الهدف من هذا العرض هو إظهار المجراة في تقنيات المختبر للتربية النيماتودا الممرضة للحشرات. في الجسم الحي أساليب تعتبر تربية هذه الديدان الخيطية مع مضيف الحشرات، في حين أن وسائل الإعلام تستخدم في المختبر أجار الغنية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
في الجسم الحي في المختبر وتربية الديدان الخيطية الممرضة (Steinernematidae وHeterorhabditidae)
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
النيماتودا الممرضة للحشرات (EPN) (Steinernematidae وHeterorhabditidae) لديها شراكة المنفعة المتبادلة مع سلبية الغرام غاما Proteobacteria في الأسرة ترتبط البكتيريا المعوية. Xenorhabdus مع steinernematids النيماتودا بينما Photorhabdus هي المتكافلة من heterorhabditids. معا الديدان والبكتيريا تشكل مجمع الحشرات قوي أن يقتل مجموعة واسعة من أنواع الحشرات في شراكة حميمة ومحددة. هنا، علينا أن نظهر في الجسم الحي وتقنيات المختبر التي يشيع استخدامها في تربية هذه الديدان الخيطية تحت ظروف المختبر. وعلاوة على ذلك، هذه التقنيات تمثل الخطوات الأساسية لإنشاء الناجح الثقافات EPN وتشكل أيضا الأساس لاختبارات بيولوجية الأخرى التي تستخدم هذه الكائنات للبحث. إنتاج aposymbiotic الديدان الخيطية (خالية من المتكافل) هو أمر حاسم لمتعمق ونهج متعدد الأوجه لدراسة التعايش في كثير من الأحيان. هذالا يتطلب بروتوكول إضافة المضادات الحيوية ويمكن تحقيقه في فترة قصيرة من الوقت مع المعدات المختبرية القياسية. الديدان الخيطية تنتج في هذه الطريقة غير قوية نسبيا، على الرغم من البقاء على قيد الحياة في التخزين قد تختلف تبعا للأنواع المستخدمة. التقنيات بالتفصيل في هذا العرض تتوافق مع تلك التي وصفها العديد من الكتاب وصقلها من قبل مختبر P. المالية، وجامعة أريزونا (توكسون، أريزونا، الولايات المتحدة الأمريكية). هذه التقنيات تختلف من الجسم من التقنيات التي تستخدم في الإنتاج الضخم من هذه الكائنات لأغراض إدارة الآفات.
المقدمة
النيماتودا الممرضة للحشرات (EPN) Steinernema وHeterorhabditis النيابة. وتعتبر (Steinernematidae، Heterorhabditidae) والمتكافلة تلك البكتيريا، Xenorhabdus وPhotorhabdus النيابة (المعوية) نموذج الأرضي الناشئة من الحيوانات ميكروب العلاقات التكافلية 2-4،6،10،19. Xenorhabdus وPhotorhabdus النيابة. وآوى والمتكافلة في الأمعاء للمرحلة الحرة الحية الوحيدة من الديدان الخيطية، والمعروف أيضا باسم الأحداث عدوى (IJ) أو المرحلة الثالثة 3 المعدية الأحداث 8،10،13. الزوج بكتيريا-النيماتودا الممرضة هو لمجموعة واسعة من الحشرات وتمت بنجاح تم تنفيذها في المكافحة البيولوجية وبرامج الإدارة ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. في الجسم الحي من تربية الديدان الخيطية الممرضة مع البكتيريا التي Symboitic
- عكس 100 × 15 مم البلاستيك طبق بتري ووضع قرصين من ورق الترشيح (90 ملم) في غطاء الطبق.
- بالتساوي توزيع 1 مل من IJ (الأحداث المعدية) تعليق الماء (بتركيز 1،000-2،000 IJ / مل) على ورقة الترشيح.
