مقالة منهجية

الفسيولوجية تسجيلات وRNA تسلسل الزوائد ذوقي من البعوض الحمى الصفراء الزاعجة المصرية

DOI:

10.3791/52088

⸱

ديسمبر 30, 2014

 , 
1Agricultural Research Service, Henry A. Wallace Beltsville Agricultural Research Center, Plant Sciences Institute, Invasive Insect Biocontrol and Behavior Laboratory, United States Department of Agriculture

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

باستخدام طريقتين لتقدير التعبير الجيني في الزوائد الذوقية الرئيسية للبعوض Aedes aegypti، حددنا مجموعة من الجينات مزعومة الكامنة وراء الاستجابة العصبية لمركبات المريرة ومثير للاشمئزاز، على النحو الذي يحدده الفحص الكهربية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يوفر التسجيل الفيزيولوجي الكهربي لإمكانات العمل من الخلايا العصبية الحسية للبعوض للباحثين لمحة عن الإدراك الكيميائي لناقلات الأمراض هذه. لقد حددنا مؤخرا خلية عصبية للاستشعار المر في تسمية الإناث الزاعجة المصرية التي تستجيب ل DEET والمواد الطاردة الأخرى ، بالإضافة إلى الكينين المر ، من خلال التحقيق الفيزيولوجي الكهربي المباشر. دفعت استجابات الخلايا العصبية المستقبلة الذوقية هذه إلى تسلسل إجمالي mRNA من عينات الذكور والإناث والترسي لتوضيح جينات الاستقبال الكيميائي المفترضة المعبر عنها في أنسجة الاستقبال الكيميائي التلامسية هذه. تم تقسيم عينات من الترسي إلى أنواع فرعية مؤيدة ومتوسطة وميتادورية لكلا الجنسين. ثم قمنا بالتحقق من صحة مجموعة البيانات الخاصة بنا عن طريق إجراء qRT-PCR على عينات الأنسجة نفسها واستخدمنا الطرق الإحصائية لمقارنة النتائج بين الطريقتين. قد تستهدف الدراسات التي تتناول الوظيفة الجزيئية الآن جينات معينة لتحديد تلك المشاركة في إدراك طارد البعوض. يمكن استخدام مسارات المستقبلات هذه لفحص طارد الحشرات الجديد نحو تعطيل سلوك البحث عن المضيف للحد من انتشار الفيروسات الضارة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد أظهرت مركبات مثل DEET، Picaridin، Citronellal وIR3535 لصد البعوض بشكل فعال، بما في ذلك ناقلات الأمراض المهم الزاعجة المصرية 1،2. نسجل إمكانات العمل من الخلايا العصبية الحسية المرتبطة sensilla الذوقية محددة لتحديد الخلايا المشاركة مع البعوض صد. إلى جانب التسلسل المصب من الجينات التي أعرب عنها في هذه الأنسجة، ونحن قد التعرف على الجينات على الأرجح التوسط في ردود هذه الخلايا من أجل فحص مركبات جديدة لتحسين قدرات صد.

RNA وما يليها هو أداة قوية، لتصبح بسرعة قياسية لتتبع التغيرات الزمانية والمكانية في التعبير الجيني. يحلل RNA وما يليها من الزوائد حسي كيميائي الحشرات واستخدمت أجهزة للكشف عن مستقبلات الجزيئية في العديد من أنواع الحشرات 3-5، وتحسين كبير على التقليدي القائم على PCR البحث الجين بواسطة الجينات 6. الحشرات تمثل الطبقة الحيوان الأكثر تنوعا، قبلsenting العديد من الفرص لدراسة العلاقة بين الجينات والظواهر فريدة من نوعها. ويمكن استخدام تكنولوجيا RNA وما يليها على أي نوع من الأنسجة الحشرات الحية. وبالمثل، تسجيل الكهربية من الخلايا الحسية داخل sensilla الذوقية uniporous لا يمكن أن يتحقق في كثير من أنواع الحشرات المختلفة. الاقتران من هذه التقنيات اثنين يسمح للباحثين لتضييق الجينات مجموعة تشارك في النمط الظاهري حسي كيميائي لوحظ. سوف الأنواع المختلفة تشكل تحديات محددة، ولكن قد تبلغ العلاقة بين جينات مستقبلة حسي كيميائي والتكيف حسي كيميائي. حجم ومورفولوجية حسي كيميائي sensilla هو متغير واستكشاف الأخطاء وإصلاحها قد تتطلب واسعة النطاق عند تسجيل إمكانات العمل للحد من الضوضاء وتحديد إشارات متكررة. تشريح أجهزة حسي كيميائي قد تكون تافهة أو حساسة تستغرق وقتا طويلا، اعتمادا على التشكل وحجم الحشرة. انتعاش عالية الجودة RNA قد تتطلب بعض استكشاف الأخطاء وإصلاحها كذلك، مثل تجنب بعض أصباغ خلالجمع الأنسجة.

بينما يدل على آثار مركبات مضادة للمن خلال التجارب السلوكية غير المباشر والمفيد، وهذا النهج هو الوقت مكثفة واسعة فيما يتعلق بآلية العمل. الكهربية إلى جانب RNA-يليها تسمح للتحليلات أكثر تحديدا من ما يدفع السلوكيات تجنب في الحشرات. مرة واحدة وقد تم التعرف على "أدوات" التمييز الكيميائية في أنواع الحشرات، ومحاولات أكثر تحديدا لتحسين على المواد الطاردة للتعرف ممكنة. ويمكن التعبير عن مستقبلات والبروتينات المرتبطة بها في الخلايا الحسية المسؤولة عن هذه السلوكيات heterologously للفحص الكيميائي المباشر. وعلاوة على ذلك، يمكن النمذجة الجزيئية ويتوقع المواد الكيميائية والتي سوف تثير ردود قوية من هذه المستقبلات 7.

قد تكون لقطة من جميع الجينات النشطة في مجموعة ضيقة من الأنسجة حسي كيميائي مفيد أيضا في تحديد جينات مشابهة في الأنواع الأخرى. عن طريق التماثل تسلسل والتعبير سيmilarities، قد شكل الباحثون مجموعة من المستقبلات الجزيئية الأرجح التوسط الردود على المواد الطاردة التي هي فعالة على نطاق واسع على الحشرات. نقدم بروتوكول التالية لمساعدة الباحثين في تفكيك مسارات حسي كيميائي الحشرات وإقناع أكثر الخوض في neuroethology عدم نموذج والحشرات الهامة اقتصاديا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. تربية عزت. الكبار بعوض

  1. يفقس البيض في حوالي ¾ بوصة المياه في صينية ضحلة. سوف الاكتظاظ تقليل حجم البالغين.
  2. اليرقات الخلفية عند 25 ° C (12-HL: 12-HD)، وإطعام الطعام الأسماك الأرض.
    ملاحظة: الإفراط في الغذاء قد يقلل من معدلات البقاء على قيد الحياة.
  3. إزالة الشرانق بشكل فردي عن طريق ماصة باستير يوميا ونقلها إلى أطباق البلاستيك (9 سم × 5.5 سم) داخل الدلاء الاحتواء صغيرة مع الأغطية شبكة غرامة، وبالتالي إنشاء 24 تجمعات سن ساعة.
  4. البعوض البالغ تغذية 10٪ محلول السكروز بواسطة كرة من القطن وضعت على جدران شاشة السكن قفص البعوض في غرفة البيئية في 27 ° C والرطوبة النسبية 70٪ تحت نفس الضوئية واليرقات.
  5. لالكهربية، استخدم 5-10 الحيوانات القديمة اليوم. بشكل عام، فإن الحيوانات الكبيرة تنتج نتائج أفضل. لعزل الحمض النووي الريبي، واستخدام الحيوانات التي تدخل في نطاق واحد 24 ساعة تجمع العمر في نطاق من العمر 5-10 يوم.

