مقالة منهجية

البروتين تنقية تقنية تسمح الكشف عن Sumoylation وUbiquitination من الناشيء الخميرة الحيز الحركي البروتينات Ndc10 وNdc80

DOI:

10.3791/52482

⸱

مايو 3, 2015

 ,  , 
1Genetics Branch, Center for Cancer Research, National Cancer Institute, National Institute of Health

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تصف هذه المخطوطة الكشف عن sumoylation وubiquitination من البروتينات الحيز الحركي، Ndc10 وNdc80، في مهدها خميرة الخباز.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التعديلات بعد متعدية (PTMs)، مثل الفسفرة، مثيلة، أستلة، ubiquitination، وsumoylation، تنظيم وظيفة الخلوية من العديد من البروتينات. PTMs من البروتينات الحيز الحركي التي تربط مع DNA القسيم المركزي توسط المؤمنين العزل الصبغي للحفاظ على استقرار الجينوم. النهج البيوكيميائية مثل مطياف الكتلة وتحليل لطخة الغربي هي الأكثر شيوعا لتحديد PTMs. هنا، يتم وصف طريقة تنقية البروتين الذي يسمح للكشف عن كل من sumoylation وubiquitination من البروتينات الحيز الحركي، Ndc10 وNdc80، في خميرة الخباز. سلالة التي تعبر عن polyhistidine العلم الموسومة Smt3 (HF-Smt3) وMyc على الموسومة Ndc10 أو شيد Ndc80 وتستخدم لدراساتنا. للكشف عن sumoylation أوجدنا بروتوكول لتقارب تنقية صاحب الموسومة البروتينات sumoylated باستخدام الخرز النيكل ويستخدم تحليل لطخة الغربية مع مكافحة Myc على الأجسام المضادة للكشف عن sumoylated Ndc10 لالثاني Ndc80. للكشف عن ubiquitination، ونحن وضعت بروتوكولا للمناعي من البروتينات Myc على الموسومة ويستخدم تحليل لطخة الغربية مع مكافحة UB الأجسام المضادة لإظهار أن Ndc10 وNdc80 وubiquitinated. نتائجنا تظهر ان حاتمة الموسومة البروتين من الفائدة في صاحب العلم الموسومة سلالة Smt3 يسهل الكشف عن PTMs متعددة. ينبغي أن يسمح الدراسات المستقبلية استغلال هذه التقنية لتحديد وتوصيف التفاعلات البروتينية التي تعتمد على PTM معين.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ubiquitination وsumoylation السماح للتصريف بتحول والصغيرة اليوبيكويتين مثل معدل (SUMO؛ Smt3 في S. خميرة 1) إلى بروتين الهدف، على التوالي. PTMs من البروتينات الحيز الحركي تؤثر على مستويات الخلوية وتفاعلات البروتين البروتين خلال مختلف مراحل دورة الخلية لضمان المؤمنين كروموسوم العزل. على سبيل المثال، يتم تنظيم مستويات الخلايا من Cse4 / CENP-A وبروتين الحيز الحركي الخارجي Dsn1 التي كتبها بوساطة بتحول والتحلل البروتيني لضمان الاستقرار الجينوم 2-5. زعزعة استقرار إرفاق ملفات-الحيز الحركي أنيبيب غير صحيحة يتطلب B كيناز Ipl1 / أورورا، التي phosphorylates Dam1 وNdc80 المجمعات التي تتفاعل مباشرة مع ميكروتثبول 6-8. على الرغم من تحديد أكثر من سبعين البروتينات الحيز الحركي، وهناك عدد قليل جدا من الدراسات إلى أن التحقيق في إدخال تعديلات على هذه البروتينات مع PTMs، على سبيل المثال، بتحول وSUMO. وجود قيود الرئيسي هو القدرة على الحفاظ على PTMالصورة خلال تنقية وندرة الأجسام المضادة مخصصة للكشف عن PTMs مثل sumoylation، الفسفرة، مثيلة، وغيرها. توصيف البروتينات الحيز الحركي sumoylated Ndc10، Cep3، تستخدم Bir1، وNdc80 الأجسام المضادة مخصصة 9. بالإضافة إلى ذلك، تم Ndc10 المتورطين باعتبارها الركيزة لubiquitination 10. Hec1 الإنسان (Ndc80 في S. الخباز) هو الركيزة أيضا لubiquitination، التي تنظمها APC / C-hCdh1 E3 يغاز 11. ولذلك، Ndc10 وNdc80 هي مرشحة جيدة لتعظيم الاستفادة من بروتوكول للكشف عن كل من sumoylation وubiquitination في S. الخباز.

لتسهيل التعرف على sumoylation، اقمنا السلالات التي تعبر عن HF-Smt3 وMyc على الموسومة Ndc10 أو Ndc80. استخدام علامات حاتمة (HF: His6 العلم) يقلل الخلفية بسبب عبر التفاعل الذي كثيرا ما لوحظ في المصل بولكلونل أثيرت ضد بروتين مرشح. نحن وضعت بروتوكولا لتقاربتنقية تقارن HF-Smt3 ثم استخدام التجاري المضادة للعلم ومعاداة Myc على الأجسام المضادة للكشف عن وجود sumolyated Ndc10 وNdc80 في إعداد Smt3 تنقيته. لubiquitination أوجدنا بروتوكول مناعي تعديل يحفظ ubiquitination من البروتينات Myc على الحيز الحركي الموسومة وإجراء تحليل لطخة الغربية مع التجاري مكافحة UB الأجسام المضادة للكشف عن ubiquitination من Ndc10 وNdc80.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. نمو خلايا الخميرة

  1. تطعيم خلايا الخميرة في 30 مل من YPD (الجدول 1) في قارورة صغيرة. احتضان عند 30 درجة مئوية خلال الليل مع اهتزاز.
  2. تمييع الخلايا إلى كثافة ضوئية من 0.2 في 600 نانومتر (OD 600 = 0.2) في 50 مل من YPD واحتضان عند 30 درجة مئوية مع الهز.
  3. تنمو ثقافة إلى كثافة ضوئية من 1.0 في 600 نانومتر (OD 600 = 1.0).
  4. خلايا جهاز الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 2000 x ج وتجاهل طاف.
  5. resuspend الكرية خلية في 40 مل ماء معقم وأجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 2000 x ج لغسل الخلايا. تجاهل طاف وتخزين بيليه خلية في -20 ° C.

2. استخراج البروتينات

  1. Resuspend الخلايا في 0.5 مل من الجليد الباردة غوانيدين العازلة (الجدول 1) لفحص المنسدلة باستخدام الخرز superflow ني NTA أو العازلة A (الجدول 1) لمناعي. إبقاء الأنابيب على الجليد في جميع الأوقات.
  2. نقل إلى 2 مترل سقف المسمار الأنبوب.
  3. إضافة نفس الحجم من الخرز الزجاجي (جدول المواد).
  4. حبة تغلب على الخلايا في حبة الخافق صغيرة (جدول المواد) لمدة 2 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، ثم ضع على الجليد لمدة 2-3 دقيقة. كرر ذلك ثلاث مرات.
  5. دوامة على سرعة عالية عند 4 درجة مئوية لمدة 30-60 دقيقة. تحقق الخلايا التي تصور تحت المجهر للتأكد من أن الخلايا هي lysed.
    ملاحظة: الخلايا هي lysed ستظهر أشباح الظلام كما وتفتقر إلى الحدود أو شكل محدد. على النحو الأمثل ينبغي هي lysed لا يقل عن 80٪ من الخلايا.
  6. ثقب حفرة في الجزء السفلي من الأنبوب باستخدام دبوس دفعة وضعها في مجموعة (يجب أن يكون سقف المسمار فضفاضة) 15 مل أنبوب مخروطي الشكل.
  7. أجهزة الطرد المركزي في 1000 x ج لمدة 1 دقيقة لجمع المحللة.
  8. نقل المحللة إلى أنبوب الطرد المركزي الجزئي.
  9. الطرد المركزي في 15000 x ج لمدة 30 دقيقة في 4 درجة مئوية لجمع البروتينات المستخرجة.
  10. قياس تركيز البروتينات المستخرجة باستخدام أسا البروتينذ مجموعة (جدول المواد) وتطبيع كل مقتطفات لتحتوي على نفس كمية البروتين. جلب الحجم الإجمالي إلى 1 مل مع العازلة المناسبة.
    ملاحظة: يتم الحصول على حوالي 5 ملغ من البروتين الكلي من 50 OD 600 الخلايا.
  11. وفر 50 ميكرولتر (250 ميكروغرام من البروتين إذا كان البروتين الكلي المستخرجة من الخطوة 2.10 هو 5 ملغ)، واستخراج خلية كاملة (WCE). إضافة 50 ميكرولتر من 2X Laemmli عينة العازلة (الجدول 1)، واحتضان عند 100 درجة مئوية في كتلة الحرارة لمدة 3-5 دقيقة. تحميل 10 ميكرولتر من كل عينة في جل SDS-PAGE لتحليل البقعة الغربية (القسم 5: تحليل لطخة غربية).

3. تنقية HF-Smt3 تقارن

  1. الحصول على حبات superflow ني NTA (جدول المواد) اللازمة للتجارب (100 ميكرولتر من الخرز لكل عينة) من خلال انخفاض سرعة الطرد المركزي (800-1،500 x ج) لمدة 1 دقيقة. إزالة طاف.
  2. تغسل حبات 5X مع 1 مل من برنامج تلفزيوني (جدول المواد): المقلوب أعلى التغلبأسفل حتى يتم معلق الخرز، وجمع حبات بواسطة الطرد المركزي بسرعة منخفضة، وإزالة طاف.
  3. تعليق الخرز في 1 مل من العازلة غوانيدين (الجدول 1) وقسامة لهم في عدد من أنابيب الموافق عينات لتتم معالجتها. جمع حبات بواسطة الطرد المركزي بسرعة منخفضة، وإزالة طاف. مزيج من الخرز بشكل جيد من قبل قلب أعلى الإفراط في القاع.
    ملاحظة: مزيج الخرز بشكل جيد من قبل قلب كبير على القاع.
  4. لكل عينة، إضافة 950 ميكرولتر من WCE المتبقية (من الخطوة 2.11: استخراج البروتينات) إلى 100 ميكرولتر من الخرز superflow ني NTA.
  5. احتضان على منصة هزاز عند 4 درجة مئوية لمدة لا تقل عن 4 ساعة أو طوال الليل.
  6. أجهزة الطرد المركزي في 800-1،500 x ج لمدة 1 دقيقة على 4 درجات مئوية.
  7. وفر 50 ميكرولتر كما طاف (SUP). إضافة 50 ميكرولتر من 2X Laemmli عينة العازلة واحتضان عند 100 درجة مئوية في كتلة الحرارة لمدة 3-5 دقيقة. تحميل 10 ميكرولتر من كل عينة في جل SDS-PAGE لتحليل البقعة الغربية (القسم 5: الشرج لطخة غربيةيسيس).
  8. تغسل حبات مرة واحدة مع 1 مل من العازلة غوانيدين لمدة 5-10 دقيقة على منصة هزاز.
  9. تغسل حبات 5X مع 1 مل من كسر العازلة (الجدول 1) لمدة 5-10 دقيقة على منصة هزاز.
  10. الخرز resuspend في 90 ميكرولتر من 2X Laemmli عينة العازلة.
  11. إضافة 10 ميكرولتر من 1 M إميدازول.
    ملاحظة: إيميدازول يساعد على فصل البروتين صاحب الموسومة من الخرز ني NTA بسبب التنافس التفاعل بين إميدازول والخرز.
  12. احتضان عند 100 درجة مئوية في كتلة الحرارة لمدة 3-5 دقيقة.
  13. الدوامة، ثم الطرد المركزي في 13000 x ج لمدة 30 ثانية. طاف لنقل أنبوب جديد.
  14. الحمل 10-20 ميكرولتر من كل عينة في جل SDS-PAGE لتحليل البقعة الغربية (القسم 5: تحليل لطخة غربية).
    ملاحظة: 10-20 ميكرولتر يتوافق مع 0،5-1،0 ملغ من المدخلات، إذا تم استخدام 5 ملغ من WCE.

4. مناعي من Myc على الموسومة الحيز الحركي البروتينات

  1. الحصول على مكافحة ج. Myc على تقارب الاغاروز هلام لtibody (جدول المواد) الضروري لتجارب (25 ميكرولتر من الراتنج لكل عينة) من خلال انخفاض سرعة الطرد المركزي (800-1،500 x ج). إزالة طاف.
  2. غسل 5X الراتنج مع 1 مل من العازلة A: عكس كبار الإفراط في أسفل حتى يتم معلق الراتنج، وجمع الراتنج التي كتبها انخفاض سرعة الطرد المركزي، وإزالة طاف.
  3. تعليق الراتنج في 1 مل من العازلة ألف وقسامة لهم في عدد من أنابيب الموافق عينات لتتم معالجتها. جمع الراتنج التي كتبها انخفاض سرعة الطرد المركزي، وإزالة طاف.
    ملاحظة: مزيج من الراتنج بشكل جيد من قبل قلب كبير الإفراط في القاع.
  4. إضافة 950 ميكرولتر من WCE المتبقية (من الخطوة 2.11: استخراج البروتينات) إلى 25 ميكرولتر من الراتنج.
  5. احتضان على منصة هزاز عند 4 درجات مئوية خلال الليل.
  6. أجهزة الطرد المركزي في 800-1،500 x ج لمدة 1 دقيقة على 4 درجات مئوية.
  7. وفر 50 ميكرولتر كما طاف (SUP). إضافة 50 ميكرولتر من 2X Laemmli عينة العازلة واحتضان عند 100 درجة مئوية في كتلة الحرارة لمدة 3-5 دقيقة. لوإعلان 10 ميكرولتر من كل عينة في جل SDS-PAGE لتحليل البقعة الغربية (القسم 5: تحليل لطخة غربية).
  8. غسل 5X الراتنج مع 1 مل من العازلة A: عكس كبار الإفراط في أسفل حتى يتم معلق الراتنج، وجمع الراتنج التي كتبها انخفاض سرعة الطرد المركزي، وإزالة طاف.
  9. Resuspend والراتنج في 100 ميكرولتر من عينة العازلة SUMEB (الجدول 1).
    ملاحظة: يحتوي عينة العازلة SUMEB 8 M اليوريا و 1٪ SDS (حالة تغيير طبيعة قوية).
  10. احتضان عند 100 درجة مئوية في كتلة الحرارة لمدة 3-5 دقيقة.
  11. الدوامة، ثم الطرد المركزي في 13000 x ج لمدة 30 ثانية. طاف لنقل أنبوب جديد.
  12. الحمل 10-20 ميكرولتر من كل عينة في جل SDS-PAGE لتحليل البقعة الغربية (القسم 5: تحليل لطخة غربية).
    ملاحظة: 10-20 ميكرولتر يتوافق مع 0،5-1،0 ملغ من المدخلات، إذا تم استخدام 5 ملغ من WCE.

5. ويسترن تحليل وصمة عار

  1. تحميل مقتطفات من البروتين على 4-12٪ مكرر تريس المواد الهلامية (جدول المواد) والأداء الإقتصادي الأداءاسندت الكهربائي في 120 V لمدة 90 دقيقة (العازلة على التوالي: جدول المواد).
  2. نقل البروتينات من الهلام إلى غشاء النيتروسليلوز (جدول المواد) باستخدام جهاز نقل في 30 V لمدة 90 دقيقة (العازلة نقل: جدول المواد).
  3. منع الغشاء في الحليب 5٪ / 1X TBST (TABLE1) لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
  4. احتضان الغشاء مع الأجسام المضادة الأولية (جدول المواد) في الحليب 5٪ / 1X TBST بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية. عن الأجسام المضادة الأولية، استخدم التخفيف من 1: 1000 (المضادة للعلم ومكافحة UB الأجسام المضادة) أو 1: 5000 (مكافحة Myc على الضد).
  5. غسل 3X غشاء لمدة 10 دقيقة لكل منهما مع 1X TBST.
  6. احتضان الغشاء مع الضد الثانوية (جدول المواد) في 5٪ حليب / 1X TBST لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة. استخدام 1: 5000 التخفيف من الأجسام المضادة الثانوية.
  7. غسل 3X غشاء لمدة 10 دقيقة لكل منهما مع 1X TBST.
  8. احتضان الغشاء مع ECL workiنانوغرام الحل (جدول المواد) لمدة 5 دقائق.
  9. تعرض الغشاء إلى الأزرق حساسة فيلم X-راي (جدول المواد) وتطوير استخدام مطور التلقائي (جدول المواد).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

للكشف عن sumoylation من البروتينات الحيز الحركي Ndc80 وNdc10، سلالات مع HF-Smt3 والبروتينات Myc على الحيز الحركي الموسومة (Ndc80 أو Ndc10) شيدت (الجدول 2)، كما هو موضح سابقا 9،12. تم تنقيته تقارن HF-Smt3 تقارب باستخدام الخرز ني NTA. تحليل لطخة الغربي من تنقية HF-Smt3 مع مضاد للعلم الضد يسمح الكشف عن أشكال sumoylated من ركائز SUMO التي كانت غائبة في سلالة تحكم دون HF-Smt3 (الشكل 1A و 1B، اللوحة اليسرى). كما هو متوقع، تم ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتستخدم على نطاق واسع علامات حاتمة مثل HA، Myc على، العلم، وGST لتحليل الكيمياء الحيوية للبروتينات. بناء سلالات مع HF-Smt3 والبروتينات Myc على الحيز الحركي الموسومة، مثل Ndc10 وNdc80، ويسهل الكشف عن PTMs مثل sumoylation وubiquitination. HF-Smt3 هدم مقايسة يسمح للكشف عن البروتينات الحيز الحركي sumoylated، Ndc10 وNdc80 (الشكل 1). بروتوكول تنقية تقارب وتحليل لطخة غربية باستخدام الأجسام المضادة ضد العلم تنشئ خصوصية التفاعل بين HF-Smt3 والبروتينات المستهدفة، والبروتينا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر الدكتور أوليفر كيرشر على الدعم والمشورة وأعضاء مختبر البصري على دعمهم وتعليقاتهم على الورقة. تم دعم هذا العمل من قبل برنامج المعاهد الوطنية للصحة للأبحاث الجماعية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الخرز الزجاجيBioSpec المنتجات110791050.5 مم قطر
مصغرة الخرزBioSpec المنتجات# 6938 خلايا تعطيل
Ni-NTA superflowQiagen30430100 مل
كوكتيل مثبط البروتيازSigma-AldrichP82151 مل
Anti-C-Myc agarose gel affinity antbody المنتجة في الأرنبSigma-AldrichA74701 مل
جسم مضاد أحادي النسيلة مضاد للعلم M2 يتم إنتاجه في الفأرالأساسي Sigma-AldrichF1804، التخفيف 1: 1,000
الجسم المضاد c-Myc (A-14) سانتاكروز للتكنولوجيا الحيويةsc-789الجسم المضاد الأساسي ، التخفيف 1: 5,000
الجسم المضاد للفأر المنقى أحادي النسيلة 9E10CovanceMMS-150Pالجسم المضاد الأساسي ، التخفيف 1: 5,000
Ubiquitin (P4G7) الجسم المضاد أحادي النسيلةCovanceMMS-258Rالجسم المضاد الأساسي ، التخفيف 1: 1,000
ECL Rabbit IgG ، الجسم المضاد الثانوي المرتبط ب HRP بالكامل AbGE Healthcare Life SciencesNA934V، التخفيف 1: 5,000
ECL Mouse IgG ،GE Healthcare Life SciencesNA931V، التخفيف 1: 5,000
مقايسة بروتين DCBio-Rad500-0116
غشاء النيتروسليلوزNovexLC20010.45 مم حجم المسام
NuPAGE 4-12٪ Bis-Tris Protein GelsNovexNP0321BOX1.0 مم ، 10 آبار
NuPAGE MES SDS تشغيل BufferNovexNP000220x
NuPAGE Transfer BufferNovexNP0006-120x
SuperSignal West Pico ChemiluminescentSubstrate Thermo Scientific34078
10x PBS pH7.4GIBCO70011-044
فيلم الأشعة السينية الحساس الأزرقDbioDBOF30003
المطور التلقائيKodakM35AX-OMAT
NocodazoleSigma-AldrichM140450 مجم
MG-132Selleck ChemicalsS261925 مجم
الجسم المضاد الجسم المضاد الثانوي المرتبط ب HRP بالكامل Ab

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Johnson, P. R., Hochstrasser, M. SUMO-1: Ubiquitin gains weight. Trends Cell Biol. 7, 408-413 (1997).
  2. Hewawasam, G., et al. Psh1 is an E3 ubiquitin ligase that targets the centromeric histone variant Cse4. Mol Cell. 40, 444-454 (2010).
  3. Ranjitkar, P., et al. An E3 ubiquitin ligase prevents ectopic localization of the centromeric histone H3 variant via the centromere targeting domain. Mol Cell. 40, 455-464 (2010).
  4. Au, W. C., et al. A novel role of the N terminus of budding yeast histone H3 variant Cse4 in ubiquitin-mediated proteolysis. Genetics. 194, 513-518 (2013).
  5. Akiyoshi, B., et al. The Mub1/Ubr2 ubiquitin ligase complex regulates the conserved Dsn1 kinetochore protein. PLoS Genet. 9, e1003216(2013).
  6. Biggins, S., et al. The conserved protein kinase Ipl1 regulates microtubule binding to kinetochores in budding yeast. Genes Dev. 13, 532-544 (1999).
  7. Cheeseman, I. M., et al. Phospho-regulation of kinetochore-microtubule attachments by the Aurora kinase Ipl1p. Cell. 111, 163-172 (2002).
  8. Liu, D., Lampson, M. A. Regulation of kinetochore-microtubule attachments by Aurora B kinase. Biochem Soc Trans. 37, 976-980 (2009).
  9. Montpetit, B., Hazbun, T. R., Fields, S., Hieter, P. Sumoylation of the budding yeast kinetochore protein Ndc10 is required for Ndc10 spindle localization and regulation of anaphase spindle elongation. J Cell Biol. 174, 653-663 (2006).
  10. Furth, N., et al. Exposure of bipartite hydrophobic signal triggers nuclear quality control of Ndc10 at the endoplasmic reticulum/nuclear envelope. Mol Biol Cell. 22, 4726-4739 (2011).
  11. Li, L., et al. Anaphase-promoting complex/cyclosome controls HEC1 stability. Cell Prolif. 44, 1-9 (2011).
  12. Takahashi, Y., Yong-Gonzalez, V., Kikuchi, Y., Strunnikov, A. SIZ1/SIZ2 control of chromosome transmission fidelity is mediated by the sumoylation of topoisomerase II. Genetics. 172, 783-794 (2006).
  13. Liu, C., Apodaca, J., Davis, L. E., Rao, H. Proteasome inhibition in wild-type yeast Saccharomyces cerevisiae cells. Biotechniques. 42, 158(2007).
  14. Kitamura, E., Tanaka, K., Kitamura, Y., Tanaka, T. U. Kinetochore microtubule interaction during S phase in Saccharomyces cerevisiae. Genes Dev. 21, 3319-3330 (2007).
  15. Gascoigne, K. E., Cheeseman, I. M. Kinetochore assembly: if you build it, they will come. Curr Opin Cell Biol. 23, 102-108 (2011).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Ndc10 Ndc80 Saccharomyces cerevisiae

مقالات ذات صلة