مقالة منهجية

طرق الخلية المرفقة قياسات السعة في ماوس الكظرية أليف الكروم خلية

DOI:

10.3791/52024

⸱

أكتوبر 22, 2014

 ,  , 
1Department of Biological Sciences, University of Illinois at Chicago

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بعد إفراز الخلايا ، يتم استرداد غشاء البلازما المنصهر من خلال عملية تعرف باسم الالتقام الخلوي. تعمل هذه الآلية على إصلاح الحويصلات المشبكية الجديدة للجولة التالية من الإصدار. يتم التقاط الأحداث الداخلية الفردية وتحليلها من خلال استخدام تسجيلات السعة المرتبطة بالخلية في خلايا كرومافين الغدة الكظرية في الفأر.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعد انتقال الخلايا العصبية جزءا لا يتجزأ من الاتصال الخلوي داخل الدماغ. يؤدي إزالة استقطاب الغشاء قبل المشبكي إلى اندماج الحويصلة المعروف باسم إفراز الخلايا الذي يتوسط الانتقال المتشابك. يعد الاسترجاع اللاحق للحويصلات المشبكية ضروريا لتوليد حويصلات جديدة مملوءة بالناقل العصبي في عملية تم تحديدها على أنها الالتقام الخلوي. أثناء إفراز الخلايا ، سيؤدي دمج أغشية الحويصلة إلى زيادة مساحة السطح ويؤدي الالتقام الخلوي اللاحق إلى انخفاض مساحة السطح. هنا ، يوضح مختبرنا مقدمة أساسية لتسجيلات السعة المرتبطة بالخلايا لأحداث الخلية المفردة في خلية كرومافين الغدة الكظرية للفأر. هذا النوع من التسجيل الكهربائي مفيد للتسجيلات عالية الدقة لإفراز الخلايا والالتقام الخلوي على مستوى الحويصلة الواحدة. في حين أن هذه التقنية يمكنها اكتشاف كل من إفراز الحويصلة والالتقام الخلوي ، فإن تركيز مختبرنا ينصب على الالتقام الخلوي الحويصلي. علاوة على ذلك ، تسمح لنا هذه التقنية بتحليل حركية الأحداث الداخلية الفردية. هنا يتم وصف طرق تشريح أنسجة الغدة الكظرية في الفأر ، وزراعة خلايا الكرومافين ، والتقنيات الأساسية المرتبطة بالخلايا ، والأمثلة اللاحقة للآثار الفردية التي تقيس حدث الخلية الداخلية الفردي.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتوسط انتقال متشابك بواسطة إيماس من الحويصلات التي تحتوي على ناقل عصبي متشابك، ويجب أن تخضع هذه الحويصلات إعادة التدوير التقامي المحلي داخل محطة العصبية للحفاظ على الاتصالات العصبية على المدى الطويل. نظرا للدور أساسي في انتقال متشابك في الدماغ، وفهم الآليات الجزيئية التي تشكل دورة حويصلة متشابك هي الركيزة الأساسية نحو فهم أفضل في مجال الاتصالات الخلوية ككل. بين النظم نموذج خلية، وقد وفرت الخلية أليفة الكروم الكظرية بعض البصيرة الأكثر حسما في الآلية الجزيئية الكامنة وراء إعادة تدوير حويصلة متشابك. إيماس، فإن الخطوة النهائية في إطلاق الناقلات العصبيه، وقد درس كثيرا وفحصها من خلال استخدام الخلايا أليفة الكروم الكظرية 1،2. في الواقع، معظم اللاعبين الجزيئية التي تنسق تشكيل والاستهداف والالتحام والانصهار من حبيبات إفرازية تم تحديدها نظرا لتطبيق شعبةتقنيات في الخلايا أليفة الكروم ERSE 1. وعلاوة على ذلك، من خلال توفير فرصة للسماح للقرار حويصلة واحدة من الآلات البروتين المشاركة في إيماس، تبقى الخلايا أليفة الكروم نموذجا قويا لمعالجة مسائل الانصهار الحويصلة 3.

