استئصال الغدة الزعترية هو تقنية قيمة في البحوث المناعية. هنا ، يتم وصف بروتوكول لاستئصال الغدة الزعية الكامل في الفئران البالغة باستخدام بضع القص المصغر جنبا إلى جنب مع التنبيب غير الجراحي والتهوية بالضغط الإيجابي لتقليل المراضة والوفيات في الفترة المحيطة بالجراحة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
التيموس كاملة في الجرذان الكبار مع غير الغازية التنبيب الرغامي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
التيموس في القوارض حديثي الولادة هي إجراءات المتبعة وموثوق بها للدراسات المناعية. ومع ذلك، في الفئران البالغات، ومضاعفات النزف واسترواح الصدر من اضطراب الجنبي يمكن أن يؤدي إلى معدل وفيات كبيرة. هذا البروتوكول هو طريقة بسيطة لاستئصال التوتة الفئران التي تستخدم مصغرة القص والتنبيب الرغامي. ويتم إنجاز التنبيب مع طريقة غير الغازية واستنساخه بسهولة، ويسمح للتهوية بالضغط الإيجابي لمنع استرواح الصدر والشعب الهوائية للرقابة التي تتيح الوقت الكافي للدقيق الغدة الصعترية تشريح للحد من انقطاع الجنبي. وهناك 1.5 سم شق القصية يقلل اتصال مع السفن المنصفية وغشاء الجنب، في حين لا يزال توفير التصور الكامل للالغدة الصعترية. بعد التعرض للالمنصف، يتم إزالة الغدة الصعترية التي كتبها تشريح حادة تحت التكبير. ثم يتم مختومة الفضاء الجنبي من قبل الإغلاق خياطة العضلات قبل القصبة الهوائية تليها تطبيق الغراء الجراحي. الثم يتم إغلاق الصدر بإغلاق خياطة من القص، تليها إغلاق خياطة الجلد. كانوا جميعا thymectomies كاملة كما يتضح من المناعى (IHC) تلطيخ من الأنسجة المنصفية، وغياب T-خلايا ساذجة التدفق الخلوي، وكان الإجراء معدل البقاء على قيد الحياة 96٪. هذا الأسلوب هو مناسبة عندما هو المطلوب التيموس الكامل مع الحد الأدنى من المضاعفات لمزيد من الدراسات المناعية في الفئران الكبار athymic.
المقدمة
منذ أوائل 1960s، وقد تم الاعتراف الغدة الصعترية لدوره الحيوي في تنمية التحمل المناعي المركزي. وقد ثبت القوارض التيموس أن يكون الإجراء أساسي في تحديد دور الغدة الصعترية في تمايز الخلايا اللمفاوية والتسامح الذات، وتحمل مناعي في تحديد زرع المزروع وورم خبيث. إزالة الغدة الصعترية الفئران تسمح للدراسات التي تنطوي على استنزاف T-الخلية أو نقل بالتبني من سكان الخلية T محددة دون عودة ظهور خلايا T ساذجة الأم.
Thymectomies في القوارض حديثي الولادة ويمكن تحقيق ذلك باستخدام تقنية الشفط مع نتائج يمكن الاعتماد عليها 1. في الفئران البالغات، ويرتبط هذا الأسلوب مع معد....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: تم القيام به جميع الإجراءات التجريبية التي تنطوي على استخدام الجرذان وفقا للبروتوكولات التي وافقت عليها لجنة رعاية واستخدام الحيوان في جامعة ديوك.
1. إعداد تنبيب الرغامي قنية
- قطع نهاية الإبرة من 2 بوصة 14 G angiocathether إبرة مع كماشة.
- قرصة التجويف من الإبرة مغلق مع كماشة إبرة الانف.
- قطع قسم مقروص وصولا الى حافة الجزء التجويف المفتوح مع كماشة القطع، ثم قطع حواف عل....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تم تنفيذ هذا الإجراء على الفئران لويس البالغين (ن = 26). كان الوقت تشغيل متوسط 15 ± 3 دقائق. لم يكن هناك أي وفيات أثناء العملية. كان 45 ± 5 ثانية - في الوقت نفسه التنبيب - من وضع الفئران على الجهاز التنبيب لإنشاء التهوية. وكان 24 الفئران الشفاء التام من العملية مع أي دليل على صعوبة التنفس أو النزف خلال اليوم بعد العمليات الجراحية (POD) 14. أحد الفئران المتقدمة صعوبة في التنفس على POD 4 وخضعت إعادة عملية لاستكشاف المنصف. تم العثور على الفئران أن يكون الفص الرئة المنهار. وبعد إعاد.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يوفر هذا البروتوكول لالتيموس الكامل نهج مينيملي مع شق ثلاث طبقات الإغلاق مع تطبيق الغراء الجراحية مصممة لتقليل المضاعفات. وقد تجلى إزالة كاملة من الغدة الصعترية عن فقدان خلايا T ساذجة وIHC تلطيخ من الأنسجة اللمفاوية المنصفية لcytokeratin.
إجراءات التيموس الفئران الكبار وقد تعقدت معدلات وفيات تتراوح 1،5 حتي 20٪ بسبب شبه المنطوق مضاعفات، ومعظمها هي تعزى إلى جمعية الحميمة من الفصوص السفلى من الغدة الصعترية مع غشاء ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من قبل AI101263 من المعاهد الوطنية للصحة (T.V.B) ، وبمنحة من مؤسسة هارتويل (M.L.M). M.L.M. عضو في مركز ديوك الشامل للسرطان.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 2 بوصة 14 جرام قسطرة | |||
| مجهر تشغيل | وسادة | ||
| ضربات القلب وأكسجة الدم للقوارض مع مستشعرات القدم | Harvard Apparatus | ST1 72-8010 ، ST1 72-8098 (مستشعر قدم الفئران) | |
| انظر <قوي>الشكل 2< / قوي > | |||
| نظام تخدير للحيوانات الصغيرة مع صندوق الحث وخزان الأيزوفلوران وخزان O2< / sub> | Harvard Apparatus | ST1 72-6420 | |
| جهاز تهوية الصغيرة مع أنابيب | CWE | 12-02000 (جهاز التنفس الصناعي) و 12-04000 (مجموعة الصمام الخارجي للفئران / الفئران) | |
| الألياف البصرية عالي الكثافة | دولان جينر | EEG 2823M | |
| ملقط نمط قياسي للطالب | أدوات العلوم | الدقيقة 91100-16 | |
| مقص مستقيم ناعم | أدوات العلوم | الدقيقة 14060-09 | |
| مقص الشيا ذو الرأس الحاد | أدوات العلوم | الدقيقة 14105-12 | |
| ضام الصدق الصغير (للقص) | أدوات العلوم الدقيقة | 17008-07 | |
| ملقط غرايف حاد | أدوات العلوم الدقيقة | 11050-10 | |
| ملقط دومون | ناعم أدوات العلوم | الدقيقة 11254-20 | |
| 5-0 خيوط ماكسون | Ethicon | ||
| 4-0 خيوط حريرية (مع إبرة قطع) | Ethicon | ||
| 6-0 خياطة نايلون | غراء Ethicon | ||
| Cyanoacrylate (Endermil) | |||
| جل تزييت | Akorn Animal المساهمات الوطنية للصحة | 17478-162-35 |
المراجع
- Hard, G. C. Thymectomy in the neonatal rat. Lab. Anim. 9 (2), 105-110 (1975).
- Kobayashi, E., et al. A technique for complete thymectomy in adult rats. J. Immunol. Methods. 1759 (94), 0-3 (1994).
- Delrivière, L., Gibbs, P., Kobayashi, E., Kamada, N., Gianello, P.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
