يعد تخليق الأنواع غير المتماثلة من الحديد تحديا باستخدام تقنيات الحل. يركز هذا التقرير على الطرق المنفذة لإنتاج اقتران حيوي من الحديد والبيوتين باستخدام تفاعلات سهلة ونظيفة يتم إنجازها عن طريق تخليق الطور الصلب. يظهر دمج جزء من الثيولات لنقل القدرة على الشلل على أسطح الذهب.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
منهجية الاصطناعية لغير المتماثلة الفيروسين المستمدة الأنظمة الحيوية المزدوجة عبر الصلبة منهجية تستند الراتنج المرحلة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الكشف المبكر هو المفتاح لنجاح العلاج لمعظم الأمراض، وأمر لا بد منه ولا سيما لتشخيص وعلاج أنواع عديدة من السرطان. التقنيات الأكثر شيوعا المستخدمة والتصوير طرائق مثل التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI)، البوزيترون الانبعاثات التضاريس (PET)، والطوبوغرافيا بالكمبيوتر (CT) وهما الأمثل لفهم الهيكل المادي للمرض ولكن يمكن إلا أن يكون أداؤها مرة واحدة كل أربع ل ستة أسابيع بسبب استخدام مواد التصوير والتكلفة الإجمالية. مع هذا في الاعتبار، وتطوير "نقطة الرعاية" التقنيات، مثل أجهزة الاستشعار التي تقييم مرحلة المرض و / أو فعالية العلاج في مكتب الطبيب، والقيام بذلك في الوقت المناسب، من شأنه إحداث ثورة في بروتوكولات العلاج. 1 كما وسيلة لاستكشاف أجهزة الاستشعار الفيروسين استنادا للكشف عن جزيئات ذات الصلة بيولوجيا 2، وقد وضعت وسائل لإنتاج الفيروسين البيوتين الحيوي تقارن الموصوفة هنا. وسوف يركز هذا التقرير على نظام البيوتين-الفيروسين-السيستين التي يمكن أن يجمد على سطح الذهب.
المقدمة
أجهزة الاستشعار والأجهزة الصغيرة التي تستخدم تقنية التعرف الجزيئية البيولوجية كمنصة لتحليل انتقائي وتستخدم لخصوصيتها، والسرعة، ومنخفضة التكلفة. أجهزة الاستشعار الكهروكيميائية للكشف عن الجزيئات الحيوية هي في طليعة هذا المجال نظرا لبساطتها، وفعالية التكاليف، وحساسية عالية. 1،3 تشريح العام لهذه المجسات هو القطب مجهزة جزيء الاعتراف محدد لعلامة البيولوجية للاهتمام . ملزمة من العلامات البيولوجية من قبل جزيء الاعتراف يؤدي إلى التغيير المحلي من إمكانات أو الحالية التي يمكن الكشف عنها بواسطة قياس بسيط. حتى الآن شاردة الاعتراف يمكن أن تتراوح من الانزيمات، والأجسام المضادة 4-8، 9-12 خلايا بأكملها، 13-16 مستقبلات،
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. توليف البيوتين-FC-السيستين (1)
- طرق المرحلة الصلبة لإنتاج الراتنجات ملزمة 1.
- وضع البيوتين الراتنج تحميل (250 ملغ، 0.145 ملمول) في حقنة fritted وتنتفخ الراتنج عن طريق وضع ثنائي ميثيل الفورماميد (5 مل)، وتهز حقنة على شاكر مختبر لمدة 20 دقيقة. طرد الحل وأكرر ثنائي ميثيل الفورماميد تورم واحد مزيد من الوقت.
- إزالة مجموعة حماية Fmoc بإضافة 4-6 مل من 20٪ تأكسد في ثنائي ميثيل الفورماميد إلى ح....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ويظهر على شكل الراتنج ملزمة من 1 في الشكل 2. المرفق التساهمية المكون الفيروسين يثير للون البرتقالي إلى الخرز الراتنج التي هي مستمرة مع الغسيل المستمر ومما يشير إلى حدوث الحديد يجمد يحتوي المجمع على العكس من امتصاص الحديد من قبل عنصر PEG من حبة الراتنج. شكل خالية من الراتنج من 1 مطابق في اللون إلى الخرز الراتنج. بعد إزالة المجمع من الراتنج الخرز، ونقاء والغلة (68٪) الناتجة عن الطرق هو أعلى بكثير من منهجية حل نموذجي. وأظهر تحليل الع.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
توليف مشتقات الفيروسين غير المتماثلة يتحدى في الحل. على سبيل المثال، محاولات لإنتاج 1 في نتج الحل في عوائد منخفضة من المنتج المطلوب (أقل من 20٪). وبالمثل، أدت ردود فعل الاستفادة 1'-الأمينية-الفيروسين حمض الكربوكسيلية (بلا Fmoc) وراتنج البيوتين ملزمة في المنتج غير قابل للذوبان يتفق مع المنتج بلمرة التي أبلغ عنها Baristic وآخرون. والحد الأدنى من المنتج. 47 معقد هذا أيضا الفيروسين ومشتقاته يجري ضوء حساسية وأن المتجانسين الأمينية عرضة .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
وأيد كغ من قبل المنحة P-1760 مؤسسة RA ولش، TCU معهد اندروز الرياضيات وعلوم التربية (لKG)، بحوث TCU والإبداع آخر غرانت (لKG) وTCU SERC غرانت (لJHS).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| راتنج البيوتين نوفاتاغ | NovaBiochem | 8550510001 | |
| TORVIQ 10 مل حقنة Luer Lock Fritted | Fisher | NC9299151 | |
| بيبيريدين | أكروس | P / 3520 / PB05 | |
| اختبار النينهيدرين | Sigma-Aldrich | 60017-1ea | |
| 1'-Fmoc-amino-ferrocene-1-carboxylic | acid Omm طلب خاص علمي | ||
| <م > ن ، ن & برايم ؛ < / م > - ثنائي الأيزوبروبيل كاربوديميد | سيجما ألدريتش | D125407-5G | |
| Fmoc-Cys (Trt) - OH | Novabiochem | 8520080025 | |
| حمض ثلاثي فلورو أسيتيك | سيجما ألدريتش | T5408 | |
| 1،2-إيثانيديثيول | سيجما ألدريتش | 2930 | |
| ثلاثي الأيزوبروبيل سيلان | سيجما ألدريتش | 233781 | |
| أنابيب إيبندورف (20 مل) | أي مصدر | ||
| للميثانول | أي مصدر | يجف مع المناخل الجزيئية قبل الاستخدام وتخزينه في زجاجة وسائط 100 مل لسهولة الاستخدام | |
| ثنائي كلورو ميثان | أي مصدر | يجف بالمناخل الجزيئية قبل الاستخدام ويخزن في زجاجة وسائط 100 مل لسهولة الاستخدام | |
| ثنائي ميثيل فورماميد | أي مصدر | يجف بالمناخل الجزيئية قبل الاستخدام & تخزينها في زجاجة وسائط سعة 100 مل لسهولة الاستخدام | |
| بأجهزة الطرد المركزي | أي مصدر |
المراجع
- Wang, J. Electrochemical biosensors: towards point-of-care cancer diagnostics. Biosens Bioelectron. 21 (10), 1887-1892 (2006).
- Scarborough, J. H., Brusoski, K., Brewer, S., Green, K. N. Solid phase synthesis of ferrocene-biotin bioconjugates and reactivity with avidin. A paradigm for development of electrochemical biosensors. , Texas Christian University. Fort Worth, Texas. (2014).
- Zhang, S., Zheng, F., Wu, Z., Shen, G., Yu, R.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
