مقالة منهجية

في المختبر توصيف الوظيفي للماوس القولون والمستقيم وارد النهايات

DOI:

10.3791/52310

⸱

يناير 21, 2015

 , 
1Center for Pain Research, Department of Anesthesiology, University of Pittsburgh

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يوضح هذا الفيديو بروتوكولا لإجراء تسجيلات الفيزيولوجيا الكهربية أحادية الألياف على مستحضر العصب والقولون والمستقيم في المختبر.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يوضح هذا الفيديو بالتفصيل في المختبر، واحد من الألياف الكهربية بروتوكول تسجيل باستخدام إعداد الماوس القولون العصب. النهج يسمح بتحديد وتوصيف وظيفي متحيز من afferents القولون والمستقيم الفردية. التسجيلات خارج الخلية من إمكانات العمل نشر (الجزائرية) التي تنشأ من واحد أو عدد قليل من وارد (أي الألياف واحد) مصنوعة حقول تقبلا (علوم الاحياء) في القولون من مازحت كراسات الألياف العصبية. تتم إزالة القولون مع أي من الحوض (PN) أو قطني حشوي (LSN) العصبية المرفقة وفتحت طوليا. يتم وضع الأنسجة في غرفة تسجيل، دبس شقة ومع perfused حل كريبس الاوكسيجين. يستخدم التحفيز الكهربائي البؤري لتحديد النهايات وارد القولون والمستقيم، والتي يتم اختبارها مزيدا من ثلاثة محفزات الميكانيكية مميزة (ثلم التحقيق، التمسيد المخاطية وتمتد كفافي) لتصنيف وظيفيا في afferents إلى خمس mechanosensiدروس موانع. وتصنف النهايات الاستجابة لأيا من هذه المحفزات الميكانيكية وafferents ميكانيكيا-حساسة (المفقودين). كلا mechanosensitive ويمكن تقييم المفقودين لتوعية (أي استجابة محسنة، خفضت عتبة، و / أو حيازة mechanosensitivity) من خلال التعرض المترجمة من علوم الاحياء للمواد الكيميائية (مثل حساء التهابات (IS)، كشافات، أدينوسين ثلاثي الفوسفات (ATP)). وصفنا المعدات والقولون العصب إعداد تسجيل، والحصاد من القولون مع PN المرفقة أو LSN، وتحديد علوم الاحياء في القولون، الألياف واحد من تسجيل كراسات العصبية، وتطبيق المترجمة من المواد الكيميائية إلى RF. وبالإضافة إلى ذلك، وتناقش أيضا تحديات إعداد وتطبيق التحفيز الميكانيكي موحد.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الألم وفرط الحساسية هي السائدة الشكاوى من المرضى الذين يعانون من اضطرابات الجهاز الهضمي الوظيفية، بما في ذلك متلازمة القولون العصبي (IBS)، والتي توجد في حالة عدم وجود سبب واضح pathobiological أو تلف الأنسجة. على سبيل المثال، والمرضى IBS تظهر فرط الحساسية، بما في ذلك ردود مشددة على المستقيم انتفاخ البالون وزيادة الحساسية خلال وظيفة الأمعاء الطبيعية، فضلا عن فرط الحساسية الإحالة الجسدية (أي، والحنان لملامسة للمنطقة البطن) 1. بسبب استهداف afferents القولون والمستقيم وقد ثبت أن تكون فعالة في تخفيف الألم وفرط الحساسية لدى مرضى القولون العصبي (على سبيل المثال، تقطير داخل المستقيم من التخدير الموضعي 2،3، ابتلاع الشفوي للguanylate محلقة-C ناهض linaclotide 4-6)، وتحسين فهم تعصيب وارد من القولون هو المهم.

