مقالة منهجية

عالية الدقة المجهر الإلكتروني ل هيليكوباكتر بيلوري CAG النوع الرابع إفراز نظام بيلي المنتجة في ظروف مختلفة من توافر الحديد

DOI:

10.3791/52122

⸱

نوفمبر 21, 2014

 ,  , 
1Department of Medicine - Division of Infectious Diseases, Vanderbilt University School of Medicine, 2Tennessee Valley Healthcare Systems, U. S. Dept. of Veterans Affairs

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نصف هنا طريقة لتصور العضية البكتيرية المسرطنة المعروفة باسم نظام إفراز Cag Type IV (Cag-T4SS). نجد أن Cag-T4SS يتم إنتاجه بشكل تفاضلي على سطح H. pylori استجابة للظروف المتغيرة لتوافر الحديد.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Helicobacter pylori هي بكتيريا حلزونية الشكل سالبة الجرام تستعمر مكانة المعدة البشرية لنصف البشر1،2. الملوية البوابية هي السبب الرئيسي لسرطان المعدة، وهي السبب الرئيسي الثاني للوفيات المرتبطة بالسرطان في جميع أنحاءالعالم. أحد عوامل الفوعة التي ارتبطت بزيادة خطر الإصابة بأمراض المعدة هو جزيرة الإمراض المزمنة ، وهي منطقة 40 كيلو بايت داخل كروموسوم الملوية البوابية التي تشفر نظام إفراز من النوع الرابع وجزيء المستجيب المماثل ، CagA4،5. Cag-T4SS مسؤول عن نقل CagA و peptidoglycan إلى خلايا ظهارية مضيفة5،6. ينتج عن نشاط Cag-T4SS العديد من التغييرات في بيولوجيا الخلية المضيفة بما في ذلك تنظيم تعبير السيتوكين ، وتنشيط المسارات المسببة للالتهابات ، وإعادة تشكيل الهيكل الخلوي ، وتحريض شبكات إشارات الخلايا المسرطنة5-8. Cag-T4SS عبارة عن آلة جزيئية كبيرة تتكون من مكونات تجميع فرعية تمتد عبر الغشاء الداخلي والخارجي وتمتد إلى الخارج من الخلية إلى الفضاء خارج الخلية. يشار إلى الجزء خارج الخلية من Cag-T4SS باسم "بيلوس"5. أظهرت العديد من الدراسات أن Cag-T4SS pili تتشكل في واجهة المضيف العامل الممرض9،10. ومع ذلك ، فإن السمات البيئية التي تنظم التكوين الحيوي لهذه العضية المهمة لا تزال غامضة إلى حد كبير. في الآونة الأخيرة ، أبلغنا أن ظروف انخفاض توافر الحديد زادت من نشاط Cag-T4SS والتكوين الحيوي لبيلوس. نقدم هنا بروتوكولا محسنا لزراعة الملوية البوابية في ظروف متفاوتة لتوافر الحديد قبل الزراعة المشتركة مع الخلايا الظهارية المعدية البشرية. علاوة على ذلك ، نقدم البروتوكول الشامل لتصور النمط الظاهري المفرط التقويم المعروض في الظروف المقيدة بالحديد من خلال تحليلات المجهر الإلكتروني الماسح عالي الدقة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عدوى الملوية البوابية هي عامل خطر كبير للإصابة بسرطانالمعدة 1. ومع ذلك ، تختلف نتائج المرض وتعتمد على العديد من العوامل مثل علم الوراثة المضيف ، والتنوع الجيني لسلالات الملوية البوابية ، والعناصر البيئية مثل النظام الغذائي للمضيف11. أثبتت التقارير السابقة وجود علاقة بين عدوى الملوية البوابية ، ونقص الحديد (كما تم قياسه بانخفاض تركيزات الفيريتين والهيموجلوبين في الدم) ، وزيادة إنتاج السيتوكين المسبب للالتهابات ، بما في ذلك إفراز IL-8 ، مما يؤدي في النهاية إلى زيادة تطور مرض المعدة12. ترتبط عدوى الملوية البوابية الحادة أيضا بنقص كلورهيدريا مما يضعف قدرة المضيف على امتصاص الحديد المغذي ، ويؤدي في النهاية إلى تغييرات في توازن الحديد13. تشير هذه النتائج السريرية إلى أن توافر الحديد داخل مكانة الغاز يمكن أن يكون عاملا مهما في نتائج المرض. في الواقع ، أظهرت النماذج الحيوانية لعدوى الملوية البوابية أن انخفاض استهلاك الحديد الغذائي يؤدي إلى تفاقم مرض المعدة14. تتطلب مستويات الحديد المنخفضة في هذه أن تحفز الملوية البوابية استجابة اكتساب الحديد من أجل الحصول على الحديد اللازم لتكاثر البكتيريا. الملوية البوابية لديها القدرة على إزعاج تهريب الحديد داخل الخلايا المضيفة لتسهيل تكاثر البكتيريا بطريقة تعتمد على CagA15. ومن المثير للاهتمام ، أن جزيرة الإمراض المزمنة قد ثبت أنها منظمة بواسطة عامل النسخ المستجيب للحديد Fur16،17. علاوة على ذلك ، ترتبط سلالات Cag + بزيادة الالتهاب وأمراض المعدة مثل السرطان1. تدعم هذه النتائج نموذجا يقوم بموجبه بكتيريا الملوية البوابية بتغيير تعبير Cag-T4SS في محاولة للحصول على الحديد من الخلايا المضيفة الموجودة في بيئة مستنفدة للحديد مما يؤدي إلى تفاقم نتائج المرض.

عاملان يزيدان الالتهاب والمراضة هما التعبير عن CAG وانخفاض تناول الحديد الغذائي. تدعم هذه الحقائق الفرضية القائلة بأن انخفاض توافر الحديد يزيد من إنتاج Cag-T4SS pili في واجهة العامل الممرض المضيف مما يؤدي إلى تفاقم مرض المعدة11-14. الهدف من الطريقة الواردة في هذه المخطوطة هو تحديد دور الحديد المغذيات الدقيقة في تنظيم التكوين الحيوي Cag-T4SS pilus. في العمل السابق ، استخدمنا طريقتين لملاحظة زيادة تعتمد على الحديد في تعبير Cag-T4SS. أولا ، تم تحليل سلالات الإنتاج من التي تم الحفاظ عليها على أنظمة غذائية عالية ومنخفضة الحديد وكشفت أن سلالات إنتاج النظام الغذائي منخفض الحديد أنتجت المزيد من Cag-T4SS pili مقارنة بسلالات النظام الغذائي عاليالحديد 14. ثانيا ، أدى نمو سلالة H. pylori 7.13 في المختبر في ظروف مليئة بالحديد إلى تقليل تكوين بيلي بينما أنتجت الخلايا التي نمت في وجود مخلب الحديد عددا أكبر بكثير من البيلي.

لقد واصلنا التحقيق في التنظيم المعتمد على الحديد للنمط الظاهري Cag-T4SS pili ونقدم البروتوكول المحسن التالي والنتائج التمثيلية التي تم إجراؤها باستخدام سلالة هيليكوباكتر بيلوري إضافية ، PMSS1. كان الأساس المنطقي وراء تطوير هذه التقنية هو ربط نشاط Cag-T4SS المتزايد في ظروف الحد من الحديد مع زيادة تكوين Cag-T4SS pilus. سيوفر التأثير الأوسع نطاقا لهذه التقنية واستخدامها ظروف ثقافة محسنة تؤدي إلى ارتفاع إنتاج Cag-T4SS pili. سيكون هذا الاختبار مفيدا للباحثين الذين يسعون إلى تحديد تكوين وهندسة Cag-T4SS من خلال إثراء هذه الميزة السطحية البكتيرية المهمة. يتميز إعداد العينة وتصورها بواسطة المجهر الإلكتروني بمسدس الانبعاث الميداني بمزايا عديدة مقارنة بالتقنيات البديلة مثل طرق الفحص المجهري الضوئي لتصور Cag-T4SS وسيكون مناسبا للباحثين المهتمين بدراسة تنظيم هذه العضية10.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. ه. بيلوري النمو في مختلف الظروف من الحديد الشواغر والمشارك الثقافة مع خلايا الإنسان الظهارية المعدة

