نظام Swimmeret من جراد البحر: دليل عملي للتشريح من الحبل العصب وخارج الخلية تسجيلات من نمط للسيارات

وswimmerets من جراد البحر تخدم وظيفة في السيطرة الموقف وضربت بشكل متوازن عندما تسبح الحيوانات إلى الأمام، تهوية الجحور أو الإناث بيضها تهوية ^{5 و 6.} وswimmerets من جراد البحر إشارة، Pacifastacus leniusculus، تحدث في أزواج من الثاني إلى الخامس الجزء البطن، مع أطرافهم واحدة على كل جانب من البطن ^7. ينتج الجهاز العصبي المركزي على الخاص طقطق محركها الإيقاعي الذي يحرك حركة swimmeret في الحيوان سليمة وكذلك في إعداد الحبل العصبي معزولة. عندما لا يكون هناك ردود الفعل الحسية أو تنازلي المدخلات الحالي يسمى النمط الإيقاعي السيارات المنتجة تنقل الوهمية ^{1 و 2.} وفي النظام swimmeret لا يختلف هذا النمط الحركي في أي معلمة من نشاط swimmerets قياس في الحيوان سليمة.

هو الدافع وراء حركة كل swimmeret من قبل المتناهية الصغر التي يقع في ويقتصر على واحدة جorresponding hemiganglion ^{1 - 3} في كل المتناهية الصغر هناك نمط توليد نواة والتي تضم خمسة interneurons غير ارتفاعه تحديدها. أنها يمكن أن توصف وظيفيا على أنها إما المانع من السكتة الدماغية الطاقة (IPS) أو المانع من العودة السكتة الدماغية (IRS) ^8. هذه IPS وinterneurons IRS ليست مؤشرات التذبذب الذاتية، وليس هو الدافع وراء النشاط بالتناوب من خلال تثبيط متبادل ^9. لأن هذه interneurons تمنع الخلايا العصبية الحركية swimmeret مباشرة، يتم إنشاء بالتناوب حركة PS-RS ^10. تنقل ومع ذلك، لا تتطلب سوى توليد النشاط، ولكن أيضا التنسيق بين رقائق مستقلة مختلفة. في النظام swimmeret يتم تأسيس مثل هذا التنسيق من قبل المتناهية الصغر تنسيق الذي يضمن أن أطرافه تنشط في الأوقات الصحيحة. تم بناء هذا المتناهية الصغر من قبل ثلاثة الخلايا العصبية التي تم تحديدها في كل قطعة ^11-15.

يوفر هذا البروتوكول لعشرالبريد أول مرة دليلا تشريح خطوة بخطوة لعزل سلسلة من العقد (T4 إلى A6، الشكل 1). وتبين لنا كيفية يعلقون عليه معزولة في البطن الحبل العصبي وdesheathe كل عقدة. في هذا معزولة إعداد الجهاز العصبي، الخلايا العصبية المسؤولة عن الحركة swimmeret جاهزة للاستخدام في التجارب الكهربية والصرفية. الجزء الثاني من هذا البروتوكول يوضح الملامح الرئيسية لنمط المحرك swimmeret. ويشمل هذا دليل خطوة بخطوة لتسجيل خارج الخلية من نشاط الخلايا العصبية الحركية swimmeret. محاور الخلايا العصبية الحركية RS المشروع من خلال فرع الأمامي من N1 العصبية، في حين تتوقع بعض محاور الخلايا العصبية الحركية PS من خلال فرع الخلفي من نفس العصب (الشكل 1) ^4. لذا نشاطهم يمكن تسجيل من هذه الفروع مع أقطاب دبوس التفاضلية.

الشكل 1: المعزولة الجهاز العصبي من العقدة الصدرية 4 (T4) إلى العقدة في البطن 6 (A6) والرسم التخطيطي منه T4: العقدة الصدرية 4؛ T5: العقدة الصدرية 5؛ A1، A2 ... A6 العقدة في البطن 1، العقدة في البطن 2 ... العقدة في البطن 6؛ N1: العصبية N1. N2: العصبية N2. N3: العصبية N3. PS: السلطة السكتة الدماغية. RS: عودة-السكتة الدماغية. الاختصارات الاتجاه: A = الأمامي. P = الخلفي.

