تم تطوير بروتوكول لفحص آثار عقار الوراثة DZNep على تطور البعوض وخصوبته والبقاء على قيد الحياة. نصف هنا إجراءات التعرض المائي ل DZNep للبعوض غير الناضج والتعرض الدموي ل DZNep للبعوض البالغ بالإضافة إلى قياس تثبيط هيدرولاز SAH.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
فحوصات السمية للاختبار تأثيرات جينية من المخدرات للتنمية، الخصوبة والوراثة من الملاريا البعوض
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
مقاومة الحشرات تشكل مشكلة كبيرة لبرامج مكافحة الملاريا. البعوض على التكيف مع مجموعة واسعة من التغيرات في البيئة بسرعة، مما يجعل مكافحة الملاريا مشكلة منتشرة في كل مكان في البلدان الاستوائية. ظهور مقاومة مبيدات الحشرات السكان يبرر استكشاف مسارات جديدة الهدف المخدرات والمركبات لمكافحة ناقلات البعوض. وتنشأ المخدرات جينية جيدا في أبحاث السرطان، ولكن لا يعرف الكثير عن تأثيرها على الحشرات. وتقدم هذه الدراسة بروتوكول بسيط لفحص الآثار السمية ل3-Deazaneplanocin ألف (DZNep)، وهو دواء جينية التجريبية لعلاج السرطان، على نواقل الملاريا، الأنوفيلة الغامبية. ولوحظ وجود زيادة تعتمد على التركيز في معدل الوفيات وانخفاض في حجم البعوض في غير ناضجة تتعرض لDZNep، في حين خفضت مجمع خصوبة البعوض البالغ النسبية للسيطرة على العلاجات. وبالإضافة إلى ذلك، كان هناك انخفاض تعتمد على المخدرات في S -adenosylhomocysteine (SAH) النشاط هيدرولاز في البعوض بعد التعرض لDZNep قريب للسيطرة على العلاجات. وتوفر هذه البروتوكولات الباحث مع ذلك، خطوة بخطوة إجراء بسيط لتقييم نهايات سمية متعددة للدواء التجريبية و، بدوره، يبرهن على وجود نهج متعدد الشق فريد لاستكشاف الآثار السمية للمخدرات أو مركبات جينية للذوبان في الماء الفائدة ضد البعوض الحامل للمرض والحشرات الأخرى.
المقدمة
الملاريا هو المسؤول عن أكبر عدد من الوفيات المرتبطة حشرة في العالم. تحدث ما يقدر بنحو 219 مليون حالة سنويا في جميع أنحاء العالم، مما أدى إلى ما يقرب من 660،000 حالة وفاة، في المقام الأول في أفريقيا 1. على الرغم من الجهود المتضافرة، تواجه برامج مكافحة الملاريا العديد من التحديات. في حين المعالجة بمبيدات الحشرات ومكونات مفتاح شكل الرش الثمالي داخل المباني البرنامج، ومقاومة للمبيدات الحشرية في السكان المحليين تعرقل هذه الجهود 2. وتعزى الزيادة السريعة في مبيدات الحشرات أسراب البعوض المقاوم إلى حد كبير إلى قدرة البعوض الملاريا على التكيف بسرعة مع التغيرات في بيئتهم واستغلال منافذ مختلفة 3،4،5. للتغلب....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: الأجزاء الثلاثة للبروتوكول تصف التعرض مائي من المخدرات DZNep للبعوض اليرقات، والتعرض القائم على دم DZNep إلى الإناث البالغات لدراسة تأثيرها على الخصوبة، وSAH هيدرولاز تثبيط من قبل DZNep تقاس باستخدام تقنية اللونية البسيطة. ويرد التمثيل التخطيطي من هذه المقايسات في الشكل 1.
1. غير ناضج تنمية البعوض والوراثة فحوصات
ملاحظة: يوضح هذا القسم استخدام دواء للذوبان في الماء الذي يؤثر على تطور يرقات البعوض والبقاء على قيد الحياة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الرقم 1 هو تمثيل تخطيطي للفحوصات. فهو يصف الخطوات المختلفة من الإجراء المذكورة في هذه المقالة. كما هو أساس بروتوكول بشأن مراحل الحياة المختلفة من البعوض، وليس هناك تسلسل معين الواجب اتباعها للتجارب بالتفصيل هنا. قد يختار المستخدم لإجراء واحد أو أكثر المقايسات في نفس الوقت، وهذا يتوقف على توافر عينة.
يوضح الشكل 2 لوحة أنشئت من أجل تطو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هناك عدة خطوات حيوية لنجاح تطبيق هذا البروتوكول. للمقايسة اليرقات، ينبغي الحرص على تسمية بشكل صحيح وتكرار كل تركيز الاختبار. التعشءه عينات الاختبار وإضافة كمية معينة من المخدرات إلى الآبار اختبار كل جزء مهم من هذا التجريبية اقامة. قبل إضافة 2 الثانية الطور يرقات البعوض إلى صفيحة ميكروسكوبية 96-جيدا، ويمكن وضع كل يرقة على منشفة ورقية لمدة 2-3 ثانية لإزالة الماء الزائد. لمنع جفاف، يجب أن يتم نقل اليرقات فورا إلى آبار صفيحة ميكروسكوبية باستخدام زوج من الملقط حادة. وهذا يضم.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
نشكر فيكتور ماركيز على توفير DZNep.HCl وسكوتي بولينج لتصنيع مغذيات الدم. تم الحصول على سلالات Mopti و SUA2La من An. gambiae من مركز موارد أبحاث الملاريا والكواشف المرجعية (MR4). تم دعم هذا العمل من قبل معهد فرلين لعلوم الحياة ومنحة من المعاهد الوطنية للصحة 1R21AI094289 إلى إيغور ف. شاراخوف.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 96 بئر صفيحة فيشر | 12565561 | علمية | |
| لوحة ثقافة الخلية | CytoOne | CC7682-7506 | |
| جهاز طرد مركزي | سورفال فريسكو | 76003758 يمكن | استخدام جهاز طرد مركزي مختلف |
| لفات الشريط الملون | فيشر | S68134 | |
| مجهر تشريح | أوليمبوس | SZ | |
| DTNB | Sigma Aldrich | D8130 | |
| DZNep.HCl | Sigma Aldrich | SMLO305 | |
| أكواب | |||
| أوراق الترشيح | فيشر | 09-795E | |
| مغذيات | زجاجية Virginia Tech | ||
| خالط | |||
| عنصر التسخين | فيشر NC0520091 العلمي | ||
| حاضنة | Percival | العلمية I36VLC8 | يمكن استخدام حاضنة مختلفة |
| أنبوب الطرد المركزي الدقيق ، 2 & nbsp ؛ مل | Axygen | 22-283 | |
| أنبوب الطرد المركزي الدقيق, 1.5 مل | Axygen | MCT-150-C | |
| Micropipette | Eppendorf | 4910 000.069 | |
| Na2HPO4 | Fisher Scientific | M-3154 | |
| NaH2PO4 | Fisher Scientific | M-8643 | |
| pH meter | متجر Mettler Toledo 7easy | S20 | |
| Plate | Reader Spectramax | M2 | |
| SAH | Sigma Aldrich | A9384 | في -20 &# 176 ؛ سي |
| تريتون X-100 | سيجما ألدريتش | T8787 |
المراجع
- CDC Report. , Available from: http://www.cdc.gov/malaria (2010).
- Gatton, M. L., et al. The importance of mosquito behavioural adaptations to malaria control in Africa. Evolution; International Journal of Organic Evolution. 67, 1218-1230 (2013).
- Sternberg, E. D., Thomas, M. B.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
