Method Article

طريقة بسيطة وغير مكلفة لتحديد الباردة الحساسية والتكيف في الفئران

DOI:

10.3791/52640

⸱

March 17th, 2015

 ,  ,  , 
1MSTP, Neuroscience Program, Washington University in St. Louis, 2Washington University Pain Center, Department of Anesthesiology, Washington University in St. Louis

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يقيس الفحص الأخمصي البارد (CPA) الاستجابة للبرد بين 30 درجة مئوية و 5 درجات مئوية ، ويمكنه أيضا قياس التكيف مع البرودة. يصف هذا البروتوكول كيفية استخدام CPA لقياس فرط الحساسية للبرد والتسكين والتكيف في الفئران.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فرط الحساسية للبرد هو مشكلة سريرية خطيرة ، تؤثر على مجموعة فرعية واسعة من المرضى وتسبب انخفاضا كبيرا في نوعية الحياة. يسمح الاختبار الأخمصي البارد بالتقييم الموضوعي وغير المكلف لحساسية البرودة في الفئران ، ويمكنه تحديد كل من التسكين وفرط الحساسية. تتأقلم الفئران مع صفيحة زجاجية ، ويتم تثبيت حبيبات ثلج جافة مضغوطة على السطح الزجاجي أسفل المخلب الخلفي. يتم استخدام زمن انتقال الانسحاب من زجاج التبريد كمقياس لحساسية البرودة.

الإحساس بالبرد مهم أيضا للبقاء على قيد الحياة في المناطق ذات التغيرات الموسمية في درجات الحرارة ، ومن أجل الحفاظ على الحساسية ، يجب أن تكون قادرة على ضبط عتبات استجابتها الحرارية لتتناسب مع درجة الحرارة المحيطة. يسمح الفحص الأخمصي البارد (CPA) أيضا بدراسة التكيف مع التغيرات في درجة الحرارة المحيطة عن طريق اختبار حساسية الفئران للبرودة في درجات حرارة تتراوح من 30 درجة مئوية إلى 5 درجات مئوية. تتأقلم الفئران كما هو موضح أعلاه ، ولكن يتم تبريد الصفيحة الزجاجية إلى درجة حرارة البدء المطلوبة باستخدام صناديق الألمنيوم (أو عبوات رقائق الألومنيوم) المملوءة بالماء الساخن أو الثلج الرطب أو الثلج الجاف. يتم قياس درجة حرارة اللوحة في المركز باستخدام مسبار مزدوج حراري من النوع T. بمجرد أن تصل اللوحة إلى درجة حرارة البداية المطلوبة ، يتم اختبار كما هو موضح أعلاه.

يسمح هذا الاختبار باختبار الفئران في درجات حرارة تتراوح من غير ضارة إلى ضارة. ينتج عن CPA استجابات سلوكية لا لبس فيها ومتسقة في الفئران غير المصابة ويمكن استخدامها لتحديد كل من فرط الحساسية والمسكن. يصف هذا البروتوكول كيفية استخدام CPA لقياس فرط الحساسية للبرد والتسكين والتكيف في الفئران.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قياس الاستجابة الباردة في القوارض المهم لتحسين فهم الآليات المحتملة للحساسية الباردة في البشر في إطار كل من الظروف العادية والمرضية. والباردة أخمصي الفحص (CPA)، وضعت أصلا منذ عدة سنوات 1، يهدف إلى توليد استنساخه، لا لبس فيها الاستجابات السلوكية الفئران لحافز البارد ألقاها في RT. وقد أتاحت المزيد من التحسينات الأخيرة من هذا الاختبار قياس استنساخه من حساسية الباردة في مجموعة واسعة من درجات الحرارة 2. تم تصميم كلا الإصدارين أيضا أن يكون نسبيا عالية الإنتاجية، وغير مكلفة للاستخدام.