الحمار = "jove_title"> 2. إعداد مواد كيميائية

  1. تحديد تركيز مناسب من بالكهرباء (مثل 1-10 ملم) الذي يتسبب الحد الأدنى من النشاط من الخلايا العصبية الحسية المحدد. 10 ملي كلوريد الصوديوم أو 1MM بوكل هي الشوارد معقولة لاختبار النشاط الأساسي عند بداية التجربة.
  2. حل لكل مادة كيميائية تجريبية في مذيب مناسب (إن لم يكن الماء، واستخدام الإيثانول أو DMSO) الذي ليس له أثر يذكر أو معدومة على تصاعد النشاط بالمقارنة مع بالكهرباء وحدها. تركيزات النهائي من 10٪ من الإيثانول أو 1٪ DMSO هي تركيزات انطلاق معقولة.
  3. اختر المناسب (مثل الكينين للمرارة أو السكروز للالحلوة) المواد الكيميائية السيطرة التي تم وصفها جيدا ردع التغذية أو المنشطات في الحشرات.

3. الكهربية (تسجيل غيض 8؛ الشكل 1)

  1. أقطاب الزجاج شكل ميكانيكيا عن طريق سحب الزجاج الشعيرات الدموية. تحسين الحرارة وسحب إعدادات لسحب الزجاج لتشكيل recordi شكل بشكل مناسبأقطاب NG. كسر بعناية قبالة نهاية الزجاج الكهربائي باستخدام ملقط تشريح تحت المجهر لخلق قطب كهربائي طرف فتح التي هي واسعة بما يكفي لالمغلف Sensillum والهدف، ولكن صغيرة بما يكفي لتجنب الاتصال مع الهياكل المجاورة.
  2. تحت المجهر، وتحديد بصريا عن طريق التشكل ووضع الهدف sensilla / Sensillum وللتأكد من التكرار من تسجيل معلومات سرية. الحيوانات الإعدادية للسماح بالوصول الحر إلى sensilla من زاوية دخول القطب.
  3. الحشرات تخدير الكبار الباردة في الثلاجة عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. تجنب الأضرار التي لحقت الخلايا العصبية الطرفية عن التعرض المفرط لدرجات الحرارة الباردة. قطع شرائط ضيقة من شريط السلوفان مع شفرة الحلاقة على شريحة زجاجية. شل حشرة كاملة على شريحة زجاجية باستخدام شرائط ضيقة.
  4. أدخل سلك التنغستن شحذ كيميائيا إلى القفص الصدري الظهري أو العين لتكون بمثابة مبال (الأرض) القطب.
  5. ملء الزجاج الكهربائي في الخطوة 3.1 مع حل محفزة للاهتمام. باستخدام حقنة إدراجها، وملء غطاءillary من نهاية سحبت لفظة نهاية. نفض الغبار من جميع فقاعات الهواء، وعقد نهاية سحبت إلى أسفل. إدراج الأسلاك الفضية (chloriding اختياري) في الزجاج الكهربائي في الخطوة 3.1 لتكون بمثابة تسجيل وتحفيز الكهربائي.
  6. توصيل الأقطاب الكهربائية إلى المضخم التي تم تصميمها لتسجيلات من الاتصال sensilla chemoreceptive في الحشرات. وهذا المضخم (300 هرتز، 3 كيلو هرتز ممر الموجة مرشح) تقليل الوقت تسوية للقبض على نشاط الخلايا العصبية أقرب إلى التحفيز مقدمة ممكن. جمع وتخزين وتحليل الإشارات الكهربائية باستخدام الحواسيب الصغيرة مجهزة برنامج تسجيل ارتفاع.
    ملاحظة: الأرضي الإعداد التسجيل بشكل صحيح قد يحسن بشكل كبير نسبة الإشارة إلى الضوضاء.
  7. تحفيز sensilla مع حل التحكم (المنحل بالكهرباء فقط) لضمان الأداء الوظيفي. عدد المسامير ابتداء من 200 ميللي ثانية بعد قطعة أثرية التحفيز لجميع الاستعدادات.
  8. بطريقة عشوائية ترتيب المواد الكيميائية اختبار لجميع التجارب، باستثناء دراسات الجرعة والاستجابة،للقضاء على التحيز. للدراسات الجرعة والاستجابة، فضح sensilla إلى زيادة تركيزات هذه المادة الكيميائية التجريبية. سماح لا تقل عن 3 دقيقة بين التحفيز لضمان استرداد كاف.
    ملاحظة: قد تختلف هذا الشرط اعتمادا على الحشرات وsensilla. ويعرف عتبة كما أن التركيز الذي لا تتداخل مع الخطأ المعياري الخطأ المعياري للاختبار أقل تركيز.

4. عزل RNA وتسلسلها (الشكل 2)

  1. إعداد المناسب بإحكام المدقات خالية من ريبونوكلياز عن طريق التبريد لهم على الثلج الجاف قبل الأنسجة disruption.Prepare المرافق المدقات خالية من ريبونوكلياز التي تناسب أنابيب غطاء مبكرة بإحكام. حافظ على أنابيب جمع مغلقة ما لم تشريح بنشاط لتجنب تكاثف الزائد.
  2. باستخدام الشافطة تصفيتها، ضع 30 إلى 40 البعوض الباردة تخدير (15 ثانية في الثلاجة -20 درجة مئوية) على خشبة المسرح الباردة والفرز حسب الجنس. مكان الحيوانات الظهرية الجانب السلبي، واستيعاب أجنحة للا ضرر الزوائد الذوق.
  3. باستخدام اثنين من أزواج من ملقط غرامة، تشريح labella الموثوقة أو الرصغي من الذكور أو الإناث تحت المجهر تشريح والحد إدراج الأنسجة المجاورة.
    ملاحظة: 500 labella يقترن ينتج حوالي 800-1،000 نانوجرام من إجمالي مرنا. 400 الرصغي الفردي (5 شرائح لكل منهما) تسفر 1،200-1،800 نانوجرام من إجمالي مرنا.
  4. مع زوج واحد من يلهث-ملقط، فهم طفيفة خرطوم البعوض فقط القريبة إلى labella تعريض قلم دقيق الداخلية. استخدام زوج آخر من جمع-ملقط، إزالة labella وإضافة إلى الأنسجة الجانب من أنبوب جمع البارد.
  5. مع زوج واحد من ملقط، فهم طفيفة في الساق البعوض في تقاطع الساق وأول جزء الرصغي. استخدام زوج آخر من الملقط، وإزالة الرصغي وإضافة إلى الأنسجة الجانب من أنبوب جمع البارد.
    ملاحظة: خذ بعين الاعتبار أنواع الخلايا في واجهة من الأنسجة أراد وغير المرغوب فيها. في حين أنه من المهم للحد من إدراج الأنسجة المجاورة، من المهم أيضا أن لا حذف أجزاء من الأنسجة المطلوب. وفايعينة نال يجب أن تمثل بدقة الجهاز بأكمله من الفائدة. إنشاء حدود الدقيق مع ملقط استيعاب مثل هذا ملقط جمع يمكن تحرير بدقة عن طريق كشط أو الاستيلاء على الأنسجة المطلوب فقط.
  6. دوري، وتدور أسفل أنبوب جمع لفترة وجيزة في 0 ° C الطرد المركزي في 9،000 x ج للحفاظ على الأنسجة في الجزء السفلي من الأنبوب. إذا يتراكم الرطوبة في أنابيب جمع خلال تشريح، إضافة 50uL من كاشف Trizol البارد لتغطية الأنسجة التي تم جمعها.
  7. باستخدام المضادة للطخة مختبر علامة، تسمية بوضوح واحدة خالية من ريبونوكلياز 1.5 مل المفاجئة أنبوب غطاء لكل نوع الأنسجة لجمع. باستخدام 1.5 مل أنبوب رف والنيتروجين السائل، وتجميد ثم طحن الأنسجة الى مسحوق ناعم (القطع الجميلة إذا كان في Trizol). أكرر مرة واحدة. جلب إجمالي حجم Trizol إلى 1 مل و resuspend الأنسجة الأرض من قبل vortexing.
  8. إضافة 200 UL من الكلوروفورم وتخلط جيدا. بعد 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة، وتدور عليها في أجهزة الطرد المركزي في 4 ° C و11،000 x ج لمدة 15 دقيقة. بعنايةإضافة طبقة مائية مباشرة إلى عمود مرشح الحمض النووي الجيني. تدور باستمرار في 11،000 ز س لمدة 5 دقائق. إضافة حجم مساو من ريبونوكلياز خالية الايثانول 70٪ في التدفق من خلال وتخلط بواسطة الماصة. نقل السائل إلى عمود جمع RNA ومواصلة استخراج الحمض النووي الريبي فقا للتعليمات المقدمة.
  9. قياس وتقييم نقاء من إجمالي RNA على معمل الدقة والمضي قدما مع أي وسيلة RNA تسلسل قياسي.

