إصابة الحبل الشوكي هي حالة الصدمة التي تسبب الاعتلال الشديد وارتفاع معدل الوفيات. في هذا العمل ونحن تصف بالتفصيل نموذج كدمة من إصابة الحبل الشوكي في الفئران تليها زرع الخلايا الجذعية العصبية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
العصبية زرع الخلايا الجذعية في التجريبية Contusive نموذج من إصابة الحبل الشوكي
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
إصابة الحبل الشوكي هو شرط السريرية مدمرة، وتتميز مجموعة معقدة من الاختلالات العصبية. نماذج حيوانية من إصابة الحبل الشوكي يمكن استخدام كلا للتحقيق في الاستجابات البيولوجية للإصابة واختبار العلاجات المحتملة. كدمة أو ضغط إصابة تسليمها إلى الحبل الشوكي يتعرض جراحيا هي النماذج الأكثر استخداما على نطاق واسع من الأمراض. في هذا التقرير يتم تنفيذ كدمة التجريبية باستخدام اللانهائي الأفق (IH) جهاز المتصادم، والذي يسمح بإنشاء نموذج حيواني إصابة استنساخه من خلال تعريف المعلمات إصابة محددة. يعتبر زرع الخلايا الجذعية عادة استراتيجية يمكن أن تكون مفيدة لعلاج هذا الشرط المنهكة. وتقييم دراسات عديدة آثار زراعة مجموعة متنوعة من الخلايا الجذعية. نحن هنا لشرح طريقة تكييفها لإصابة الحبل الشوكي يليه الذيل الوريد حقن الخلايا في الفئران CD1. باختصار، نحن نقدم إجراءات ل: ط) وضع العلامات خلية وايعشر التتبع الحيوي، والثاني) الرعاية ما قبل المنطوق من الفئران، الثالث) تنفيذا لإصابة الحبل الشوكي contusive، والرابع) الوريد من بعد الوفاة السلائف العصبية. ويمكن استخدام هذا النموذج كدمة لتقييم فعالية وسلامة زرع الخلايا الجذعية في نهج الطب التجديدي.
المقدمة
إصابة الحبل الشوكي (النخاع الشوكي) هو الإصابة الأكثر شيوعا التي تسببها الصدمة ذات الطاقة العالية مثل الحوادث والسيارات، وتقع والرياضة والعنف 1. في SCI شديد، القوة إصابة بتدمير أو أضرار الأنسجة العصبية، مما تسبب في خسارة مفاجئة من وظيفة الجهاز العصبي. صدمة اصابات النخاع الشوكي غالبا ما يحدث لدى البالغين الذين تتراوح أعمارهم بين 10 و 40 سنة من العمر. أنه يؤثر بشكل كبير الحالة العقلية والجسدية للمريض ويسبب تأثير اقتصادي هائل للمجتمع 2. نهج العلاج في المرحلة الحادة غالبا ما يقتصر على جرعة عالية من الستيرويدات القشرية، وتحقيق الاستقرار الجراحي وإزالة الضغط لربما تخفيف مزيد من الضرر 3-4، ولكن أدوار هذ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد وافق جميع الإجراءات من قبل لجنة المراجعة من جامعة ميلان والتقى المبادئ التوجيهية الإيطالية لحيوانات المختبر في الامتثال مع المجتمعات التوجيه الأوروبي بتاريخ نوفمبر 1986 (86/609 / EEC): ملاحظة.
1. إعداد الخلايا لزرع
ملاحظة: استخدام الخلايا الجذعية العصبية بين 5 و مرور 9 في الثقافة لهذه التجارب. اختبار لانتشار الثقافات والقدرة التمايز قبل أن المسمى للزرع. تحديد مدى التمايز التي كتبها مناعية 12.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
العدد الكلي للخلايا المزروعة هو 1 × 10 6 خلايا وقسمت إلى ثلاث حقن متتالية في الوريد الذيل. نحن تدار 3.3 × 10 5 خلايا في 50 ميكرولتر من حل العازلة الفوسفات (PBS). تم إجراء الحقن الأولى في غضون 30 دقيقة بعد الإصابة، في وقت لاحق 6 ساعة الثانية والساعة ال 18 الماضية بعد الآفة. تم تحديد اختيار مهلة 18 ساعة بعد اصابات النخاع الشوكي لإدارة PM-الشخصيات التي نفاذية المثلى من حاجز الدم في الدماغ في هذا الوقت 14. لتقييم تأثير الخلايا الجذعية حقن أنه سيكون من .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في هذه الورقة وصفنا طريقة للحصول على نموذج استنساخه من إصابات في النخاع الشوكي باستخدام المتصادم الأفق اللانهائي في قوة من 70 kdyne (شديد). باستخدام نموذج قوة أكبر (80 kdyne)، ونحن يمكن أن يسبب إصابة أكثر الشديدة التي للأسف يرتبط معدل وفيات الفئران أعلى. من أجل تجنب هذه المشكلة، ونحن عادة اختيار نموذج قوة معتدلة (70 kdyne) مقترن لآفة للتكرار مع الانتعاش التدريجي من وظيفة وفيات أقل. لإنتاج مثل هذه الإصابة مستقرة من المهم جدا أن تولي اهتماما خاصا لتثبيت الصحيح للحيوان على منصة المسب.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب تعلن أي مصلحة مالية المتنافسة.
شكر وتقدير
يقر المؤلفون بالدعم الاقتصادي من قبل FAIP (Federazione Associazioni Italiane Paraplegici) ومؤسسة "Neurogel-en-Marche" (فرنسا) ومؤسسة "La Colonna".
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| PKH26GL-1KT | جهاز تأثير الأفق اللانهائي | Sigma 091M0973 | |
| Infinite Horizon (IH) | أنظمة الدقة والأجهزة ، ذ م م | موديل 0400 تسلسلي 0171 | |
| جنتاميسين 10 مجم / مل | يوروكلون | ECM0011B | 1 مجم / مل في محلول ملحي معقم |
| Isoflurane-Vet 250 مل | Merial | B142J12A | |
| Blefarolin POM OFT 10 جم | |||
| منزلق مدفأ | 2 أدوات بيولوجية | HB101-sm-402 | |
| مشرط ، الحجم 10 | لانس باراجون | 26920 | |
| ملقط صغير Graefe | 2أدوات بيولوجية | 11023-14 | |
| أدوات Rongeur | Medicon | 07 60 07 | |
| مقص صغير | 2 أدوات بيولوجية | 15000-00 | |
| خيوط قابلة للامتصاص (4/0) | Safil Quick | C0046203 | |
| Hemostat | 2Biological Instruments | 13014-14 | |
| مشبك الجرح المنعكس 7 | 2 الأدوات البيولوجية | 12031-07 | |
| 7 مم مقاطع الجرح الانعكاسية | 2 الأدوات البيولوجية | 12032-07 | |
| NGS | Euroclone | ECS0200D | |
| Triton X 100 | Merck Millipore | 1086431000 | |
| البروتين المضاد للأنابيب الدقيقة Assocoated ؛ (الخريطة) 2 | Millipore | AB5622 | |
| Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11008 | |
| FluorSave Reagent ؛ | كالبيوكيم | 345789 | |
| الخلايا الجذعية العصبية المتوسطة | DMEM-F12 المتوسطة (يوروكلون) تحتوي على 2 مم ل-جلوتامين (يوروكلون) ، 0.6٪ جلوكوز (سيجما ألدريتش) ، 9.6 جم / مل بوتريسين (سيجما ألدريتش) ، 6.3 نانوغرام / مل من البروجسترون (سيجما ألدريتش) ، 5.2 نانوغرام / مل سيلينيت الصوديوم (سيجما ألدريتش) ، 0.025 مجم / مل أنسولين (سيجما ألدريتش) ، 0.1 مجم / مل ترانسفيرين (سيجما ألدريتش) ، و 2 مو ؛ جم / مل من الهيبارين (ملح الصوديوم ، الدرجة الثانية ؛ سيجما ألدريتش) ، bFGF (مؤتلف بشري ، 10 نانوغرام / مل ؛ Life Technologies) و EGF (مؤتلف بشري ، 20 نانوغرام / مل ؛ لايف تكنولوجيز) | ||
| DMEM-F12 | Euroclone | ASM5002 | |
| L-glutamine | Euroclone | ECB3000D | |
| الجلوكوز | سيجما ألدريتش | G8270-100G | |
| بوتريسين | سيجما ألدريتش | P5780-25G | |
| البروجسترون | سيجما ألدريتش | P6149-1MG | |
| صوديوم سيلينيت | سيجما ألدريتش | S9133-1MG | |
| ترانسفيرين | سيجما ألدريتش | تي 5391 | |
| الأنسولين | سيجما ألدريتش | I1882 | |
| الهيبارين ملح الصوديوم | سيجما ألدريتش | H0200000 | |
| bFGF | Life Technology | PHG0024 | |
| h-EGF | Life | Technology PHG6045 | |
| حقنة 0.33 سم مكعب 29 جم | Terumo | MYJECTOR ؛ | |
| بوبرينورفين | شيرينج المحراث SpA | جل العين TEMGESIC | |
| Bausch & | ليبوزيك |
المراجع
- Cord Injury Statistical Center: spinal cord injury facts and figures at glance. , https://www.nscisc.uab.edu/PublicDocuments/fact_figures_docs/Facts%202013.pdf (2013).
- Yip, P. K., Malaspina, A. Spinal cord trauma and the molecular point of no return. Molecular Neurodegeneration. 7, 6(2012).
- Fehlings, M. G., Cadotte, D. W., Fehlin....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