واستخدمت قياسات السعة الخلية المرفقة أولا في حل واحدة الانصهار الحويصلة خلال إيماس 3. إيماس حويصلات صغيرة مثل ~ أثبتت 60 نانومتر في القطر ليتم الكشف عنها بواسطة القياسات قبول غشاء الخلية مع تقنية المشبك التصحيح في الخلية المرفقة التكوين 4-7. ويعرف قبول كمقياس لمدى سهولة الدائرة أو الجهاز سوف تسمح لتدفق الحالية. هو معكوس مقاومة. وبالتالي، توفر قياسات قبول فهم السعة الغشاء. ويتم إنجاز هذا عن طريق دمج الغشاء الحويصلي في غشاء البلازما. هذا التأسيس يكشف عن تغيرات في سطحمنطقة 8. تسبب كل حويصلة التفجير زيادة تدريجية في السعة غشاء 9،10. بالإضافة إلى ذلك، يوفر هذا القياس القبول في تصرف الغشاء والمسام الانصهار تصرف خلال هذا الحدث exocytotic 3. كما وفرت هذه التقنية أداة فريدة من نوعها في تحديد حركية حويصلة واحدة خلال إيماس، مختبرنا وقد طبقت مؤخرا هذا المفهوم للكشف عن الإلتقام من الحويصلات واحدة 11،12.

مصلحتنا هي محددة بوساطة بالكلاذرين الإلتقام (CME)، والتي تم اعتبارها مكونا أساسيا في التدبير المنزلي العديد من الخلايا 13 و كمسار الرئيسي لحويصلة متشابك الإلتقام في المحطات العصبية 14،15. ومن المعروف CME إلى أن تكون مهمة من الناحية البيولوجية، ومع ذلك، لا تزال حركية ليست مفهومة بشكل جيد بسبب القيود التقنية في رصد الأحداث التقامي المفرد. نظرا لأوجه التشابه في آليات exocytic بين الخلايا أليفة الكروم والخلايا العصبية 1، فمن ررausible التي قد تطبق آليات انشطار الخلايا أليفة الكروم في الأرجح إلى حويصلة متشابك الإلتقام في الخلايا العصبية. وقد استخدمت قياسات السعة الخلية المرفقة لرصد الأحداث التقامي الفردية وتحليل حركية الانشطار، والتي معظم الطرق غير قادرة على حلها. في منطقتنا التسجيلات الخلية المرفقة، وفرضه موجة جيبية عند 20 كيلو هرتز حول احتمالات عقد، ويتم فصل الانتاج الحالي في غشاء تصرف في قناة واحدة وغشاء السعة في قناة أخرى من مرحلتين قفل في مكبر للصوت 16- 18. من تغيرات في غشاء تصرف والسعة، يمكن للمرء حساب حركية الانشطار المسام، والتي تتطابق المرجح أن الرقبة غشاء أنبوبي الذي يربط حويصلة استيعاب لغشاء البلازما قبل حويصلة قرصة حالا. جماعي، هذه التقنية تتيح لنا الفرصة لدراسة الآليات التنظيمية للحويصلة الانشطار خلال التعليم الطبي المستمر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: تم إجراء الإجراء بأكمله وفقا للمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة، التي وافقت عليها لجنة رعاية واستخدام الحيوان من جامعة إلينوي في شيكاغو.