أحرز قدر كبير من التقدم في فهم آليات حساسية الباردة باستخدام أساليب سلوكية أخرى. أسلوب واحد هو اختبار التبخر الأسيتون، والتي تنطوي على اللمس أو الرش الأسيتون على مخلب الماوس وقياس مقدار الوقت الذي تنفق الماوس عبها 3،4 مخلب. للأسف،خزينا الردود على الأسيتون التبخر التي كتبها الإحساس الرطب ورائحة الأسيتون. أيضا، والتحفيز الباردة التي يتم تطبيقها في اختبار الأسيتون التبخر يمكن أن تختلف على أساس كمية من الاسيتون التطبيقية، ويصعب قياسها كميا. وأخيرا، لم يصب الفئران لها ردود الحد الأدنى لالأسيتون في الأساس، مما يجعل من المستحيل قياس التسكين في غياب فرط الحساسية مع هذا الأسلوب.

فحص الكلاسيكي آخر لردود الباردة هو فحص الذيل نفض الغبار، حيث يتم قياس زمن الوصول إلى الانسحاب بعد مغمورة الذيل في 5،6 الماء البارد. في حين أن الاستجابات السلوكية في هذا الاختبار هي لا لبس فيها ويقيس الفحص الردود على درجة حرارة معينة، لا بد من ضبط النفس الحيوانات أثناء الاختبار، والتي يمكن أن تغير الاستجابة الباردة من خلال موصوفة وصفا جيدا التوتر الناجم عن آليات مسكن 7.

آخر أداة تستخدم عادة هي اختبار لوحة البارد، الذي يقيس السلوكيةردود الفئران بعد يتم وضعها على طبق من ذهب المبردة بلتيير 8-10. بينما توفر هذه الأداة المعلومات حول استجابات الحيوان في درجات حرارة معينة، فإنه كما استخدمت بشكل غير متسق. وتقاس مجموعات مختلفة أنواع مختلفة من الاستجابات بما في ذلك عدد من القفزات 8،11، الكمون لأول رد 8،11- 13، وعدد من مخلب يرفع 11،13،14 مع نتائج مختلفة جدا. لوحة فحص البارد هو أيضا منخفضة نسبيا الإنتاجية كما حيوان واحد فقط يمكن اختبارها في كل مرة، وأنه يتطلب وجود جهاز بلتيير مكلفة وهشة.

2-لوحة اختبار تفضيل درجة الحرارة هو مشتق تستخدم عادة للاختبار لوحة الباردة يقيس كمية النسبي من الوقت الذي تنفق الحيوانات في 2 وحات متصلة من درجات حرارة مختلفة 9،15- 17. آخر مماثل فحص شيوعا هو فحص التدرج الحراري، حيث مقدار الوقت الذي تنفق الفئران في مناطق مختلفة في درجة الحرارةتتراوح بين 5 ° C و 45 ° C على لوحة معدنية طويلة تقاس 16. في حين أن هذه المقايسات تسمح المقارنة بين درجات الحرارة، وأنه من غير الواضح ما إذا كان يمثل سلوك النفور درجة الحرارة أو لتفضيل درجة الحرارة.

وأخيرا، تم استخدام لوحة الباردة الديناميكي فحص لقياس مدى الفئران تستجيب لتغير درجات الحرارة المحيطة 18. يتضمن هذا الأسلوب وضع الفئران على جهاز بلتيير RT والتعلية ذلك وصولا الى 1 درجة مئوية في حين قياس مدى تقفز الفئران أو لعق الكفوف في درجات حرارة لوحة مختلفة. في حين أن هذا اختبارات كيف الفئران على التكيف مع بيئة التبريد، وأنها لا توفر وسيلة لاختبار مدى الفئران تستجيب لحافز البارد في الإعداد لدرجة الحرارة المحيطة برودة. بالإضافة إلى ذلك، فإنه يتطلب معدات باهظة الثمن لأداء ولا توفر وسيلة لتأقلم الفئران لاختبار المعدات قبل قياس حساسيتها الباردة.