ملاحظة: نقابة الصحفيين العراقيين لا تحتاج إلى أن تكون تعقيم السطح. - إضافة 10 مشاركة الطور اليرقات من أكبر waxmoth غاليريا mellonella إلى الطبق. الهدف هو ت....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يستخدم في الجسم الحي طريقة تربية الحشرات الحية بصفتها الدولة المضيفة للنمو وتكاثر الديدان الخيطية. غرف العدوى هي وسيلة فعالة لتعريض الحشرات نقابة الصحفيين العراقيين. هذه هي المرحلة الوحيدة في دورة حياة الديدان الخيطية "التي ناقلات للالمتكافلة البكتيرية من المضيف حشرة واحدة إلى أخرى. يبين الشكل 1 وانشاء لغرفة العدوى وكذلك المواد اللازمة لبناء هذه القاعة. في المختبر أساليب تربية تسمح EPN أن ينمو دون مضيف الحشرات ولكن يتم تنفيذها أيضا لتربية aposymb.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
باستخدام مجموعة مناسبة هو عامل رئيسي للنجاح في تربية الجسم الحي من EPN. عادة، يمكن أن كلا steinernematids وheterorhabditids إنتاج وبنجاح إكمال دورة حياتها في يرقات فراشة الشمع الكبيرة، غاليريا mellonella (قشريات الجناح: Pyralidae). ومع ذلك، يمكن اعتبار أنواع الحشرات الأخرى من الأسر و / أو أوامر مختلفة. ومن المعروف أن هناك عدد قليل من الأنواع الخيطية وصف حاليا لدينا خصوصية لمجموعة الحشرات معين. على سبيل المثال، S. kushidai وS. scarabaei ليست ضراو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
أعلنت أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
الكتاب أود أن أشكر أعضاء السابق للمختبر الأوراق المالية: مينغ مين لي، كاثرين Plichta، فيكتوريا ميراندا طومسون وسام كيو كيم لمساهماتها في تحسين العديد من هذه البروتوكولات. وقد تم تمويل هذا العمل في جزء من منحة المؤسسة الوطنية للعلوم IOS-0840932-0724978 وIOS لSP المالية
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| For In vivo < / em> الالتهابات | |||
| 100 × 15 أطباق بتري | VWR | 25384-088 | |
| ورق ترشيح ، 9 سم الصف 1 السليلوز | Whatman / VWR | 28450-081 | ورق ترشيح من الدرجة 1 موصى به |
| مضيفي الحشرات | Timberline | http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG | Galleria mellonella< / em> موصى |
| لأطباق الكبد والكلى (500 مل) | |||
| 60 × 15 مم أطباق بتري | VWR | 25384-092 | |
| كبد البقر ، 50 جم | من مصادر محلية ؛ جزار أو سوبر ماركت | يمكن تخزين المتبقي مجمدة وإذابة لاستخدامها في المستقبل | |
| كلى لحم البقر ، 50 جم | من مصادر محلية ؛ جزار أو سوبر ماركت | يمكن تخزين المتبقي مجمدا وإذابته للاستخدام في المستقبل | |
| كلوريد الصوديوم 2.5 جم (تركيز نهائي 0.5٪) | Acros / VWR | 200002-434 | يمكن استخدام أي درجة بحثية كلوريد الصوديوم |
| أجار ، 7.5 جم (1.5٪ أجار ، التركيز النهائي) | HiMedia / VWR | 95026-642 | يمكن استخدام أي أجار بدرجة الوسائط |
| 500 مل H2< / sub>O | |||
| For Lipid Agar (ل 1 لتر) | |||
| 100 × 15 أطباق بتري | VWR | 25384-088 | |
| مرق المغذيات ، 8 جم | BD / VWR | 90002-660 | |
| مستخلص الخميرة ، 5 جم | EMD / VWR | EM1.03753.0500 | |
| سداسي هيدرات كلوريد المغنيسيوم 10 مل (0.2 جم / مل) | EMD / VWR | EM-MX0045-1 | |
| زيت ذرة ، 4 مل | أي علامة تجارية | مصدر محلي ؛ سوبر ماركت | يمكن استخدام |
| أي نوع من زيت الذرةشراب الذرة ، 96 مل يمزج 7 مل من شراب الذرة في 89 مل H2< / sub>O ودوامة من أجل التجانس | Karo | من مصادر محلية ؛ سوبر ماركت | |
| أجار ، 15 جم | HiMedia / VWR | 95026-642 | يمكن استخدام أي أجار من الدرجة |
| الإعلامية المقطر H2< / sub>O ، 890 مل | |||
المراجع
- Akhurst, R. J. Morphological and functional dimorphism in Xenorhabdus spp., bacteria symbiotically associated with the insect pathogenic nematodes, Neoaplectana and Heterorhabditis. J. Gen. Microbiol. 121, 303-309 (1980).
- Dunphy, G. B., Webster, J. M.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
