يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الاستفادة من تصميم مخصص انجذاب غلفاني غرف لدراسة الاتجاه الهجرة من خلايا البروستاتا

8.9K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/51973

⸱

ديسمبر 7, 2014

 ,  , 
1Department of Dermatology, Scool of Medicine, University of California, Davis

في هذه المقالة

ملخص

نقدم طريقة لتطبيق مجال كهربائي فسيولوجي على خلايا البروستاتا المهاجرة والخالدة في غرفة جلفانوتاكس المصنوعة خصيصا. باستخدام هذه الطريقة ، نوضح أن خطين من خلايا البروستاتا غير السرطانية يظهران درجات مختلفة من اتجاه الهجرة في هذا المجال.

الملخص

يخدم الحقل الكهربائي الفسيولوجية الوظائف البيولوجية محددة، مثل توجيه الهجرة خلية في تطور الجنين، ثمرة العصبية الظهارية والتئام الجروح. تطبيق حقل كهربائي الحالي مباشرة إلى الخلايا المستزرعة في المختبر يدفع الهجرة الخلية الاتجاه، أو انجذاب غلفاني. طريقة انجذاب غلفاني 2-الأبعاد نظهر هنا يتم تعديل مع العرف بولي (كلوريد الفينيل) (PVC) الكاميرات، سطح الزجاج، وأقطاب البلاتين واستخدام مرحلة الآلية التي يتم تصوير الخلايا. غرف PVC وأقطاب البلاتين يحمل منخفضة السمية الخلوية وبأسعار معقولة وقابل لاعادة الاستخدام. سطح الزجاج والمسرح المجهر الآلية تحسين جودة الصور وتسمح التعديلات المحتملة على سطح الزجاج والعلاجات للخلايا. نحن بتصوير انجذاب غلفاني اثنين من غير مكون للأورام، خطوط خلد SV40 خلية البروستاتا، pRNS-1-1 وPNT2. هذه خطوط الخلايا اثنين تظهر بسرعة هجرة مماثلة وكلا تهاجر نحوالكاثود، لكنها تظهر درجة مختلفة من اتجاهها في انجذاب غلفاني. النتائج التي تم الحصول عليها عن طريق هذا البروتوكول تشير إلى أن pRNS-1-1 وخطوط الخلايا PNT2 قد يكون لها سمات مختلفة الجوهرية التي تحكم ردود المهاجرة الاتجاه بهم.

المقدمة

تم الكشف عن الحقول الكهربائية المحلية في الأنسجة المختلفة، مثل الجلد 1، 32، 33 و الدماغ 2. يخدم الحقل الكهربائي الفسيولوجية الوظائف البيولوجية محددة، بما في ذلك توجيه تطور الجنين 3، 4، توجيه ثمرة من العمليات العصبية 5 و 6 و تعزيز الظهارية والقرنية الجرح إغلاق 1 و 7. في المختبر، وتطبيق حقل كهربائي الحالي مباشرة إلى الخلايا المستزرعة يقلد الحقل الكهربائي الفسيولوجية ويستحث الهجرة الخلية الاتجاه، أو انجذاب غلفاني. وقد درست انجذاب غلفاني في الخلايا الليفية 8، 9 الكيراتينية الأسماك، الظهارية البشري والخلايا الكيراتينية القرنية 10-12، الخلايا اللمفية 13، neuroblasts 2، والخلايا العصبية السلف 14. عندما تتعرض لمجال التطبيقية، والغالبية العظمى من الخلايا درس تهاجر إتجاهي نحو المهبطي (-) قطب. ومع ذلك، وعدة خلايا السرطان، بما في ذلك درجة عالية من النقيليخلايا سرطان الثدي البشرية والبروستاتا البشرية خط الخلايا السرطانية PC-3M، الانتقال إلى مصعدي (+) قطب 15 و 16. واقترحت عدة آليات للتوسط انجذاب غلفاني أو لتفسير قدرة الخلايا على الإحساس الحقل الكهربائي، بما في ذلك تفعيل من EGF مستقبلات 12، قناة الصوديوم الظهارية 17، PI3K وPTEN 18، وإطلاق الكالسيوم أيونات 15 و 19. هذه الآلية ليست مفهومة تماما حتى الآن وأنه من الممكن أن تشارك مسارات إشارات متعددة في انجذاب غلفاني.

طريقة انجذاب غلفاني 2-الأبعاد نظهر هنا هو مفيد لتوصيف الهجرة الاتجاه من تمسكا، وخلايا متحركة، إما لمراقبة الهجرة الفردية خلية 10، 12، 17 أو الهجرة من ورقة من خلايا متكدسة 18 و 20. يتم تعديل هذه التقنية من بنغ وجافي 21، ونيشيمورا وآخرون. 10 مع حسب الطلب، غرف PVC واضحة، مع coversl قابلة للإزالةIPS يسمح لسهولة استرجاعها الخلية بعد انجذاب غلفاني للتحليل الثانوي، مثل التصوير المناعية مضان. السطح الزجاجي للغرف انجذاب غلفاني هو بصري متوافق، مما يسمح للتصوير في تضخم عالية ومع الخلايا fluorescently المسمى. كما يسمح التصميم التجريبي مع تعديل سطح الزجاج، مثل تغيير طلاء السطح أو رسوم. وتستخدم الفواصل مصنوعة من رقم 1 ساترة في غرف للحد من تدفق التيار فوق الخلايا. وبالتالي فإن التدفئة الجول، التي تتناسب مع مربع تدفق التيار، وليس من شأنه أن ارتفاع درجة حرارة الخلايا أثناء التجربة. الجسور أجار ربط تمنع الاتصال المباشر من الأقطاب الكهربائية مع الخلايا وتمنع تغيير درجة الحموضة متوسطة أو تركيز أيون خلال انجذاب غلفاني.

تم فحص اثنين من غير مكون للأورام البروستاتا خطوط الخلايا البشرية للاستجابة انجذاب غلفاني في هذه الدراسة. وpRNS-1-1 22 و 23 PNT2 كلاهما SV40 خلد، خطوط الخلايا التي تعتمد على عامل النمو معربا عن علامات الظهارية cytokeratin 5 و 8 و 18 و 19 مع التعبير منخفضة أو معدومة في البروستاتا محددة مستضد (PSA). كل من خطوط الخلايا تحافظ على مورفولوجيا المضلع من الخلايا الظهارية العادية، ولكن لوحظ اضطراب صبغي في تنميط نووي 22 و 24. وعلى الرغم من pRNS-1-1 وPNT2 مشاركة سلوكيات مماثلة في معظم التجارب، إلا أنها تظهر الاختلافات في تشكيل هيكل عنيبية و انجذاب غلفاني. على مصفوفة 3-D، Matrigel، وpRNS-1-1 الخلايا تشكل هياكل جوفاء عنيبية مع شمعة تشبه البروستاتا العادية الغدة الأنسجة 25. ومع ذلك، فإن الخلايا PNT2 تشكل الأجسام الشبه الكروية الصلبة دون التجويف أو ظهارة الاستقطاب 26. كما تظهر الخلايا pRNS-1-1 استجابة galvanotactic أعلى من PNT2 في الدراسة الحالية. العلاقة بين تشكيل هيكل عنيبية وانجذاب غلفاني في pRNS-1-1 تشير إلى أن إشارات galvanotactic قد تلعب دورا في تنظيم العلاقات العامةostate الحركات الأنسجة الغدة ردا على الحقول الكهربائية الذاتية، ويوفر المزيد من الخصائص للتمييز بين هذه خطوط الخلايا 2.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. خلايا التثقيف البروستاتا

  1. ثقافة pRNS-1-1 وPNT2 البروستاتا الخلايا على 100 ​​أطباق ثقافة ملم في المتوسط ​​1640 RPMI تستكمل مع 10٪ FBS والمضادات الحيوية-مضاد فطري عند 37 درجة مئوية مع 5٪ CO 2. تحديث مستنبت كل يوم حتى تصل إلى خلايا 80٪ confluency للتجارب انجذاب غلفاني.