هذا الإجراء تشريح وتقنية الكهربية أثبتت ومريحة لطلاب المرحلة الجامعية ويمكن أن تكمل الدورات العملية طالب في علم وظائف الأعضاء. وقد استخدم سلسلة معزولة من العقد في عدد من التجارب لدراسة العصبي وظيفة الجهاز، والتنسيق، أو تعديل من رقائق swimmeret ⁶ فضلا عن السيطرة العصبية من السلوك التكيفي في تنقل ^{16، 17.} وهكذا فإن نظام جراد البحر swimmeret يوفر وجود كمية هائلة التدريس مثيرة للاهتمام أو تيتمطر الفرص التي تبدأ مع كل تشريح الحبل العصبي البطني من جراد البحر وتسجيل خارج الخلية من نمط السيارات الوهمية.

هذا الإجراء هو تشريح وفقا لتوجيهات المجلس جماعات الأوروبية ²² سبتمبر 2010 (2010/63 / EU).

1. إعداد

1. الحصول على جراد البحر، Pacifastacus leniusculus (دانا) ومن كلا الجنسين ≥8 سم في الحجم. تأكد من أن الحيوانات هي حيوية والأطراف البطن والبطن سليمة.
2. احرص على تفقد درع وأن هذا إهاب صعبة وجامدة. قبل والحيوانات postmolt يملك درع لينة وغير مناسبة لاجراء تجارب لأنه خلال عملية طرح الريش تغيير العديد من المعلمات (على سبيل المثال، انخفاض في النشاط الحركي).
3. تجميع كل الأدوات والمواد المستخدمة أثناء تشريح، تعلق وdesheathing من الحبل العصبي هو مبين في الشكل (2) والمدرجة في الملاحق المقدمة.

الشكل 2:

(1) دلو كبير مليء الجليد. (2) جراد البحر المالحة. (3) موزع المياه المالحة. (4) المجهر تشريح. (5) طبق تشريح. (6) مقص قوية. (7) ملقط (8) مقص الربيع؛ (9) طبق بيتري اصطف مع sylgard اضح. (10) دبابيس التثبيت. (11) المصدر مصباح البارد.