1. حلول والثقافة وسائل الإعلام الاستعدادات

  1. إبقاء جميع الحلول في -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى ستة أشهر. إبقاء وسائل الإعلام الثقافة في 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى 3 أشهر.
  2. إعداد 100 مل من وسائل الإعلام والثقافة عن طريق خلط 1 مل من محلول القلم بكتيريا و 1 مل من ITSX (الانسولين ترانسفيرين-مكملات السيلينيوم) إلى 100 مل مع DMEM.
  3. إعداد الحل انزيم عن طريق خلط 250 مل من DMEM 2.5 مل من 100 مم CaCl 2، و 2.5 مل من 50 ملي EDTA.
  4. إعداد الحل تعطيل عن طريق خلط 225 مل من DMEM، 25 مل من FBS، 625 ملغ من الزلال، و 625 ملغ مثبط التربسين.
  5. إعداد الحل ولوك من 154 مم كلوريد الصوديوم، 5.6 ملي بوكل، 5.0 ملي HEPES، NaHCO3 3.6 ملم، 5.6 ملم الجلوكوز. ضبط درجة الحموضة إلى 7.3 مع هيدروكسيد الصوديوم.
  6. إعداد بولي د يسين (PDL) حل 50 ملغ / مل. استخدام تركيز النهائي من 1 ملغ / مل إلى coverslips معطف.
  7. إعداد حل خارج الخلية من 140 مم كلوريد الصوديوم، 5 ملي بوكل، 2 مم CaCl 2، 1 ملم MgCl 2 و 10 ملي HEPES، هيدروكسيد الصوديوم، و 10 ملي الجلوكوز. ضبط درجة الحموضة إلى 7.3 مع هيدروكسيد الصوديوم مع الأسمولية من ~ 310 نانومول / كجم.
  8. يعد حل ماصة من 50 ملي كلوريد الصوديوم، و 100 ملي TEACl، 5 ملي بوكل، 2 مم CaCl 2، 1 ملم MgCl 2 و 10 ملي HEPES. ضبط درجة الحموضة إلى 7.3 مع هيدروكسيد الصوديوم مع الأسمولية من ~ 290 نانومول / كجم.

2. الغدة الكظرية عزل

  1. الأوتوكلاف زوج من مقص تشريح الكبيرة والصغيرة واثنين من أزواج من ملقط. ارتداء القفازات أثناء العملية برمتها ووضع علبة تشريح في دلو الجليد.
  2. استخدام الفئران التي اتخذت في يوم 0-3. الموت ببطء الحيوانات مع الضغط دبابة CO 2 تليها قطع الرأس.
  3. الاستفادة من مجموعة أصغر من مقص لقطع أسفل الجزء الخلفي من الجرو التالية من العمود الفقري العنقية كال لالذيلية المنطقة. تأكد من قطع سطحي تحت الجلد وليس بيرس في تجويف الجسم.
  4. المقبل، قشر الجلد بعيدا عن العمود الفقري لذلك يتعرض هذا الجهاز العضلي أن يكون لها رؤية واضحة للعمود الفقري. من هنا، اجراء خفض transectional في الحبل الشوكي عنق الرحم ثم جعل اثنين تخفيضات موازية على طول جانبي العمود الفقري.
  5. مع زوج واحد من ملقط يمسك الجسم الرئيسي للحيوان، استخدام زوج آخر من ملقط لانتزاع العمود الفقري وقشر الظهر العمود الفقري حتى تتعرض الكلى.
  6. في هذه اللحظة، تصور الغدد الكظرية على قمة الكليتين. ثم ضع بعناية الغدد اثنين من كل حيوان في أنبوب مخروطي الشكل مملوءة بمحلول لوك.
    ملاحظة: في بعض الأحيان سوف الغدد التمسك ملقط. إذا كانت هذه هي الحالة، استخدم بلطف زوج آخر من ملقط للمساعدة في إزالة الغدد من ملقط والى حل للوك. يمكن أن تبقى الغدد في هذه الحالة لمدة تصل إلى 2 ساعة.
ه "> 3. الهضم الأنسجة

  1. في غضون ذلك، فقاعة الحل الانزيم مع 5٪ CO 2 + 95٪ O 2 لمدة 15 دقيقة قبل الاستخدام. ضمان أن الحل معايرتها يتحول من اللون الوردي مشرق في اللون وردي / برتقالي.
  2. إضافة غراء إلى حل انزيم فقاعات حديثا بتركيز نهائي من 20-25 وحدة / مل. احتضان كل زوج من الغدد من كل حيوان ل40-60 دقيقة عند 37 درجة مئوية في حل الانزيم مع غراء.
  3. إضافة 75٪ من الحل تعطيل لكل أنبوب، واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة أخرى. هذه الحضانة يثبط نشاط نشاط انزيم غراء.
  4. بعد حضانة 10 دقيقة مع الحل تعطيل، ونقل بلطف الغدد في أنبوب المسمى حديثا ثم يغسل الغدد 3X مع وسائل الإعلام الثقافة.