2. تجميع انجذاب غلفاني الغرف

  1. تجميع الدوائر السفلى
    1. القضاء على انجذاب غلفاني غرفة من البلاستيك مع 2-بروبانول. تطبيق السداده الصف السيليكون البحرية حول فتحات دائرية على الجانب السفلي من الغرفة مع حقنة وإرفاق ساترة كبيرة (الشكل 1). استخدام الجانب الخلفي للقضيب من القطن لدفع أسفل ساترة وتمحو الغراء الزائد مع مسحات القطن. فتحات دائرية تسمح على المديين المتوسط ​​والتيار الكهربائي لتتدفق على الخلايا تقع بين اثنين من الخزانات المتوسطة الداخلية.
    2. قطع صغيرة ساترة لجعل 6 مم × 25 مم الفواصل مع علامة نقطة الماس.
    3. الوجه الغرفة. تطبيق 2 المشارب من الغراء السيليكون مع حقنة و / أو ملعقة معدنية لإنشاء 10 مم × 25 مم سطح القناة لمرفق الخلية بين فتحات دائرية 2 على الزجاج السفلي. الغراء 2 قطعة من الزجاج الفاصل بين فتحات دائرية 2. استخدام الجانب الخلفي من تطبيقها القطن لدفع أسفل الفواصل وتمحو الغراء الزائد مع مسحات القطن و / أو المسواك.
    4. تجف الغرفة لمدة 24 ساعة حتى يتم الشفاء الغراء السيليكون. نقع في غرفة المقطر بين عشية وضحاها بالماء لإزالة بقايا حمض الخليك من الغراء. تجفيف غرفة للاستخدام الفوري، أو تخزين غرفة لاستخدامها لاحقا في وعاء نظيف.
      مخطط إعداد غرفة Galvanotaxis بالتفصيل التجميع مع الفواصل الزجاجية ، زجاج الغطاء السفلي.
      الشكل 1: جمعية الغرفة أسفل انجذاب غلفاني. A) ومرفق ساترة كبيرة إلى أسفل غرفة نظيفة. B) Tالتعليم الجامعي يتم لصقها قطعة من الزجاج الفواصل بين فتحات دائرية 2 لإنشاء 10 مم × 25 مم قناة للخلايا لإرفاق.
  2. بذر الخلايا على غرف انجذاب غلفاني
    1. إعداد تتطلب عدد من الغرف انجذاب غلفاني اللازمة للتجربة. كل سطر الخلية أو العلاج يتطلب غرفة انجذاب غلفاني واحدة. مسح غرف انجذاب غلفاني مع 2-بروبانول. غسل غرف مع العقيمة PBS 3 مرات والتحقق من تدفق السائل بين فتحات دائرية 2 في غرف.
    2. أرفق غرف في أطباق زراعة الخلايا العقيمة والسماح لهم لكي تتوازن في 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. فصل الخلايا البروستاتا من طبق ثقافتهم باستخدام 5 مل 0.25٪ التربسين-EDTA عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. تحييد التربسين-EDTA مع 5 مل 10٪ FBS في برنامج تلفزيوني.
    3. نقل الخلايا إلى 15 مل أنابيب وأجهزة الطرد المركزي الخلايا لمدة 5 دقائق في 200 x ج، 37 ° C. نضح طاف واعادة تعليق الخلايا في 1 مل من مستنبت.
    4. يستغرق 20 μلتر من حل الخلية لتحميل إلى غرفة الفرز وحساب عدد الخلايا. ضبط تركيز الخلية إلى 8 × 10 4 خلية / مل مع الثقافة المتوسطة.
    5. خذ غرف انجذاب غلفاني من C حاضنة 37 درجة. البذور 350 ميكرولتر من تعليق الخلية على كل من المجلسين.
    6. احتضان الخلايا في الدوائر بين عشية وضحاها في صحن الثقافة مع Kimwipe رطبة أو في غرفة الرطوبة في الحاضنة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ CO 2.

مخطط هجرة خلايا البروستاتا مع إعداد حاضنة للتحليل التجريبي عند 37 درجة مئوية ، 5٪ ثاني أكسيد الكربون.
الشكل 2: البذر الخلايا إلى غرفة تجفف غرفة السفلى وتنظيفها وtrypsinized خلايا A) البروستاتا، عد ونقل إلى غرفة وحضنت بين عشية وضحاها B) ومرفق ساترة قصوى لختم الغرفة قبل التصوير...