2. الإجمالي تشريح

1. تخدير الحيوانات على الجليد لمدة 15 - 20 دقيقة. تنفيذ الجزء الأول من تشريح الإجمالي في مقاعد البدلاء المختبر بالقرب من الحوض لأنه يتضمن خطوة استنزاف ويحتاج العينة إلى أن تشطف بانتظام مع جراد البحر المالحة أثناء العملية.
2. عقد الجانب البطني الحيوان صعودا واستخدام مقص قوية لخفض كل من مخالب في قواعدهم بالقرب من القفص الصدري (الشكل 3-1). إزالة الأيمن والأيسر قدم ذنبية (الشكل 3-2).
3. ضع الجانب البطني الحيوان حتى في طبق تشريح اصطف مع sylgard الأسود. Elevaالشركة المصرية للاتصالات مقدمة الرأس عن طريق إدخال الجليد تحت ويعلقون البطن في الدبير (الشكل 4A).
4. ملء موزع المياه المالحة مع ~ 60 مل المبردة جراد البحر المالحة. يروي جراد البحر مع المياه المالحة الباردة من خلال فتح مخلب (الشكل 4B). سوف المالحة الزائدة تصريف من خلال تخفيضات في uropods. تغطية جراد البحر مع الجليد خلال استنزاف
5. قطع رأس الحيوان مع عرضية واحد قطع الخلفي عادل لعيون الحيوان باستخدام مقص قوية (الشكل 5A). إزالة جميع الساقين يسير بالقرب من المفاصل قاعدة كما هو مبين في الشكل 5B.
6. عزل البطن مع مشاركة قطاعات الصدر عن بقية مقدمة الرأس. جعل أول خطوة من نوعها على مستوى الساقين المشي الثانية (قطاع الصدري 3) عن طريق إدراج غيض من مقص في افتتاح المحطة المشي الثاني وقطع إلى الجانب المعاكس. (الشكل 6A-1).
7. تمديد هذه أول خطوة من نوعها لكلا الجانبين من خلال رانه مقدمة الرأس (الشكل 6A-2).
8. الوجه الحيوان المفتوحة لجعل بعض الأعضاء الداخلية مرئية. دفع الغدة الهضمية بارزة (الشكل 6B-3) إلى الجزء الأمامي من العينة واستخدام ملقط لإزالة الأعضاء التناسلية من تجويف البطن.
9. إزالة الجزء الأمامي من مقدمة الرأس (الشكل 6C). استخدام تخفيضات الجانبية لإزالة الأجزاء الجانبية للدرع، والتي تغطي الخياشيم، على جانبي القفص الصدري المتبقية (الشكل 6D-4). إزالة الخياشيم وشطف العينة مع المياه المالحة الباردة.
10. مواصلة تشريح مع قطع من خلال طول كامل من لوحة القصية كما هو مبين في الشكل 6E-5. جعل هذا الخفض في المواقف الجانبية القصوى بين pleuron وswimmerets (الشكل 6E علامات حمراء). المضي قدما على الجانب الآخر مع خفض نفسه. شطف العينة مع المياه المالحة الباردة.
11. تنفيذ تشريح المتبقية تحت dissectioن المجهر. وضع الجانب البطني البطن جراد البحر لتصل في طبق تشريح اصطف مع sylgard السوداء ومليئة جراد البحر المالحة بحيث يغطي العينة.
    ملاحظة: الخطوات التالية (2،12 حتي 4،8) تحتوي على تعليمات الاتجاهات التي تنطبق على المجربون اليد اليمنى. في الخطوات التالية (2،12 حتي 6،8) من المهم أن تحل محل جراد البحر المالحة في فترات منتظمة، كل 20-30 دقيقة مع المياه المالحة الباردة، للحفاظ على سلامة الجهاز العصبي.
12. إصلاح العينة مع دبابيس الحشرات الخلف في الدبير والأمامية في ما تبقى من درع. ضع العينة بحيث يشير الدبير إلى اليسار وهي موازية لحافة الجدول.
13. استخدام ملقط الخشنة في اليد اليسرى لانتزاع خلال افتتاح المحطة سيرا على الأقدام (الشكل 7A) وسحب العينات المفتوحة (الشكل 7B السهم الأبيض). تحديد الكبيرين الظهرية العضلات المثنية خيوط (الشكل 7B-1 و C-1) وقطع بطني بهمأساس كما هو مبين في الشكل 7B.
14. تحديد الشريان القصية (الشكل 7C-2)، الذي ينحدر من الظهرية (القلب) لبطني، في الجزء الصدري 4 ^عشر. هذا الشريان يكمن الحق فوق الحبل العصبي (الشكل 7C-3)، قبل أن مشاريع تحت الحبل العصبي، والتي تشكل الشريان البطني.
15. القطع الشريان القصية. كما هو موضح في الشكل 7C، ورفع الشريان لأول مرة، وذلك باستخدام شفرة واحدة من مقص، وقطع فقط عندما يكون الحبل العصبي البطني تقع مرئيا.
16. إصلاح العضلات الظهرية المثنية الأمامية (إلى الجانب الأيمن). ينبغي أن يتم ذلك في أقصى امتدت موقف مع دبابيس بحيث لن تمنع الرؤية وعينة يبقى امتدت. عندما يتم فروع العضلات الظهرية ثابتة (الشكل 8-1)، والعقد في البطن الأول، A1 و A2، مع الأعصاب المرتبطة N1، N2، N3 ومرئية (الشكل 8).
17. استخدام ملقط في اليد اليسرى للاستيلاء على المواصفاتإيمان في افتتاح واحد من الساقين المشي. في جميع أنحاء تشريح الخطوات التالية سحب بلطف للحفاظ على عينة مفتوحة.
18. المسح الشامل للأعصاب N3 في موقف أبعد من الحبل العصبية. (الشكل 8-3).
19. قطع العضلات المثنية على مقربة من apodeme بطني كما هو مبين في الشكل 8-4. والحرص على عدم تلف الحبل العصبي أو N2 الأعصاب.
20. كرر الخطوات 2.18 و 2.19 لN3 الأعصاب والعضلات المثنية ما تبقى من البطن A2 العقد لA5.
21. في العقدة في البطن الماضية، A6، وقطع العضلات الظهرية المثنية من apodeme بطني والعينة يجب أن تبدو كما هو مبين في الشكل 9.
22. قطع لوحة الخلفي القصية للأعصاب A6 (الشكل 9-1) والحفاظ على جزء بطني (الشكل 9-2). تجاهل الجزء الظهري مع عضلات المثنية (الشكل 9-3). إصلاح لوحة القصية الأمامية مع دبابيس من خلال فتحات في الساقين المشي،والخلف إلى A6.

3. الجميلة تشريح

1. وضع العينة تحت المجهر مع الجزء الأمامي توجه بعيدا والجزء الخلفي نحو حافة الجداول.
2. استخدام ملقط كما هو مبين في الشكل 10A لإزالة الأجزاء الأكثر الأمامية للخرشنة الرأسي الصدري.
   ملاحظة: العقد الصدر والأعصاب المرتبطة وتغطي بشكل جزئي من قبل الجهاز العضلي في الساق وخرشنة الرأسي الصدري. وخرشنة الرأسي الصدري تشكيل الهيكل العظمي الذي يفصل بين تجاويف تقع أفقيا في الساقين قريبة من بعضها البعض، ومن تجويف وسطي التي الحبل البطني العصب يقيم.
3. قطع عضلات بين الهياكل المتبقية خارج الهيكل كما هو مشار إليه في الشكل 10B -1 و(B2) استخدام ملقط لانتزاع ورفع نهاية الأمامي للالحبل البطني العصب (الشكل 10C).
   ملاحظة: سوف يكون معطوبا الحبل العصبي في عملية لذا تجنب التقاط NERVالبريد الحبل عدة مرات.
4. قطع الأعصاب الصدرية أفقيا في حين رفع الحبل العصبي (الشكل 10C-3). إبقاء هذه الأعصاب في طول مناسب لتعلق. إزالة جزء تقلص من سلسلة من العقد، الذي التقطت مع ملقط، عن طريق خفض بعيدا كل الأمامي الأنسجة لT4 (الشكل 10C-4).
5. ضع العينة مع الجزء الأمامي إلى اليسار والتركيز على A1. قطع N1 الأعصاب وN2 من A1 بطول مناسب (كحد أقصى. 1 سم) لتعلق بها.
6. التركيز على A2 وتحديد الأعصاب N1، N2، N3 وهذه الشريحة (الشكل 11). الأعصاب N1 من العقد في البطن A2-A5 يقيمون بين اثنين infoldings جليدية القصية في كل جزء (الشكل 11A-1) وتغطيها الجهاز العضلي. جعل قطع واحد على طول الطوي جليدية القصية الخلفي. تبدأ في الحافة الجانبية للبطن والمضي قدما نحو خط الوسط كما هو مبين في الشكل 11A.
7. إذا كان N1 الهدف لا يزال كوفالأحمر مع الأنسجة كما هو مبين في الشكل 11B (السهم الأحمر)، وقطع عبر حزمة العضلات، ولكن هذه المرة الأمامي لكلا infoldings جليدية القصية والعصب N1 (الشكل 11B-2).
8. قطع N1 الأعصاب كما بشكل أقصى وقت ممكن (الشكل 11C-3). الأعصاب N1 مرئيا بالكامل ويمكن تحديد فرع الأمامي والخلفي (الشكل 11C).
9. انتقل إلى N1 العصبية المقابل وقطع أولا العضلات على طول الطوي جليدية القصية الخلفي، بدءا إعلامي، بالقرب من العقدة (الشكل 11D). إذا كانت العصبية لا تزال تغطيها الأنسجة، وتتقاطع مع حزمة العضلات، ولكن هذه المرة الأمامي لكلا infoldings جليدية القصية والعصب N1، على غرار الشكل 11B-2. قطع N1 العصبية كما بشكل أقصى وقت ممكن.
10. قطع N2 الأعصاب من هذه العقدة إلى طول مناسب (حوالي 0.5 سم) لتعلق.
11. كرر الخطوات 3،7-3،11 للأعصاب من A3-A5.
12. خفض معدل الالتحاق الصافيفيس من العقدة A6 كما بشكل أقصى وقت ممكن (الشكل 12A). استخدام ملقط لانتزاع الأعصاب متعددة من A6 لرفع هذه العقدة والبدء في عزل سلسلة من العقد من لوحة القصية.
13. بينما رفع الحبل العصبي، وسحب بلطف في الاتجاه الأمامي كما هو موضح في الشكل 12B (السهم الأبيض). كما يتم رفع العقد الفردية، وإزالة الشريان البطني التي يمكن أن تعلق على الجانب البطني من الحبل العصبي (الشكل 12C). يستمر هذا التسلسل (بلطف) سحب قطع حتى النخاع العصبية معزولة تماما.
14. نقل سلسلة معزولة من العقد إلى طبق بيتري اصطف مع sylgard واضح ومليئة جراد البحر المالحة (الشكل 12D).

4. التدبيس الحبل العصب في طبق بتري

ملاحظة: استخدام دبابيس صغيرة من قطع أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ (انظر الملاحق) يعلقون الحبل العصبية. لمس فقط العصب تنتهي مع ملقط ولا squeezالبريد والوصل أو العقد.

1. دبوس سلسلة من العقد في خط مستقيم، مع تطبيق تمتد لطيف.
2. ترتيب الحبل العصبية في طبق بيتري مع الجانب الظهري التي تواجه صعودا (الشكل 13، خط أسود). الجانب البطني من العقد يمكن تحديدها من قبل التحدب بها؛ الجانب الظهري مسطح. يعلقون عليه الفهرس العربي الموحد على الجانبين. تواصل مع أعصاب A6، وتمتد على طول الحبل العصبية محورها الطولي.
3. دبوس من أعصاب A1 في زاوية 90 درجة قريب إلى الحبل العصبية.
4. انتقل إلى A2 ويعلقون على N2 الأعصاب في زاوية من 35-45 درجة بالنسبة إلى الحبل العصبية (الشكل 1A).
5. فصل الأعصاب N1 في الأمامي والخلفي فروعها قبل تعلق كما هو موضح في الشكل 14. استخدام اثنين من أزواج من ملقط غرامة لالتقاط مع زوج واحد من ملقط الأمامي ومع الآخر الفرع الخلفي من N1 العصبية. احرص على اختيار فقط نهاية الأكثر القاصيالصورة من فروع العصب. الآن سحب منها بعناية بعيدا.
6. دبوس الفرع الأمامي للN1 العصبية في 90 درجة زاوية قريب إلى الحبل العصبية (الشكل 1A). دبوس فرع الخلفي للعصب N1 بين فرع N1 الأمامي والعصب N2.
7. كرر الخطوات 4،4-4،6 للأعصاب من العقد A3-A5. في حين تثبيت امتداد الحبل العصبي في طولية وكذلك الاتجاهات مستعرضة.

5. Desheathing في العقد

1. ضع إعداد بطريقة أن يد المجرب لويستريح دائما على متن طائرة مستقرة لتجنب اهتزاز. من أجل desheath في العقد تسليط الضوء على الحبل العصبي من الأسفل.
2. التركيز على أي A1 العقدة في البطن لA5. استخدام مقص الربيع الجميلة لاجراء خفض الجانبي الصغيرة من خلال غمد العقدة، مؤخره إلى العقدة وبين الأعصاب N2 N3 و(الشكل 15A السهم الأحمر).
3. التقاط غمد العقدة باستخدام و جداملقط المعهد الوطني للإحصاء وقطع مستعرض عبر غمد فوق الوصل، كما هو مبين في الشكل 15A-1. والحرص على عدم الضغط أو قطع الحبل العصب مع مقص.
4. ما زالت تحتجز ورفع غمد العقدة مع ملقط تزال قطع عليه على طول الحدود الجانبية للالعقدة (الشكل 15B-2 و -3). إزالة غمد. دبوس بدلا من ذلك أن كلا الجانبين من الوصل في مثل هذه الطريقة التي يتم إصلاحها ذلك، ولكن لا يتم عصر الحبل العصبي.
5. كرر الخطوات من 5،2-5،4 لجميع A1 العقد في البطن لA5.
6. Desheathe في العقد الصدري والعقدة A6 بطريقة مماثلة. من أجل desheathe A6 بداية سابقة لالعقدة والمضي قدما في الاتجاه الخلفي. دبوس غمد العقدة من A6 إلى نهاية الخلفية من سلسلة من العقد.

6. خارج الخلية تسجيلات من الخلايا العصبية للسيارات

1. تجميع كل الأدوات والمواد التي تستخدم في التسجيلات خارج الخلية يظهر طن الشكل 16B والمدرجة في الملاحق. ويظهر لمحة عامة عن الإعداد تسجيل في الشكل 16A. بدء تشغيل كافة الأجهزة الإلكترونية المستخدمة في هذه التجربة (الشكل 16C)، حتى أن مكبرات الصوت يمكن الاحماء لمدة 30 دقيقة على الأقل قبل التسجيل. قم بتشغيل الكمبيوتر وبدء برنامج تسجيل.
2. وضع سلسلة من العقد على الطاولة المجهر وتسليط الضوء من أسفل. إدراج القطب تسجيل في sylgard قريب من العصب المستهدف والقطب المرجعية في مكان قريب، ولكن الجانبي إلى العقد (الشكل 17A وباء). ثني الأعصاب المستهدفة حول القطب تسجيل (الشكل 17C).
3. تمتد العصب قليلا، لضمان الاتصال بين القطب والعصب ويعلقون عليه إلى الجانب (F igure 17D). إصلاح الكابلات الكهربائي إلى طاولة المجهر باستخدام الصلصال، لذلك فإنها تبقى في الموضع المطلوب.
4. استخدامحقنة مليئة الفازلين وإبرة قياس 20 (مع تلميح مدورة) (الشكل 17E-3) لعزل العصب الهدف من حل الاستحمام. أولا ربت بعض الفازلين على sylgard حول القطب تسجيل. والنتيجة هي طبقة من الفازلين تغطي sylgard في المناطق القريبة من القطب تسجيل (الشكل 17E-4). والحرص على عدم ربت مباشرة على الأعصاب وتجنب فقاعات الهواء في هذه الطبقة.
5. ختم القطب تسجيل مع الفازلين من جميع الجهات حتى مستوى سطح المياه المالحة (الشكل 17F).
6. كرر هذا الإجراء لجميع الأعصاب الهدف الذي ينبغي رصد النشاط.
7. بدء التسجيل. استخدام وضع اكتساب مجانا المستمر أو الفجوة ومعدل أخذ العينات من 5 كيلو هرتز. تعيين مكبر للصوت خارج الخلية لالمعلمات التالية. كسب إلى 1،000 (تضخيم إشارة 1،000 مرات، الحرص على تضمين هذه المعلمة التضخيم في إعدادات برنامج الحصول على) لدا مجموعة ممر الموجة مرشح من 300 هرتز (انخفاض قطع) إلى 2،000 هرتز (قطع عالية).

مع التسجيلات خارج الخلية في وقت واحد من RS وPS، الخلايا العصبية الحركية من عقدة واحدة، والنشاط بالتناوب من هذه البرك الخلايا العصبية الحركية، ويمكن رصد (الشكل 18)، وهو ما يمثل نمط تنقل الوهمية.

الرقم 18: تخطيطي لعقدة واحدة ووضع دبوس التفاضلي القطب تسجيل خارج الخلية من RS الخلايا العصبية الحركية (تتبع العلوي) والخلايا العصبية الحركية PS (أقل التتبع).

النشاط PS خارج الخلية من PS المماثل من 2 إلى 5 PS الخلايا العصبية الحركية يبرز الجوانب المثيرة للاهتمام من التنسيق بين القطع في النظام swimmeret (الشكل 19A).

أولا، النشاط يبدأ دائما مع انفجار PS في A5 (الشكل 19A، 4 تشرين التتبع) وموجة الإثارة ينتشر في الاتجاه الأمامي (<قوي> الشكل 19A، الخط الأخضر). ثانيا، الفترة (وهي المرة يقاس من بداية انفجار واحد إلى بداية انفجار المقبل) في كل قطعة تبقى ثابتة (الشكل 19A، السهم سماوي). وهذا صحيح، طالما أن تدفق المعلومات من عقدة إلى أخرى سليمة ولا تتغير الظروف التجريبية.

بمستحضرات مختلفة، أو في ظل ظروف تجريبية مختلفة على فترات وفترات انفجر يمكن أن تختلف إلى حد كبير: من فترات ،25-1 ثانية. من أجل مقارنة هذه معلمات بين الاستعدادات المختلفة، فإنها تحتاج إلى تطبيع ورسوم بيانية في الرسم البياني المرحلة (الشكل 19B). هذا يكشف عن الجانب الثالث للاهتمام من نمط المحرك: يبقى الفاصلة بين مرحلة شرائح، وتأخير بين القطع، ثابت ومستقل وتيرة الإيقاع.

لحساب الرسم البياني المرحلة، القياسات والحسابات التالية necessary:

أولا، أن يترك أثرا إشارة لابد من اختياره. وعادة ما نستخدم التتبع PS من العقدة الأكثر الخلفية (على سبيل المثال، PS 5) كمرجع (كونها المرة 0) لرسم بياني المرحلة من إيقاع swimmeret سجلت عبر عدة قطاعات (الشكل 19A)، ثم قياس الفترة (في مللي ثانية ) من إيقاع من بداية واحدة PS 5 انفجر (الوقت 0، الشكل 19A، خط منقط البرتقال) إلى بداية المقبل PS 5 انفجر (الشكل 19A، السهم سماوي) في غضون هذه الدورة، قياس الإختفاء (في مللي ثانية ) بين بداية انفجار PS 5 (الوقت 0) وبداية (بداية انفجر، الشكل 19A وباء، والسهام البرتقالي) ونهاية (الإزاحة الشكل 19A وباء، والسهام البنفسجي) من PS تنفجر في كل من العقد الأخرى . لذلك لحساب بداية المرحلة وتعويض لكل تنفجر وتنقسم إلى الإختفاء التي كتبها الفترة المتزامنة. وهذه القياسات يؤدي في الخامس رقميةalues ​​بين 0 و 1. وأخيرا، مؤامرة هذه القيم في الرسم البياني المرحلة كما هو مبين في الشكل 19B.

مما أدى الرسم البياني المرحلة (الشكل 19B) يحتوي على معلومات حول دورة اجب PS تنفجر في كل قطاع. وبين القطع المرحلة الفاصلة من ~ 0.25 بين القطاعات المجاورة واضحة للعيان.

الرقم 19: (A) تخطيطي لوضع قطب كهربائي وتسجيل خارج الخلية من PS المماثل من 5 إلى PS 2. (B) القياسات والحسابات اللازمة لمرحلة الرسم البياني. الرسم البياني مرحلة تحسب من عشرة انفجارات متتالية (ن = 10) ويبين تأخير المرحلة بين القطع من ~ 0.25.

لمزيد من المجربون المتقدمة، ويمكن تسجيلات داخل الخلايا مع الميكروية حادة من التشعبات من الخلايا العصبية الحركية تكون مفيدة. إمكانات الغشاءالفردية المسجلة داخل الخلية العصبية الحركية PS تظهر في مرحلة التذبذبات مع النشاط المسجلة خارج الخلية من جميع الخلايا العصبية الحركية PS من نفس hemiganglion (الشكل 20، والألواح الرمادية). بدلا من ذلك، الخلايا العصبية الحركية أو RS interneurons يمكن تسجيلها داخل الخلية بنفس الطريقة (لا تظهر البيانات).

الرقم 20: تخطيطي لوضع قطب كهربائي تتأرجح إمكانات غشاء واحد سجلت داخل الخلية العصبية الحركية PS (تتبع العلوي) في المرحلة (لوحات رمادية) مع النشاط PS سجلت خارج الخلية (أقل التتبع).

لتحديد الخلايا العصبية المسجلة داخل الخلية (interneurons أو الخلايا العصبية الحركية)، يمكن خلايا تكون الصبغة شغل باستخدام الميكروية حادة والرحلان الشاردي (انظر المناقشة). في الشكل 21، وترد اثنين داخل الخلية صبغ شغل في الخلايا العصبية الحركية PS. من somata بطنيوتقع الخلفي لقاعدة N1 العصبية. المشاريع محوار الأساسي الأمامية (الشكل 21B-2) وفروع داخل الجانبي Neuropil (الشكل 21A وB-3)؛ مشاريع محور عصبي من خلال فرع الخلفي من N1 العصبية إلى العضلات swimmeret (الشكل 21B-4).

الرقم 21: (A) تخطيطي من العقدة في البطن (B) اثنين الملون داخل الخلية العصبية الحركية PS. (1) somata. (2) neurites التي الأولية؛ (3) شجيري المتفرعة في neuropil الجانبي. (4) محاور المشروع من خلال فرع الخلفي للعصب N1. شريط = 100 ميكرون.

لأقل من المجربون المتقدمة، أو أولئك الذين يرغبون في دراسة مورفولوجية العقدة في البطن، backfills من PS وRS محرك حمامات الخلايا العصبية عن طريق N1 العصبية، هي ممارسة مثيرة للاهتمام. في الشكل 2 كانت ملطخة 2، وRS والخلايا العصبية الحركية PS من hemiganglion واحد مع شركة 2+ (RS) والنيكل 2+ أيونات (PS)، على التوالي. وتقع Somata من الخلايا العصبية الحركية PS الخلفي لقاعدة N1 العصبية (الشكل 22-1). وتقع جميع somata من RS الخلايا العصبية الحركية الأمامية لقاعدة العصب N1 (الشكل 22-2).

الرقم 22: Backfills من الأمامي (البرتقال، شركة 2+) والخلفية (الأزرق، ني 2+) فرع من الأعصاب N1 (1) Somata من الخلايا العصبية الحركية PS؛ (2) somata من الخلايا العصبية الحركية RS. شريط = 100 ميكرون.

الشكل 3: إزالة مخالب (1) وuropods (2). خطوط حمراء (1) و (2) تشير إلى مواقف التخفيضات. شريط = 5 سم.

= "jove_content" FO: المحافظة على together.within صفحة = "دائما">
الشكل 4: (A) مقيد الحيوان الجانب بطني حتى والثابتة في الدبير (B) وexsanguinated وجراد البحر من خلال فتح مخلب مع المياه المالحة الباردة. الحانات = 5 سم.

الشكل 5: (A) قطع الرأس و (ب) إزالة المشي الساقين. خطوط حمراء تشير إلى مواقف التخفيضات. الحانات = 1 سم.

الشكل (6): (A، B، C و D) إزالة الأمامي والأجزاء الجانبية من مقدمة الرأس. E. افتتاح البطن على طول الجانب الوحشي.خطوط حمراء (1) و (2) و (4) و (5) تشير إلى مواقف التخفيضات. (3) الغدة الهضمية. وتشير السهام الحمراء إلى تجويف البطن فتحت بالفعل. الحانات = 1 سم.

الرقم 7: (A) وأمسك العينة في فتح الساقين المشي (الأسهم الحمراء) خيوط (B) والعضلات الظهرية (1) يتم مقطوع في حين يتم فتح العينة. السهم الأبيض يصور الاتجاه الذي يتم سحبها لوحة القصية. (C) نظرة عامة على تجويف البطن مع الشريان القصية (2) والحبل العصبي (3).

الرقم 8: رأي عرضية من البطن جراد البحر مع خيوط العضلات الظهرية ثابت (1) والشريان القصية (2)؛ الخطوط الحمراء (3) و (4) تشير إلى مواقف التخفيضات. الحانات = 5 ملم.

الرقم 9: ظهري وبطني أجزاء من البطن وفصلها عن بعضها البعض (1) يشير الخط الأحمر موقف قطع. لوحة القصية (2) مع الحبل البطني العصب. الظهرية جزء من البطن (3).

الرقم 10:.. (A) مواقف ملقط لإزالة خرشنة الرأسي الصدري الأمامي (B) خطوط حمراء (1) و (2) إلى أين قطع العضلات بين خرشنة الرأسي الصدري المتبقية مقطوع (C) والفهرس العربي الموحد في الخطوط الحمراء (3) لعزل العقد الصدري من الأنسجة المحيطة بها. الخط الأحمر (4) يشير إلى قطع بين T3 و T4. الحانات = 5 ملم.

ther.within صفحة = "دائما">
الرقم 11: (A و B) عرض لوحة القصية في A2. يتم عزل العصب N1 من النسيج مع خفض على طول الطوي جليدية القصية الخلفي (1) وسابقة لكلا infoldings جليدية القصية (ب 2). (C) التكبير العالي في المنطقة حول A2، مع العصب معزولا N1. ( D) عزل من N1 العصبية على الجانب المقابل مع تخفيضات مماثلة. خطوط حمراء (2) و (3) تشير إلى مواقف التخفيضات. (1) الأمامية والخلفية infoldings جليدية القصية. الحانات = 5 ملم.

الرقم 12: (A و B) يتم عزل A6 من الأنسجة ويمكن رفع الحبل العصبية في الأعصاب من A6 (C). (D) المعزولة الحبل العصبي في طبق بيتري اصطف مع sylgard اضح ومليئة المالحة. خطوط حمراء تشير إلى مواقف التخفيضات. الحانات = 5 ملم.

الشكل (13): عرض الجانبي واحد العقدة التعرف على ظهري والجانب البطني (خط أسود) من الحبل العصبي. شريط = 5 ملم

الرقم 14: فرع الأمامي للعصب يتم فصل N1 من فرع الخلفي بار = 5 ملم.

الشكل 15: اتجاهات للdesheathing من الوظيفة العقدة في البطن (A) من أول قطع صغيرة من خلال غمد من الوصل (السهم الأحمر)، وضعت الجانبي والخلفي لالعقدة. يتم وضع علامة على خفض لاحقا من خلال غمد فوق الضام بواسطة الخط الأحمر (1). (ب) خطوط حمراء (1) و (2) احتفالا التخفيضات على طول الحدود الجانبية للعقدة. ويمكن بعد ذلك يتم سحبها غمد من العقدة. الحانات = 1 مم.

الرقم 16: (A) نظرة عامة على الإعداد تسجيل (ب) المواد والأدوات اللازمة للتسجيلات خارج الخلية. C. المعدات اللازمة لتسجيل الكهربية. (1) مصدر مصباح الباردة. (2) قفص فاراداي. (3) مجهر ستيريو. (4) المائدة الهواء؛ (5) الجدول المجهر. (6) مرآة. (7) أقطاب التفاضلي دبوس. (8) حقنة مملوءة بالنفطجيلي. (9) الطين النمذجة. (10) ملقط. (11) التخلص من النفايات السائلة. (12) التحويل الرقمي. (13) مكبر للصوت خارج الخلية. (14) الكمبيوتر، ومجهزة برنامج تسجيل ومراقبة.

الرقم 17: (A و B) الموقع من تسجيل (1) والأدب (2) القطب دبوس. (C و D) الفرع الخلفي من العصب N1 هو منعطف حول القطب تسجيل. E. قاعدة (4) من القطب تسجيل معزول مع الفازلين. يتم عزل F. والتسجيل الكامل القطب مع الفازلين من حل حمام. (3) حقنة مليئة الفازلين. الحانات = 2 مم.

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.