Method Article

الصورة القائمة على التدفق الخلوي وتقنيات لتقييم التغيرات في الحبيبية وظيفة في المختبر

DOI:

10.3791/52201

⸱

December 26th, 2014

 ,  ,  ,  , 
1Applied Physiology Laboratory, University of North Texas

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

توضح هذه الطريقة تقنية لتقييم وظيفة الخلايا المحببة عن طريق قياس البلعمة للبكتيريا والانفجار التأكسدي في نفس الوقت. سمح قياس التدفق الخلوي المستند إلى الصورة بتحديد ثلاث مجموعات فرعية متميزة من الخلايا المحببة المنشطة والتي اختلفت جميعها في قدرتها الوظيفية النسبية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تلعب الخلايا المحببة دورا رئيسيا في الاستجابة المناعية الفطرية للجسم للالتهابات البكتيرية والفيروسية. في حين أن هناك طرقا لقياس وظيفة الخلايا المحببة ، إلا أنها بشكل عام محدودة من حيث المعلومات التي يمكن أن تقدمها. على سبيل المثال ، توفر معظم المقايسات الحالية فقط نسبة مئوية من عدد الخلايا المحببة التي يتم تنشيطها بعد حضانة واحدة ثابتة الطول. ومما يزيد الأمور تعقيدا ، أن معظم المقايسات تركز على جانب واحد فقط من الوظيفة بسبب القيود المفروضة على تقنية الكشف. يوضح هذا التقرير تقنية للقياس المتزامن لبلعمة الخلايا المحببة للبكتيريا والانفجار التأكسدي. من خلال قياس هاتين الوظيفتين في نفس الوقت ، تم تحديد ثلاثة أنماط ظاهرية فريدة من الخلايا المحببة المنشطة: 1) تنشيط منخفض (الحد الأدنى من البلعمة ، لا يوجد انفجار مؤكسد) ، 2) التنشيط المعتدل (البلعمة المعتدلة ، بعض الانفجارات التأكسدية ، ولكن لا يوجد توطين مشترك للحدثين الوظيفيين) ، و 3) التنشيط العالي (البلعمة العالية ، الانفجار التأكسدي العالي ، التوطين المشترك للبلعمة والانفجار التأكسدي). كما تم تحديد مجموعة رابعة تتكون من الخلايا المحببة المعطلة. باستخدام حضانات الفحص لمدة 10 و 20 و 40 دقيقة ، تم تقييم تأثير مدة حضانة الفحص على إعادة توزيع الأنماط الظاهرية للخلايا الحبيبية المنشطة. تم الانتهاء من حضانة رابعة على الجليد كعنصر تحكم. باستخدام حضانات الوقت التسلسلي ، قد يكون الاختبار قادرا على اكتشاف كيفية تأثير العلاج مكانيا على وظيفة الخلايا المحببة. تم قياس جميع العينات باستخدام مقياس التدفق الخلوي المستند إلى الصورة المزود بخيار التصوير الكمي (QI) ، وجهاز أخذ العينات التلقائي ، وأشعة الليزر المتعددة (488 و 642 و 785 نانومتر).

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمثل المحببة عنصر واحد من نظام المناعة الفطري في الجسم، والذي يوفر خط الدفاع الأول ضد المستضدات الغازية. ركزت الطرق السابقة لتقييم وظيفة محببة على قدرة البلعمة أو الأكسدة انفجار باستخدام طرق منفصلة، ​​مما يجعل من الصعب التأكد بشكل جماعي كيف تغيرت المحببة 1-4. الخلوي وقد أدت التطورات في مجال التدفق في إنتاج الأدوات الفوق قادرة على عالية الدقة، والتصوير متعدد الألوان الخلايا بطريقة إنتاجية عالية 5. القدرة على الجمع بين التصوير مع التدفق التقليدي يمثل الخلوي والتقدم الذي يوفر منصة التكنولوجية اللازمة للابتكار في التدفق الخلوي الحاليين الأساليب واستخراج معلومات جديدة عن جهاز المناعة.