  1. Assembling أعلى غرف
    1. تجميع الغرفة العليا قبل التصوير. يمكن المجهر تستوعب سوى التصوير غرفة انجذاب غلفاني واحدة في وقت واحد. الاحماء 10 مل من مستنبت في 37 ° C لكل غرفة انجذاب غلفاني. نقل غرفة انجذاب غلفاني من الحاضنات إلى 37 درجة مئوية في درجات الحرارة لوحة.
    2. شطف الخلايا مع مستنبت لإزالة الخلايا غير مرتبط. ترك 400 ميكرولتر من المتوسطة في الغرفة. استخدام حقنة لتطبيق عالية الشحوم فراغ على رأس كل من الفواصل الزجاجية.
    3. إضافة ساترة صغيرة لختم الغرفة. اضغط بلطف إلى أسفل ساترة مع الجانب الخلفي للقضيب من القطن. تمحو المتوسطة الزائدة مع مسحات القطن.
    4. يجف سطح الزجاج وتطبيق عالية الشحوم فراغ لاغلاق الفجوة بين ساترة والغرفة. استخدام ملعقة معدنية لنشر الشحوم. إضافة 4 مل من مستنبت إلى الخزانات الداخلية والتحقق من تدفق السائل بين الخزانات.
  2. جعل أجارالجسور
    1. قطع زوج من 2 بوصة أنابيب PVC طويلة (503/16 ID س 5/16 1/16 OD X ستريت)، والوجه وإدراجها في 100 مل دورق.
    2. قياس 200 ملغ Bacto آجار وإضافته في قارورة 50 مل مع 10 مل مستنبت لجعل 2٪ هلام أجار. الميكروويف لمدة 30 ثانية. تحميل هلام أجار إلى أنابيب بلاستيكية مع الماصة نقل. ترك الجسور أجار في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقيقة لترسيخ آغار.
    3. إضافة 2 مل مستنبت إلى الخزانات الخارجية للغرفة انجذاب غلفاني. أدخل الجسور أجار إلى الخزانات المتوسطة الداخلية والخارجية لإجراء الحالية.

مخطط تجربة Galvanotaxis يوضح إعداد الغرفة مع جسور أجار وطاقة التيار المستمر لترحيل الخلية.
الرقم 3: تصوير الخلايا على غرفة رسم تخطيطي للتدليل على التجميع النهائي للغرفة انجذاب غلفاني. وختم الغرفة تماما مع ارتفاع الشحوم فراغ. يضاف المتوسطة رس ملء الخزانات، ويتم إدراج اثنين من الجسور أجار في الغرفة. ثم يتم تحويل غرفة انجذاب غلفاني إلى مرحلة المجهر وتعلق الأقطاب الكهربائية لتطبيق الحقل الكهربائي. ويظهر الجانبية الرأي من الغرفة انجذاب غلفاني تجميعها لإثبات أن يتدفق التيار الكهربائي على الخلايا من خلال الجسور أجار والفضاء بين غطاء زجاجي.

التصوير 3. الوقت الفاصل

  1. التبديل على غرفة البيئية إلى 37 درجة مئوية مع 5٪ CO 2 في ساعة تعميم الهواء 2 قبل التصوير.
  2. التبديل على المجهر والشروع في البرمجيات الحصول على الصورة. معايرة مرحلة المجهر وحدد الهدف 10X.
  3. نقل غرف انجذاب غلفاني إلى مرحلة المجهر، وتأمين الغرفة مع الشريط والتركيز على الخلايا. إدراج الأقطاب انجذاب غلفاني إلى الخزانات الخارجي مع الكاثود على الجانب الأيمن. تأمين الأسلاك والأقطاب مع الشريط.
  4. التبديل على السلطة بوس لتطبيق حقل كهربائي الى قاعة المحكمة. قياس الجهد الناتج مع الفولتميتر عبر الغرفة لتصل إلى 2.5 فولت ل25 مم غرفة طويلة (100 فولت / مم). الحفاظ على قوة الميدان خلال التجربة عن طريق ضبط الانتاج الحالي.
  5. تحديد 10 نقطة في جميع أنحاء الغرفة لتصوير فيلم في البرنامج لتوليد عشرة أفلام مرور الزمن. إعداد الشروط الاستحواذ على فترات 10 دقيقة لمدة 2 ساعة.
  6. بدء التصوير وضبط الانتاج الحالي حسب الحاجة.
  7. في نهاية التجربة، وإزالة غرفة من مرحلة وإصلاح الخلايا مع 95٪ كحول. كسر مفتوحة الغرفة بشفرة حلاقة لتنظيف وإعادة استخدامها.

4. الكمي لانجذاب غلفاني

  1. تدوير الأفلام الوقت الفاصل بين وإعادة توجيه-القطب السالب إلى الجزء العلوي من الصور. تصدير الأفلام إلى تتبع خلية البرمجيات.
  2. تتبع (س، ص) موقف 10-20 خلايا في كل نقطة في الوقت من كل فيلم (الشكل 4 A، B) يدويا.، وهو نفس اتجاه المجال الكهربائي، وسيتم احتساب المسافات الهجرة والزوايا نسبة إلى اتجاه الشمال والجنوب في تتبع الخلايا البرمجيات (الشكل 4C).
    ملاحظة: يتم تحويل متوسط ​​سرعة الهجرة من المسافة إجمالي الهجرة ومجموع وقت التصوير. يتم تحويل اتجاهها من زوايا لقيمة جيب التمام. إذا تهاجر الخلايا مع الاتجاهية عشوائي، فإن متوسط ​​صافي جيب التمام تكون قريبة من الصفر. إذا كانت الخلايا تهاجر مباشرة نحو الكاثود، فإن قيمة جيب التمام يكون +1. إذا كانت الخلايا تهاجر مباشرة نحو القطب الموجب، فإن قيمة جيب التمام يكون -1.

مقارنة هجرة الخلايا ، الهجرة العشوائية مقابل الجالفانومحور ، رسم تخطيطي مع معادلة جيب التمام للاتجاه.
الشكل 4: تتبع خلية لقياس الاتجاهية A) تراكب خطوط تتبع مع ​​الصور الخلية. و(س، ص) مواقف الخلايا مانواتتبع LLY في الأفلام مرور الزمن. . إذا كانت الخلايا تهاجر بشكل عشوائي، فإن متوسط ​​جيب التمام هي قريبة من الصفر ب) ومع ذلك، إذا كانت الخلايا تهاجر نحو القطب السالب أو الموجب، فإن قيمة متوسط ​​جيب التمام هي قريبة من + (الكاثود) أو - (الأنود) 1.0 C ) وتقدم الاتجاهية التي كتبها قيمة جيب التمام، والتي يتم تحويلها من زوايا الهجرة (θ). جيب التمام (θ) يساوي نسبة المسافة من (المسافة الهجرة) إلى المسافة ب (المسافة المتوقعة لاتجاه المجال الكهربائي).

  1. حفظ القياسات. استيراد البيانات إلى تطبيق قاعدة بيانات لحساب النتائج مجتمعة.
  2. تصدير البيانات المجمعة لمتوسط ​​سرعة الهجرة ومتوسط ​​قيمة جيب التمام إلى جدول بيانات لرسم الرسوم البيانية (الشكل 5).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

وقد تم التحقيق سطرين من خلايا البروستاتا (pRNS-1-1 وPNT2) مع هذا الأسلوب. خلايا في كل خطوط تهاجر بسرعة مماثلة من 1.0 +/- 0.3 ميكرون / دقيقة على مدار 2 ساعة (الشكل 5A). ومع ذلك، يكون الاتجاه إلى المجال الكهربائي هو 0.7 +/- 0.3 لpRNS-1-1 الخط، و 0.2 +/- 0.8 للخط PNT2 (الشكل 5B). تظهر النتائج وجود اختلاف كبير في انجذاب غلفاني هذه خطوط الخلايا اثنين (P <0.01، تم تتبع 100 خلية)، مما يوحي بأن لديهم مختلف آليات الإشارات الخلوية التي تؤدي إلى استجابات ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وقد تم تحليل استجابة انجذاب غلفاني الخلية مؤشرا وظيفي مهم لكثير من المهاجرة الخلوية أو نمو عمليات 27، 28، وهنا نستخدم غرفة مصنوعة خصيصا مع سطح الزجاج لتصوير اثنين من خطوط الخلايا البروستاتا. هذه خطوط الخلايا أظهرت درجات مختلفة من انجذاب غلفاني، ونحن التكهن بأن توطين داخل الخلايا أو تفعيل البروتينات التوسط انجذاب غلفاني قد تدخلت خلال عملية توليد خطوط الخلايا الخالدة، مما أسفر عن الفرق الذي لوحظ في الاستجابة انجذاب غلفاني.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

خطوط الخلايا البروستاتا يتم توفير يرجى من قبل الدكتور لينغ يو وانغ والدكتور شينغ Jien الكونغ في مركز السرطان، وجامعة كاليفورنيا ديفيس. ويدعم هذا المشروع من قبل المعاهد الوطنية للصحة منحة انجذاب غلفاني 4R33AI080604.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات البروستاتا td colspan = "4" >medium and solutions
Cells< / strong>
pRNS-1-1 خلاياLee, et al.< / em> (1994)
خلايا البروستاتا PNT2Sigma-Aldrich95012613-1VLBerthon, et al.< / em> (1995)<
RPMI 1640 medium Invitrogen11875-093الاحماء حتى 37 درجة ؛ C قبل الاستخدام
مصل الأبقار الجنيني - PremiumAtlanta BiologicalsS1115010٪ في PBS ، تسخين حتى 37 درجة ؛ C قبل الاستخدام
مضاد حيوي مضاد للفطريات (100x)تضيف Life Technologies152405 مل إلى 500 مل متوسط
2-بروبانولVWRBDH1133-5GL
PBS-137 ملي كلوريد الصوديوم ، 2.7 ملي كلوريد الصوديوم ، 4.3 ملي Na 2< / sub>HPO4< / sub> و 1.5 ملي مولار KH2< / sub>PO4< / sub> في 1,000 مل من H2< / sub> O ، درجة الحموضة إلى 7.4 والتعقيم ، التسخين حتى 37 درجة ؛ C قبل الاستخدام
0.25٪ Trypsin-EDTA Invitrogen25200-056الاحماء حتى 37 درجة ؛ C قبل الاستخدام ، عالج الخلايا لمدة 3-5 دقائق عند 37 درجة ؛ C
<قوي>جهاز Galvanotaxis< / قوي >
غرف GalvanotaxisPrecision Plastics Inc ، CAمصممة خصيصا (1/4 "× 2" × 3.5 بوصة) ، غرف PVC غير سامة وواضحة. يرجى الاتصال بالمؤلفين للحصول على مواصفات التصميم.
أقطاب Galvanotaxis أقطابUCD متجرمن البلاتين ملفوفة مع أسلاك مرنة
صندوق طاقة Galvanotaxisهندسة الركيزة ، خرج طاقة التيار المستمر المصممخصيصا مع زجاج
غطاء مجهر الفولتميتر ، كبير ، 45 × 50 مم ، رقم 1.5فيشر12-544-F
زجاج ، صغير ، 25 × 25 مم ، رقم 1ThermoScientific3307
علامة نقطة الماسThermoScientific750
سدادة السيليكون من الدرجة البحرية ، واضحة3M051135-08019
شحم عالي الفراغداو كورنينج2021846-0807
6 مل حقنةفيشر Scientific05-561-64
حقنة Nichiryo ، 1.5 ملNichiryoSG-M
قضيب القطنمنتجات بورتيان الطبية806-WC
كيوتبسجونسون آند أمبير جونسون729389
Nalgene 180 أنابيب PVC Nalgene8000-9030503/16 ID × 5/16 OD × 1/16 Wall
Bacto-AgarDifco0140-01يجعل محلول أجار 2٪
Razor BladePersonna74-0001
المعدات والبرمجيات< / قوي>
منضدة الطرد المركزيEppendorf5810Rتعمل مع A-4-62 دوار
عداد السيلومتر التلقائي T4Nexcelomغرف
NexcelomCHT4-SD100-002تحميل 20 &# 956 ؛ ل حلول الخلايا لحساب
لوحة الاحترار بدرجة حرارة الثقافةBel-Art Scienceware370150000للحفاظ على غرف galvanotaxis عند 37 درجة ؛ ج 
مجهر Eclipse TE-2000 مع المرحلة الآلية والغرفة البيئيةنيكون
خطة فلور 10X / 0.30 الموضوعية لينكاميرا نيكون
ريتيجا EX CCD Qimagingكامارا CCD المبردة ، أحادية اللون ، هواء مضغوط 12 بت
مع 5٪ CO2< / sub>Airgasطلب خاص
Volocity 6.3PerkinElmerImage الحصول على برنامج
Improvision: OpenLab 5.5.2برنامج تتبع خلية PerkinElmerومخصص لقياس زوايا الترحيل
FileMaker Pro Advanced ، 8.0FileMaker
Microsoft Excel 2008 لنظام التشغيل MacMicrosoft
كهربائية كهربائي غطاء مجهر عد عداد عداد العداد التلقائي T4

المراجع

  1. Reid, B., Nuccitelli, R., Zhao, M. Non-invasive measurement of bioelectric currents with a vibrating probe. Nat Protoc. 2 (3), 661-669 (2007).
  2. Cao, L., et al. Endogenous electric currents might guide rostral migration of neuroblasts. EMBO Rep. 14 (2), 184-190 (2013).
  3. Hotary, K. B., Robinson, K. R. Endogenous electrical currents and voltage gradients in Xenopus embryos and the consequences of their disruption. Dev Biol. 166 (2), 789-800 (1994).
  4. Hotary, K. B., Robinson, K. R. Evidence of a role for endogenous electrical fields in chick embryo development. Development. 114 (4), 985-996 (1992).
  5. Yamashita, M. Electric axon guidance in embryonic retina: galvanotropism revisited. Biochem Biophys Res Commun. 431 (2), 280-283 (2013).
  6. Wood, M. D., Willits, R. K. Applied electric field enhances DRG neurite growth: influence of stimulation media, surface coating and growth supplements. J Neural Eng. 6 (4), 046003(2009).
  7. Kucerova, R., et al. The role of electrical signals in murine corneal wound re-epithelialization. J Cell Physiol. 226 (6), 1544-1553 (2011).
  8. Sillman, A. L., Quang, D. M., Farboud, B., Fang, K. S., Nuccitelli, R., Isseroff, R. R. Human Dermal fibroblasts do not exhibit directional migration on collagen I in direct-current electric fields of physiological strength. Exp Dermatol. 12 (4), 396-402 (2003).
  9. Allen, G. M., Mogilner, A., Theriot, J. A. Electrophoresis of cellular membrane components creates the directional cue guiding keratocyte galvanotaxis. Curr Biol. 23 (7), 560-568 (2013).
  10. Nishimura, K. Y., Isseroff, R. R., Nuccitelli, R. Human keratinocytes migrate to the negative pole in direct current electric fields comparable to those measured in mammalian wounds. J Cell Sci. 109 (1), 199-207 (1996).
  11. Farboud, B., Nuccitelli, R., Schwab, I. R., Isseroff, R. R. DC electric fields induce rapid directional migration in cultured human corneal epithelial cells. Exp Eye Res. 70 (5), 667-673 (2000).
  12. Fang, K. S., Ionides, E., Oster, G., Nuccitelli, R., Isseroff, R. R. Epidermal growth factor receptor relocalization and kinase activity are necessary for directional migration of keratinocytes in DC electric fields. J Cell Sci. 112 (12), 1967-1978 (1999).
  13. Li, J., et al. Activated T lymphocytes migrate toward the cathode of DC electric fields in microfluidic devices. Lab Chip. 11 (7), 1298-1304 (2011).
  14. Meng, X., Arocena, M., Penninger, J., Gage, F. H., Zhao, M., Song, B. PI3K mediated electrotaxis of embryonic and adult neural progenitor cells in the presence of growth factors. Exp Neurol. 227 (1), 210-217 (2011).
  15. Wu, D., Ma, X., Lin, F. DC Electric Fields Direct Breast Cancer Cell Migration, Induce EGFR Polarization, and Increase the Intracellular Level of Calcium Ions. Cell Biochem Biophys. 67 (3), 1115-1125 (2013).
  16. Martin-Granados, C., et al. A role for PP1/NIPP1 in steering migration of human cancer cells. PLoS One. 7 (7), 40769(2012).
  17. Yang, H. Y., Charles, R. P., Hummler, E., Baines, D. L., Isseroff, R. R. The epithelial sodium channel mediates the directionality of galvanotaxis in human keratinocytes. J Cell Sci. 126 (9), 1942-1951 (2013).
  18. Zhao, M., et al. Electrical signals control wound healing through phosphatidylinositol-3-OH kinase-gamma and PTEN. Nature. 442 (7101), 457-460 (2006).