afferents الحشوية، بما في ذلك afferents القولون والمستقيم، تكون قادرة على الاستجابة لطرائق الكيميائية / بالمغذيات والحرارية (على سبيل المثال، 7-9). ومع ذلك، فإن afferents الحشوية الاستجابة للمؤثرات الميكانيكية (أي afferents mechanosensitive) ودرس الأكثر بدقة بسبب المحفزات الميكانيكية (على سبيل المثال، وانتفاخ اللمعية، وتمتد) هي تلك التي ينتج عنها عادة الأحاسيس واعية، بما في ذلك الانزعاج والألم 10-16. وبالإضافة إلى ذلك، يتم معصب الأحشاء أيضا afferents حساسة ميكانيكيا (المفقودين)، عادة يطلق nociceptors الصامتة أو النوم 17. في ظل الظروف الفسيولوجية العادية، المفقودين لا تستجيب لالتحفيز الميكانيكي أو لديهم استجابة عالية جدا عتبات 18، ولكن يمكن أن تصبح نشطة واكتساب mechanosensitivity في ظروف الفيزيولوجية المرضية والمساهمة في فرط الحساسية.

عن طريق إعداد في المختبر، وبروتوكول الموصوفة هنا، قمنا بتطوير ويعمل استراتيجية التحفيز الكهربائية إلى البحر RCH لنهايات تقبلا، والسماح تحديد متحيز كل من النهايات mechanosensitive وMIA في القولون 19. ويستمد تعصيب القولون والمستقيم من حشوي قطني (LSN) والعصبية الحوض (PN) مسارات، ويتضمن afferents القولون والمستقيم والتي يمكن تصنيفها إلى خمسة فصول mechanosensitive (المصلي، الغشاء المخاطي، العضلات، والعضلات-المخاطية، المساريقي) وفئة واحدة MIA 20. باستخدام هذا المستحضر في المختبر، وجدنا أن المفقودين القولون والمستقيم mechanosensitivity المكتسب (توعية) بعد التعرض موجز لحقولهم تقبلا لالحساء التهابات (IS)، والذي توعية 71٪ من المفقودين في مسار PN و 23٪ من المفقودين في مسار LSN 19. ونحن كما وثقت توعية طويلة الأمد (تصل إلى 28 يوما) من المفقودين في سياق فرط الحساسية الحشوية السلوكي طويلة الأمد (أي في الفئران تلقي العلاجات intracolonic مع زيموزان 21 أو حامض 2،4،6-trinitrobenzenesulfonic (TNBS) 22) .

jove_content "> ومن بين afferents mechanosensitive، afferents العضلات والعضلات-المخاطية هي الطبقات الوحيدة التي تكود tonically تمتد كفافي من القولون (أي، هي امتداد حساسة) وأيد ترميز الضارة انتفاخ القولون والمستقيم 23،24. وباستخدام الكمبيوتر التي تسيطر عليها قوة المحرك، طبقنا معيار، متجانسة، وقابلة للتكرار تمتد رفعت في اتجاه كفافي من نسيج القولون والمستقيم بالارض وزيادة تصنيفها afferents حساسة تمتد كما منخفضة وعالية عتبة عتبة 23. وبالإضافة إلى ذلك، وبالطبع وقت توعية تمتد afferents -sensitive بعد زيموزان intracolonic 21 أو 22 TNBS العلاج يتوافق مع ظهور، والمثابرة، و / أو استرداد فرط الحساسية الحشوية السلوكي، مما يشير إلى دور حساس تمتد afferents القولون والمستقيم في الألم الحشوية وفرط الحساسية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: تم استعراض هذا البروتوكول والموافقة عليها من قبل جامعة بيتسبرغ المؤسسي رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام.

1. إعداد الحل كريبس التعديل واختبار المخدرات مأخوذة

  1. جعل 6 L المعدلة حل كريبس الذي يحتوي (مم): 117.9 كلوريد الصوديوم، 4.7 بوكل، 25 NaHCO 3، 1.3 ناه 2 PO 4، 1.2 MgSO 4، 2.5 CaCl 2، 11.1 D-الجلوكوز، الزبدات 2 الصوديوم، خلات الصوديوم 20 ، 0.004 نيفيديبين (لمنع تقلصات العضلات العفوية)، والاندوميتاسين 0.003 (لمنع تخليق البروستاجلاندين الذاتية). استخدام حلول كريبس الجليد الباردة والدافئة للتشريح الأنسجة وتسجيل الألياف واحد، على التوالي.
  2. إعداد أي المحاليل الكيميائية (على سبيل المثال، IS، كشافات، ATP) في aliquots في تركيزات المطلوب.

