مقالة منهجية

الزرد خلية قرنية إإكسبلنتس لدراسة الهجرة الجماعية خلية وعودة التظهرن في شفاء الجروح الجلدية

DOI:

10.3791/52489

⸱

فبراير 25, 2015

 ,  ,  ,  ,  , 
1Biomedical Sciences Program, Midwestern University, 2Department of Microbiology & Immunology, Midwestern University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

keratocytes الزرد الهجرة في أوراق خلية من إإكسبلنتس وتقديم نموذج في المختبر لدراسة آليات الهجرة الخلية الجماعية في سياق الظهارية التئام الجروح. هذه البروتوكولات بالتفصيل وسيلة فعالة لإقامة الثقافات يزدرع الأولية لاستخدامها في المقايسات الهجرة الجماعية الخلية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نظرا لخصائص متحركة فريدة من نوعها، فصل keratocytes الأسماك من منذ فترة طويلة تستخدم الثقافات يزدرع لدراسة آليات الهجرة خلية واحدة. ومع ذلك، عندما يتم تأسيس إإكسبلنتس، وهذه الخلايا أيضا تتحرك بشكل جماعي، والحفاظ على العديد من الميزات التي تجعل الفرد keratocytes نموذجا جذابا لدراسة الهجرة: سرعة معدلات الحركة، واسعة النطاق، الأكتين الغنية صفاحات مع كابل الأكتين عمودي، وبسرعة ثابتة نسبيا و اتجاه الهجرة. في إإكسبلنتس وقت مبكر، وinterconversion السريع لخلايا المهاجرة بشكل فردي مع أولئك الذين يهاجرون جماعيا يسمح دراسة دور التصاقات خلية خلية في تحديد النمط من الهجرة، وتشدد على الروابط الجزيئية بين وضعي للهجرة. الخلايا في إإكسبلنتس في وقت لاحق تفقد قدرتها على الهجرة بسرعة وبشكل جماعي باعتباره الظهارية لالوسيطة الانتقال يحدث ويتم التعبير عن الجينات المرتبطة التئام الجروح والتهاب تفاضلي. وهكذا، يمكن إإكسبلنتس خلية قرنية بمثابة نموذج في المختبر لعودة التظهرن الذي يحدث أثناء الجلدي التئام الجروح ويمكن أن تمثل نظاما فريدا لدراسة آليات الهجرة الخلية الجماعية في سياق برنامج محدد للتغيرات التعبير الجيني. هي مجموعة متنوعة من خطوط الزرد متحولة والمعدلة وراثيا المتاحة، والتي تسمح إإكسبلنتس التي ستنشأ من السمك مع خلفيات وراثية مختلفة. وهذا يسمح للدور البروتينات المختلفة داخل هذه العمليات التي ينبغي معالجتها بشكل فريد. البروتوكولات المذكورة هنا تصف طريقة سهلة وفعالة لإقامة هذه الثقافات يزدرع لاستخدامها في مجموعة متنوعة من المقايسات المتعلقة بالهجرة خلية الجماعية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد ركزت دراسات الحركة خلية تقليديا على الخلايا المهاجرة بشكل فردي. وقد أثبتت Keratocytes مثقف من الأسماك والبرمائيات إإكسبلنتس أن يكون نظام نموذج قوي لدراسة آليات حركية الخلية باستخدام النمذجة كلا التجريبية والرياضية تقترب 1-6. وساعد العمل التجريبي على الخلايا المهاجرة بشكل فردي عن طريق السريع، وسلاسة الحركة مزلق من الخلايا، مع الحفاظ على شكل موحد، والسرعة، والاتجاه. ومع ذلك، في الجسم الحي، والخلايا في كثير من الأحيان تتحرك بشكل جماعي مع الحفاظ على تقاطعات خلية خلية، وخاصة خلال مرحلة التطور الجنيني، التئام الجروح، والانبثاث. وهكذا، الهجرة الخلية الجماعية هي منطقة النمو وبارزة على نحو متزايد من البحوث ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا البروتوكول يتوافق مع مبادئ الرعاية اخر احصاء الحيوان في رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية وتمت الموافقة من قبل لجنة المؤسسي رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في جامعة الغرب الأوسط.

1. إعداد التخدير، المعدات، والإعلام

  1. Dechlorinate ما يقرب من 1.5 L من ماء الصنبور باستخدام إما وكيل تجاري dechlorinating (متوفر في محلات الحيوانات الأليفة) أو عن طريق السماح موقف المياه لمدة 24 ساعة. الحصول على ثلاثة أكواب 1 L وملء مع كل 500 مل إزالة الكلور المياه. تسمية واحدة لعقد الأسماك قب....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كما هو موضح في الشكل رقم 1، ورقة من keratocytes يمكن ملاحظة المهاجرة خارج من تحت نطاق غضون ساعات من تأسيس ثقافة يزدرع. أحيانا، وهي خلية قرنية المهاجرة بشكل فردي والتي قد كسر بعيدا عن ورقة المهاجرة بشكل جماعي ويمكن ملاحظة. وبالإضافة إلى ذلك، كما تم تأسيس يزدرع من الأسماك التي كانت قد التقطه سابقا، هناك وفرة العدلات المهاجرة من خلال ورقة. في فترات أطول الثقافة، شظايا ورقة خلية قرنية كخلايا الخضوع EMT 14.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخطوة الأكثر أهمية لنجاح ثقافة خلية قرنية النباتى هو السماح للنطاق التمسك الطبق الثقافة لحوالي 2-3 دقائق قبل إضافة مستنبت. ما يقرب من 75٪ من المقاييس ستلتزم وتنمو ورقة (وعدد من الثقافات التي أنشئت لكل تجربة تحتاج إلى تعديل وفقا لذلك). أوراق خلية قرنية لا تشكل حول كل نطاق وإزالتها من الأسماك ووضعها في الثقافة لعدة أسباب. أولا، دابي تلطيخ إإكسبلنتس يكشف عن أن بعض المقاييس لديها عدد قليل من الخلايا المرفقة، وبالتالي من المتوقع أن هذه المقاييس لن يكون ورقة من keratocytes. ثانيا، قدرة.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل من جانب صناديق من الغرب الأوسط الكلية الجامعية للعلوم الصحة منح البحوث تسهيل منح لEEH ومكتب جامعة الغرب الأوسط للبحوث والبرامج التي ترعاها منحت جماعية غرانت إلى KJL.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أطباق ثقافة القاع الزجاجي مقاس 35 مم (مطلية ب Poly-D Lysine)MatTekP35GC-1.5-14-C1.5 مم هو الأفضل لإزالة الغطاء. يوفر قطر 14 مم مساحة ثقافة أكبر.
الملقط السويسري للمجوهرات ، Integra ، Miltex 17-303VWR21909-460نجد أن الملقط الضيق والناعم يعمل بشكل أفضل لإزالة الترسبات الكلسية.
سمك

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Burton, K., Park, J. H., Taylor, D. L. Keratocytes generate traction forces in two phases. Molecular Biology of the Cell. 10, 3745-3769 (1999).
  2. Keren, K., et al. Mechanism of shape determination in motile cells. Nature. 453, 475-480 (2008).
  3. Lacayo, C. I., ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة