مقالة منهجية

جيل من الخلايا الجذعية الدهنية لجسم الإنسان من خلال فقد التمايز من الناضجة الخلايا الشحمية في الثقافات السقف

11.6K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/52485

⸱

مارس 7, 2015

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1IUCPQ Research Center, 2CHU de Québec Research Center, 3Laval University

في هذه المقالة

ملخص

قد تمثل الخلايا الشحمية الناضجة مصدرا وفيرا للخلايا الجذعية من خلال عدم التمايز ، مما يؤدي إلى مجموعة متجانسة من الخلايا الشبيهة بالخلايا الليفية. يستخدم هضم الكولاجيناز لعزل الخلايا الشحمية الناضجة عن الدهون البشرية. الهدف من بروتوكولنا هو الحصول على خلايا دهنية متعددة القدرات وغير متمايزة من الخلايا الشحمية البشرية الناضجة.

الملخص

ثبت أن الخلايا الشحمية الناضجة تعكس نمطها الظاهري إلى خلايا شبيهة بالخلايا الليفية في المختبر من خلال تقنية تسمى ثقافة السقف. يمكن أيضا عزل الخلايا الشحمية الناضجة من الأنسجة الدهنية الطازجة لتوصيف وظيفتها وخصائصها الأيضية الخاصة بالمستودع. هنا ، نصف بروتوكولا راسخا لعزل الخلايا الشحمية الناضجة من الأنسجة الدهنية باستخدام هضم الكولاجيناز ، والخطوات اللاحقة لإجراء مزارع السقف. باختصار ، يتم تحضين الأنسجة الدهنية في مخزن مؤقت Krebs-Ringer-Henseleit يحتوي على الكولاجيناز لتعطيل مصفوفة الأنسجة. يتم جمع الخلايا الشحمية الناضجة العائمة على السطح العلوي للمخزن المؤقت. يتم طلاء الخلايا الناضجة في قارورة T25 مملوءة بالكامل بالوسائط وتحضنها رأسا على عقب لمدة أسبوع. يسمح نهج استزراع الألواح البديل المكون من 6 آبار بتوصيف الخلايا الشحمية التي تخضع لإزالة التمايز. يتغير مورفولوجيا الخلايا الشحمية بشكل جذري بمرور وقت الثقافة. يمكن إجراء التألق المناعي بسهولة على الشرائح المزروعة في ألواح ذات 6 آبار كما يتضح من تلطيخ التألق المناعي FABP4. يوجد بروتين FABP4 في الخلايا الشحمية الناضجة ولكن يتم تنظيمه بشكل منخفض من خلال تفكيك الخلايا الدهنية. قد يمثل تفكيك الخلايا الشحمية الناضجة وسيلة جديدة للعلاج الخلوي وهندسة الأنسجة.

المقدمة

في المختبر يتم تحقيق عدم التمايز بين الخلايا الشحمية الناضجة من خلال تقنية تسمى ثقافة السقف1. بسبب ميلها الطبيعي إلى الطفو في المحاليل المائية ، تلتصق الخلايا الشحمية الناضجة المعزولة بسطح قارورة مقلوبة مملوءة بالكامل بوسط الاستزراع. على مدى بضعة أيام ، تقوم الخلايا بتعديل مورفولوجيتها الكروية وتصبح خلايا شبيهة بالخلايا الليفية. الخلايا الناتجة ، التي تسمى خلايا الدهون غير المتمايزة (DFAT) ، متعددةالقدرات 2. المقالات البحثية حول تفكيك الخلايا الشحمية ، خاصة على الخلايا البشرية ، محدودة. ومع ذلك ، فقد قدموا بالفعل معلومات مثيرة للاهتمام فيما يتعلق بتعدد القدرات والنمط الظاهري للخلية والقدرة التكاثرية لخلايا DFAT2. تم بنجاح فصل الخلايا الشحمية الناضجة التي تنشأ من أجزاء دهنية مختلفة بما في ذلك تلك التي تنشأ من الأنسجة الدهنية الحشوية وتحت الجلد البشرية2-4. بالإضافة إلى هذه المستودعات ، أخذ كيشيموتو والمتعاونون معه عينات من الأنسجة الدهنية من ضمادات دهون الخد والخلايا الشحمية غير المتمايزة إلى خلايا DFAT5. نجح ماتسوموتو والمتعاونون في إنشاء خلايا DFAT تحت الجلد من المرضى الذين يغطون مجموعة واسعة من الأعمار ، وكان لدى غالبية الخلايا معدل تكاثر مرتفع وأقل من 6٪ من الشيخوخة حتى بعد 10 مقاطع في الثقافة2.

تم إعادة تمايز خلايا DFAT بنجاح إلى عدة سلالات ، بما في ذلك السلالات الشحمية والعظمية والغضروفية والأعصابية2،3،6. تعبر هذه الخلايا عن العديد من علامات الخلايا الجذعية الجنينية مثل Nanog والعوامل الأربعة متعددة القدرات المحددة Oct4 و c-myc و Klf4 و Sox23. كما أنها تعبر عن علامات خاصة بكل طبقة من الطبقات الجرثوميةالثلاث 7. بالإضافة إلى ذلك ، تشبه خلايا DFAT الخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من نخاع العظام (MSC المشتقة من BM) بناء على توقيعها اللاجيني3. من خلال استغلال قدرة الخلايا الجذعية لخلايا DFAT ، قامت العديد من المجموعات بالتحقيق في قدرتها على علاج أو تحسين الأمراض المختلفة8،9. لوحظت تحسينات في الحالات المرضية ، مثل أنسجة القلب المنكسرة وإصابة الحبل الشوكي وضعف العضلة العاصرة في مجرى البول ، مع حقن خلايا DFAT في نماذج الفئران للمرض10-12.

بالإضافة إلى خصائص الخلايا الجذعية لخلايا DFAT ، فقد تمثل نموذجا خلويا جديدا لدراسات فسيولوجيا الخلايا الشحمية. غالبا ما يستخدم خط الخلايا 3T3-L1 لهذا الغرض حيث تتمايز هذه الخلايا إلى خلايا شحمية ملتصقة ومخزنة للدهون تحت التحفيز الداكن13. ومع ذلك ، تنشأ هذه الخلايا من أنسجة جنين الفأر13. أيضا ، لا يمكن التحقيق في خصوصية المستودع باستخدام هذا النموذج وقد لا يعكس بشكل كامل فسيولوجيا الخلايا الشحمية البشرية14. تعمل المختبرات الأخرى مع الخلايا الدهنية المعزولة من مستودعات دهون الفئران ، لكن توزيع الدهون ليس ثنائي الشكل في الفئران والتكوين التشريحي لتجويف بطن القوارض يمنع من الاستقراء مباشرة إلى البشر15. من أجل دراسة الخلايا الشحمية في سياق علم الأمراض الفيزيائية للسمنة البشرية ، أصبح النظر في توزيع الدهون في الجسم والاختلافات الخاصة بمستودع الدهون أمرا ضروريا16. أدت بعض القيود المفروضة على مزارع الخلايا الدهنية الأولية ، بما في ذلك كميات الخلايا التي تم الحصول عليها من عينات خزعة الأنسجة الدهنية وشيخوختها بعد بضع مقاطع في الثقافة ، إلى الحاجة إلى نماذج بديلة. قام بيريني والمتعاونون به بالتحقيق في خصوصية المستودع في التعبير الجيني لخلايا DFAT الناشئة من الدهون الحشوية وتحت الجلد وقارنوها بالخلايا الجذعية المشتقة من الدهون (ASC) من نفس مستودع الدهون. لقد أظهروا أن الاختلافات في التعبير الجيني والوظيفة توجد بشكل أساسي بين المستودعات أكثر من أنواع الخلايا ، مما يشير إلى أن خلايا DFAT قريبة من الناحية الفسيولوجية إلى ASC من نفس المستودع. قد تمثل خلايا DFAT بديلا مثيرا للاهتمام للنماذج المتاحة للدراسات حول توزيع الدهون في الفيزيولوجيا المرضية للسمنة البشرية. علاوة على ذلك ، تعد زراعة السقف طريقة واعدة للحصول على الخلايا الجذعية البالغة لأغراض هندسة الأنسجة.

هنا ، نصف هضم الكولاجيناز ، وهي تقنية مستخدمة على نطاق واسع لعزل الخلايا الشحمية الناضجة من عينات الدهون تحت الجلد و / أو الحشوية17 ، والخطوات اللاحقة لإجراء زراعة السقف وإزالة تمايز هذه الخلايا إلى خلايا متعددة القدرات تشبه الخلايا الليفية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

بيان الأخلاق: تمت الموافقة على المشروع من قبل لجنة أخلاقيات البحث IUCPQ وقبل التوظيف المريض. لأغراض هذه المادة / الفيديو، حصلنا على الأنسجة من 2 المرضى: 1) مريض الذكور البالغ من العمر 62 مع مؤشر كتلة الجسم من 50.7 كجم / م 2 و 2) مريضة البالغ من العمر 35 مع مؤشر كتلة الجسم من 57 كجم / م 2. تجارب يمكن أن يتم مع كل من المقصورات الدهون، ولكن لم تقتصر على مقصورة الدهون واحد لغرض هذا الفيديو. تم تنفيذ الجوانب التقنية للفيديو مع المريض (1) وأجري FABP4 المناعي مع الخلايا dedifferentiated من مريض 2.

تجهيز 1. عينة

  1. اسأل الجراحين لجمع الأنسجة الدهنية من المقصورات الدهون ثربية وتحت الجلد في وقت لعملية جراحية لعلاج البدانة بالمنظار.
  2. جلب عينات الدهنية بسرعة إلى المختبر في RT ومعالجة الفور.
  3. أداء الهضم في المختبر، في أجواء غير معقمة. الفي نهاية المطاف سوف يتم نقل الخلايا إلى غرفة الثقافة وزراعتها تحت ظروف معقمة. لتجنب التلوث، وإعداد عازلة KRH مع الماء المقطر ومرشح ومتابعة من قبل ترشيح (فلتر 0.22μM) قبل عملية الهضم. أنابيب نظيفة تماما مع الايثانول نقل مسبق في الخلية هود الثقافة لقارورة وإعداد لوحة.
  4. وضع الأنسجة الدهنية على طبق المرجحة قبل والوزن قياسي. إصلاح قطعة صغيرة من كل عينة الأنسجة (أقل من 1 سم 2) في 10٪ عازلة الفورمالين في RT لمدة 24 ساعة على الأقل قبل البارافين التضمين. استخدام هذه العينة جزءا لا يتجزأ من لتجارب المناعية (تقنية لا تظهر).
  5. ضع قطعة أخرى في أنبوب 50 مل وفلاش-تجميد في النيتروجين السائل قبل تخزينها في -80 ° C لمزيد من الدراسات على الأنسجة الدهنية كلها (على سبيل المثال، التعبير الجيني - تقنية لا تظهر).

2. كولاجيناز الهضم

  1. ضع قطعة الأنسجة الدهنية المتبقية في 50 مل تويكون للهضم.
  2. إضافة 4 مل من KRH-WB تستكمل مع كولاجيناز (350 U / مل) في كل غرام من العينة في أنبوب الهضم.
  3. تخطر الدهنية الأنسجة مع مقص.
  4. وضع مفروم تعليق الأنسجة الدهنية في شاكر، 37 ° C، و 90 دورة في الدقيقة كحد أقصى، على بعد 45 دقيقة الحضانة (بحد أقصى 1 ساعة).

3. تنقية الخلايا الشحمية وPreadipocytes

  1. من أجل حل شفافة مع قليل من قطع من الدهون من خلال النايلون 400 ميكرومتر شبكة في كوب من البلاستيك.
  2. مع ملاقط، وفرك إعداد الخلايا على شبكة من النايلون ويغسل مع 5 مل من KRH-WB.
  3. بدقة نقل تعليق خلية مرشح في أنبوب 50 مل مع أنابيب بلاستيكية في ذلك، وحقنة في 60cc تعلق في أقصى الأنابيب.
  4. السماح للتعليق مع الخلايا الشحمية ناضجة الوقوف لمدة حوالي 10 دقيقة، مما يسمح للخلايا للوصول إلى أعلى العازلة الطرح.
  5. نضح ببطء المخزن المؤقت في الجزء السفلي من الأنبوب باستخدام في 60cc syrinجنرال الكتريك الشفط.
  6. إضافة 20 مل من KRH-WB لغسل. كرر من الخطوة 3.4 ل2 يغسل إضافية.
  7. جمع المخزن المؤقت لجلب تعليق خلية شحمية إلى الحجم النهائي من 5 أو 10 مل، اعتمادا على كمية الخلايا. متابعة مع الخطوات الموجودة في القسم 5.
  8. استرداد جزء-انسجة الوعائية من المخزن المؤقت التي تم جمعها مع الحقنة في 60cc بواسطة الطرد المركزي (3،000 دورة في الدقيقة، RT، 5 دقائق) لمزيد من الثقافة الخلية الأولية إذا رغبت (تقنية لا تظهر).

4. الناضجة خلية شحمية عدد الخلايا

  1. تحميل 10 ميكرولتر من هز بلطف تعليق خلية شحمية في غرفة العد (haemocytometer). أداء عدد الخلايا في quadruplicate.
  2. حساب عدد الخلايا الناضجة معزولة.

5. الناضجة خلية شحمية فقد التمايز إلى T-25 قارورة

  1. ملء 25 سم 2 الأنسجة قارورة الثقافة إلى ¾ من حجم مع DMEM / F12-20٪ العجل المصل.
  2. وفقا لعدد خلايا، صب 500000 خلايا ناضجة في قارورة.
  3. ملء قارورة تماما باستخدام أنبوب 50ML مع المتوسطة وإزالة العديد من الفقاعات ممكن.
  4. المسمار غطاء unvented على القارورة.
  5. تنظيف القارورة مع الايثانول قبل الحضانة لتجنب التلوث.
  6. احتضان القارورة رأسا على عقب لمدة أسبوع دون لمسها لتجنب الحركة في الثقافة والذي قد يضر الالتزام الخلوية.
  7. قبل عكس القارورة في 7 أيام من ثقافة مقلوب، والتعامل معها بلطف القارورة وإزالة كافة المتوسطة في قارورة بواسطة الشفط، وتجنب الحركات المفاجئة.
  8. إضافة 12 مل من DMEM-F12-20٪ العجل المصل وزراعة الخلايا مع التقنيات القياسية. يمكن إضافة تصفيتها، وكأب تنفيس للقارورة.

6. الناضجة خلية شحمية فقد التمايز إلى لوحة 6 جيدا

  1. وضع ساترة على الجزء السفلي من كل بئر من لوحة 6 جيدا
  2. إضافة ½ "جلبة من البلاستيك على رأس كل ساترة.
  3. ملء الآبار مع 8 مل من 20٪ العجل المصل DMEM المتوسطة.
  4. وضع ساترة على كل جلبة البلاستيكية.
  5. إدراج طرف الماصة بين الشريحة والأنبوب لحقن الخلايا تحت الشريحة (50،000 الخلايا لكل بئر).
  6. احتضان لوحات في معيار ثقافة الخلية الحاضنة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ CO 2 لمدة أسبوع.
  7. ساترة العكسية مع خلايا المرفقة إلى كل منها يحتوي أيضا 2 مل من وسائل الإعلام تستكمل مع 20٪ مصل العجل ومتابعة الثقافة.
  8. استخدام ساترة مع الخلايا التي تمر فقد التمايز لأغراض عدة بما في ذلك المناعي (تقنية لا تظهر).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تحدث تغيرات شكلية الرئيسية لتنضج الخلايا الشحمية خلال فقد التمايز (الشكل 1). كما هو مبين في الشكل 2، كانت ملطخة الخلايا التي تمر فقد التمايز مع الأجسام المضادة لمكافحة FABP4 لتحليل مضان. أعربت الخلايا مع التشكل الجولة البروتين FABP4 في حين أن الغالبية العظمى من الخلايا مثل الخلايا الليفية لم يفعل ذلك. بعد فقد التمايز، وخلايا DFAT يمكن زراعتها مع الإجراءات القياسية لعدة مقاطع. لقد كنا قادرين على الوصول إلى أكثر من 15 ممرات للثربي البشري وخطوط الخلا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

فقد التمايز من الخلايا الشحمية ناضجة مع تقنية ثقافة السقف هو نهج جديد للحصول على الخلايا الجذعية الدهنية من عينة صغيرة من الأنسجة الدهنية الأم. بناء على خبرتنا وأن الآخرين 2، غرام واحد من الأنسجة غير كافية لوحة 25 سم 2 قارورة والحصول على عدد سكانها خلايا DFAT التي تم تظاهر التجانس التي كتبها بولوني والمتعاونين 3. يبدو خلية شحمية فقد التمايز ممكن مع الخلايا من أي جهة مانحة، بصرف النظر عن السن والجنس وغيرها من الخصائص. بين الناتج السكان من الحصول على...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

تم دعم هذه الدراسة من قبل مجلس أبحاث العلوم الطبيعية والهندسة في كندا Discovery Grant (371697-2011 ، AT). يريد المؤلفون الاعتراف بمساعدة جراحي السمنة الدكتورة S. Biron ، F-S. هولد ، إس ليبل ، أو ليسيلور ، بي مارسو ، وكذلك كريستين راسين وكارولين غانيون من بنك الأنسجة IUCPQ. نشكر السيد جاك كادوريت من الخدمات السمعية والبصرية التابعة للاتحاد الدولي للملكية الفكرية على تصوير الفيديو وتحريره.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الألبومين البقري في مصلSigmaA7906
الأدينوزينسيجماA4036
حمض الأسكوربيكSigmaA0278
NaClيمكن استخدام أي علامة تجارية
KClيمكن استخدام أي علامة تجارية
CaCl2< / sub>استخدام
أي علامة تجاريةMgCl2< / sub>استخدام أي علامة تجارية
KH2< / sub>PO4< / sub>استخدام أي علامة تجارية
HEPESاستخدام أي علامة تجارية
يمكن استخدام الجلوكوزيمكن استخدام أي علامة تجارية
من النوع الأول كولاجينازWorthington Biochemical CorpLS-004196
DMEM / F-12 ، HEPES ، بدون فينول أحمرGibco-Life Technologies11039-021أضف إلى متوسط: 20٪ مصل ربلة الساق ، جنتاميسين (50 & micro; جم / مل) و Fungizone (2.5 وميكرو ؛ جم / مل)
مصل العجل ، مكمل الحديد ، من العجول التي تتغذى على الحليب الصناعيSigmaC8056-500 مل
1/2 في البطانة البلاستيكيةIberville2704-CPSKU: 1000120918 (Home Depot)
النيتروجين السائلليند
فورمالين سولوتون ، محايد مخزن ، 10٪ملاقط
مقص
60 سم مكعب محاقنBD
بلاستيكية
Kraebs-Ringer-Henseleit مخزن مؤقت (KRH)تحضير مخزن التخزين المؤقت على النحو التالي: 25 ملي مولار HEPES درجة الحموضة 7.6 ، 125 ملي كلوريد الصوديوم ، 3.73 ملي كلوريد كلوريد ، 5 ملي مولار CaCl 2< / sub>.2H2< / sub>O ، 2.5 ملي مولار MgCl2< / sub>.6H2< / sub>O ، 1 [م] [ك<سب>2[إب<سب>4. اضبط الرقم الهيدروجيني على 7.4.
كربس رينجر هينسليت عازلة العمل (KRH-WB)أضف المكونات التالية حديثا إلى المخزن المؤقت KRH: 4٪ ألبومين مصل بقري ، 5 ملي مولار جلوكوز ، 0.1 وميكرو ؛ م الأدينوزين ، 560 & ميكرو ؛ حمض الأسكوربيك
M KRH-WB مكمل بالكولاجينازأضف 350 وحدة / مل من النوع الأول من الكولاجيناز
T25 قارورة ثقافة الأنسجة ذات الغطاء غير المهواةSarsted أو علامة تجارية
لوحة زراعة الأنسجة ذات 6 آبارBD Falcon أو علامة تجارية
غطاء مجهر زجاجي 22x22Fisherbrand12-542-B
أكوابمعقمة
يمكن يمكن يمكن يمكن معقمة HT501128 SIGMAمعقم أنابيب من النوع الأول أخرىأخرى

المراجع

  1. Zhang, H. H., Kumar, S., Barnett, A. H., Eggo, M. C. Ceiling culture of mature human adipocytes: use in studies of adipocyte functions. J Endocrinol. 164 (2), 119-128 (2000).
  2. Matsumoto, T., et al. Mature adipocyte-derived dedifferentiated fat cells exhibit multilineage potential. J Cell Physiol. 215 (1), 210-222 (2008).
  3. Poloni, A., et al. Human dedifferentiated adipocytes show similar properties to bone marrow-derived mesenchymal stem cells. Stem Cells. 30 (5), 965-974 (2012).
  4. Perrini, S., et al. Differences in gene expression and cytokine release profiles highlight the heterogeneity of distinct subsets of adipose tissue-derived stem cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue in humans. PLoS One. 8 (3), e57892(2013).
  5. Kishimoto, N., et al. The osteoblastic differentiation ability of human dedifferentiated fat cells is higher than that of adipose stem cells from the buccal fat pad. Clin Oral Investig. , (2013).
  6. Kou, L., et al. The phenotype and tissue-specific nature of multipotent cells derived from human mature adipocytes. Biochem Biophys Res Commun. 444 (4), 543-548 (2014).
  7. Jumabay, M., et al. Pluripotent stem cells derived from mouse and human white mature adipocytes. Stem Cells Transl Med. 3 (2), 161-171 (2014).
  8. Sugawara, A., Sato, S. Application of dedifferentiated fat cells for periodontal tissue regeneration. Hum Cell. 27 (1), 12-21 (2014).
  9. Kikuta, S., et al. Osteogenic effects of dedifferentiated fat cell transplantation in rabbit models of bone defect and ovariectomy-induced osteoporosis. Tissue Eng Part A. 19 (15-16), 1792-1802 (2013).
  10. Obinata, D., et al. Transplantation of mature adipocyte-derived dedifferentiated fat (DFAT) cells improves urethral sphincter contractility in a rat model. Int J Urol. 18 (12), 827-834 (2011).
  11. Jumabay, M., et al. Dedifferentiated fat cells convert to cardiomyocyte phenotype and repair infarcted cardiac tissue in rats. J Mol Cell Cardiol. 47 (5), 565-575 (2009).
  12. Ohta, Y., et al. Mature adipocyte-derived cells, dedifferentiated fat cells (DFAT), promoted functional recovery from spinal cord injury-induced motor dysfunction in rats. Cell Transplant. 17 (8), 877-886 (2008).
  13. Moreno-Navarrete, J. M. F. -r Ch. 2. Adipose Tissue Biology. Symonds, M. E. , Springer. 17-38 (2012).
  14. Poulos, S. P., Dodson, M. V., Hausman, G. J. Cell line models for differentiation: preadipocytes and adipocytes. Exp Biol Med (Maywood. 235 (10), 1185-1193 (2010).
  15. Casteilla, L., Penicaud, L., Cousin, B., Calise, D. Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity). Methods Mol Biol. 456, 23-38 (2008).
  16. Tchernof, A., Despres, J. P. Pathophysiology of human visceral obesity: an update. Physiol Rev. 93 (1), 359-404 (2013).
  17. Rodbell, M. Metabolism of Isolated Fat Cells. I. Effects of Hormones on Glucose Metabolism and Lipolysis. J Biol Chem. 239, 375-380 (1964).
  18. Watson, J. E., et al. Comparison of Markers and Functional Attributes of Human Adipose-Derived Stem Cells and Dedifferentiated Adipocyte Cells from Subcutaneous Fat of an Obese Diabetic Donor. Adv Wound Care. 3 (3), 219-228 (2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

FABP4

مقالات ذات صلة