2. تشريح الأنسجة القولون العصب

  1. تخدير والموت ببطء الفئران الذكور (6-8 أسابيع من العمر، 20 - 30 ز) فيغرفة CO 2 بمعدل تدفق أن يزيح 10-30٪ من حجم الغرفة في الدقيقة الواحدة حتى الفئران توقف التنفس تماما كما يدل على ذلك عدم وجود حركة الصدر.
  2. مباشرة بعد القتل الرحيم، يستنزف من خلال خفض فتح غرفة الصدرية، تثقيب الأذين الأيمن، وغمر الذبيحة الماوس في حجم وافرة (~ 500 مل) من الجليد الباردة كريبس (4 ° C) حل فقاعات مع كربوجين (95٪ O 2 و 5٪ CO 2).
  3. إزالة بعناية كل الأحشاء ولكن القولون والحوض الأجهزة. القطع الماوس في نصف عبر شريحة الشوكي T12 أعلى قليلا من الحجاب الحاجز والصدر ونقل النصف الذيلية إلى غرفة التشريح التي تحتوي على الجليد الباردة، فقاعات حل كريبس.
  4. تحت stereomicroscope، إزالة المثانة والأعضاء التناسلية التي transecting عند التقاطعات لمجرى البول، وإزالة الهابطة / الشريان الأورطي البطني حتى bifurcates في الشرايين الحرقفي المشترك. تحرير PN أو LSN من surroundin بهمز الأنسجة عن طريق تشريح حادة واتبع العصبية من خارج العرف الحرقفي حتى نقطة دخول البطنية في L6 وS1 العمود الفقري (لPN) أو T13 وL1 العمود الفقري (لLSN).
  5. قطع الارتفاق العانة والحق والمفاصل الحقي اليسار، وإزالة العظم الحرقفي. مجانا بعناية إما PN أو LSN من العضلات والنسيج الضام المرفقة من على مقربة من القولون حتى حيث يدخل العصب والعمود الفقري.
  6. بتر بعناية العظم الحرقفي لفضح القولون البعيدة. تشريح خارج القولون البعيدة مع PN المرفقة أو LSN في التواصل.
  7. نقل القولون مع العصب تعلق على حجرة حمام للغرفة الأنسجة. إزالة النسيج الضام المفرطة من جانب آخر تشريح، وفتح القولون طوليا على طول الحدود المضادة للالمساريقي.
  8. مع الجانب المخاطية مواجهة، دبوس حافة المساريقي من القولون المتاخمة للتسجيل مقصورة في قاعدة سيليكون من chambeص وإرفاق طول مقابل المساريق من القولون إلى أشعل النار من السنانير متصلة المحرك قوة (موضح في الشكل (1) وتصويرها في الشكل 2A).
  9. تمديد PN أو LSN في حجرة التسجيل، وهذا مرتبط إلى حجرة حمام من جحر الفأر والبوابة. وضع بلطف جذع العصب على مرآة زجاجية صغيرة في حجرة التسجيل، التي تنص على سطح ماء لالعصب على الالتزام. Superfuse حجرة حمام دافئ مع (30-32 درجة مئوية)، المؤكسج حل كريبس وملء المقصورة تسجيل مع الزيوت المعدنية.

تسجيل 3. واحد من الألياف وتوطين مجال تقبلا

  1. قشر بعناية إلى الخلف غلاف (غمد العصب) من PN أو LSN تحت stereomicroscope في تضخم عالية (50 - 60X). باستخدام ملقط غرامة، ندف جذع العصب إلى 5-8 حزم العصبية من ~ 100 ميكرون سمك.
  2. ضع إشارة البلاتين إيريديومالقطب في اتصال مع الحل كريبس في غرفة الأنسجة. وضع بالتتابع الحزم العصبية الفردية على القطب تسجيل مصنوعة من نفس المادة.
  3. استخدام فرشاة طلاء ناعمة لاستحضار نقاط وصول من afferents القولون والمستقيم عن طريق التمسيد بلطف صعودا ونزولا على سطح القولون والمستقيم. تحديد موقع حزمة الأعصاب (ق) التي يعصب القولون من خلال كشفها AP (إمكانات العمل) التسجيلات.
    ملاحظة: إن PN وLSN أيضا يعصب المثانة البولية وأعضاء الحوض الأخرى.
  4. استخدام زوج من 30 نصائح إبرة G لمزيد من تقسيم حزمة الأعصاب إلى خيوط كراسة غرامة ~ 10 ميكرون سمك ووضع خيوط الأفراد على تسجيل القطب.
  5. وضع القطب متحدة المركز مستديرة ذات الرؤوس عمودي على سطح الغشاء المخاطي لإثارة كهربائيا النهايات وارد في كثافة suprathreshold التحفيز (10 مللي أمبير الحجم، 0.5 ميللي ثانية مدتها @ 0.3 هرتز)، والتي تنتج ~ 2 مم دائرة نصف قطرها من انتشار الحالي. تحرك القطب منهجية (~ 1.5 ملم خطوات) على طول وعرض القولون بالارض في توطين النهايات تقبلا.
  6. عندما هو متحمس لإنهاء وارد، وضبط الموقف الكهربائي لتحديد موقع تفعيل (حقل تقبلا، RF) التي تتطلب الحد الأدنى من شدة التحفيز (عتبة التحفيز). تجاهل النهايات مع عتبة التحفيز> 3 مللي أمبير 19.
  7. حساب سرعة التوصيل (CV) من 1) المسافة بين القطب محفزة في مجال تقبلا (RF) وموقع تسجيل و2) التأخير التوصيل (على سبيل المثال، الشكل 2B) بين القطع الأثرية التحفيز وبداية من إمكانات العمل .
    CV (م / ثانية) = المسافة (ملم) / تأخير التوصيل (ميللي ثانية).

4. التصنيف الوظيفي من Mechanosensitive القولون والمستقيم Afferents

  1. بعد تحديد موقع RF بواسطة التحفيز الكهربائي، وتطبيق ما يلي ثلاثة المحفزات الميكانيكية إلى RF:
    1. إجراء التحقيق التحفيز عن طريق الضغط على غيض من calibraحيدة تيد فون فراي مثل النايلون (0.4 و 1 غرام القوة) عموديا نحو RF على القولون بالارض.
    2. إجراء التحفيز التمسيد بلطف بواسطة التمسيد الغشاء المخاطي القولون والمستقيم مع غرامة حبلا خيوط النايلون (10 ملغ قوة) لإنشاء إجهاد القص سطح صغير في RF.
    3. إجراء تمتد كفافي باستخدام المحرك قوة الكمبيوتر التي تسيطر عليها، والتي توفر قوة تمتد رفعت (0-170 MN في 5 مليون / ثانية) في الاتجاه المحيطي على طول حافة المضادة للالمساريقي من القولون عبر أشعل النار من السنانير هو موضح في الخطوة 2.8 .
  2. تصنيف afferents كما المصلي (تستجيب فقط لفظة التحقيق)، المخاطية (الرد على المخاطية التمسيد وفظة التحقيق)، والعضلات (الرد على امتداد كفافي وفظة التحقيق) العضلي / المخاطية (الرد على امتداد كفافي، المخاطية التمسيد وفظة التحقيق)، أو MIA (وليس استجابة لأي من المحفزات الميكانيكية ثلاثة).
  3. لafferents المساريقي (فقط فيوتعصيب LSN) التي يصعب تفعيل انتقائي من قبل التحفيز الكهربائي، تحديد نهايات لها تقبلا من قبل التمسيد الميكانيكية / تحقق من مساريق.
  4. لafferents حساسة تمتد (العضلات والعضلات-الغشاء المخاطي)، وتحديد عتبة ردا على ذلك، الذي يعرف بأنه القوة التي تثير أول AP خلال تمتد رفعت.
  5. لafferents المصلي، سجل ردودها على الصعود مستويات منقط تحقق من حقل تقبلا مدفوعا قوة المحرك الكمبيوتر التي تسيطر عليها.

5. التطبيق الكيميائية / التحوير من النهايات التعبيرية

  1. تسجيل استجابة خط الأساس لحافز الميكانيكية (أي استجابة لتمتد رفعت، منقط التحقيق، أو الغشاء المخاطي التمسيد).
  2. معطف الحافة السفلية من قطعة من الأنابيب (النحاس أو الفولاذ المقاوم للصدأ، 10 مم عالية و 4 × 4 مم 2 مربع أو 4-5 مم) مع الفازلين ووضعه على الحقل تقبلا على القولون.
  3. نزعالحل كريبس داخل الأنابيب، ويعرض نهاية تقبلا ل3-5 دقيقة إلى 170 ميكرولتر من محلول يحتوي على مادة كيميائية (ق) لفحصها.
  4. مراقبة الاستجابة للوارد خلال تطبيق الكيميائي (بعض afferents هي حساس للكيماويات).
  5. إزالة الحل الكيميائية والأنابيب لإنهاء عمل هذه المادة الكيميائية. ضمن 4-6 دقيقة، واختبار الاستجابة وارد لنفس التحفيز الميكانيكي كما هو الحال في الاستجابة خط الأساس.
  6. إعادة تطبيق التحفيز الميكانيكي مرة أخرى بعد فترة كافية من غسل المغادرة (> 15 دقيقة).

6. المسامير تسجيل والتمييز AP

  1. رقمنة الإشارات الكهربائية المسجلة من محاور عصبية في 20 كيلو هرتز وحفظ البيانات إلى جهاز كمبيوتر. مراقبة إشارة على الخط من خلال رصد الصوت.
  2. تحليل المسامير AP خارج الخط وتميز الوحدات واحدة على أساس تحليل المكون الرئيسي من الطول الموجي ارتفاع الفردية 25.
    ملاحظة: يجب أن يحتوي على سجل واحد لا أكثر عشروحدتين النشطة discriminable بسهولة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويتضح الإعداد في الشكل 1. ويشمل غرفة الأنسجة حسب الطلب الذي يضم القولون في حمام مقصورة مبطنة سيليكون والعصب المرفقة في معدن متجاورة مقصورة مملؤة بالنفط. تم تشكيله غرفة المقصورة اثنين من كتلة صلبة من البلاستيك الاكريليك بواسطة آلة CNC. وقد اصطف أسفل كل مقصورات في وقت لاحق مع سيليكون ثابت للسماح السهل دبوس أسفل من نسيج القولون والمستقيم. يتم تسجيل نقاط وصول خارج الخلية العصبية من كراسات مثار باستخدام منخفضة الضوضاء، بطارية تعمل بالطاقة التفاضلية مكبر للصوت مع مشترك ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد ثبت في المختبر إعداد القولون العصب الموصوفة هنا أن يكون طريقة فعالة لدراسة وظائف ترميز العصبية من afferents القولون والمستقيم الفردية، التي تكمل بشكل جيد النهج غير وظيفية أخرى (على سبيل المثال، والدراسات الخلوية والجزيئية والنسيجية) على الخلايا العصبية الحسية الحشوية ( انظر استعراض 27 لمزيد من التفاصيل). وقد كشف الآليات العصبية التي تسهم في حس الألم وطويلة الأجل القولون والمستقيم وفرط الحساسية وقد أجريت التلاعب الدوائية التي لها أهداف كشفت أن يمكن ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بدعم من جائزة المعاهد الوطنية للصحة R01 DK093525 (GFG). نحن نقدر عاليا المراجعة العلمية والتحرير النحوي للمخطوطة من قبل الدكتور أمبر شافر (جامعة بيتسبرغ) ونشكر مايكل بورشام على المساعدة في إعداد الأرقام.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Leica MZ16 مجهر ستيريوLeica Microsystems Inc.
كاميرا Leica IC DLeica Microsystems Inc.
مكبر للصوتالعالم للأدوات الدقيقة ، وشركةSYS-DAM80مكبر للصوت تفاضلي منخفض الضوضاء
من جزأين
Power1401Cambridge Electronic Design LimitedPower1401الحصول على البيانات ، إدخال / إخراج إشارة تناظرية
Spike2 v5.02حزمة برامج Cambridge Electronic Design Limitedالتي تعمل مع شاشة الصوت Power1401
NatusAm 8
محفز نبض مربعNatusS48لتقديم محفزات كهربائية
وحدة عزل كهروضوئيةNatusPSIU6Stimulus لتقليل الضوضاء
القطب الكهربائي الدقيق ثنائي القطبمتحد المركز FHC Inc.CBFFG75لتقديم المحفزات
الكهربائية نظام الرافعة ثنائي الوضعAurora Scientific Inc.سلسلة 300Cلتقديم المحفزات الميكانيكية
ملقطأدوات العلوم الدقيقة11252-00ملقط مع أطراف دقيقة
غرفة أنسجة مخصص

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Naliboff, B. D., et al. Evidence for two distinct perceptual alterations in irritable bowel syndrome. Gut. 41, 505-512 (1997).
  2. Verne, G. N., Robinson, M. E., Vase, L., Price, D. D. Reversal of visceral and cutaneous hyperalgesia by local rectal anesthesia in irritable bowel syndrome (IBS) patients. Pain. 105, 223-230 (2003).
  3. Verne, G. N., Sen, A., Price, D. D. Intrarectal lidocaine is an effective treatment for abdominal pain associated with diarrhea-predominant irritable bowel syndrome. Journal of Pain. 6, 493-496 (2005).
  4. Chey, W. D., et al. Linaclotide for irritable bowel syndrome with constipation: a 26-week, randomized, double-blind, placebo-controlled trial to evaluate efficacy and safety. Am J Gastroenterol. 107, 1702-1712 (2012).
  5. Rao, S., et al. A 12-week, randomized, controlled trial with a 4-week randomized withdrawal period to evaluate the efficacy and safety of linaclotide in irritable bowel syndrome with constipation. Am J Gastroenterol. 107, 1714-1724 (2012).
  6. Busby, R. W., et al. Pharmacologic properties, metabolism, and disposition of linaclotide, a novel therapeutic peptide approved for the treatment of irritable bowel syndrome with constipation and chronic idiopathic constipation. J Pharmacol Exp Ther. 344, 196-206 (2013).
  7. Mei, N. Intestinal chemosensitivity. Physiol Rev. 65, 211-237 (1985).
  8. Mei, N., Lucchini, S. Current data and ideas on digestive sensitivity. J Auton Nerv Syst. 41, 15-18 (1992).
  9. Su, X., Gebhart, G. F. Mechanosensitive pelvic nerve afferent fibers innervating the colon of the rat are polymodal in character. J Neurophysiol. 80, 2632-2644 (1998).
  10. McMahon, S. B., Morrison, J. F. Spinal neurones with long projections activated from the abdominal viscera of the cat. J Physiol. 322, 1-20 (1982).
  11. Cervero, F., Sann, H. Mechanically evoked responses of afferent fibres innervating the guinea-pig's ureter: an in vitro study. J Physiol. 412, 245-266 (1989).
  12. Sengupta, J. N., Gebhart, G. F. Mechanosensitive properties of pelvic nerve afferent fibers innervating the urinary bladder of the rat. J Neurophysiol. 72, 2420-2430 (1994).
  13. Sengupta, J. N., Gebhart, G. F. Characterization of mechanosensitive pelvic nerve afferent fibers innervating the colon of the rat. J Neurophysiol. 71, 2046-2060 (1994).
  14. Habler, H. J., Janig, W., Koltzenburg, M. Activation of unmyelinated afferent fibres by mechanical stimuli and inflammation of the urinary bladder in the cat. J Physiol. 425, 545-562 (1990).
  15. Habler, H. J., Janig, W., Koltzenburg, M. A novel type of unmyelinated chemosensitive nociceptor in the acutely inflamed urinary bladder. Agents Actions. 25, 219-221 (1988).
  16. Brierley, S. M., Jones, R. C. 3rd, Gebhart, G. F., Blackshaw, L. A. Splanchnic and pelvic mechanosensory afferents signal different qualities of colonic stimuli in mice. Gastroenterology. 127, 166-178 (2004).
  17. Meyer, R. A., Davis, K. D., Cohen, R. H., Treede, R. D., Campbell, J. N. Mechanically insensitive afferents (MIAs) in cutaneous nerves of monkey. Brain Res. 561, 252-261 (1991).
  18. Handwerker, H. O., Kilo, S., Reeh, P. W. Unresponsive afferent nerve fibres in the sural nerve of the rat. J Physiol. 435, 229-242 (1991).
  19. Feng, B., Gebhart, G. F. Characterization of silent afferents in the pelvic and splanchnic innervations of the mouse colorectum. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 300, G170-G180 (2011).
  20. Feng, B., La, J. H., Schwartz, E. S., Gebhart, G. F. Irritable bowel syndrome: methods, mechanisms, and pathophysiology. Neural and neuro-immune mechanisms of visceral hypersensitivity in irritable bowel syndrome. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, G1085-G1098 (2012).
  21. Feng, B., et al. Long-term sensitization of mechanosensitive and -insensitive afferents in mice with persistent colorectal hypersensitivity. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, G676-G683 (2012).
  22. Feng, B., et al. Altered colorectal afferent function associated with TNBS-induced visceral hypersensitivity in mice. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303, G817-G824 (2012).
  23. Feng, B., Brumovsky, P. R., Gebhart, G. F. Differential roles of stretch-sensitive pelvic nerve afferents innervating mouse distal colon and rectum. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 298, G402-G409 (2010).
  24. Feng, B., et al. Activation of guanylate cyclase-C attenuates stretch responses and sensitization of mouse colorectal afferents. J Neurosci. 33, 9831-9839 (2013).
  25. Jolliffe, I. T. Principal component analysis. , 2nd, Springer. New York, NY. (2002).
  26. La, J. H., Feng, B., Schwartz, E. S., Brumovsky, P. R., Gebhart, G. F. Luminal hypertonicity and acidity modulate colorectal afferents and induce persistent visceral hypersensitivity. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303, G802-G809 (2012).
  27. Christianson, J. A., et al. plasticity and modulation of visceral afferents. Brain Research Reviews. 60, 171-186 (2009).
  28. Kiyatkin, M. E., Feng, B., Schwartz, E. S., Gebhart, G. F. Combined genetic and pharmacological inhibition of TRPV1 and P2X3 attenuates colorectal hypersensitivity and afferent sensitization. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 305, G638-G648 (2013).
  29. Brumovsky, P. R., Feng, B., Xu, L., McCarthy, C. J., Gebhart, G. F. Cystitis increases colorectal afferent sensitivity in the mouse. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 297, G1250-G1258 (2009).
  30. Shinoda, M., Feng, B., Gebhart, G. F. Peripheral and central P2X receptor contributions to colon mechanosensitivity and hypersensitivity in the mouse. Gastroenterology. 137, 2096-2104 (2009).
  31. Tanaka, T., Shinoda, M., Feng, B., Albers, K. M., Gebhart, G. F. Modulation of visceral hypersensitivity by glial cell line-derived neurotrophic factor family receptor α-3 in colorectal afferents. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 300, G418-G424 (2011).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Krebs

مقالات ذات صلة