5. الكمي RT-PCR RNA التحقق من صحة التسلسل (الشكل 3)

  1. اختر العديد من الجينات ممكن لمقارنة مستويات التعبير الجيني النسبية على نطاق ديناميكي، سواء في توقع وفرة تسلسل ويفترض وظيفة الجين حسي كيميائي.
  2. أزواج التصميم التمهيدي لكل الجين المستهدف لتضخيم 100-180 basepair PCR منتج معين. استبعاد التضخيم gDNA غير محددة من خلال ضمان التمهيدي واحد على الأقل لكل مجموعة يمتد على الحدود إنترون. بدلا من ذلك، استخدم العلاج الدناز للحد من التلوث الجيني.
  3. جمعالأنسجة الحشرات كما هو موضح في القسم السابق. حساب مقدار الأنسجة هو مطلوب لتوفير ما يكفي من RNA لاستكمال جميع ردود الفعل QRT-PCR.
    ملاحظة: سوف ثلاث نسخ البيولوجي وردود الفعل ثلاث نسخ الفنية توفير أقصى قدر من الثقة في النتائج.
  4. حساب الكمي الجين النسبي كما X الهدف - (ط م [الهدف] -Ct [إشارة]) لكل جينة المستهدفة والمتوسط ​​لكل تكرار، سواء البيولوجية والتقنية. استخدام الجينات التدبير المنزلي (ق) لتطبيع القيم ط بين مكررات البيولوجية وللقضاء على نطاق وY-axis في مقارنات التعبير النسبي.
  5. تقييم تشابه RNA وما يليها ومجموعات البيانات QRT-PCR باستخدام القائمة على الانحدار، التمهيد إجراء التكافؤ 9، تطبيق تكرارا، إلى البيانات من كل الأنسجة.
    ملاحظة: يحدد هذا الإجراء أصغر "المنطقة التشابه" التي يمكن بناؤها حول البيانات RNA تسلسل وQRT-PCR الملحوظ، والسماح للالتعبير الجيني النسبي مقاسا qRT-PCR للنظر يعادل إحصائية لقياس التعبير الجيني النسبي التي كتبها RNA وما يليها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التسجيلات أثر للإمكانات العمل من عزت. sensilla الذوقية بعوض (الشكل 1) تثبت فعالية التحفيز المباشر مع مجموعة من المواد الكيميائية. هذه التقنية يمكن استخدامها لقياس ردود على أي مادة كيميائية محفزة عن طريق عد المسامير من السعة معين ومدة على نطاق وزمنية معقولة (عادة أقل من 500 مللي ثانية). يجب أن يكون التسجيلات تتبع استنساخه بسهولة في ظل مجموعة معينة من الظروف التجريبية. خلاف ذلك، قد الاستجابات الفسيولوجية لاحظ تمثل الظواهر شائعة بين الأفراد من الأنو...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الجانب الأكثر تحديا من إمكانات العمل تسجيل من sensilla ذوقي هو الذي يقرر الردود هي "طبيعية"، وعندما تستخدم Sensillum واحدة الذوقية غيض تسجيل أول مرة لأنواع الحشرات معين، فإن العدد الإجمالي والحساسيات من الخلايا العصبية المستقبلة الذوقية (GRNs) هي غير معروف على الأرجح. ويطلب العديد من التسجيلات الأولية لأول مرة لتحديد المدى وتركيزات المواد الكيميائية لاختبار. في هذا المثال، بدأنا مع ملاحظة أن GRN احد بالرد على تركيزات منخفضة من DEET (الشكل 1). وفي وقت لاح...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يشكر المؤلفون بريان تي فينيارد من وزارة الزراعة الأمريكية ، خدمة البحوث الزراعية ، مركز هنري أ. والاس بيلتسفيل للبحوث الزراعية ، خدمة الاستشارات البيومترية ، بيلتسفيل ، دكتوراه في الطب على التحليلات الإحصائية. تم دعم هذا العمل جزئيا من خلال منحة ل JCD من برنامج أبحاث حماية مقاتلي الحرب المنتشرين (DWFP) الممول من قبل وزارة الدفاع من خلال مجلس إدارة الآفات في القوات المسلحة (AFPMB).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أنظمةAB الشعرية الزجاجية628000قياسية ، 1.5 مم × 0.86 مم ، 4 "
سلك فضيأنظمة AM7875.015"
سلك التنغستنمنتجات ألفا369قطر 0.127 مم
ملقط دقيقأدوات العلوم الدقيقة11252#5SF Inox
المرحلة المبردةBioQuip Products1429Chill مضخم الطاولة
SyntechTaste Probepreamplifier
برنامج للفيزيولوجيا الكهربيةبرنامج SyntechAutospikeلعلم الفيزيولوجيا الكهربية
TetraMin طعام الأسماكTetraحبيبات طعام الأسماكالاستوائية طعام الأسماك المطحون إلى مسحوق ناعم
TRIzolLife Technologies15596-026كاشف عزل الحمض النووي الريبي
RNeasy Plus Qiagen74136على مزيل gDNA وأعمدة الدوران RNeasy مقياس
الطيف الضوئي NanodropNano Drop ProductsND-1000مطياف سطح الطاولة
R إحصائياتمجانية (تم إنشاؤه بواسطة Robert Gentleman و Ross Ihaka)www.r-project.orgاستخدم وظيفة lm لحزمة الإحصائيات ووظيفة equiv.boot لحزمة التكافؤ في بيئة الحوسبة R.
1.5 مل أنبوب الرفدائم الخضرة240-6388-030صب النيتروجين السائل في عدد قليل من الآبار الفارغة لتجميد وطحن الأنسجة.
أنابيب تجميع 1.5 مل مع مدقةGrainger6HAX6RNase خالية
الطرد المركزيThermo Scientific11178160تدور الأنسجة المجمدة للاحتفاظ بها في قاع أنبوب 1.5 مل.
أداة تصميم التمهيدي التمهيديNCBIn / a
العاري تشتمل مجموعة صغيرة من أجهزة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Klun, J. A., Khrimian, A., Debboun, M. Repellent and deterrent effects of SS220, picaridin, and DEET suppress human blood feeding by Aedes aegypti, Anopheles stephensi, and Phlebotomus papatasi. J. Med. Entomol. 43 (1), 34-39 (2006).
  2. Dickens, J. C., Bohbot, J. D. Mini review: Mode of action of mosquito repellents.Pestic. Biochem. Physiol. 106 (3), 149-155 (2013).
  3. Pitts, R. J., Rinker, D. C., Jones, P. L., Rokas, A., Zwiebel, L. J. Transcriptome profiling of chemosensory appendages in the malaria vector Anopheles gambiae reveals tissue- and sex-specific signatures of odor coding. BMC Genomics. 12 (271), (2011).
  4. Zhou, X., Slone, J. D., Rokas, A., Berger, S. L., Liebig,, et al. Phylogenetic and transcriptomic analysis of chemosensory receptors in a pair of divergent ant species reveals sex-specific signatures of odor coding. PLOS Genet. 8 (8), e1002930(2012).
  5. Shiao, M., Fan, W., Fang, S., Lu, M. J., Kondo, R., Li, W. Transcriptional profiling of adult Drosophila antenna by high-throughput sequencing. Zoological Studies. 52 (42), (2013).