على مدى السنوات العشر الماضية، مختبرنا، من بين أمور أخرى، وقد تركز تماما على تأثير مختلف patte الغذائية والعلاجات ممارسةRNS على وظيفة المناعة الفطرية 6-9. الأسلوب هو موضح في هذه المخطوطة له آثار عملية في مجال علم المناعة السريرية. الطريقة الحالية تعزز من قوة الصورة القائمة على التدفق الخلوي لقياس في وقت واحد من جسيمات البلعمة البكتيرية والأكسدة انفجار. باستخدام هذا النهج، واحد قادر على فصل المحببة تفعيلها باستخدام المتغيرات التي تقدمها الجزء القائم على صورة التحليل. وكانت هذه المجموعات الفرعية يمكن تحديدها إلا بعد تقييم الصور الخلوية على المحببة الفردية. المزيد من الوقت فحص حضانة أثرت على الانتقال بين مجموعات فرعية تفعيل ثلاثة 10. وبالتالي، فمن المعقول أن استخدام مرات حضانة متعددة قد تسمح طريقة لاختبار تغيير في وظيفة محببة بعد العلاج التجريبي محددة. وكان الغرض من هذه المخطوطة لإثبات وسيلة لتقييم وظيفة محببة باستخدام الصورة القائمة على التدفق الخلوي لقياس البلعمة في وقت واحد مع oxidatانفجار إيف.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: تم تنفيذ جميع إجراءات جمع الدم وصفها في هذه الطريقة وفقا لإعلان هلسنكي والموافقة عليها من قبل الاتحاد الوطني للعمال المؤسسي مجلس مراجعة (IRB) للمواد الدراسية الإنسان. أعطت جميع المواد الدراسية موافقة خطية لجمع الدم، والتي كانت تستخدم في هذا الأسلوب للتأكد من أنها كانت على ما يبدو بصحة جيدة، من وزن الجسم العادي، وخالية من المرض.

1. الكاشف المصدر وإعداد

  1. استخدام CD66b-APC (استنساخ # G10F5، DF = 1: 50) وCD45-APCeFluor780 (استنساخ # 2D1، DF = 1: 50) لهذا الاختبار.
    ملاحظة: قبل الدراسة، وtitered CD45 وCD66b الأجسام المضادة لتحديد التخفيف الأمثل الذي المحببة حلها بوضوح (CD45 + / + 66B) من الكريات البيض الأخرى (CD45 + / 66b-) 11. على إضافة الأجسام المضادة المخفف لتلطيخ كان التخفيف النهائي في الأنبوب 875.
  2. شراء وذوبان الجليد الأسهم S. الذهبية bioparticles المسمى مع pHrodo صبغة حمراء. تعليق بتركيز 1 مغرام من bioparticles لكل مل في برنامج تلفزيوني العقيمة. قسامة bioparticles مخفف وتخزين تجميد في -20 درجة مئوية حتى استخدامها في فحص.
  3. حل dihydroethidium (DHE)، والتي يتم تحويلها إلى بروميد إيثيديوم الفلورسنت في وجود الجذور الحرة الأكسجين (أي انفجار الأكسدة)، في DMSO إلى تركيز النهائي من 10 جرام / مل.
  4. مزيج N-ethylmaleimide (التي تستخدم لمنع البلعمة الإضافية التالية الفحص مدة حضانة معين) مع برنامج تلفزيوني العقيمة في التخفيف 2 خطوة من 200 ملغ / مل و 17.5 ملغ / مل على التوالي. في مقايسة، استخدم تركيز النهائي من 15 ملم. عندما يذوب N-ethylmaleimide، استخدم 37 درجة كتلة C الحرارة، كما لا تبقى N-ethylmaleimide في الحل.
  5. بعد الخطوة النهائية التثبيت، استخدم 7AAD وصمة عار DNA النووي. قبل بالإضافة إلى ذلك، تمييع 7AAD الأسهم 01:10 مع برنامج تلفزيوني العقيمة.

2. جمع الدم عينة

  1. طرح المواضيع للوصول إلى المختبر بعد O / N سريع (> 8HR) وabstentiعلى من النشاط البدني (> 12 ساعة).
  2. بعد تنظيف الجلد مع لوحة الإعدادية الكحول، اضافة الى وجود إبرة معقمة جمع الدم إلى الذراع ريد محيطي.
  3. جمع الدم في الأنابيب المفرغة التي تمتلئ تجاريا مع الهيبارين الصوديوم.
  4. بعد جمع وتطبيق ضمادة لاصقة لذراع في هذا الموضوع.
  5. عكس أنابيب الدم لخلط 10 مرات وبعد ذلك وضعت على الكرسي الهزاز حتى التحليل.

3. البلعمة الفحص تقنية

  1. bioparticles ذوبان الجليد البكتريا (RT)، DHE (RT)، وN-ethylmaleimide (37 ° C).
  2. إضافة 20 L من bioparticles البكتريا إلى 4 الفردية 1.2 مل أنابيب بينما كان يعمل في غطاء محرك السيارة العقيمة.
  3. إضافة 40 L من DHE إلى كل أنبوب يحتوي على bioparticles.
  4. بلطف الاستفادة من الأنابيب على سطح مقاعد البدلاء لجمع الكواشف في الجزء السفلي من الأنبوب.
  5. إضافة 100 L من الدم الكامل مختلطة إلى كل أنبوب الذي تم مليئة bioparticles وDHE.
  6. مسح الحافة الداخلية من الأنابيب مع القطن يميل قضيب لإزالة أي تلوث الدم.
  7. مزيج من الدم والكواشف مع الماصة الإلكترونية المقرر أن مزيج الدم والكاشف لثلاث دورات بعد إضافة الدم.
  8. وضع أنابيب الاختبار في دلو الجليد وتغطية للحماية من الضوء.
  9. احتضان أنابيب الاختبار لمدة 10، 20، و 40 دقيقة. نبدأ مع أنبوب 40 دقيقة لضمان جميع الأنابيب فحص تنتهي في نفس الوقت.
  10. ذوبان الجليد N-ethylmaleimide في 37 ° C حمام حبة.
  11. الماصة 15 L من N-ethylmaleimide (المذكورة أعلاه في 1.4) في كل أنبوب الفحص، احتضان لمدة 30 دقيقة.
  12. الماصة 10 L من CD66b-APC و 10 L من CD45-APCeFluor780 الأجسام المضادة المخفف (المذكورة أعلاه في 1.1)، واحتضان لمدة 60 دقيقة.
  13. الماصة 750 L للإصلاح مجلس الملاكمة العالمي / RBC حل ليز إلى كل أنبوب الفحص، احتضان لمدة 60 دقيقة.
  14. أجهزة الطرد المركزي (10 دقيقة في 400 x ج) فحص أنابيب لجمع بيليه الخلية.
  15. فراغ نضح الحل ليز مجلس الملاكمة العالمي / RBC الإصلاح، وترك فلوريدا المتبقيةحجم UID (100 L) أعلاه بيليه الخلية.
  16. الماصة 10 L من محلول مخفف 7AAD (المذكورة أعلاه في 1.5) و 50 L من برنامج تلفزيوني في كل أنبوب الاختبار.
  17. إضافة قطرة واحدة من الخرز المعايرة (~ 25 L) إلى كل أنبوب الاختبار، والقبعات مكان على أنابيب الاختبار، وأنابيب التفاف في احباط، ومكان في الثلاجة.
  18. تحميل أنبوب العينة إلى تدفق القائم على صورة عداد الكريات وجمع ما لا يقل عن 3،000 أحداث محببة باستخدام معلمات محددة مسبقا: الاوتوماتيكى والأزرق (488 نانومتر و 60 ميغاواط) والأحمر (640 نانومتر و 100 NW)، SSC (785 نانومتر. 8.5 ميغاواط) ليزر (الشكل 1).

figure-protocol-1
الشكل 1. اكتساب الأسلوب والقالب. تم الحصول على عينات على تدفق القائم على صورة عداد الكريات (A). خلال الاستحواذ، تم إنشاؤها نقطة قطع برايت الميداني نسبة الارتفاع مقابل CD66b APC-لالمحببة فصل من الخرز المعايرة ارتفعت النقيبز INSPIRE ضد 100.2.292.0 البرمجيات (B). تم الحصول على ما لا يقل عن 5،000 المحببة لكل العينات باستخدام الاوتوماتيكى والأزرق (488 نانومتر و 60 ميغاواط) والأحمر (640 نانومتر و 100 NW)، SSC (785 نانومتر، 8.5 ميغاواط) وأشعة الليزر. يرجى ملاحظة أن عددا من رسوم بيانية موجودة خلال الاستحواذ على رصد إعدادات الليزر وغيرها من جوانب البيانات جمع. كل هذه رسوم بيانية اختيارية ويحتاج فقط إذا كانت إجراءات التشغيل القياسية المختبر يتطلب منهم عن مراقبة الجودة. يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

4. اكتساب عينة وتحليل

  1. استخدام المعالج تعويض البرمجيات الآلي من البرنامج IDEAS لتطبيق مصفوفة تعويضات لملفات الصور الخام (RIF) وإنشاء تعويض الملفات المصورة (CIF).
  2. تحميل ملفات سيف الفردية في IDEAS البرمجيات وتوليد المؤامرات التالية لتحديد مجموعات فرعية محببة: لى>
  3. إنشاء بوابات الأولية لتحديد الخلايا التي اعتبرت في التركيز باستخدام الرسم البياني للمشرق RMS التدرج الميدان (الشكل 2A). جعل هذا التحديد لكل عينة المرضى باستخدام جهاز التحكم unstimulated كمعيار مرجعي.
  4. استخدام المؤامرات الثانوية إلى خلايا منفصلة القميص من الحطام والحلل باستخدام مؤامرة نقطة من نسبة الارتفاع الحقل مشرق (نسبة ارتفاع الخلية مقابل العرض) مقابل منطقة حقل مشرق (الشكل 2B). جعل هذا التحديد لكل عينة المرضى باستخدام جهاز التحكم unstimulated كمعيار مرجعي.
  5. مرة واحدة وقد تم التعرف على السكان نظيفة من الخلايا، إنشاء مؤامرة نقطة من CD45 مقابل CD66b (الشكل 2C) لتحديد إيجابيا المحببة (CD45 + / 66B +). خلق مؤامرة ابنة (الشكل 3) من شدة التفاصيل مشرقة للS. العنقودية الذهبية (محور س) مقابل كثافة التفاصيل مشرقة للالتأكسدي انفجار (DHE، المحور ص) لتحديد مجموعات فرعية من المحببة تفعيلها. جمع رصور الحقل آيت في القناة 1 و 9، bioparticles في القناة 2، DHE في القناة 4، 7AAD في قناة 5، CD66b في قناة 11، وCD45 في قناة 12.

figure-protocol-2
الشكل 2. تحليل قالب. هذا الرقم سلسلة من المؤامرات التي تم إنشاؤها لتحديد الخلايا التي كانت في التركيز (A)، والخلايا واحدة (B)، المحببة (C). استخدمت المؤامرات إضافية لتحديد مجموعات فرعية ثلاثة من المحببة تنشيط مقابل المحببة الخاملة. تم الانتهاء من جميع تحليل ملفات الصور المكتسبة باستخدام برامج IDEAS V.6. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

استخدام الصورة القائمة على التدفق الخلوي سمح لنا لفصل السكان متجانسة من المحببة إلى ثلاث مجموعات فرعية تنشيط تفعيل مختلفة (الشكل 3). في هذه الطريقة، والطريقة الأكثر فعالية لحل فرعية تفعيل الثلاثة هو عن طريق التآمر كثافة التفاصيل مشرقة للالبلعمة (S. الذهبية) مقابل الأكسدة انفجار (DHE) (الشكل 3؛ الشكل 4). أيضا، سوف استخدام المعالج شارك في التعريب في IDEAS البرمجيات تسمح لتقدير حجم وجود البلعمة في وقت واحد والأكسدة انفجار، الذي هو علامة السمة المميزة لتنشيط المحببة للغاية.

figure-results-1
الشكل 3. تحديد المنشط الحبيبية مجموعات فرعية. وبعد تحديد المحببة باستخدام علامات سطح الخلية (CD45 + / 66B +)، ولدت مؤامرة ابنة مع مشرق inten التفاصيلSITY لالبلعمة مقابل كثافة التفاصيل مشرقة للالتأكسدي انفجار. باستخدام هذا النهج، نسبة غير نشط (الأرجواني)، وانخفاض النشط (أحمر، A)، معتدلة نشط (الأزرق، B)، وتم تحديد العالية نشطة (الصفراء، C) المحببة. تم استخدام هذه التقنية النابضة أيضا لتقييم تأثير من الزمن فحص الحضانة على الوفرة النسبية لمختلف مجموعات فرعية محببة تفعيلها. وكانت أعلى نسبة المحببة "عالية نشطة" الحالية بعد حضانة 40 دقيقة. تم الانتهاء من جميع تحليل ملفات الصور المكتسبة باستخدام برامج IDEAS V.6. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

بالإضافة إلى إثبات وجود ثلاث مجموعات فرعية متميزة من المحببة تفعيلها، وقد تبين أن فترة حضانة الفحص أثرت الوفرة النسبية لكل المحببة فرعية تفعيلها. على وجه التحديد، والمؤتمر الوطني العراقي 40 دقيقةأدى ubation في النسبة الأكبر من المحببة "عالية نشطة". من قبل بما لا يقل عن ثلاث فترات حضانة الفحص قد يكون من الممكن تحديد كيف يغير من العلاج السريري نظرا لحالة التنشيط الزمني للالمحببة. هذا هو الأسلوب نشرت أول استخدام الصورة القائمة على التدفق الخلوي لتحديد مجموعات فرعية مختلفة محببة تفعيلها بوصفها وظيفة من القياسات في وقت واحد من البلعمة والأكسدة انفجار.

figure-results-2
ويقدم الشكل 4. الصور التمثيلية للعلامات الخلوية. إن معرض الصورة من خلايا تصنف على أنها عالية نشط (A)، معتدلة نشط (B)، والمنخفضة النشط (C) في هذا الرقم. bioparticles البكتريا هي في Ch03 ، التأكسدي انفجار في Ch04، 7AAD للنواة في Ch05، والجانب مبعثر في Ch06، CD66b فيCH11، وCD45 في Ch12. أيضا، يتم عرض صورة دمج مترجمة شارك البلعمة (Ch03) مقابل الأكسدة انفجار (Ch04). مجالات الأصفر في الصورة دمج تدل على أن البلعمة والأكسدة انفجار تحدث في نفس المكان التشريحي في نفس الوقت. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمثل هذا الأسلوب صقل الأساليب القائمة لتقييم وظيفة محببة باستخدام التدفق الخلوي 1،3،4،12-14. الخطوات الحاسمة من هذا الاختبار تميل إلى أن تكون ذات صلة الخلط السليم للعينة الدم مع bioparticles وDHE. سوف خلط ناقصة تؤدي إلى نتائج غير دقيقة. في حين خلط كامل أمر بالغ الأهمية، يجب أن تكون طريقة خلط لطيف في الطبيعة. ويقترح أن الاختلاط تحقيقه باستخدام الماصة الإلكترونية مع وظيفة خلط بدلا من خلاط دوامة. آخر خطوة حاسمة في مقايسة هي ضمان دائما عدم وجود الدم الملوثة في النصف العلوي من أنبوب الاختبار. ويمكن إزالة هذا الدم المتبقي باستخدام القطن ذات الرؤوس المعقم قضيب. إزالة كاملة مهمة لأن عدم القيام بذلك قد تلوث إعداد مقايسة نهائي مع خلايا الدم الحمراء هي lysed الامم المتحدة.

