Method Article

طرق الخلية المرفقة قياسات السعة في ماوس الكظرية أليف الكروم خلية

DOI:

10.3791/52024

⸱

October 22nd, 2014

 ,  , 
1Department of Biological Sciences, University of Illinois at Chicago

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بعد إفراز الخلايا ، يتم استرداد غشاء البلازما المنصهر من خلال عملية تعرف باسم الالتقام الخلوي. تعمل هذه الآلية على إصلاح الحويصلات المشبكية الجديدة للجولة التالية من الإصدار. يتم التقاط الأحداث الداخلية الفردية وتحليلها من خلال استخدام تسجيلات السعة المرتبطة بالخلية في خلايا كرومافين الغدة الكظرية في الفأر.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعد انتقال الخلايا العصبية جزءا لا يتجزأ من الاتصال الخلوي داخل الدماغ. يؤدي إزالة استقطاب الغشاء قبل المشبكي إلى اندماج الحويصلة المعروف باسم إفراز الخلايا الذي يتوسط الانتقال المتشابك. يعد الاسترجاع اللاحق للحويصلات المشبكية ضروريا لتوليد حويصلات جديدة مملوءة بالناقل العصبي في عملية تم تحديدها على أنها الالتقام الخلوي. أثناء إفراز الخلايا ، سيؤدي دمج أغشية الحويصلة إلى زيادة مساحة السطح ويؤدي الالتقام الخلوي اللاحق إلى انخفاض مساحة السطح. هنا ، يوضح مختبرنا مقدمة أساسية لتسجيلات السعة المرتبطة بالخلايا لأحداث الخلية المفردة في خلية كرومافين الغدة الكظرية للفأر. هذا النوع من التسجيل الكهربائي مفيد للتسجيلات عالية الدقة لإفراز الخلايا والالتقام الخلوي على مستوى الحويصلة الواحدة. في حين أن هذه التقنية يمكنها اكتشاف كل من إفراز الحويصلة والالتقام الخلوي ، فإن تركيز مختبرنا ينصب على الالتقام الخلوي الحويصلي. علاوة على ذلك ، تسمح لنا هذه التقنية بتحليل حركية الأحداث الداخلية الفردية. هنا يتم وصف طرق تشريح أنسجة الغدة الكظرية في الفأر ، وزراعة خلايا الكرومافين ، والتقنيات الأساسية المرتبطة بالخلايا ، والأمثلة اللاحقة للآثار الفردية التي تقيس حدث الخلية الداخلية الفردي.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتوسط انتقال متشابك بواسطة إيماس من الحويصلات التي تحتوي على ناقل عصبي متشابك، ويجب أن تخضع هذه الحويصلات إعادة التدوير التقامي المحلي داخل محطة العصبية للحفاظ على الاتصالات العصبية على المدى الطويل. نظرا للدور أساسي في انتقال متشابك في الدماغ، وفهم الآليات الجزيئية التي تشكل دورة حويصلة متشابك هي الركيزة الأساسية نحو فهم أفضل في مجال الاتصالات الخلوية ككل. بين النظم نموذج خلية، وقد وفرت الخلية أليفة الكروم الكظرية بعض البصيرة الأكثر حسما في الآلية الجزيئية الكامنة وراء إعادة تدوير حويصلة متشابك. إيماس، فإن الخطوة النهائية في إطلاق الناقلات العصبيه، وقد درس كثيرا وفحصها من خلال استخدام الخلايا أليفة الكروم الكظرية 1،2.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: تم إجراء الإجراء بأكمله وفقا للمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة، التي وافقت عليها لجنة رعاية واستخدام الحيوان من جامعة إلينوي في شيكاغو.

1. حلول والثقافة وسائل الإعلام الاستعدادات

  1. إبقاء جميع الحلول في -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى ستة أشهر. إبقاء وسائل الإعلام الثقافة في 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى 3 أشهر.
  2. إعداد 100 مل من وسائل الإعلام والثقافة عن طريق خلط 1 مل من محلول القلم بكتيريا و 1 مل من ITSX (الانسولين ترا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وبقاء الخلية ونوعية ختم gigaohm حاسمة في تحديد نوعية التسجيلات السعة الخلية المرفقة. لذا، فمن الأهمية بمكان لشراء ثقافة خلية فعالة وكفؤة قبل التسجيلات الكهربية وخلايا قابلة للحياة نموذجية موضحة في الشكل 1. سوف الممارسة والوقت يكون مفيدا في تحقيق ختم gigaohm ذات جودة عالية. إذا كان أحد يمكن أن نرى بوضوح تشوه الخلايا عندما ماصة التصحيح يقترب الخلية كما هو موضح في الخطوة 5.3 البروتوكول، هناك فرصة أفضل في الحصول على ختم عالية الجودة. الشكل 3 يوضح تسجي.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قياسات السعة الخلية المرفقة تتطلب عدة خطوات حاسمة من أجل الحصول على التسجيلات ذات الجودة العالية بنجاح: 1) خلايا قابلة للحياة وصحية أعدت من الغدد الكظرية. 2) PDL طلاء لل coverslips. 3) تشكيل ختم gigaohm. 4) مستوى الضوضاء النظام؛ و 5) مرحلة التصحيح.

لجراحة الحيوان، يمكن للمرء أن التعديلات المحتملة هي جعل لضبط النهج الجراحية لتناسب والبراعة لمنع الضرر أثناء تشريح. بالإضافة إلى ذلك، ممارسة كافية على تحديد وإزالة الغ.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعلن الكتاب أنه ليس لديهم المصالح المالية المتنافسة.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا العمل مدعوم بجائزة المؤسسة الوطنية للعلوم (1145581) ل LWG.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
بولي دي ليسينسيجماP0899
DMEM15066024الابتعاد عن الأشعة فوق البنفسجية
Dulbecco ' تغطيتقنيات
زجاجكارولينا بيولوجي63302912 مم
بنسلين ستربتومايسينلايف تكنولوجيز15140122100 مل
تقنيات الأنسولين عبر سيل إكس51500056تذوب فقط على ICE!
PapainWorthington39S11614
EPC-7 plus مضخم التصحيحHEKA
BNC-2090 لوحة الحصول على البياناتالوطنية Instruments
برنامج الحصول على البياناتWavemetrics
P-97 مجتذب الماصةSutter Instruments
MicroforgeScientific Instruments
الشعيرات الدموية الزجاجية البورسليكاتSutter InstrumentsB150-110-10القطر الخارجي: 1.5 مم
القطر الداخلي: 1.10 مم
الطول: 10 سم
النسر المتوسطة العمر المعدلة

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Rettig, J., Neher, E. Emerging roles of presynaptic proteins in Ca++-triggered exocytosis. Science. 298, 781-785 (2002).
  2. Gong, L. W., et al. Phosphatidylinositol phosphate....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cell attached CapacitanceMouse Adrenal ChromaffinVesicle EndocytosisExocytosis DetectionPatch Clamp TechniqueGiga Seal FormationAdrenal Gland DissectionCell Culture PreparationSingle Vesicle AnalysisSynaptic Vesicle Recycling

Related Articles