  6. Bohbot, J., Pitts, R. J., Kwon, H. W., Rützler, M., Robertson, H. M., Zwiebel, L. J. Molecular characterization of the Aedes aegypti odorant receptor gene family. Insect Mol. Biol. 16 (5), 525-537 (2007).
  7. Kain, P., Boyle, S. M., Tharadra, S. K., Guda, T., Pham, C., et al. Odour receptors and neurons for DEET and new insect repellents. Nature. 502 (7472), 507-512 (2013).
  8. Hodgson, E. S., Lettvin, J. Y., Roeder, K. D. The physiology of a primary chemoreceptor unit. Science. 122 (3166), 417-418 (1955).
  9. Robinson, A. P., Duursma, R. A., Marshall, J. D. A regression-based equivalence test for model validation: shifting the burden of proof. Tree Physiol. 25 (7), 903-913 (2005).
  10. Mortazavi, A., Williams, B. A., McCue, K., Schaeffer, L., Wold, B. Mapping and quantifying mammalian transcriptomes by RNA-seq. Nat. Methods. 5 (7), 621-628 (2008).
  11. Trapnell, C., Williams, B. A., Pertea, G., Mortazavi, A., Kwan, G., et al. Transcript assembly and quantification by RNA-seq reveals unannotated transcripts and isoform switching during cell differentiation. Nat. Biotechnol. 28 (5), 511-515 (2010).
  12. Sanford, J. L., Shields, V. D. C., Dickens, J. C. Gustatory receptor neuron responds to DEET and other insect repellents in the yellow-fever mosquito, Aedes aegypti. Naturwiss. 100 (3), 269-273 (2013).
  13. Sparks, J. T., Vinyard, B. T., Dickens, J. C. Gustatory receptor expression in the labella and tarsi of Aedes aegypti. Insect Biochem. Mol. Biol. 43 (12), 1161-1171 (2013).
  14. Kent, L. B., Walden, K. K. O., Robertson, H. M. The Gr family of candidate gustatory and olfactory receptors in the yellow-fever mosquito Aedes aegypti. Chem. Senses. 33 (1), 79-93 (2008).
  15. Ramsköld, D., Wang, E. T., Burge, C. B., Sandberg, R. An abundance of ubiquitously expressed genes revealed by tissue transcriptome sequence data. PLoS Comput. Biol. 5 (12), e1000598(2009).
  16. Wagner, G. P., Kin, K., Lynch, V. J. A model based criterion for gene expression calls using RNA-seq data. Theory Biosci. 132 (3), 159-164 (2013).
  17. Hart, T., Komori, H. K., LaMere, S., Podshivalova, K., Salomon, D. D. Finding active genes in deep RNA-seq gene expression studies. BMC Genomics. 14 (778), (2013).
  18. Isono, K., Morita, H. Molecular and cellular designs of insect taste receptor system. Front. Cellu. Neurosci. 4 (20), 1-16 (2010).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة