يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

إعداد ثقافة بيليه الدم الجرثومي السريع لتحديد واختبار حساسية المضادات الحيوية

36K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/51985

⸱

أكتوبر 15, 2014

 ,  ,  , 
1Institute of Microbiology, University Hospital Center and University of Lausanne

في هذه المقالة

ملخص

A السريع البكتيرية إعداد بيليه من ثقافة الدم إيجابية يمكن استخدامها كعينة لتطبيقات مثل التعرف بواسطة MALDI-TOF، غرام تلطيخ، اختبار الحساسية للمضادات الحيوية واختبار PCR القائم. النتائج التي يمكن أن ترسل بسرعة إلى الأطباء لتحسين نتائج المرضى الذين يعانون من التهابات مجرى الدم.

الملخص

التهابات مجرى الدم والإنتان هي أحد الأسباب الرئيسية للمراضة والوفيات. نتائج ناجحة للمرضى الذين يعانون من تجرثم الدم تعتمد على التحديد السريع للجراثيم لتوجيه العلاج بالمضادات الحيوية المثلى. تحليل بقع غرام من ثقافة الدم إيجابية يمكن أن تتم بسرعة وبالفعل تؤثر بشكل كبير على نظام المضادات الحيوية. ومع ذلك، ما زالت هناك حاجة إلى تحديد دقيق للجراثيم لتحديد العلاج الأمثل المستهدفة. نقدم هنا البكتيرية إعداد بيليه بسيطة وسريعة من ثقافة الدم الإيجابية التي يمكن استخدامها كعينة لعدة تطبيقات المصب الأساسية مثل تحديد الهوية من جانب MALDI-TOF MS، اختبار الحساسية للمضادات الحيوية (AST) من خلال القرص نشر الفحص الآلي أو أنظمة AST والتلقائية وفقا PCR-الاختبارات التشخيصية. أداء هذه الأنظمة تحديد وAST مختلفة تطبق مباشرة على كريات الدم البكتيرية الثقافة الاشتراكية جداmilar إلى الأداء التي تم الحصول عليها عادة من المستعمرات المعزولة نمت على لوحات أجار. بالمقارنة مع الأساليب التقليدية، واقتناء السريع لبيليه البكتيرية ويقلل بشكل كبير من الوقت لتقرير كل من تحديد وAST. وهكذا، في أعقاب الثقافة الإيجابية الدم، وتحديد من قبل MALDI-TOF يمكن ذكرت في غضون اقل من 1 ساعة في حين أن نتائج AST AST الآلي من قبل أنظمة أو المقايسات نشر القرص ضمن 8 إلى 18 ساعة، على التوالي. وبالمثل، فإن نتائج الفحص السريع PCR القائم يمكن أن ترسل إلى الأطباء أقل من 2 ساعة في أعقاب تقرير لتجرثم الدم. معا، وتظهر هذه النتائج أن الإعداد السريع لبيليه البكتيرية ثقافة الدم لديه تأثير كبير على تحديد وقت وAST التحول وبالتالي على نتيجة ناجحة من المرضى الذين يعانون من التهابات مجرى الدم.

المقدمة

التهابات مجرى الدم والإنتان في المرضى في المستشفيات هي أحد الأسباب الرئيسية للمراضة والوفيات. وهكذا، ويلاحظ الوفيات المتعلقة دموية العدوى في حوالي 14٪ إلى 37٪ من المرضى في المستشفى وربما تزيد إلى 35٪ في وحدات العناية المركزة المرضى 1-3. تحديد السريع للجراثيم هو محوري في توجيه العلاج المضادة للميكروبات الأمثل وزيادة نجاح العلاج المضادة للميكروبات 4،5. التحليل السريع للبقع غرام من ثقافة الدم إيجابية بالفعل لها تأثير كبير على تكييف العلاج المضادة للميكروبات 6،7 ولكن التحديد الدقيق للجراثيم هو مطلوب لتوفير أفضل العلاج بالمضادات الحيوية تتكيف مع المرضى. على سبيل المثال، تختلف نظم العلاج بالمضادات الحيوية لا بد من تنفيذها التالية تجرثم مع المكورات المعوية والعقديات التي يصعب تمييز من قبل غرام تلطيخ. وبالمثل، والتعرف على الأنواع ليفمطلوب ايل للكشف غرام enterobacteria السلبية ترميز الجينات الصبغية شركة المرفأ للطاقة التي تمنح مقاومة لزيادة β-اكتام 8.

مع ثقافة الدم إيجابية، ونهج التشخيص التقليدي لثقافة فرعية للجراثيم على لوحات أجار مختلفة، الأمر الذي يتطلب عدة ساعات من الحضانة إضافية تحديد مسبق مع الطرق المختلفة بما في ذلك الاختبارات البيوكيميائية والنمو على وسائل الإعلام المختلفة انتقائية ونظم التعرف الآلي الميكروبي. الوقت لنتائج نهج التشخيص التقليدي هو من حوالي 1 إلى 3 أيام.

وقد وفرت ظهور بمساعدة الليزر مصفوفة الامتزاز / التأين وقت من الطيران مطياف الكتلة (MALDI-TOF) التكنولوجيا من أجل التعرف السريع على الكائنات الحية الدقيقة أداة جديدة لتحديد بسرعة الكائنات الدقيقة من المستعمرات نمت على لوحات أجار ولكن أيضا مباشرة من الدم إيجابي الثقافات (الشكل 1) 9-12. عشراستخدام البريد من MALDI-TOF لتحديد وكيل المعدية من الثقافات الدم قد قلل كثيرا من الوقت إلى النتائج لبضع دقائق بدلا من ساعات وأيام تتطلبها الطرق التقليدية. كما نوقش من قبل Croxatto وآخرون 13، وكفاءة تحديد MALDI-TOF تعتمد على معايير مختلفة بما في ذلك نقاء الكائن الدقيق وكميتها. يتم الحصول على هذين المعيارين بسهولة من مستعمرات منفصلة نمت على لوحات أجار ولكن تتطلب العلاج قبل تحليلية لتخصيب البكتيرية وتنقية من عينات معقدة مثل ثقافة الدم، والتي تحتوي على العديد من المكونات الخلوية والبروتينات التي قد تتداخل مع تحديد MALDI-TOF.

وقد استخدمت أساليب العزلة مختلف الكائنات الحية الدقيقة "من ثقافة الدم في عدد من الدراسات بما في ذلك سابونين أو غيرها من طريقة المنظفات معتدل لاستخراج بكتيريا 9،14، المصل طريقة فاصل 10، تحلل أساليب الطرد المركزي 12 والحلول تجاريا مثل مجموعة sepsityper. وقد وضعت لدينا مختبر التشخيص الجراثيم بسيطة ثقافة الدم بيليه البكتيرية إعداد استنادا كلوريد الأمونيوم كرات الدم الحمراء، التي تتيح تحديد هوية تحلل سريع من البكتيريا والخميرة بواسطة MALDI-TOF ونظم التعرف الآلي (الشكل 2) 15. هذا المستحضر بيليه ثقافة الدم كما توفر عينة لتطبيقات المصب المباشرة الأخرى مثل تلطيخ غرام، واختبارات التشخيص الآلي PCR القائم مثل POCT-تقارير إنجاز المشروعات للكشف السريع للمقاومة للميثيسيلين Staphyloccocus العنقودية الذهبية (الجرثومة)، واختبار الحساسية للمضادات الحيوية مع أنظمة AST الآلي و / أو عن طريق القرص المقايسات نشر على لوحات أجار (الشكل 3).