قبل استخدام هذا الأسلوب ضوابط التعويض المناسبة ينبغي أن يضاف للسيطرة على سالتداخل ectral بين الكواشف المستخدمة للتعرف على جوانب مختلفة من وظيفة محببة. لهذا الأسلوب، وتشمل الضوابط تعويض جمع عينات الدم التي تم اقترحت 40 دقيقة فحص الحضانة ومن ثم وضع العلامات مع علامة واحدة (أي كولاي، DHE، وما إلى ذلك). بعد وضع العلامات، ويتم جمع الأحداث الإيجابية واحدة ويتم إنشاء مصفوفة التعويض باستخدام المعالج الآلي في برامج التحليل IDEAS. ومن الأهمية بمكان أن إذا تم استخدام هذا الاختبار، يتم الانتهاء من ضوابط التعويض المناسبة لضمان الأداء السليم الفحص.

ويتم إنجاز التحليل باستخدام ميزة مكتشف وشارك في توطين المعالجات لتحديد أن كثافة التفاصيل مشرق هو أفضل المتغير للفصل بين السكان، وكذلك تحديد كيفية وجود الكثير من التداخل بين انفجار الأكسدة وإشارات البلعمة. على وجه التحديد، شريطة استخدام الخلوي الصورة القائمة على القدرة على فصل المحببة إلى ثلاث مجموعات فرعية تفعيلها. تيتم تحديد له فرعية انهيار باستخدام كثافة التفاصيل مشرق البلعمة مقابل الأكسدة انفجار. بالإضافة إلى دراسة هذه الوظائف خلية واحدة، وقد تم تحديد الخلايا التي عرضت كلا الحدثين في نفس الوقت في نفس الموقع التشريحي (شارك في التعريب). كانت المحببة التي سقطت في فرعية "عالية النشطة" النمط الظاهري الوحيد الذي أثبت بما يتفق شارك في التعريب بين البلعمة والأكسدة انفجار. هذا تحديد مجموعات فرعية محببة تفعيلها هي أكبر منطقة التي تحتاج إلى استكشاف الأخطاء وإصلاحها. من المهم جدا للمستخدم جديد إلى يستغرق وقتا طويلا لفهم إجراءات العمل عينة في الأفكار وفهم آليات النابضة السكان الخلية باستخدام عنصر التصوير. وتشمل التعديلات الأخرى التي يمكن للمستخدم أن تسعى لجعل اختيار الأوقات فحص حضانة بديلة أو إضافية. وتشير الطريقة الحالية استخدام فترات من 10-40 دقيقة. ومع ذلك، اعتمادا على النموذج التجريبي حيث هذه الطريقةلاستخدامها، قد يكون من الضروري لتحديد فترات أطول الفحص. بحاجة الى مثل هذا التعديل ليتم تقييمها على أساس فردي.

وعلاوة على ذلك تقرر أن مدة الحضانة فحص له تأثير كبير على ظهور مجموعات فرعية ثلاثة تفعيلها. النهج المبينة في هذا التقرير يمثل امتدادا لما هي المعلومات التي يمكن الحصول عليها في وقت سابق بشأن محببة وظيفة 3،4،13،15. وقد أثبتت مختبرات أخرى على أهمية تقييم التغيرات في وظيفة محببة كجزء من تقييم شامل للمناعة والامراض 15-17. وعلى الرغم من إمكانات هذا الاختبار ليس من دون قيود. واحدة من القيود الرئيسية من حيث التكلفة والوقت الطلب المرتبطة عينة عالية التجهيز الإنتاجية. عندما يتطلب تصميم الدراسة على عدد كبير من العينات في يوم معين، يمكن أن تكون هذه من الصعب معالجة. هو تبسيط معالجة عن طريق استخدام pipets الإلكترونية وموزعات،ولكن هذه تميل إلى أن تكون مكلفة وليست بالضرورة متوفرة في كل مختبر.

لدينا مجال البحث تركز على دراسة كيفية ممارسة الرياضة والعادات الغذائية تؤثر على الصحة الجهاز المناعي وظيفة 6،8-10،18-20. هذه الأهداف لها آثار عملية هامة لمجموعة متنوعة من مجالات صحة الإنسان. ما وراء دراسة ممارسة الرياضة والتغذية آثار طريقة البلعمة أظهر في هذه المخطوطة يمكن أن تكون مفيدة في مناطق أخرى من المناعة السريرية حيث رصد وظيفة البلعمة أمر بالغ الأهمية لنتائج العلاج. الفحص الحالي هو الأول من كثيرين أن المقايسات المناعية مع القدرة على إعادة اختراع من خلال استغلال المعلومات التصوير الفريدة التي يمكن أن تكون وسعها من تدفق القائم على صورة عداد الكريات.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل الدراسة الحالية جزئيا من خلال منحة بدء البحث (RIG) من جامعة شمال تكساس للدكتور ماكفارلين. لم يتلق المؤلفون تمويلا مباشرا لإكمال هذه الدراسة ولم يبلغوا عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
المكانسالكهربائية BD Life Sciencesالمستخدمة لجمع الدم
تحلل WBC Fixative / RBCeBioscience00-5333-57
CD66b-APCeBioscienceاستنساخ G10F5
CD45-APCeFluor780eBioscienceاستنساخ 2D1
S. aureus< / i> الجسيمات الحيويةLife TechnologiesA10010
ثنائي هيدرو إيثيديومسيجما ألدريتشD7008
N-إيثيل ماليميدسيجما ألدريتش4259
7AADEMD محلل أمراض الدم Millipore
MindrayBC-3200
ماصة 96 قناةIntegra BiosciencesViaFlo
حاضنة حمام حبةمختبرBeadBath
التصوير تدفق التدفقEMD MilliporeAmnis FlowSight
INSPIRE SoftwareEMD MilliporeAmnis INSPIRE
IDEAS SoftwareEMD MilliporeAmnis IDEAS
X-Pierce Pierable Plate SealerExcel Scientific, Inc.X-Pierce
Dell Precision Workstationأجهزة كمبيوتر Dellمختلفةتستخدم لتحليل IDEAS
حل