واستكمالا لهذه المقايسات، وCPA يختبر acclimaردود تيد لحافز البارد واضحة المعالم في مجموعة متنوعة من تتراوح درجة الحرارة، أو أثناء عملية التكيف مع درجات الحرارة المحيطة الباردة. فإنه يمكن اختبار ما يصل الى 14 الفئران في وقت واحد مع الجهاز الحالي لدينا، مع إمكانية زيادتها غير مكلفة تصل لاختبار الإنتاجية العالية.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكانت جميع البروتوكولات الماوس وفقا للمبادئ التوجيهية المعاهد الوطنية للصحة وتمت الموافقة من قبل لجنة الدراسات الحيوانية من كلية الطب بجامعة واشنطن (سانت لويس، MO).

1. إعداد لوحة اختبار واسوار

  1. تنظيف قبالة سطح الزجاج.
  2. تأمين T-نوع خيوط التحقيق الحرارية إلى السطح في منتصف لوحة من الزجاج مع الشريط المختبر.
  3. وضع مرفقات الحيوان على لوحة الزجاج في خط واحد على طول منتصف اللوحة.
  4. كاتب التحقيق الحرارية من خلال مركز الضميمة الحيوانية والاندماج في مسجل البيانات. تحويل مسجل بيانات على حين تفعيل هذا ميزة لصناعة السيارات في الاغلاق، وإرفاق مسجل بيانات إلى جهاز الكمبيوتر باستخدام كابل المقدمة.
    1. إذا تسجيل درجة الحرارة لوحة أثناء التجربة، افتح البرنامج مسجل بيانات لبدء تسجيل درجات الحرارة لوحة.
    2. إذا لزم الأمر، وضبط البرنامج لإعادةالحبل درجة الحرارة لوحة مرة واحدة كل ثانية.
    3. بدء تسجيل درجات الحرارة باستخدام برنامج حزم مع مسجل بيانات الحراري.
  5. فصل العلبة السوداء مع تدرج لمنع التفاعل البصري بين الفئران.
  6. موقف يعكس تحت الزجاج بحيث الجانب السفلي من العبوات مرئيا من وضع الجلوس المريح.