  1. حدد H. بيلوري سلالة PMSS1 لهذه الدراسات لأنه يحتوي على حالها جزيرة المساعدة النقدية المرضية ويعبر عن نوع عمل نظام إفراز الرابع. الاستفادة أيضا قفص متحولة إسوي (PMSSI Δ قفص) كوسيلة لمراقبة سلبية. تنمو البكتيريا على لوحات TSA تستكمل مع 5٪ الأغنام الدم (لوحات أجار الدم) لمدة 24 ساعة على 37 درجة مئوية في وجود 5٪ CO 2.
    ملاحظة: إعداد الكواشف وتجميع المواد على النحو المبين في الجدول المواد والمعدات. يتم سرد تركيزات النهائية لكل كاشف بين قوسين.
  2. تتخلص من البكتيريا لوحة باستخدام القطن ذات الرؤوس قضيب معقمة وتلقيح في تعديل مرق البروسيلا المحضرة من المكونات (انظر الجدول المواد والمعدات) وتستكمل مع الكولسترول. احتضان الثقافات بين عشية وضحاها في 37° C في هواء الغرفة تستكمل مع 5٪ CO 2 مع اهتزاز عند 200 التناوب في الدقيقة الواحدة (دورة في الدقيقة).
    يستخدم الكولسترول في مكان مصل بقري جنيني يرجع ذلك إلى حقيقة أن المصل معقد، ملاحظة: تحتوي على مصادر عديدة من المواد الغذائية مثل الحديد الهيم الذي يسبب تقلبات في النتائج.
  3. في يوم من زراعة البكتيرية، البذور AGS الخلايا الظهارية في المعدة البشرية (آي تي سي سي CRL-1739) على بولي D يسين coverslips المعالجة في لوحات 12-جيدا (حوالي 1 × 10 5 خلايا لكل بئر).
  4. في اليوم التالي، وتمييع الثقافات البكتيرية إلى OD600 من 0.3 في تعديل مرق البروسيلا وحدها أو تستكمل مع 100 ميكرومتر FeCl 3، 200 ميكرومتر dipyridyl (أ خالب الحديد الاصطناعية)، أو 200 ميكرومتر dipyridyl بالإضافة إلى 250 ميكرومتر FeCl 3. احتضان هذه الثقافات لمدة 4 ساعات في 37 درجة مئوية في هواء الغرفة تستكمل مع 5٪ CO 2 مع اهتزاز عند 200 دورة في الدقيقة.
  5. البكتيريا الطرد المركزي في 1000 x ج لجمع الخلايا وإزالة supernatants قبل إعادة التعليق طن حجم مساو من جديد مرق البروسيلا تعديل تستكمل مع الكولسترول. قياس OD600 الثقافة (OD600 = 1.0 = 5.5 × 10 8 خلية / مل) وإضافة البكتيريا إلى الخلايا الظهارية في عدد وافر من العدوى (وزارة الداخلية) من 20: 1. إجراء التخفيفات التسلسلية والخلايا البكتيرية على لوحة لوحات أجار الدم لتقييم بقاء الخلية البكتيرية.
  6. احتضان ه. بيلوري وAGS الخلايا الظهارية في المعدة البشرية شارك الثقافات لمدة 4 ساعة عند 37 درجة مئوية في وجود 5٪ CO 2 في ظروف ثابتة قبل تنفيذ المجهر الإلكتروني الماسح (SEM) إعداد العينة.

2. SEM إعداد نموذج لتصور H. بيلوري CAG-T4SS بيلي

  1. إزالة H. بيلوري وAGS شارك الثقافات من طاف صب الحاضنة والثقافة (انقاذ لIL-8 ELISA). غسل بلطف ثلاث مرات مع الصوديوم 0.05 M عازلة كاكوديلات (الرقم الهيدروجيني 7.4). إصلاح عينات لمدة 2-4 ساعات في درجة حرارة الغرفة في حل من 2.0٪ امتصاص العرق، 2.5gluteraldehyde٪، و 0.05 M الصوديوم عازلة كاكوديلات. بعد التثبيت الأولي، وغسل العينات ثلاث مرات مع الصوديوم 0.05 M عازلة كاكوديلات.
  2. إجراء تثبيت الثانوي باستخدام رباعي أكسيد الأوزميوم 0.1٪ بما يعادل 0.05 M الصوديوم عازلة كاكوديلات في اثنين خطوات متتابعة 10 دقيقة التثبيت. بعد تثبيت الثانوي، وغسل العينات ثلاث مرات مع الصوديوم 0.05 M عازلة كاكوديلات.
  3. بعد تثبيت الابتدائي والثانوي، يذوى العينات عن طريق الغسيل متسلسل مع زيادة تركيزات الإيثانول كما في الجدول 1.
  4. بعد الإيثانول الجفاف، نفذ ثلاثة يغسل متتابعة من ثاني أكسيد الكربون السائل. عينات الجافة ثم عند نقطة حرجة باستخدام آلة مجفف النقطة الحرجة عند درجة حرارة 31.1 درجة مئوية وضغط 1073 PSI.
  5. جبل coverslips على الألومنيوم SEM عينة بذرة والطلاء مع خط رفيع من الفضة الغروية على حافة عينة لتحقيق التأريض المناسب وتجنب فرض SEM أثناء التصوير.
  6. عينات معطف مع 5 نانومتر للالذهب والبلاديوم باستخدام آلة معطف تفل لزيادة عينة إشارة الإلكترون الثانوية وتأثير الحافة.

3. معلمات التصوير للتحليلات عالية الدقة SEM

  1. عرض العينات مع حقل الانبعاث الضوئي بندقية الإلكترون مجهر (FEG-SEM).
  2. صورة في وضع فراغ عالية على مسافة العمل من 5-10 ملم.
  3. تعيين الجهد المتسارع إلى 5 كيلو فولت.
  4. تحديد حجم البقعة إلى 2-2.5.
  5. إمالة العينة بين 15-25 درجة لتحقيق رؤية أفضل واجهة المضيف الممرض.
  6. أولويات التصوير البكتيريا الملتصقة إلى حواف الخلايا الظهارية للعرض عالية التكبير، كما يتم إثراء هذه المناطق من التفاعل المضيف الممرض للبكتيريا المكونة للالشعرة.

4. التحليلات الإحصائية في تقييم بيلي Quantifications

  1. تحليل H. بيلوري CAG-T4SS الشعرة باستخدام برنامج يماغيج لقياس عدد من الشعرة / خلية، وكذلك في المئة من خلايا اظهار مشعر PHEnotype في التعليمات أدناه.
  2. ملفات مفتوحة مجهرية في برنامج يماغيج. تحديد بيلي عن الهياكل التي تشكلت بين الخلية البكتيرية والخلية المضيفة، مع عرض موحد (10-13 نانومتر) وطول (60-150 نانومتر).
    ملاحظة: هيكل شعرة موجود على السلالات البكتيرية WT، ولكن غاب عن سلالات إسوي مثل Δ قفص سلالات متحولة، التي ترعى وتعطيل في جين ترميز أتباز كبير أن القوى نوع إفراز الرابع شعرة التجمع.
  3. معايرة أدوات القياس عن طريق رسم خط باستخدام أداة خط مستقيم ثم النقر على علامة التبويب "تحليل". تحديد "جدول تعيين" من القائمة المنسدلة وأدخل القيمة شريط التكبير في المربع المسمى "المسافة المعروفة" وتعيين وحدة طول إلى الإعداد المناسب (نانومتر). انقر على "موافق".
  4. قياس CAG-T4SS الشعرة باستخدام أداة رسم خط مستقيم على طول أو عرض شعرة ثم اضغط على "السيطرة-M" لقياس كل شعرة. مراقبة مربع الحوار مع القيم المقاسة. تسجل هذه القيم أو نسخ ولصق في برنامج جداول البيانات.
  5. استخدام الطول والعرض ضعت من قبل المعلمات 24، ملامح التجاهل التي لا تناسب مكانة CAG-T4SS. ثم تحديد عدد بيلي على أساس القيم التي هي ضمن انقطاع 10-13 نانومتر 60-150 نانومتر العرض والطول.
  6. تحليل الكمي لبيلي إحصائيا كتبها t الطالب اختبار ثنائي الطرف باستخدام برنامج GraphPad بريزم.

5. اختياري: تقييم IL-8 إفراز لربط مع شعرة الإنتاج

  1. باستخدام supernatants من الخطوة 2.1، إجراء IL-8 ELISA في تعليمات الشركة الصانعة مع عدة (انظر الجدول المواد والمعدات).
  2. تحليل IL-8 تفرزها الخلايا المضيفة وحساب المئة IL-8 الاستقراء فيما يتعلق WT PMSS1 نمت في المتوسط ​​وحده. إجراء التحليل الإحصائي باستخدام ثنائي الطرف اختبار ر الطالب باستخدام GraphPad بريزم ذلكftware.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذا التقرير، لقد أثبتنا أن ظروف متفاوتة توافر الحديد لديها القدرة على تعديل H. بيلوري CAG-T4SS شعرة نشوء حيوي في واجهة الممرض المضيف. عندما مثقف في المتوسط ​​وحده، H. بيلوري تشكل ما معدله 3 بيلي / الخلية. عندما H. ويزرع في بيلوري الحديد تستنزف الظروف (باستخدام خالب dipyridyl الاصطناعية) التي هي شبه المثبطة لنمو البكتيريا (الشكل 1)، وتنتج البكتيريا العديد من CAG-T4SS بيلي (بيلي ~ 7 / خلية) عندما شارك في تربيتها مع خلايا المعدة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الحديد هو المغذيات الدقيقة الأساسية لمعظم أشكال الحياة، بما في ذلك مسببات الأمراض البكتيرية. في محاولة للحد من قابلية غزو الكائنات الحية الدقيقة، ويستضيف الفقاريات بتنحية الحديد المغذيات في عملية تعرف باسم "مناعة الغذائية" (18). ردا على ذلك، تطورت مسببات الأمراض البكتيرية استخدام الحديد كناقل عصبي العالمي لاستشعار البيئة المحيطة بهم وتنظيم وضع ملامح الفوعة مثل نظم جمع الحديد، والسموم، وإفراز السم الآلات 19،20.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا البحث من قبل جائزة التطوير الوظيفي لوزارة شؤون المحاربين القدامى 1IK2BX001701 وجائزة CTSA UL1TR000445 من المركز الوطني للنهوض بالعلوم الانتقالية. تقع مسؤولية محتوياته على عاتق المؤلفين وحدهم ولا تمثل بالضرورة وجهات النظر الرسمية للمركز الوطني للنهوض بالعلوم الانتقالية أو المعاهد الوطنية للصحة. تم إجراء تجارب الفحص المجهري الإلكتروني جزئيا من خلال استخدام الموارد المشتركة لتصوير الخلايا VUMC ، بدعم من منح المعاهد الوطنية للصحة CA68485 و DK20593 و DK58404 و DK59637 و EY08126.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
البروسيلا المعدل
الببتون من الكازين (10 جم / لتر)سيجما70172
هضم الأنسجة الحيوانية (10 جم / لتر)سيجما70174
(2 جم / لتر)سكر العنب سيجما92144
(1 جم / لتر)سيجماD9434
كلوريد الصوديوم (5 جم / لتر)ثيرمو فيشرS271-10
كوليسترول (250X) (4 مل / لتر)Life Technologies12531018
كلوريد الحديديك (100 أو 250 ميكرومتر)Sigma157740-100G
Dipyridyl (200 uM)SigmaD216305-100G
معدل RPMI
RPMI + HEPES (1X)Life Technologies22400-121
مصل بقري الجنين ( 100 مل / لتر)تقنيات الحياة10438-026
تحضير
بارافورمالدهيد (2.0٪ مائي)علوم المجهر الإلكتروني15713
غلوتيraldehyde (2.5٪ مائي)علوم المجهر الإلكتروني16220
كاكوديلات الصوديوم (0.05 م)علوم المجهر الإلكتروني12300
رابع أكسيد الأوزميوم (0.1٪ مائي)علوم المجهر الإلكتروني19150
الإيثانول (المطلق)سيجماE7023
الطلاء الفضي الغرويعلوم المجهر الإلكتروني12630
بذرة عينة SEMعلوم المجهر الإلكتروني75220
CoverslipsThermo Fisher08-774-383
إفراز IL-8
Quantikine IL-8 ELISA kitR & أنظمة DD8000C
مرق مستخلص الخميرة المجهر الإلكترونيتقييم

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cover, T. L., Blaser, M. J. Helicobacter pylori in health and disease. Gastroenterology. (6), 1863-1873 (2009).
  2. Sycuro, L. K., et al. Peptidoglycan crosslinking relaxation promotes Helicobacter pylori's helical shape and stomach colonization. Cell. 141 (5), 822-833 (2010).
  3. Kodaman, N., et al. Human and Helicobacter pylori coevolution shapes the risk of gastric disease. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111 (4), 1455-1460 (2014).
  4. Tegtmeyer, N., Wessler, S., Backert, S. Role of the cag-pathogenicity island encoded type IV secretion system in Helicobacter pylori pathogenesis. FEBS J. 278 (8), 1190-1202 (2011).
  5. Fischer, W. Assembly and molecular mode of action of the Helicobacter pylori Cag type IV secretion apparatus. FEBS J. 278 (8), 1203-1212 (2011).
  6. Odenbreit, S., Puls, J., Sedlmaier, B., Gerland, E., Fischer, W., Haas, R. Translocation of Helicobacter pylori CagA into gastric epithelial cells by type IV secretion. Science. 287 (5457), 1497-1500 (2000).
  7. Bourzac, K., Guillemin, K. Helicobacter pylori-host cell interactions mediated by type IV secretion. Cell Microbiol. 7 (7), 911-919 (2005).
  8. Bronte-Tinkew, D. M., et al. Helicobacter pylori cytoxin-associated gene A activates the signal transducer and activator of transcription 3 pathway in vitro and in vivo. Cancer Res. 69 (2), 632-639 (2009).
  9. Johnson, E. M., Gaddy, J. A., Cover, T. L. Alterations in Helicobacter pylori triggered by contact with gastric epithelial cells. Front. Cell. Infect. Microbiol. (2), 17(2012).
  10. Rohde, M., Puls, J., Buhrdorf, R., Fischer, W., Haas, R. A novel sheathed surface organelle of the Helicobacter pylori cag type IV secretion system. Mol. Microbiol. 49 (1), 219-234 (2003).
  11. Cover, T. L., Peek, R. M. Jr Diet, microbial virulence and Helicobacter pylori induced gastric cancer. Gut Microbes. 4 (6), 482-493 (2013).
  12. Queiroz, D. M., et al. Increased gastric IL-1β concentration and iron deficiency parameters in Helicobacter pylori infected children. PLoS One. 8 (2), 57420(2013).
  13. Harris, P. R., et al. Helicobacter pylori-associated hypochlorhydria and development of iron deficiency. J. Clin. Pathol. 66 (4), 343-347 (2013).
  14. Noto, J. M., et al. Iron deficiency accelerates Helicobacter pylori-induced carcinogenesis in rodents and humans. J. Clin. Invest. 123 (1), 479-492 (2013).
  15. Tan, S., Noto, J. M., Romero-Gallo, J., Peek, R. M. Jr, Amieva, M. R. Helicobacter pylori perturbs iron trafficking in the epithelium to grow on the cell surface. PLoS Pathog. 7 (5), (2011).
  16. Danielli, A., Roncarati, D., Delany, I., Chiarini, V., Rappouli, R., Scarlato, V. In vivo dissection of the Helicobacter pylori Fur regulatory circuit by genome-wide location analysis. J. Bacteriol. 188 (13), 4654-4662 (2006).
  17. Pich, O. Q., Carpenter, B. M., Gilbreath, J. J., Merrell, D. S. Detailed analysis of Helicobacter pylori Fur-regulated promoters reveals a Fur box core sequence and novel Fur-regulated genes. Mol. Microbiol. 84 (5), 921-941 (2012).
  18. Cassat, J. E., Skaar, E. P. Iron in infection and immunity. Cell Host Microbe. 13 (5), 509-519 (2013).
  19. Nielubowicz, G. R., Mobley, H. L. Host-pathogen interactions in urinary tract infection. Nat. Rev. Urol. 7 (8), 430-441 (2010).
  20. Brickman, T. J., Cummings, C. A., Liew, S. Y., Relman, D. A., Armstrong, S. K. Transcriptional profiling of the iron starvation response in Bordatella pertussis provides new insights into siderophore utilization and virulence gene expression. J. Bacteriol. 193 (18), 4798-4812 (2011).
  21. Mobley, H. L. Helicobacter pylori factors associated with disease development. Gastroenterology. 113 (6), 21-28 (1997).
  22. Testerman, T. L., Conn, P. B., Mobley, H. L., McGee, D. L. Nutritional requirements and antibiotic resistance patterns of Helicobacter species in chemically defined. J. Clin. Microbiol. 44 (5), 1650-1658 (2006).
  23. Senkovich, O., Ceaser, S., McGee, D. J., Testerman, T. L. Unique host iron utilization mechanisms of Helicobacter pylori revealed with iron-deficient chemically defined media. Infect. Immun. 78 (5), 1841-1849 (2010).
  24. Shaffer, C. L., et al. Helicobacter pylori exploits a unique repertoire of type IV secretion system components for pilus assembly at the bacteria-host cell interface. PLoS Pathog. 7 (9), (2011).
  25. Barrozo, R. M., et al. Functional plasticity in the type IV secretion system of Helicobacter pylori. PLoS Pathog. 9 (2), (2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة