد |
| فيشر | FB0875712 | ||
| الطيف | يقيس OD620< / sub> للثقافات | ||
| 37 & درجة ؛ C حمام | |||
| 37 درجة ؛ حاضنة C مع أنبوب | |||
| 5٪ 15 مل |
المراجع
- Dawid, S., Roche, A. M., Weiser, J. N. The blp bacteriocins of Streptococcus pneumoniae mediate intraspecies competition both in vitro and in vivo. Infect Immun. 75 (1), 443-451 (2007).
- Sawa, N., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