  19. Shanley, L. J., Walczysko, P., Bain, M., MacEwan, D. J., Zhao, M. Influx of extracellular Ca2+ is necessary for electrotaxis in Dictyostelium. J Cell Sci. 119 (22), 4741-4748 (2006).
  20. Zhao, M., Agius-Fernandez, A., Forrester, J. V., McCaig, C. D. Directed migration of corneal epithelial sheets in physiological electric fields. Invest Ophthalmol Vis Sci. 37 (13), 2548-2558 (1996).
  21. Peng, H. B., Jaffe, L. F. Polarization of fucoid eggs by steady electrical fields. Dev Biol. 53 (2), 277-284 (1976).
  22. Lee, M., et al. Characterization of adult human prostatic epithelial-cells immortalized by polybrene-induced DNA transfection with a plasmid containing an origin-defective sv40-genome. Int J Oncol. 4 (4), 821-830 (1994).
  23. Berthon, P., Cussenot, O., Hopwood, L., Leduc, A., Maitland, N. Functional expression of sv40 in normal human prostatic epithelial and fibroblastic cells - differentiation pattern of non-tumorigenic cell-lines. Int J Oncol. 6 (2), 333-343 (1995).
  24. Aurich-Costa, J., Vannier, A., Grégoire, E., Nowak, F., Cherif, D. IPM-FISH, a new M-FISH approach using IRS-PCR painting probes: application to the analysis of seven human prostate cell lines. Genes Chromosomes Cancer. 30 (2), 143-160 (2001).
  25. Tyson, D. R., Inokuchi, J., Tsunoda, T., Lau, A., Ornstein, D. K. Culture requirements of prostatic epithelial cell lines for acinar morphogenesis and lumen formation in vitro: role of extracellular calcium. Prostate. 67 (15), 1601-1613 (2007).
  26. Lang, S. H., Sharrard, R. M., Stark, M., Villette, J. M., Maitland, N. J. Prostate epithelial cell lines form spheroids with evidence of glandular differentiation in three-dimensional Matrigel cultures. Br J Cancer. 85 (4), 590-599 (2001).
  27. Babona-Pilipos, R., Popovic, M. R., Morshead, C. M. A galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field. J Vis Exp. (68), (2012).
  28. Meng, X., et al. Electric field-controlled directed migration of neural progenitor cells in 2D and 3D environments. J Vis Exp. (60), (2012).
  29. Pullar, C. E., Isseroff, R. R. Cyclic AMP mediates keratinocyte directional migration in an electric field. J Cell Sci. 118 (9), 2023-2034 (2005).
  30. Sheridan, D. M., Isseroff, R. R., Nuccitelli, R. Imposition of a physiologic DC electric field alters the migratory response of human keratinocytes on extracellular matrix molecules. J Invest Dermatol. 106 (4), 642-646 (1996).
  31. Feng, J. F., et al. Guided migration of neural stem cells derived from human embryonic stem cells by an electric field. Stem Cells. 30 (2), 349-355 (2012).
  32. Mukerjee, E. V., Isseroff, R. R., Nuccitelli, R., Collins, S. D., Smith, R. L. Microneedle array for measuring wound generated electric fields. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 1, 4326-4328 (2006).
  33. Nuccitelli, R., Nuccitelli, P., Li, C., Narsing, S., Pariser, D. M., Lui, K. The electric field near human skin wounds declines with age and provides a noninvasive indicator of wound healing. Wound Rep. and Reg. 19, 645-655 (2011).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

غرفة الانتحاء الجلفانيالمجال الكهربائيتتبع الخلاياالتصوير بالفاصل الزمنيغرف PVCأقطاب البلاتينمنصة آليةجسور الآجار
الاستفادة من تصميم مخصص انجذاب غلفاني غرف لدراسة الاتجاه الهجرة من خلايا البروستاتا
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.