4. خلية التفكك والتصفيحات

  1. بعد الغسيل، ووضع الغدد اثنين الى 200 ميكرولتر من وسائل الإعلام الثقافة وثم يعاير بلطف صعودا والغددإلى أسفل من خلال طرف ماصة مع ماصة 200 ميكرولتر حتى لم يعد هناك قطعة كبيرة من الأنسجة في الحل.
    ملاحظة: عند المعايرة، والحفاظ على الغدد في الجزء السفلي من أنبوب مع قوة الهبوط من 200 ميكرولتر ماصة وإشراك الأنسجة بلطف وببطء. تكون معينة لاستخدام بطيئة، والسكتات الدماغية مستمرة، أبدا pipetting لسريع أو مفاجئ.
  2. إضافة إضافي سائل الإعلام والثقافة 250 ميكرولتر لتبرزي حجم الكلي للثقافة وسائل الإعلام تصل إلى 450 ميكرولتر.
  3. لوحة 60 ميكرولتر من هذا الحل التي تحتوي على كل خلية من سبعة 12 ملم coverslips المغلفة PDL مسبقا، والتي يتم وضعها في صحن الثقافة 60 × 15 مم.
  4. مرة واحدة مطلي، ضع الطبق في الحاضنة التي تم تعيينها إلى 37 درجة مئوية، وحافظت مع تدفق مستمر / توريد 5٪ CO 2 لمدة 30 دقيقة لضمان بيئة لبقاء الخلية. بعد الحضانة، إضافة بلطف 5 مل من قبل تحسنت وسائل الإعلام الثقافة في صحن الثقافة والعودة الطبق مرة أخرى في حاضنة لمدة 24 ساعة قبل خلية الملحقتسجيلات د.
    ملاحظة: عادة، الخلايا يمكن استخدامها لالتسجيلات الكهربية لمدة تصل إلى 4 أيام.

5. خلية تحديد وتشكيل ختم Gigaohm

  1. وضع 12 ملم ساترة إلى حل خارج الخلية. حيث يتم استخدام الغدد الكظرية كاملة لإعداد الخلية، مزيج الخلايا أليفة الكروم (عادة مشرقة جدا مع البني / البيج والتلوين على شكل دائري مثالي القريب (الشكل 1) في الثقافة مع الخلايا القشرية (أصغر وباهتة من الخلايا أليفة الكروم).
  2. سحب ماصات التصحيح في أربع مراحل باستخدام برمجة P-97 مجتذب. تراجع غيض ماصة في الشمع المنصهر، والتي سوف تساعد على تقليل السعة من الزجاج ومن ثم اطلاق النار البولندية طرف إلى "ضربة بعيدا" هذا الشمع من الداخل من طرف ماصة.
    ملاحظة: عندما تمتلئ حل ماصة التصحيح، ماصات التصحيح وعادة ما يكون مقاومة MΩ ~ 2.
  3. الاقتراب من ماصة التصحيح قريبة من الخلية ضمن عدة مicrons. لتحقيق تكوين الخلية المرفقة، والبحث عن أي تشوه خلية طفيف خلال نهج من ماصة التصحيح أقرب إلى الخلية. تطبيق الشفط لطيف حتى يتحقق ختم GΩ.

