Method Article

التيموس كاملة في الجرذان الكبار مع غير الغازية التنبيب الرغامي

DOI:

10.3791/52152

⸱

December 29th, 2014

 ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, Duke University Medical Center, 2Department of Pediatrics, Duke University Medical Center, 3Department of Immunology, Duke University Medical Center

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

استئصال الغدة الزعترية هو تقنية قيمة في البحوث المناعية. هنا ، يتم وصف بروتوكول لاستئصال الغدة الزعية الكامل في الفئران البالغة باستخدام بضع القص المصغر جنبا إلى جنب مع التنبيب غير الجراحي والتهوية بالضغط الإيجابي لتقليل المراضة والوفيات في الفترة المحيطة بالجراحة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التيموس في القوارض حديثي الولادة هي إجراءات المتبعة وموثوق بها للدراسات المناعية. ومع ذلك، في الفئران البالغات، ومضاعفات النزف واسترواح الصدر من اضطراب الجنبي يمكن أن يؤدي إلى معدل وفيات كبيرة. هذا البروتوكول هو طريقة بسيطة لاستئصال التوتة الفئران التي تستخدم مصغرة القص والتنبيب الرغامي. ويتم إنجاز التنبيب مع طريقة غير الغازية واستنساخه بسهولة، ويسمح للتهوية بالضغط الإيجابي لمنع استرواح الصدر والشعب الهوائية للرقابة التي تتيح الوقت الكافي للدقيق الغدة الصعترية تشريح للحد من انقطاع الجنبي. وهناك 1.5 سم شق القصية يقلل اتصال مع السفن المنصفية وغشاء الجنب، في حين لا يزال توفير التصور الكامل للالغدة الصعترية. بعد التعرض للالمنصف، يتم إزالة الغدة الصعترية التي كتبها تشريح حادة تحت التكبير. ثم يتم مختومة الفضاء الجنبي من قبل الإغلاق خياطة العضلات قبل القصبة الهوائية تليها تطبيق الغراء الجراحي. الثم يتم إغلاق الصدر بإغلاق خياطة من القص، تليها إغلاق خياطة الجلد. كانوا جميعا thymectomies كاملة كما يتضح من المناعى (IHC) تلطيخ من الأنسجة المنصفية، وغياب T-خلايا ساذجة التدفق الخلوي، وكان الإجراء معدل البقاء على قيد الحياة 96٪. هذا الأسلوب هو مناسبة عندما هو المطلوب التيموس الكامل مع الحد الأدنى من المضاعفات لمزيد من الدراسات المناعية في الفئران الكبار athymic.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

منذ أوائل 1960s، وقد تم الاعتراف الغدة الصعترية لدوره الحيوي في تنمية التحمل المناعي المركزي. وقد ثبت القوارض التيموس أن يكون الإجراء أساسي في تحديد دور الغدة الصعترية في تمايز الخلايا اللمفاوية والتسامح الذات، وتحمل مناعي في تحديد زرع المزروع وورم خبيث. إزالة الغدة الصعترية الفئران تسمح للدراسات التي تنطوي على استنزاف T-الخلية أو نقل بالتبني من سكان الخلية T محددة دون عودة ظهور خلايا T ساذجة الأم.

Thymectomies في القوارض حديثي الولادة ويمكن تحقيق ذلك باستخدام تقنية الشفط مع نتائج يمكن الاعتماد عليها 1. في الفئران البالغات، ويرتبط هذا الأسلوب مع معد....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: تم القيام به جميع الإجراءات التجريبية التي تنطوي على استخدام الجرذان وفقا للبروتوكولات التي وافقت عليها لجنة رعاية واستخدام الحيوان في جامعة ديوك.

1. إعداد تنبيب الرغامي قنية

  1. قطع نهاية الإبرة من 2 بوصة 14 G angiocathether إبرة مع كماشة.
  2. قرصة التجويف من الإبرة مغلق مع كماشة إبرة الانف.
  3. قطع قسم مقروص وصولا الى حافة الجزء التجويف المفتوح مع كماشة القطع، ثم قطع حواف عل....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تنفيذ هذا الإجراء على الفئران لويس البالغين (ن = 26). كان الوقت تشغيل متوسط ​​15 ± 3 دقائق. لم يكن هناك أي وفيات أثناء العملية. كان 45 ± 5 ثانية - في الوقت نفسه التنبيب - من وضع الفئران على الجهاز التنبيب لإنشاء التهوية. وكان 24 الفئران الشفاء التام من العملية مع أي دليل على صعوبة التنفس أو النزف خلال اليوم بعد العمليات الجراحية (POD) 14. أحد الفئران المتقدمة صعوبة في التنفس على POD 4 وخضعت إعادة عملية لاستكشاف المنصف. تم العثور على الفئران أن يكون الفص الرئة المنهار. وبعد إعاد.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يوفر هذا البروتوكول لالتيموس الكامل نهج مينيملي مع شق ثلاث طبقات الإغلاق مع تطبيق الغراء الجراحية مصممة لتقليل المضاعفات. وقد تجلى إزالة كاملة من الغدة الصعترية عن فقدان خلايا T ساذجة وIHC تلطيخ من الأنسجة اللمفاوية المنصفية لcytokeratin.

إجراءات التيموس الفئران الكبار وقد تعقدت معدلات وفيات تتراوح 1،5 حتي 20٪ بسبب شبه المنطوق مضاعفات، ومعظمها هي تعزى إلى جمعية الحميمة من الفصوص السفلى من الغدة الصعترية مع غشاء ا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل من قبل AI101263 من المعاهد الوطنية للصحة (T.V.B) ، وبمنحة من مؤسسة هارتويل (M.L.M). M.L.M. عضو في مركز ديوك الشامل للسرطان.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
2 بوصة 14 جرام قسطرة
مجهر تشغيلوسادة
ضربات القلب وأكسجة الدم للقوارض مع مستشعرات القدمHarvard ApparatusST1 72-8010 ، ST1 72-8098 (مستشعر قدم الفئران)
انظر <قوي>الشكل 2< / قوي >
نظام تخدير للحيوانات الصغيرة مع صندوق الحث وخزان الأيزوفلوران وخزان O2< / sub>Harvard ApparatusST1 72-6420
جهاز تهوية الصغيرة مع أنابيبCWE12-02000 (جهاز التنفس الصناعي) و 12-04000 (مجموعة الصمام الخارجي للفئران / الفئران)
الألياف البصرية عالي الكثافةدولان جينرEEG 2823M
ملقط نمط قياسي للطالبأدوات العلومالدقيقة 91100-16
مقص مستقيم ناعمأدوات العلومالدقيقة 14060-09
مقص الشيا ذو الرأس الحادأدوات العلومالدقيقة 14105-12
ضام الصدق الصغير (للقص)أدوات العلوم الدقيقة17008-07
ملقط غرايف حادأدوات العلوم الدقيقة11050-10
ملقط دومونناعم أدوات العلومالدقيقة 11254-20
5-0 خيوط ماكسونEthicon
4-0 خيوط حريرية (مع إبرة قطع)Ethicon
6-0 خياطة نايلونغراء Ethicon
Cyanoacrylate (Endermil)
جل تزييتAkorn Animal المساهمات الوطنية للصحة17478-162-35
وعائية الاحترار Zeiss معدل جهاز التنبيب (بلاستيك مع قضيب معدني في الأعلى)مصباح

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hard, G. C. Thymectomy in the neonatal rat. Lab. Anim. 9 (2), 105-110 (1975).
  2. Kobayashi, E., et al. A technique for complete thymectomy in adult rats. J. Immunol. Methods. 1759 (94), 0-3 (1994).
  3. Delrivière, L., Gibbs, P., Kobayashi, E., Kamada, N., Gianello, P.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

ThymectomyEndotracheal IntubationRat ModelSternotomyFlow CytometryImmunohistochemistryPleural SpaceT cell DepletionSurgical GluePostoperative Care

Related Articles