مقالة منهجية

غير الطرفية تقنيات أخذ العينات الدم في غينيا الخنازير

DOI:

10.3791/51982

⸱

أكتوبر 11, 2014

 ,  ,  , 
1Department of Veterinary Disease Biology, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

على الرغم من نموذج معروف، خنزير غينيا يمثل حاليا مكانة في العلوم التجريبية والحيوان هو البيانات المحدود المتاح على تنفيذ معظم الإجراءات. هنا نقدم أربعة أساليب مختلفة لغير محطة في تقنيات أخذ العينات الدموية في الجسم الحي واعية إما مخدرة أو خنازير غينيا.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خنازير غينيا تمتلك العديد من أوجه التشابه البيولوجية للإنسان ويتم التحقق من صحة النماذج الحيوانية التجريبية 1-3. ومع ذلك، فإن استخدام خنازير غينيا يمثل حاليا منطقة ضيقة نسبيا من البيانات البحثية وصفية حول منهجية محددة نادرة في المقابل. الميزات التشريحية للخنازير غينيا مختلفة قليلا عن نماذج القوارض الأخرى، وبالتالي تعديل تقنيات أخذ العينات لاستيعاب الاختلافات أنواع محددة، على سبيل المثال، مقارنة مع الفئران والجرذان، ضرورية للحصول على عينات كافية وعالية الجودة. على حد سواء طويلة وقصيرة الأجل في الدراسات المجراة في كثير من الأحيان تتطلب أخذ عينات الدم تتكرر اختيار تقنية ينبغي النظر جيدا من أجل الحد من التوتر وعدم الراحة في الحيوانات ولكن أيضا لضمان بقاء فضلا عن الامتثال مع متطلبات حجم العينة وسهولة الوصول إليها. ويمكن الحصول على عينات من الدم الوريدي في عدد من المواقع في خنازير غينيا على سبيل المثال.، والصافن والوريدالأوردة، كل تقنية تحتوي على كل مزايا وعيوب 4،5. هنا، نقدم أربع تقنيات مختلفة لأخذ عينات الدم إما واعية أو مخدرة خنازير غينيا. الإجراءات يتم توفير جميع الإجراءات غير الطرفية التي أحجام العينة وعدد العينات لا تتجاوز المبادئ التوجيهية لجمع الدم في الحيوانات المختبرية 6. تم اختبارها بدقة كل الأساليب المذكورة وتطبيقها لاخذ عينات من الدم المتكررة في الجسم الحي في الدراسات داخل منشأة أبحاثنا.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خنزير غينيا هو نموذج حيوانات التجارب قيما والتحقق من صحتها بسبب وجود عدد من أوجه التشابه البيولوجية للإنسان مثل شرط وجود امدادات الغذائية من فيتامين C، البروتين الدهني البلازما مقارنة تأييض البروتين الدهني الانزيمات وملامح، وكذلك أوجه الشبه المشتركة مع المشيمة البشرية و وضع ما قبل الولادة 1-3،7،8. هذا يجعل خنزير غينيا نموذج جذاب ومناسب لدراسة آثار الأمراض المرتبطة الحمية مثل مرض غير الكحولية الكبد الدهني وأمراض القلب والأوعية الدموية والآثار المفترضة من نقص فيتامين C ولكن أيضا تأثير على سبيل المثال، التدخل الغذائي الأمهات في البلدان النامية ذرية.

وغالبا ما يتطلب أخذ عينات الدم المتكررة في كل من المدى القصير والطويل في الدراسات المجراة. بسبب الاختلافات التشريحية أنواع محددة من تعديل أسلوب أخذ العينات ضروري من أجل الحصول على عينات من الدم في خنازير غينيا بالمقارنة مع نماذج القوارض الأخرى 4،5. ويشمل هذا الاختلاف في مجرى الأوردة والشرايين، وأيضا أن الخنازير الغينية ليس لها ذيل، وبالتالي لديها متطلبات وخيارات مختلفة لكلا أخذ العينات والتعامل معها. أخذ العينات من الوريد الصافن أو الرصغي، يدفع الحد الأدنى من الراحة والإجهاد في الحيوان و لا يتطلب التخدير 3،9. هذه التقنية تسمح تكرار عينات من كميات صغيرة من الدم (100-400 ميكرولتر)، على سبيل المثال، لتحديد العلامات الكيميائية الحيوية في البلازما. إذا كان حجم أصغر عينة كافية (50-100 ميكرولتر)، وهذا يمكن بسهولة الحصول عليها عن طريق الوريد ثقب الأذن. ويمكن أيضا أن تتم هذه التقنية في الحيوانات واعية ومفيد على سبيل المثال عند قياس مستوى السكر في الدم 10،11. أخذ العينات من حبل الوريد تسمح لجمع كميات أكبر من الدم (1-2 مل) ولكنها تتطلب التخدير.

هنا، نقدم أربع تقنيات مختلفة لأخذ عينات الدم إما واعية أو مخدرة خنازير غينيا. بروكedures يتم توفير جميع الإجراءات غير الطرفية التي أحجام العينة وعدد العينات لا تتجاوز المبادئ التوجيهية لجمع الدم في الحيوانات المختبرية 6. هو في مصلحة العلم الجيد وكذلك الرفق بالحيوان أن الإجهاد يجب أن تبقى إلى أدنى حد ممكن. بالتالي، فقط المدربين تدريبا جيدا والشخصية المختصة أن تؤدي الإجراءات الحيوانية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تنفيذ الإجراءات الموضحة وفقا لبروتوكولات وافق عليها الدنماركية الحيوان التجريب التفتيش تحت إشراف وزارة الأغذية والزراعة ومصايد الأسماك.

1. الدم أخذ العينات من الصافن الجانبي أو عظم الكعب الوريد

  1. تنفيذ هذا الإجراء دون تخدير ومساعدة من محقق واحد، واحد التعامل مع خنزير غينيا، واحد جمع العينة.
  2. حلق منطقة الجفن من الساق الخلفية مع ماكينة حلاقة كهربائية حتى عروق مرئية. ضمان مساحة كبيرة بما فيه الكفاية لتجنب التدخل الفراء مع موقع الثقب.
  3. وضع الساق الخلفية في حمام الماء الفاتر وفرك بلطف الساق، مما يجعل من الأوردة المتوسعة وأكثر وضوحا.
  4. مسح الساق مع منشفة نظيفة وتطهير الموقع ثقب بشاش أو قطعة من القطن المبلل الكحول 70٪.
  5. كبح خنزير غينيا وتمديد الساق الخلفية إلى الأسفل أثناء تطبيق ضغط لطيف على الفور فوق الركبة ر مشتركس توفير ركود.
  6. ثقب الوريد باستخدام إبرة 21 G أو انسيت. جمع مثل الدم، باستخدام مجموعة أو أنبوب شعري. التعامل بلطف الساق للمساعدة في تدفق الدم.
  7. الافراج عن ركود، بمجرد الحصول على العينة. تطبيق قطعة من الشاش أو القطن والصوف مع ضغط لطيف على الموقع ثقب حتى توقف النزيف.
  8. عودة الحيوان إلى قفصه ورصد لمدة 5-10 دقيقة لضمان الارقاء.

2. أخذ عينات الدم من الوريد الأذن

  1. تنفيذ هذا الإجراء دون تخدير إما وحدها أو يفضل مع مساعدة من زميل واحد.
  2. تطهير السطح الظهري للأذن باستخدام الشاش أو قطعة من القطن المبلل الكحول 70٪.
  3. تطبيق الضغط الخفيف على قاعدة الأذن لتوفير ركود.
  4. ثقب الوريد باستخدام إبرة أو مشرط 21 G، وجمع الدم.
  5. الافراج عن ركود، بمجرد الحصول على العينة، تطبيق قطعة من الشاش أو القطن والصوف مع جنرال الكتريكتوقف الضغط ntle الى موقع ثقب حتى النزيف.
  6. عودة الحيوان إلى قفصه ورصد لمدة 5-10 دقيقة لضمان الارقاء.

3. الدم أخذ العينات من الوريد الوداجي

  1. تنفيذ هذا الإجراء باستخدام مساعدة من محقق إضافي واحد؛ التعامل مع الخنازير الغينية واحد وجمع العينة.
  2. تخدير خنزير غينيا مع مخدر مناسبة لكامل مدة هذا الإجراء. مزيج من تلييتامين (0.93 ملغ / كلغ)، zolazepam (0.93 ملغ / كلغ)، زيلازين (1.49 ملغ / كلغ) وبوتورفانول (0.06 ملغ / كلغ) يمكن استخدامها.
  3. وضع خنزير غينيا مخدرة على ظهرها وسحب بلطف اليدين نحو caudally.
  4. يحلق وتطهير (على سبيل المثال، مع 70٪ كحول) الجزء البطني من الرقبة.
  5. معطف الحقنة مع إما الهيبارين أو EDTA قبل أخذ العينات من أجل الحد من مخاطر تخثر.
  6. جس الترقوة وإدراج G 25 (أو 23 G) إبرة شنت على 1 مل حقنة ا ف بتقريبية 1 سم الوحشي على خط الوسط على مستوى مفصل الكتف. الحفاظ على حقنة في زاوية تصاعدية وسطي طفيفة أثناء تطبيق ضغط سلبي طفيف. تجنب إتلاف الهياكل ويقع الوريد الوداجي سطحية جدا. إمالة الرقبة من خنزير غينيا إلى الوراء قليلا لتوفير ركود زيادة الوريد.
  7. الافراج عن الأرجل الأمامية عندما يتم الحصول على عينة من الدم، والتخفيف من حدة الركود قبل سحب الإبرة. استخدام قطعة جافة من الشاش أو القطن والصوف لتطبيق ضغط لطيف على الموقع ثقب.
  8. عودة الحيوان إلى قفص الانتعاش ورصد لضمان الارقاء والتعافي من التخدير.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم عرض أربعة أساليب مختلفة لغير الطرفية في الجسم الحي تقنيات أخذ العينات في الدم إما واعية أو مخدرة خنازير غينيا. ويوضح الشكل 1 مسار الجانبي الصافن والوريد الرصغي في خنزير غينيا ومواقع ثقب الممكنة. ويوضح الأوردة الأذن مرئية على السطح الظهري من الأذن خنزير غينيا في الشكل 2. هذه الأوردة يمكن استخدامها لأخذ عينات الدم عند الحاجة فقط حجم صغير جدا. موقف خنزير غينيا لأخذ عينات الدم الوريد هو تظهر في الشكل 3. ويتضح بالطبع من حبل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بالمقارنة مع الفئران والجرذان والخنازير الغينية هي مخيفة بطبيعتها ويجب أن اقتربت بهدوء والتعامل معها بشكل صحيح من أجل الحد من التوتر. من نقطة الرفق بالحيوان نظر، يتصرف بحذر هو بطبيعة الحال على سبيل الأولوية؛ ومع ذلك، وهذا أيضا يقلل من خطر الآثار المصاحبة للقلق على البيانات التي تم جمعها على سبيل المثال، زيادة مستويات الدم من الستيرويدات القشرية والجلوكوز 12. وبالمثل، فإن التعامل اليومي روض الحيوانات لإجراءات العادية ويمكن أن تستخدم للحد من التوتر إلى أبعد من ذل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم ما يكشف. تمت الموافقة على جميع الإجراءات بموجب قانون التجارب على الحيوانات من الدنمارك، وهو ما يتفق مع اتفاقية مجلس أوروبا ETS 123.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نعترف المساعدة الماهرة من آني B. كريستنسن، إليزابيث V. أندرسن، بليندا B. Bringtoft ومقدمي الرعاية الحيوانية في وزارة الطب التجريبي، كوبنهاجن الحرم الجامعي، كلية الصحة والعلوم الطبية، جامعة كوبنهاغن، الدنمارك. يعقوب Lønholdt وشكره على مساعدته التقنية الممتازة في تصوير إجراءات. وأيد هذه الدراسة في جزء من مركز LIFEPHARM لفي الجسم الحي الصيدلة وجامعة كوبنهاغن.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

يمكن استخدام مرهم

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
ماكينة الحلاقة الكهربائيةWella (Contura) ، الدنمارك273207منتج بديل. العديد من الموردين
محاقن يمكن استخدام منتج بديل B.Braun-Omnifix-F ، ألمانيا9161406V. يمكن استخدام العديد من الموردين
NeedlesBD Microlance ، إسبانيا301156منتج بديل. العديد من الموردين
أنبوب جمع Microvette Sarstedt ، D-51588N & uuml. mbrecht ، ألمانيا201،288،100يمكن استخدام منتج بديل. العديد من الموردين
يمكن استخدام محلل Accu-CheckRoche A / S Diagnostics ، الدنماركمنتج بديل. يمكن استخدام العديد من الموردين
Heparin 5000 IE / mlLEO Pharma ، الدنماركمنتج بديل. يمكن استخدام العديد من الموردين
AnesthesiaZoletil 50 ، Chemvet ، الدنماركمنتج بديل. يمكن استخدام العديد من الموردين
أنستازياناركوكسيل البيطري 20 مجم / مل ، إنترفيت ، الدنماركمنتج بديل. يمكن استخدام العديد من الموردين
AnesthesiaTorbugesic vet 10 mg / ml ، Scanvet ، الدنماركمنتج بديل. موردين متعددين
العين المحايديمكن استخدام منتج بديل. موردين متعددين
شاش أو مسحة قطن  يمكن استخدام منتج بديل. موردين
متعددين: مطهر (70٪ كحول)يمكن استخدام منتج بديل. موردين متعددين

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. DeOgburn, R., et al. Effects of increased dietary cholesterol with carbohydrate restriction on hepatic lipid metabolism in Guinea pigs. Comp.Med. 62 (2), 109-115 (2012).
  2. Fernandez, M., Volek, J. S. Guinea pigs a suitable animal model to study lipoprotein metabolism, atherosclerosis and inflammation. Nutr Metab (Lond). 3 (17), (2006).
  3. Frikke-Schmidt, H., Tveden-Nyborg, P., Birck, M. M., Lykkesfeldt, J. High dietary fat and cholesterol exacerbates chronic vitamin C deficiency in guinea pigs. Br J Nutr. 105 (1), 54-61 (2011).
  4. Hem, A., Smith, A. J., Solberg, P. Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat, hamster, gerbil, guinea pig, ferret and mink. Lab Anim. 32 (4), 364-368 (1998).
  5. Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
  6. Guillen, J. FELASA guidelines and recommendations. J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (3), 311-321 (2012).
  7. Ye, P., Cheah, I. K., Halliwell, B. High fat diets and pathology in the guinea pig Atherosclerosis or liver damage. Biochim Biophys Acta. 1832 (2), 355-364 (2013).
  8. Tveden-Nyborg, P., et al. Maternal vitamin C deficiency during pregnancy persistently impairs hippocampal neurogenesis in offspring of guinea pigs. PLoS One. 7 (10), 12-18391 (2012).
  9. Schjoldager, J. G., Tveden-Nyborg, P., Lykkesfeldt, J. Prolonged maternal vitamin C deficiency overrides preferential fetal ascorbate transport but does not influence perinatal survival in guinea pigs. Br J Nutr. 110 (9), 1573-1579 (2013).
  10. Greulich, S., et al. Secretory products of guinea pig epicardial fat induce insulin resistance and impair primary adult rat cardiomyocyte function. J Cell Mol Med. 15 (11), 2399-2410 (2011).
  11. Swifka, J., Weiss, J., Addicks, K., Eckel, J., Rosen, P. Epicardial fat from guinea pig a model to study the paracrine network of interactions between epicardial fat and myocardium. Cardiovasc Drugs Ther. 22 (2), 107-114 (2008).
  12. Pilny, A. A. Clinical hematology of rodent species. Vet.Clin North Am Exot Anim Pract. 11 (3), 523-vii (2008).
  13. Franco, N. H., Olsson, I. A. Scientists and the 3Rs: attitudes to animal use in biomedical research and the effect of mandatory training in laboratory animal science. Lab Anim. 48 (1), 50-60 (2014).
  14. Van, L. J., et al. eAssessing the application of the 3Rs a survey among animal welfare officers in The Netherlands. Lab Anim. 47 (3), 210-219 (2013).
  15. Sloan, R. C., et al. High doses of ketamine-xylazine anesthesia reduce cardiac ischemia-reperfusion injury in guinea pigs. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (3), 349-354 (2011).
  16. Jacobson, C. A. A novel anaesthetic regimen for surgical procedures in guinea pigs. Lab Anim. 35 (3), 271-276 (2001).
  17. Saha, J. K., Xia, J., Grondin, J. M., Engle, S. K., Jakubowski, J. A. Acute hyperglycemia induced by ketamine xylazine anesthesia in rats mechanisms and implications for preclinical models. Exp Biol Med(Maywood). 230 (10), 777-784 (2005).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة