تم بناء منشأة أسماك الزرد المناسبة للتكاثر والبحث في الجسم الحي بطريقة سهلة وبأسعار معقولة. الصيانة ضئيلة. هذا المرفق مثالي لمشاركة الطلاب والبحث المستقل.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
بناء على بناء سهلة لمرفق الزرد بأسعار معقولة و
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
في الجسم الحي البحوث الطبية الحيوية أمرا حيويا لترجمة في نتائج المختبر إلى التطورات السريرية. المؤسسات الأكاديمية صغيرة ذات موارد محدودة تجد من المستحيل تقريبا لبناء وصيانة مرافق القوارض النموذجية للأبحاث. وقد أثبتت الأبحاث الزرد ليكون بديلا قيما لفي الجسم الحي البحوث في علم الصيدلة، علم وظائف الأعضاء، وتنمية والدراسات الوراثية. توضح هذه المقالة أن منشأة الزرد وظيفي يمكن أن يبنى بطريقة سهلة وميسرة. علينا أن نبرهن على مثل هذا المرفق يمكن أن يبنى في حوالي يوم عمل واحد مع الحد الأدنى من الأدوات والخبرات. وبلغت تكلفة حوض للأسماك الزرد 27 منشأة 1.8 L شيدت في هذه الدراسة حوالي 1500 $. ونحن نقدر أن المحافظة على عمل 150 مستعمرة الأسماك الأولية لمدة 3 أشهر هو 1،000 دولار. هذا الطلاب المعنيين في المشروع، تم تقديمها للaquaculturing من الزرد ليقترح البحث.
المقدمة
في الجسم الحي نماذج ضرورية في إجراء البحوث الطبية الحيوية شامل لأنها تسمح للفي مجال البحوث المختبر إلى أن تترجم على مستوى النظام والعضوي. على سبيل المثال، قد أثبتت الأبحاث مع الثدييات الصغيرة، وهما القوارض، الضروري في تطوير عقاقير وتحسين العقاقير المتاحة. ومع ذلك، فإن التعقيد (ماليا ولوجستيا) قد يجعل من المستحيل تقريبا لبناء وصيانة مرافق القوارض ليقترح التجريب في المؤسسات البحثية الصغيرة الأكاديمية. ومع ذلك، في الجسم الحي البحوث يمكن أن يؤديها باستخدام الأنواع الحيوانية الأخرى التي تتطلب اللوجستية أقل تفصيلا. الزرد (دانيو rerio) وقد استخدمت بنجاح لتكون نموذجا في الجسم الحي لدراسة علم الوراثة والتنمية والفيزيولوجيا المرضية، والصيدلة 1،2،10،11،12. التسهيلات اللازمة لإيواء الزرد لإجراء التجارب هي بسيطة نسبيا وأقل تكلفة بالمقارنة مع صمرافق odent. كيم وآخرون. 3 وقد وصفت مؤخرا بالتفصيل نظام السكن الزرد 80 دبابة التي يمكن أن يبنى على ما يقرب من 1،500 دولار، والذي يشمل كلا من قطع الغيار وتكاليف العمالة. هذا يقف في تناقض صارخ مع ما يقرب من 8500 $ التي من شأنها أن تكون هناك حاجة لشراء نظام 80 دبابة جاهزة من أي عدد من الموردين التجاريين. ومع ذلك، فإن الوصف الذي قدمه كيم وآخرون. قد تكون معقدة وصعبة لمتابعة بالنسبة للمستخدمين المبتدئين للبحوث الأسماك. ونحن نعتقد أن منشأة الزرد يمكن بناؤها بطريقة مبسطة للاستثمار من 1500 $.
إنشاء منشأة في الجسم الحي في المؤسسات الأكاديمية صغيرة يوفر كلياتهم أداة إضافية التي لإنتاج الأبحاث أكثر قوة وشامل. في المختبر البيانات التي تدعمها في الجسم الحي النتائج إنتاج عام البحوث الطبية الحيوية أكثر شمولا من البيانات التي تم الحصول عليها باستخدام فقط في النهج المختبر. ولذلك، فإنسوف تنفيذ منشأة الأبحاث في الجسم الحي يعزز إلى حد كبير نجاح مؤسسة في المساعي البحثية الشاملة (التعرض الطالب الأبحاث والمنشورات، والاتصالات، والسعي من التمويل الخارجي، الخ.).
بناء منشأة الزرد مثل واحد الموصوفة في هذه الدراسة هو المثالي للمؤسسات الأكاديمية البحثية مع مرافق محدودة (أو المؤسسات في الجسم الحي دون مرافق البحوث) خلال تشنجا الأوقات المالية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: هذه البروتوكولات اتباع المبادئ التوجيهية للIACUC من المشيخية كلية.
1. المواد اكتساب المدرج في الجدول 1.
2. تجميع 5 الجرف كروم وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. وسوف تستخدم هذه لإيواء مرفق.
3. بناء خزان للمياه ونظام الترشيح (أرقام 1A و 2).
- باستخدام الشكل 1A كدليل، تخطيط ال 18 غالون دلو، ومضخة والفلاتر ومصباح الأشعة فوق البنفسجية لتحديد موقع التثبيت النهائي والحجم.
- مرة واحدة وضعت أجزاء من وقياس وقطع ¾ "الأنابيب البلاستيكية لطول اللازمة للتجميع. تختلف أطوال جميع الأنابيب وفقا لاحتياجات مساحة محددة والقيود.
- تجميع الأنابيب والتجهيزات على النحو المنصوص عليه في السابق باستخدام التمهيدي والاسمنت PVC، انظر أدناه (3.3.2 و3.3.3).
- الرمال قطع حواف الأنابيب مع الصنفرة حتى أنهم سلس إلى لمسةد لا يوجد الحطام.
- رئيس وخارج الأنابيب وداخل المناسب مع التمهيدي PVC شراؤها مع مسحة المضمنة من التمهيدي PVC.
- تدعيم الأنابيب وتركيب معا من خلال تطبيق الأسمنت PVC إلى خارج الأنبوب باستخدام مسحة المدرجة. أكرر لجميع الخطوات التي تحتاج إلى التدعيم PVC.
- وضع دلو 18 غالون إلى جانب واحد من البناء الرف.
- تثبيت موصل الحاجز في جانب خزان.
- إرفاق ¾ "أنابيب PVC إلى الحاجز.
- إرفاق الطرف الآخر من ¾ "الأنابيب إلى مدخل المضخة باستخدام ¾" الخيوط جعل المناسب.
- ربط مرشحات إلى المضخة باستخدام اثنين من 90 درجة المرفقين و¾ "الأنابيب PVC.
- استخدام مرشح واحد ورقة تليها واحدة تنشيط مرشحات الكربون من أجل تصفية الحطام وخفض مستويات الكلور والمواد الكيميائية في الماء.
- قم بتوصيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية إلى accordi المرشحاتنانوغرام لتعليمات الشركة الصانعة.
- إرفاق مضخة ونظام التصفية إلى الجانب العلوي من الرف الأول من رف باستخدام العلاقات السلك. تختلف ترتيب التجمع والمرفق وفقا لحجم وتخطيط الرف / الرف الذي تم اختياره.
- إضافة 1 bioball لكل جالون من الماء إلى خزان المياه مرة واحدة يتم تجميع المضخة ونظام التصفية وتعلق على الرف.
4. بناء الخط الرئيسي العرض (أرقام 1B و 2).
- قياس وقطع قطعة من ¾ "الأنابيب البلاستيكية لتوصيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية إلى العرض الرئيسي
- استخدام ¾ "نقطة الإنطلاق PVC لبدء خط الإمداد الرئيسي من خلال ربط نقطة الإنطلاق إلى ¾" العادم PVC القادمة من فلتر الأشعة فوق البنفسجية. .
- إضافة صمام على الخروج إلى أسفل نقطة الإنطلاق PVC لتكون بمثابة استنزاف لاحمرار صيانة النظام.
- بدء تشغيل خط الإمداد الرئيسي من الجزء العلوي من ¾ "نقطة الإنطلاق PVC عن طريق قياس وقطع ¾" PVCالأنابيب إلى الطول المطلوب لتوفير أنابيب تغذية لكل من الرفوف على الرف.
- تثبيت ¾ "المحملات PVC للخطوط الأفقية التي ستدخل كل رف من رفوف.
- اختياريا (والمقترح)، إضافة ¾ "على الخروج صمام لكل الرف خط إمداد للسماح لعزل كل رف وتصميم وحدات من هذا النظام.
- استخدام ¾ "أنابيب PVC كورقة ضغط الحد من خط على الرف العلوي. في حالة تشغيل هذا الخط في الجزء الخلفي من الرف، واستخدام هذا الجرف للتخزين. إنهاء تخفيض الضغط سطر في خط العادم الرئيسي (الشكل 1B) مع ¾ "صمام على الخروج.
- مرة واحدة وقد تم الانتهاء من الخطوات المذكورة أعلاه، رئيس وتدعيم الأنابيب البلاستيكية معا كما فعلت سابقا عند بناء نظام خزان والترشيح.
5. بناء الخط الرئيسي العادم (أرقام 1C و 2).
- تشغيل طول العمودي للخط العادم الرئيسي إلى الجانب الآخر من و رفROM خط الإمداد الرئيسي. استخدام أنابيب 2 "PVC لهذا الخط الرأسي لاستقبال خط الإمداد الرئيسي في أعلى واستنزاف خطوط من الدبابات الأسماك من كل رف.
- قطع قطعة من 2 "الأنابيب البلاستيكية لالرأسي خط العادم الرئيسي واستخدام 2" المحملات PVC لاستقبال حوض للأسماك خطوط هجرة من كل الرف. إنهاء خط العادم الرئيسي في خزان الأسهم لطرد المياه المعاد تدويرها أكثر من فلتر الاسفنج.
- قطع بوصة واحدة فتح كامل طول 2 "PVC القطع الأنابيب ونعلق على رأسي خط العادم الرئيسي مع PVC المحملات لخطوط الصرف الأفقية من الدبابات الأسماك.
- تتويج 2 "خطوط هجرة أفقية مع 2" غطاء PVC.
- رئيس وتدعيم القطع باستخدام التجهيزات الضرورية (وصلات، الحلمات أو المرفقين).
6. بناء خزانات الأسماك (الشكل 3).
- مع الحفر، وقطع 1 1/8 "ثقب في الجزء الخلفي من حوض للأسماك 1" تحت الحافة العليا مع رأى حفرة. حرك ¾ "محول PVC الذكور الخيوط (مع # 18 يا خاتم المرفقة) من خلال ثقب (من داخل الخزان إلى الخارج).
- نعلق وتشديد 90 درجة 3/4 "الخيوط PVC الكوع إلى محول الذكور لإنشاء أنبوب العادم حوض للأسماك. إضافة قطعة من شبكة غرامة قبل الشد الجوز عقد لمنع الزرد يمر نظام العادم.
- وضع خزان الأسماك مع نهاية أنبوب العادم في فضاء مفتوح من خط تصريف وراء الدبابات
7. بدء نظام المياه
- في عدة حاويات، مثل تلك المستخدمة للخزان، وقياس ثلاثة أضعاف كمية المياه الواردة في هذا النظام. اسمحوا الوقوف هذا الماء في درجة حرارة الغرفة لتكييف لمدة 48 ساعة.
- إضافة الماء إلى النظام والسماح لها تعمم مدة لا تقل عن 3 أيام.
- تغيير الماء في النظام بقوة طوال 3 أيام الأولى من الدورة الدموية من أجل تخليص النظام من الملوثات ثار يقيمون داخل الأنابيب.
- إضافة الزرد المبتدئين والسماح للدورة النيتروجين إلى الحصول على المنشأة. تطبيع الرقم الهيدروجيني إلى ثابت 7. حافظ على سبعة الزرد في 1.8 L، وإطعامهم مرتين يوميا خلال أيام الأسبوع، ومرة واحدة يوميا خلال عطلة نهاية الأسبوع على النحو الذي اقترحه ينبو 4 و 6 مكناب.
- مراقبة نترات (<75 ملغ / L) تم الحفاظ عليها، النتريت (<10 ملغ / لتر)، والأمونيوم (0 ملغم / لتر) يوميا خلال الأسبوع الأول بعد إضافة الأسماك، ومستويات مرتين أسبوعيا مرة واحدة المطلوب مع التغييرات المياه العادية .
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
بناء نظام مضخة وFlters
مرة واحدة يتم تجميعها الرف واقامة الخطوة الأولى هي لبناء مضخة وفلتر النظام. وترتبط عوامل التصفية لمضخة نظام وتقع فوق مستوى السفلي من الرف الأول، والذي يسمح لسهولة الصيانة واستبدال فلتر. وبالمثل، يتم توصيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية مع الأنابيب البلاستيكية للتصفية والذي عقد في مكان مع العلاقات الأسلاك البلاستيكية للسماح السهل استبدال مصباح الأشعة فوق البنفسجية حسب الحاجة (الشكل 4A). مباشرة بعد المضخة يتم تثبيت مرشح ورقة، فلتر ال...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
والغرض الرئيسي من هذه المقالة هو لإثبات أن بناء منشأة الزرد وظيفية ليست معقدة ويمكن أن يبنى من قبل الباحثين المبتدئين الأسماك مع الحد الأدنى من المعرفة البناء. وعلاوة على ذلك، تعرض هذه المقالة أن المواد اللازمة لهذا المرفق الزرد وظيفية يمكن الحصول عليها بسهولة وكلفة معقولة من متاجر الحيوانات الاليفة العرض المحلية أو المتاجر. مرة واحدة وقد تم الحصول على جميع المواد والأدوات بناء النظام والدبابات الأسماك يستغرق حوالي يوم عمل واحد. الجولة الأولى لل72 ساعة يسمح لأي فشل في النظام، مثل ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح لهذه الورقة.
شكر وتقدير
فإن الكتاب أود أن أشكر مكتب البحوث من مدرسة المشيخية كلية الصيدلة للحصول على الدعم المالي لهذا المشروع خلال حفل توزيع جوائز الصيدلة الصغيرة للبحوث والتعاون (SPARC) جائزة. الكتاب أشكر السيد جون Smink، مدير مختبر أبحاث الحيوانات المائية، جامعة كليمسون، كليمسون، SC لبلده الفني مراجعة مخطوطة المساعدة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| كمية | العلامة التجارية | للسلعة | |
| 74 بوصة ارتفاع × 48 بوصة عرض × 18 بوصة عمق 5 أرفف فولاذية قائمة بذاتها | تحديد نمط | الوحدة 1 | |
| دلو عام سعة 18 جالون / حمل | سنتركس بلاستيك: LLC & nbsp ؛ حمل متين | 1 | |
| 6 منافذ قطاع طاقة مع 15 قدم سلك | كهربائي رئيسي | 1 | |
| 9 واط الأشعة فوق البنفسجية حديقة المياه مصفاة FiIter ومصباح الأشعة فوق البنفسجية | Smartpond ؛ | 1 | |
| فلتر استبدال المياه للمنزل بالكامل | دوامة | 6 | |
| دوامة مبهمة للمنزل بالكامل قبل الترشيح | دوامة 2 | ||
| شريط ختم الخيط | ويليام إتش هارفي | 1 | |
| 8 أوقية LO-VOC PVC الأسمنت | Oatey & nbsp ؛ | 1 | |
| 8 أونصة سائلة LO-VOC Primer | Oatey | 1 | |
| 1/4 بوصة × 100 قدم أنابيب توزيع الري بالتنقيط الفينيل | السيد Landscaper ؛ | 1 | |
| 1/4 في الري بالتنقيط الشائكة تشغيل / إيقاف صمام | مستر تنسيق الحدائق | 33 | |
| 9 منافذ NPT الري المشعب مع فلتر | ؛ مستر لاند سكلايكر | 6 | |
| مرشح إسقاط مع House | دوامة | 6 | |
| 2 في ضياء 90 درجة PVC الكوع | LASCO | 3 | |
| 2 في ضياء 90 درجة المحملة | LASCO | 3 | |
| 3/4 بوصة ضياء 90 درجة زلة الكوع | LASCO | 15 | |
| 3/4 في ضياء PVC محول | LASCO | 7 | |
| 3/4 في ضياء PVC تي لايسكو | 12 | ||
| 2 في ضياء PVC كاب | LASCO | 3 | |
| 1 في ضياء × 3/4 في ضياء PVC محول | LASCO | 2 | |
| 3/4 في PVC المقبس في الخط صمام الكرة | الأمريكية صمام | 5 | |
| 1/2 بوصة ضياء × 3/4 في ضياء PVC محول | Lasco | 8 | |
| 3/4 في ضياء PVC كاب | Lasco | 1 | |
| 2 في × 5 قدم بولي كلوريد الفينيل الأنابيب | شارلوت الأنابيب | 4 | |
| ¾ ؛ -في × 10 قدم الأنابيب البلاستيكية | شارلوت الأنابيب | 3 | |
| 11 / 16x1-7 / 80 حلقة PVC | SXT | 10 | |
| & frac12 ؛ ” محول ذكر PVC | SXT | 1 | |
| & frac34 ؛ ” اقتران PVC | SXT | 1 | |
| & frac12 ؛ ” محول أنثى PVC ؛ | SXT | 1 | |
| وصلة | |||
| 1.8 لتر مزدوج بيتا حارس | أعلى زعنفة | 27 | |
| ¾ ” محول ذكر PVC (ث / # 18 يا دائري) | SXT | 28 | |
| 90 درجة ¾ ؛ ” الخيوط PVC الكوع | SXT | 27 | |
| شبكة غرامة | N / A | 1 ياردة | |
| الحاجز موصل | N / A | 1 | |
| منشارا | N / A | 1 | |
| حفر | N / A | 1 | |
| منشار ثقب | N / A | 1 | |
| ربط قابل للتعديل | N / A | 1 | |
| كماشة ؛ | N / A | 1 | |
| شريط قياس | N / A | 1 | |
| نظارات السلامة | N / A | 1 | |
| قفازات العمل | N / A | 1 |
المراجع
- Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , 3rd ed, Academic Press. New York, New York. (2010).
- Grim, J. M., et al. Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish. Strategic Conference of Zebrafish Investigators Poster Presentation, 2013, Asilimar, CA, , (2013).
- Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P. Modular, easy-to-assemble, low-cost facility. Zebrafish. 6 (3), 269-274 (2009).
- Linbo, T. L. Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center. U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).
- Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. J Vis Exp. 69, 4196(2012).
- McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. Don't be afraid to set up your fish facility. Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).
- Garcia, R. L., Sanders, G. E. Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).
- Rivas-Boyero, A. A., et al. Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio). J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).
- Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b. Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).
- Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodríguez, R. E. Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor. Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
استكشف المزيد من المقالات