في هذا العمل، نحن تصف الخطوات المختلفة لإعداد بيليه البكتيرية ثقافة الدم كما أوضح Prod'hom وآخرون 15 (الشكل 4). ونحن أيضا إلغاءالكاتب البروتوكولات لثلاثة من التطبيقات الرئيسية التي يمكن القيام بها على بيليه ثقافة الدم: تحديد بواسطة MALDI-TOF 15، تحديد الهوية (ID) واختبار الحساسية للمضادات الحيوية (AST) مع النظم الآلية 16 لالمعوية والعنقوديات وPCR- الآلي اختبار تشخيصي استنادا للكشف عن الجرثومة 17.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وقد تم تطوير هذا البروتوكول وبعد التحقق من صحة عمليات البحث والتطوير والقواعد الأخلاقية لمؤسستنا قبل تطبيقها كأداة روتينية.

1. إعداد ثقافة الدم الجرثومي بيليه من كلوريد الأمونيوم الإجراءات كرات الدم الحمراء، lysing

  1. إعداد ثقافة الدم إيجابية لاحق الطرد المركزي.
    1. تعقيم الغطاء ثقافة الدم. إضافة 70٪ من الإيثانول على غطاء الزجاجة وحرقها.
      ملاحظة: لا تؤدي هذه الخطوة تحت غطاء تدفق الصفحي.
    2. نقل زجاجة إلى غطاء تدفق الصفحي. جمع 5 مل من ثقافة الدم مع حقنة G 20.
    3. إضافة 5 مل من ثقافة الدم في أنبوب الطرد المركزي 50 مل تحتوي على 45 مل من الماء المعقم (H 2 O) وخلط العينة.
  2. إعداد بيليه البكتيرية ثقافة الدم عن طريق تحلل الطرد المركزي.
    1. أجهزة الطرد المركزي في العينة 1،000 x ج لمدة 10 دقيقة في RT.
    2. ريمولقد طاف (الذي يحتوي أساسا H 2 O وخلايا الدم) مع مضخة فراغ مختبر.
    3. resuspend الكرية في 1 مل من كلوريد الأمونيوم الصنع lysing الحل (0.15 M NH 4 الكلورين، 1 ملم KHCO 3). كسر بيليه عن طريق كشط وقبل vortexing الأنبوب وأجهزة الطرد المركزي العينة في 140 x ج لمدة 10 دقيقة في RT.
    4. تجاهل طاف التي تحتوي أساسا خلايا الدم الحمراء الحطام.
      1. إذا بقي بيليه النزفية، resuspend وبيليه في 2 مل من معقم والمقطر H 2 0 لزيادة ليز خلايا الدم الحمراء والمتبقية لغسل بيليه. أجهزة الطرد المركزي العينة في 140 x ج لمدة 10 دقيقة في RT وتجاهل طاف.
    5. Resuspend وبيليه في 200 ميكرولتر من H 2 O
  3. ثقافة فرعية من ثقافة الدم على مختلف انتقائي وغير انتقائي وسائل الإعلام أجار.
    1. جمع 1 مل من ثقافة الدم مع حقنة G 20.
    2. تطعيم 1 قطرة من ثقافة الدم كثافة العملياتس أربعة أجزاء على أجار الدم، والشوكولاته أجار، McConkey أجار وSchaedler أجار.
    3. احتضان عند 37 ° C أجار الدم وألواح الشوكولاته أجار في 5٪ CO 2 الغلاف الجوي، وأجار McConkey في جو طبيعي ولوحة أجار Schaedler في الظروف اللاهوائية.
    4. اتبع نمو البكتيريا على وسائل الإعلام المختلفة.
    5. تحقق من النقاء البكتيرية.

2. تحديد بواسطة MALDI-TOF MS

  1. التعرف المباشر من بيليه الدم.
    1. نقل 1 ميكرولتر من الدم بيليه على لوحة الهدف MALDI واتركها لتجف على منصة التدفئة 42 درجة مئوية.
    2. تراكب العينة مع حمض الفورميك 1 ميكرولتر 70٪ واتركها لتجف على منصة التدفئة 42 درجة مئوية.
    3. تراكب العينة مع 1 ميكرولتر من MALDI مصفوفة (محلول مشبع من α-سيانو-4-hydroxycinnamic حامض في 50٪ حامض trifluoroacetic الأسيتونيتريل 2.5٪) واتركها لتجف على 42 ° C منصة التدفئة.
    4. انتقل إلى MALDI-TOF MS تحليل مع نظام MALDI-TOF MS كما هو موضح من قبل الشركات المصنعة.
    5. إذا كانت النتيجة غير صالحة التعرف على مستوى الأنواع (على سبيل المثال مع درجة <2)، إجراء استخراج البروتين من العينة بيليه الدم.
  2. تحديد بعد استخراج البروتين من بيليه ثقافة الدم.
    1. مزيج 20 ميكرولتر من بيليه مع 1 مل من الايثانول 70٪ والطرد المركزي في 13،000 x ج لمدة 2 دقيقة في RT.
    2. تجاهل طاف وإضافة 25 ميكرولتر من حمض الفورميك 70٪ و 25 ميكرولتر من 100٪ الأسيتونيتريل لبيليه. دوامة بقوة ل resuspend الكريات. و resuspend الكريات الصعبة عن طريق كسر عليهم مع نصائح ماصة قبل vortexing ل.
    3. أجهزة الطرد المركزي في 13،000 x ج لمدة 2 دقيقة في RT. نقل 1 ميكرولتر من طاف (التي تحتوي على البروتينات المستخرجة) على لوحة الهدف MALDI واتركها لتجف على منصة التدفئة 42 درجة مئوية. تابع كما هو موضح في 2.1.2.

3. البكتيرية Identification والمضادات الحيوية اختبار الحساسية مع نظام الميكروبية الآلي

  1. إعداد تعليق البكتيرية لتحديد البكتيريا وAST مع نظام الميكروبية الآلي.
    1. إعداد أنبوب من البلاستيك تحتوي على 3 مل من العقيمة 0.45٪ كلوريد الصوديوم الحل متوافق مع نظام الميكروبية الآلي.
    2. إضافة كمية كافية من بيليه ثقافة الدم في 0.45٪ كلوريد الصوديوم الحل للحصول على تعليق البكتيرية المقابلة لتعكر مكفارلاند من 0،6-0،8. قياس العكارة باستخدام آلة قياس شدة الضوء.
      ملاحظة: حجم بيليه البكتيرية ثقافة الدم يتراوح بين 50 و 200 ميكرولتر لتحقيق التعكر مكفارلاند من 0،6-0،8.
  2. تطعيم الآلي إيجابية الجرام (GP) أو سالبة الجرام (GN) بطاقات لتحديد الهوية وبطاقات AST الآلي لاختبار الحساسية للمضادات الميكروبات من البكتيريا إيجابية الغرام وسلبية الغرام والبكتيريا كما هو موضح من قبل الشركة المصنعة.
    ملاحظة: Identificatioن مع GP أو بطاقات حسن الجوار لا يطبق إذا MALDI-TOF MS تحديد قيمة النتيجة هي> 2. تحقق نقاء تعليق البكتيرية بواسطة subculturing تعليق البكتيرية على أجار الدم (GP وGN) وآغار ماكونكي (GN) لوحات.

4. المضادات الحيوية اختبار حساسية قبل القرص إنتشار الفحص

يوصف فحص القرص نشر من قبل اللجنة الأوروبية على اختبار الحساسية للمضادات الميكروبات (EUCAST، الإصدار 3.0، إبريل عام 2013، www.eucast.org).

  1. إعداد تعليق البكتيرية لإجراء اختبار الحساسية للمضادات الميكروبات عن طريق الانتشار فحص القرص.
    1. إعداد أنبوب زجاجي يحتوي على 3 مل من معقم 0.9٪ كلوريد الصوديوم الحل.
    2. إضافة كمية كافية من بيليه ثقافة الدم في 0.9٪ كلوريد الصوديوم الحل للحصول على تعليق البكتيرية المقابلة لتعكر مكفارلاند 0.5. قياس العكارة باستخدام آلة قياس شدة الضوء.
      ملاحظة: حجم ثقافة الدمبيليه البكتيرية يتفاوت بين 50 و 200 ميكرولتر لتحقيق التعكر مكفارلاند من 0،6-0،8.
    3. دوامة تعليق البكتيرية.
  2. تلقيح تعليق البكتيرية على أجار مولر هينتون (MH) أو مولر هينتون أجار أجار الحساسية الكائنات الحية (MHF) (MH تستكمل مع 5٪ مزال الفبرين دم الحصان و 20 ملغم / لتر من β-نيكوتيناميد الأدينين ثنائي النوكليوتيد).
    1. تراجع مسحة القطن المعقمة في تعليق البكتيرية وإزالة بلطف السوائل الزائدة من خلال تحويل مسحة على الجدار الداخلي للأنبوب زجاجي.
    2. نشر تعليق البكتيرية بالتساوي على كامل سطح لوحة أجار MH / MHF بواسطة ينظف في ثلاثة اتجاهات أو باستخدام لوحة المدورة الآلي.
  3. تطبيق الأقراص المضادة للميكروبات على لوحات أجار تلقيح.
    1. تطبيق كثب الأقراص على سطح المجففة لوحات أجار تلقيح يدويا أو باستخدام موزع القرص قابلية.
    2. احتضان لوحة في تيمبي المناسبrature والغلاف الجوي كما هو موضح في اختبار الحساسية للمضادات الميكروبات طريقة نشر القرص EUCAST (الإصدار 3.0، إبريل عام 2013، www.eucast.org).

5. الآلي PCR القائم على اختبار تشخيص للكشف عن الجرثومة

  1. باستخدام micropipette، ونقل 50 ميكرولتر من بيليه ثقافة الدم إلى قارورة العينة كاشف المتوفرة مع هذه الجرثومة الآلي PCR القائم التشخيص اختبار عدة ودوامة خلال 20 ثانية.
  2. باستخدام micropipette 1 مل، الاستغناء العينة في منفذ عينة من خرطوشة. إدراج خرطوشة في نظام PCR الآلي وبدء الفحص كما هو موضح من قبل الشركة المصنعة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

في دراسة قام بها Prod'hom وآخرون 15، وقد تم تحليل حبيبات البكتيرية التي حصلت عليها كلوريد الأمونيوم تحلل الطرد المركزي من 122 ثقافة الدم إيجابية من 78 مريضا بواسطة MALDI-TOF MS. من 122 ثقافة الدم إيجابية، 95 (77.9٪) تم التعرف بشكل صحيح على مستوى الأنواع واحدة (0.8٪) عند مستوى جنس. أعطت 26 (21.3٪) الكريات ثقافة الدم المتبقية لا يمكن الاعتماد عليها بواسطة تحديد MALDI-TOF. من بين هؤلاء، 21 كانت البكتيريا موجبة الجرام بما في ذلك 13 العقديات و 5 المخثرة العنقوديات س...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

مقارنة مع النهج التشخيص التقليدية ثقافة الدم إيجابية، واقتناء السريع لبيليه البكتيرية باستخدام كلوريد الأمونيوم تحلل نهج الطرد المركزي يقلل من الوقت لتقرير الهوية من قبل 16 إلى 24 ساعة والوقت لتقرير AST قبل 24 إلى 48 ساعة (الشكلان 1 و 3).

مقدمة السريع من العلاج بالمضادات الحيوية المناسبة أمرا حيويا لتحسين نتائج المرضى الذين يعانون من التهابات مجرى الدم. وبالتالي، الكشف المبكر عن العوامل المعدية ف...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

تعلن الكتاب أنه ليس لديهم المصالح المالية المتنافسة.