6. الخلية المرفقة التسجيلات السعة

  1. بمجرد كشف ختم GΩ، وجعل التسجيلات الخلية المرفقة من خلال استخدام مكبر للصوت EPC-7 زائد التصحيح، المشبك، وعلى مرحلتين التناظرية قفل في مكبر للصوت (انظر الجدول المرفق المعدات). تطبيق شركة Sinewave مع سعة 50 فولت (RMS) وتردد 20 كيلو هرتز من مكبر للصوت في قفل.
  2. تعيين عامل التصفية الناتج من مكبر للصوت قفل في 1 مللي ثانية في وقت ثابت و 24 ديسيبل. تعيين مرحلة من مكبر للصوت قفل في مثل هذا أن التغيرات السعة عابرة تنتجها البقول شفط طيف تظهر فقط في السعة التصحيح (ايم) التتبع مع ​​أي الإسقاط في تصرف التصحيح (إعادة) أثر (الشكل 2).
    ملاحظة: يرجى الاطلاع على التفاصيل لمعايرة النظام في إعادةاملؤمتر 19.
  3. تحديد التغييرات السعة نموذجية من خطوات "الهبوط" (الشكل 3).
    ملاحظة: سيتم شاهدوا A تسجيل الصلب بأنها "الدرج" نوع تشابه مع العديد من الخطوات الهبوط مما يؤدي الى استيعاب الحويصلات واحدة. تخدم عملية الترقيع بمثابة التحفيز الميكانيكي، نظرا لأن الإجراءات الحالية يمكن عادة المسجلة من معظم الخلايا.
  4. تسمية الملفات والمجلدات الفردية بما في ذلك تاريخ: شهر / يوم / سنة وكل تسجيل الخلية المرفقة والخاصة ترقيم فردي (س س) داخل هذا الملف.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وبقاء الخلية ونوعية ختم gigaohm حاسمة في تحديد نوعية التسجيلات السعة الخلية المرفقة. لذا، فمن الأهمية بمكان لشراء ثقافة خلية فعالة وكفؤة قبل التسجيلات الكهربية وخلايا قابلة للحياة نموذجية موضحة في الشكل 1. سوف الممارسة والوقت يكون مفيدا في تحقيق ختم gigaohm ذات جودة عالية. إذا كان أحد يمكن أن نرى بوضوح تشوه الخلايا عندما ماصة التصحيح يقترب الخلية كما هو موضح في الخطوة 5.3 البروتوكول، هناك فرصة أفضل في الحصول على ختم عالية الجودة. الشكل 3 يوضح تسجي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قياسات السعة الخلية المرفقة تتطلب عدة خطوات حاسمة من أجل الحصول على التسجيلات ذات الجودة العالية بنجاح: 1) خلايا قابلة للحياة وصحية أعدت من الغدد الكظرية. 2) PDL طلاء لل coverslips. 3) تشكيل ختم gigaohm. 4) مستوى الضوضاء النظام؛ و 5) مرحلة التصحيح.

لجراحة الحيوان، يمكن للمرء أن التعديلات المحتملة هي جعل لضبط النهج الجراحية لتناسب والبراعة لمنع الضرر أثناء تشريح. بالإضافة إلى ذلك، ممارسة كافية على تحديد وإزالة الغ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعلن الكتاب أنه ليس لديهم المصالح المالية المتنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا العمل مدعوم بجائزة المؤسسة الوطنية للعلوم (1145581) ل LWG.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
بولي دي ليسينسيجماP0899
DMEM15066024الابتعاد عن الأشعة فوق البنفسجية
Dulbecco ' تغطيتقنيات
زجاجكارولينا بيولوجي63302912 مم
بنسلين ستربتومايسينلايف تكنولوجيز15140122100 مل
تقنيات الأنسولين عبر سيل إكس51500056تذوب فقط على ICE!
PapainWorthington39S11614
EPC-7 plus مضخم التصحيحHEKA
BNC-2090 لوحة الحصول على البياناتالوطنية Instruments
برنامج الحصول على البياناتWavemetrics
P-97 مجتذب الماصةSutter Instruments
MicroforgeScientific Instruments
الشعيرات الدموية الزجاجية البورسليكاتSutter InstrumentsB150-110-10القطر الخارجي: 1.5 مم
القطر الداخلي: 1.10 مم
الطول: 10 سم
النسر المتوسطة العمر المعدلة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Rettig, J., Neher, E. Emerging roles of presynaptic proteins in Ca++-triggered exocytosis. Science. 298, 781-785 (2002).
  2. Gong, L. W., et al. Phosphatidylinositol phosphate kinase type I gamma regulates dynamics of large dense-core vesicle fusion. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 5204-5209 (2005).
  3. Lindau, M., Alvarez de Toledo, G. The fusion pore. Biochimica et Biophysica Acta. 1641, 167-173 (2003).
  4. Albillos, A., et al. The exocytotic event in chromaffin cells revealed by patch amperometry. Nature. 389, 509-512 (1997).
  5. Lollike, K., Borregaard, N., Lindau, M. Capacitance flickers and pseudoflickers of small granules, measured in the cell-attached configuration. Biophys J. 75, 53-59 (1998).
  6. Lollike, K., Borregaard, N., Lindau, M. The exocytotic fusion pore of small granules has a conductance similar to an ion channel. The Journal of cell biology. 129, 99-104 (1995).
  7. Dernick, G., Gong, L. W., Tabares, L., Alvarez de Toledo, G., Lindau, M. Patch amperometry: high-resolution measurements of single-vesicle fusion and release. Nat Methods. 2, 699-708 (2005).
  8. Neher, E., Marty, A. Discrete changes of cell membrane capacitance observed under conditions of enhanced secretion in bovine adrenal chromaffin cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 79, 6712-6716 (1982).
  9. Gong, L. W., de Toledo, G. A., Lindau, M. Exocytotic catecholamine release is not associated with cation flux through channels in the vesicle membrane but Na+ influx through the fusion pore. Nature Cell Biology. 9, 915-922 (2007).
  10. Gong, L. W., Hafez, I., Alvarez de Toledo, G., Lindau, M. Secretory vesicles membrane area is regulated in tandem with quantal size in chromaffin cells. The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. 23, 7917-7921 (2003).
  11. Yao, L. H., et al. Actin polymerization does not provide direct mechanical forces for vesicle fission during clathrin-mediated endocytosis. The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. 33, 15793-15798 (2013).
  12. Yao, L. H., et al. Synaptotagmin 1 is necessary for the Ca2+ dependence of clathrin-mediated endocytosis. The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. 32, 3778-3785 (2012).
  13. McMahon, H. T., Boucrot, E. Molecular mechanism and physiological functions of clathrin-mediated endocytosis. Nature reviews. Molecular Cell Biology. 12, 517-533 (2011).
  14. Murthy, V. N., De Camilli, P. Cell biology of the presynaptic terminal. Annu Rev Neurosci. 26, 701-728 (2003).
  15. Granseth, B., Odermatt, B., Royle, S. J., Lagnado, L. Clathrin-mediated endocytosis is the dominant mechanism of vesicle retrieval at hippocampal synapses. Neuron. 51, 773-786 (2006).
  16. Rosenboom, H., Lindau, M. Exo-endocytosis and closing of the fission pore during endocytosis in single pituitary nerve terminals internally perfused with high calcium concentrations. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91, 5267-5271 (1994).
  17. MacDonald, P. E., Eliasson, L., Rorsman, P. Calcium increases endocytotic vesicle size and accelerates membrane fission in insulin-secreting INS-1 cells. Journal of Cell Science. 118, 5911-5920 (2005).
  18. Zhao, Y., Fang, Q., Straub, S. G., Lindau, M., Sharp, G. W. Hormonal inhibition of endocytosis: novel roles for noradrenaline and G protein G(z). J Physiol. 588, 3499-3509 (2010).
  19. Debus, K., Lindau, M. Resolution of patch capacitance recordings and of fusion pore conductances in small vesicles. Biophys J. 78, 2983-2997 (2000).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Cell attached CapacitanceMouse Adrenal ChromaffinVesicle EndocytosisExocytosis DetectionPatch Clamp TechniqueGiga Seal FormationAdrenal Gland DissectionCell Culture PreparationSingle Vesicle AnalysisSynaptic Vesicle Recycling

مقالات ذات صلة