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kong, M., et al. The effect of alpha-fetoprotein on the activation and phagocytosis of granulocytes and monocytes. Hepatogastroenterology. 59, 2385-2388 (2012).
  2. Prakash, P. S., Caldwell, C. C., Lentsch, A. B., Pritts, T. A., Robinson, B. R. Human microparticles generated during sepsis in patients with critical illness are neutrophil-derived and modulate the immune response. J. Trauma Acute Care Surg. 73, 401-406 (2012).
  3. Salih, H. R., Husfeld, L., Adam, D. Simultaneous cytofluorometric measurement of phagocytosis, burst production and killing of human phagocytes using Candida albicans and Staphylococcus aureus as target organisms. Clin. Microbiol. Infect. 6, 251-258 (2000).
  4. Tsuji, S., Iharada, A., Taniuchi, S., Hasui, M., Kaneko, K. Increased production of nitric oxide by phagocytic stimulated neutrophils in patients with chronic granulomatous disease. J. Pediatr. Hematol. Oncol. 34, 500-502 (2012).
  5. Ortyn, W. E., et al. Sensitivity measurement and compensation in spectral imaging. Cytometry A. 69, 852-862 (2006).
  6. McFarlin, B. K., et al. A one-year school-based diet/exercise intervention improves non-traditional disease biomarkers in Mexican-American children. Matern. Child Nutr. 9, 524-532 (2013).
  7. McFarlin, B. K., Johnson, C. A., Moreno, J. P., Foreyt, J. P. Mexican-American Children have differential elevation of Metabolic Biomarkers that is proportional to Obesity Status. J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. , (2013).
  8. Strohacker, K., et al. Moderate-intensity, premeal cycling blunts postprandial increases in monocyte cell surface CD18 and CD11a and endothelial microparticles following a high-fat meal in young adults. Appl. Physiol. Nutr. Metab. 37, 530-539 (2012).
  9. Carpenter, K. C., Breslin, W. L., Davidson, T., Adams, A., McFarlin, B. K. Baker's yeast beta-glucan supplementation increases monocytes and cytokines post-exercise: implications for infection risk. Br. J. Nutr. , 1-9 (2012).
  10. McFarlin, B. K., Williams, R. R., Venable, A. S., Dwyer, K. C., Haviland, D. L. Image-based cytometry reveals three distinct subsets of activated granulocytes based on phagocytosis and oxidative burst. Cytometry A. 83, 745-751 (1002).
  11. McFarlin, B. K., Williams, R. R., Venable, A. S., Dwyer, K. C., Haviland, D. L. Image-based cytometry reveals three distinct subsets of activated granulocytes based on phagocytosis and oxidative burst. Cytometry A. 83, 745-751 (2013).
  12. Ichii, H., et al. Iron sucrose impairs phagocytic function and promotes apoptosis in polymorphonuclear leukocytes. Am J Nephrol. 36, 50-57 (2012).
  13. Ploppa, A., George, T. C., Unertl, K. E., Nohe, B., Durieux, M. E. ImageStream cytometry extends the analysis of phagocytosis and oxidative. Scand. J. Clin. Lab. Invest. 71, 362-369 (2011).
  14. Van Amersfoort, E. S., Van Strijp, J. A. Evaluation of a flow cytometric fluorescence quenching assay of phagocytosis of sensitized sheep erythrocytes by polymorphonuclear leukocytes. Cytometry. 17, 294-301 (1994).
  15. Gullstrand, B., et al. Combination of autoantibodies against different histone proteins influences complement-dependent phagocytosis of necrotic cell material by polymorphonuclear leukocytes in systemic lupus erythematosus. J. Rheumatol. 39, 1619-1627 (2012).
  16. Fierro, M. T., et al. Functional and phenotypical impairment of polymorphonuclear cells in atopic dermatitis: an additional cause for the known susceptibility to infections. Dermatology. 224, 323-330 (2012).
  17. Gruger, T., et al. Negative impact of linezolid on human neutrophil functions in vitro. Chemotherapy. 58, 206-211 (2012).
  18. McFarlin, B. K., Venable, A. S. Measurement of Low Concentration Human Serum Cytokines using a Millipore High-Sensitivity Milliplex Assay. J. Vis. Exp. , (2014).
  19. McFarlin, B. K., Carpenter, K. C., Davidson, T., McFarlin, M. A. Baker's Yeast Beta Glucan Supplementation Increases Salivary IgA and Decreases Cold/Flu Symptomatic Days After Intense Exercise. J. Diet. Suppl. 10, 171-183 (2013).
  20. McFarlin, B. K., Carpenter, K. C., Strohacker, K., Breslin, W. L. Comparison of blood monocytes and adipose tissue macrophages in a mouse model diet-induced weight gain. Comp. Med. 62, 462-465 (2012).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Granulocyte FunctionImage based Flow CytometryPhagocytosis AssayOxidative BurstGranulocyte SubsetsBio ParticlesDHE ReagentCD45 CD66bIDEA SoftwareQuantitative Imaging

Related Articles