شكر وتقدير

نشكر فنيي مختبر علم الجراثيم في مركز مستشفى جامعة لوزان لمساعدتهم على تنفيذ التقنيات في المختبر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
20 جرام إبرةTerumo ، لوفين ، بلجيكاNN-2038R
50 مل Falcon tubeBD ، Franklin Lakes ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية35207050 مل أنابيب الطرد المركزي
Ammonium chlorureMerck ، دارمشتات ، ألمانيا101145
كربونات الهيدروجين البوتاسيومFluka ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية   ؛60340
حمض الفورميكسيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية   ؛F0507قابل للاشتعال ، تآكل
&# 945 ؛ -Cyano-4-hydroxycinnamic acidFluka ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية   ؛70990السمية الحادة
أسيتونيتريلسيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية  271004أسيتيك قابل للاشتعال وحاد
سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية   ؛T6508تسمية حادة
وأكالة Vitek 2 60 أداةBiom & eacute ؛ rieux ، Marcy-l'Etoile ، فرنسا27202أداة النظام الميكروبي الآلي
Vitek 2 Gram-positive (GP) بطاقةBiom & eacute ؛ rieux, Marcy-l'Etoile, France21342الآلي GP  بطاقة الهوية
Vitek 2 AST-P580 بطاقةBiomé rieux ، Marcy-l'Etoile ، فرنسا22233نظام AST الميكروبي الآلي
Vitek 2 Gram-negative (GN) بطاقةBiom & eacute ؛ rieux, Marcy-l'Etoile, France21341الآلي GN  بطاقة الهوية
Vitek 2 AST-N242 بطاقةBiomé rieux ، Marcy-l'Etoile ، فرنسا413391نظام AST الميكروبي الآلي
Xpert MRSACepheid ، Sunnyvale ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية  ؛ GXMRSA-100N-10تقنية تضخيم الحمض النووي MRSA
GeneXpert IV أداةCepheid ، Sunnyvale ، Ca ، الولايات المتحدة الأمريكيةGXIV-4-Dأداة تقنية تضخيم الحمض النووي
Microflex LT MALDI-TOF MS أداةBruker Daltonics ، بريمن ، ألمانياBDAL microflex LT / SH
MSP 96 الهدف الصلب BCBruker Daltonics ، بريمن ، ألمانيا280799لوحة الهدف MALDI
مقياس الكثافة Densicheck أداةBiom & eacute ؛ rieux, Marcy-l'Etoile, France27208
MALDI Sepsityper kit 50Bruker Daltonics, Bremen, Germany8270170
Mac Conkey agarBiolife, Milano, Italy4016702
Mueller-Hinton agarOxoid, Hampshire, EnglandCM0337Mueller-Hinton agar (MH) 
MHF أجاربيوم & إيكوت; rieux ، Marcy-l'Etoile ، فرنسا43901Mueller-Hinton agar-fastidious Organisms agar (MHF)
BD كولومبيا III أجارBD ، فرانكلين ليكس ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية254071أجار الدم
BD أجار الشوكولاتةBD ، فرانكلين ليكس ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة254089أجار الشوكولاتة
BD schaedler agarBD ، فرانكلين ليكس ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية254084Schaedler agar
حمض ثلاثي فلورو الأمريكية

المراجع

  1. Alberti, C., et al. Epidemiology of sepsis and infection in ICU patients from an international multicentre cohort study. Intensive care medicine. 28, 108-121 (2002).
  2. Angus, D. C., et al. Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care. Critical care medicine. 29, 1303-1310 (2001).
  3. Vincent, J. L., et al. Sepsis in European intensive care units results of the SOAP study. Critical care medicine. 34, 344-353 (2006).
  4. Micek, S. T., et al. Empiric combination antibiotic therapy is associated with improved outcome against sepsis due to Gram-negative bacteria a retrospective analysis. Antimicrob Agents Chemother. 54, 1742-1748 (2010).
  5. Seifert, H. The clinical importance of microbiological findings in the diagnosis and management of bloodstream infections. Clin Infect Dis. 48, S238-S245 (2009).
  6. Barenfanger, J., et al. Decreased mortality associated with prompt Gram staining of blood cultures. American journal of clinical pathology. 130, 870-876 (2008).
  7. Munson, E. L., Diekema, D. J., Beekmann, S. E., Chapin, K. C., Doern, G. V. Detection and treatment of bloodstream infection: laboratory reporting and antimicrobial management. J Clin Microbiol. 41, 495-497 (2003).
  8. Clerc, O., et al. Impact of matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry on the clinical management of patients with Gram-negative bacteremia a prospective observational study. Clin Infect Dis. 56, 1101-1107 (2013).
  9. Meex, C., et al. Direct identification of bacteria from BacT/ALERT anaerobic positive blood cultures by MALDI-TOF MS MALDI Sepsityper kit versus an in-house saponin method for bacterial extraction. Journal of medical microbiology. 61, 1511-1516 (2012).
  10. Moussaoui, W., et al. Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry identifies 90% of bacteria directly from blood culture vials. Clin Microbiol Infect. 16, 1631-1638 (2010).
  11. Seng, P., et al. Ongoing revolution in bacteriology routine identification of bacteria by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry. Clin Infect Dis. 49, 543-551 (2009).
  12. Stevenson, L. G., Drake, S. K., Murray, P. R. Rapid identification of bacteria in positive blood culture broths by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry. J Clin Microbiol. 48, 444-447 (2010).
  13. Croxatto, A., Prod&34hom, G., Greub, G. Applications of MALDI-TOF mass spectrometry in clinical diagnostic microbiology. FEMS Microbiol Rev. 36, 380-407 (2012).
  14. Chen, J. H., et al. Direct bacterial identification in positive blood cultures by use of two commercial matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry systems. J Clin Microbiol. 51, 1733-1739 (2013).
  15. Prod&34hom, G., Bizzini, A., Durussel, C., Bille, J., Greub, G. Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry for direct bacterial identification from positive blood culture pellets. J Clin Microbiol. 48, 1481-1483 (2010).
  16. Prod&34hom, G., Durussel, C., Greub, G. A simple blood-culture bacterial pellet preparation for faster accurate direct bacterial identification and antibiotic susceptibility testing with the VITEK 2 system. Journal of medical microbiology. 62, 773-777 (2013).
  17. Clerc, O., et al. Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry and PCR-based rapid diagnosis of Staphylococcus aureus bacteraemia. Clin Microbiol Infect. , (2013).
  18. Martiny, D., et al. Impact of rapid microbial identification directly from positive blood cultures using matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry on patient management. Clin Microbiol Infect. 19, E568-E581 (2013).
  19. Stoneking, L. R., et al. Would earlier microbe identification alter antibiotic therapy in bacteremic emergency department patients. The Journal of emergency medicine. 44, 1-8 (2013).
  20. Nordmann, P., Dortet, L., Poirel, L. Rapid detection of extended-spectrum-beta-lactamase-producing Enterobacteriaceae. J Clin Microbiol. 50, 3016-3022 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

مقياس طيف الكتلة باستخدام التأين بالليزر بمساعدة المصفوفة والتحليل بزمن الطيران (MALDI-TOF MS)مقايسة الانتشار القرصياختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل المؤتمتالتحلل باستخدام كلوريد الأمونيومبروتوكول الطرد المركزيعكارة ماكفارلاندصبغ جرام
إعداد ثقافة بيليه الدم الجرثومي السريع لتحديد واختبار حساسية المضادات الحيوية
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.