2. الاحتباس الحراري / تبريد لوحة زجاج

  1. ملء صناديق الألومنيوم مع المياه تحسنت، والجليد الرطب، أو الثلج الجاف والموقف منها بشكل مناسب على لوحة زجاجية (يمكن أيضا الحزم رقائق الألومنيوم مليئة الثلج الجاف أن تستخدم لتبريد الزجاج؛ الشكل 1) (2).
    1. للاختبار في 30 ° C، ضع صناديق الألومنيوم حوالي 0.25 '' بعيدا عن حظائر الحيوانات (الشكل 2B) 2.
      1. تحديد شكل دائري الماء الساخن على جانبي لوحة زجاجية. تعيين دائري إلى 45 - 60 درجة مئوية، ولناالبريد إلى ملء صناديق الألومنيوم مع وجود تدفق مستمر من الماء الساخن (الشكل 1C) 2.
      2. ضع المروجون مثل أن الماء الساخن من صناديق الألومنيوم يستنزف مباشرة مرة أخرى في خزان للدائري على كل جانب (الشكل 1C) 2.
    2. للاختبار في RT، وترك صناديق فارغة (الشكل 2) 2.
    3. للاختبار في 17 ° C، ضع صناديق حوالي 0.25 '' بعيدا عن حظائر الحيوانات على جانبي وملء مع الثلج الرطب (الشكل 2) 2.
    4. للاختبار في 12 ° C، ضع صناديق حوالي 1.25 '' بعيدا عن العبوات على جانبي وملء مع الثلج الجاف (الشكل 2) 2.
    5. للاختبار في 5 ° C، ضع صناديق حوالي 0.25 '' بعيدا عن العبوات على جانبي وملء مع الثلج الجاف (الشكل 2) 2.
      1. عندما التبريد الزجاج مع الثلج الجاف، تأكد من وجود تهوية كافية لمنع CO 2 تراكم في الغرفة.
  2. الانتظار للزجاج للوصول إلى مجموعة ودرجة الحرارة المطلوبة.
  3. إضافة الفئران لالمرفقات على لوحة.
    ملاحظة: يمكن استخدام مولد الضوضاء البيضاء لتقليل الاضطرابات الضوضاء.
  4. انتظر الفئران ليتأقلم.
    ملاحظة: في منشأتنا هذا يستغرق ما يقرب من 2.5 ساعة، ولكن هذا قد تتفاوت تفاوتا كبيرا على أساس السكن الحيوانية وشروط التعامل معها.
  5. الحفاظ على الزجاج في نطاق درجات الحرارة المطلوبة عن طريق ضمان أن يتم الاحتفاظ صناديق كامل من الماء درجة حرارة والجليد الرطب، أو الثلج الجاف.
    ملاحظة: مع جهازنا في حاجة إلى صناديق ليتم تعبئتها مع الثلج تقريبا كل 90 دقيقة.
    ملاحظة: لC حالة 17 °، فإنه من المفيد لتفريغ معظم المياه من مربعات الألومنيوم من خلال فتحات التصريف قبل إعادة تعبئتها مع الثلج. وهذا الاستقرار في درجة الحرارة أفضل، والعلاقات العامةتجاوز الحدث
    ملاحظة: إن المبلغ المحدد من الثلج الجاف تختلف موسميا، ولكن بصفة عامة حفظ مربعات أكثر من ¼ الكاملة على طول من مربع سوف تبقي درجة حرارة ثابتة.

3. اختبار الفئران في درجات الحرارة الثابتة

  1. خارج الغرفة السلوكية، وملء دلو الجليد حوالي نصف كامل من الثلج الجاف.
  2. باستخدام مطرقة أو مطرقة، سحق الثلج الجاف الى مسحوق ناعم.
    ملاحظة: سوف الملئ دلو تجعل من الصعب سحق تماما الثلج الجاف الى مسحوق.
  3. باستخدام شفرة حلاقة مستقيمة أو مقص، وقطع رأس قبالة حقنة 3 مل.
  4. باستخدام إبرة 21 G، كزة 3 الثقوب على طرفي نقيض من الحقنة (ما مجموعه 6 فتحات).
    ملاحظة: هذه الثقوب يقلل من الضغط الناتجة عن التسامي في حين ضغط الثلج الجاف. يمكن إعادة استخدام المحاقن قطع للتجارب متعددة.
  5. أخذ الحقنة، ومسحوق الثلج الجاف، وساعة توقيت باليد إلى غرفة السلوكية.
  6. ملء غرفة حقنة نصف كامل من مسحوق الثلج الجاف. عقد نهاية قطع من حقنة ضد كائن مسطح، وضغط بقوة مسحوق باستخدام المكبس. احذر؛ المكبس من البلاستيك قد ينحني أو كسر من الضغط. إذا حدث هذا، استبدال المكبس من حقنة جديدة.
  7. تمديد غيض من مضغوط بيليه الثلج الجاف الماضي حافة حقنة.
  8. الفئران الاختبار التي هي تماما في بقية.
    1. في 30 ° C، 23 ° C و 17 ° C، والفئران التي لديها اختبار كل الكفوف 4 على الزجاج وليس تتحرك، ولكن ليس نائما تماما (19).
    2. في 12 ° C و 5 ° C، الفئران الاختبار التي هي على الكفوف 2 أو 4 الكفوف وعدم التحرك أو القفز.
  9. باستخدام المرايا الاستهداف، بلطف ولكن بحزم اضغط بيليه دافق شقة ضد سطح الزجاج تحت hindpaw الماوس (الشكل 1A) 2. بدء الموقت اليد.
  10. إيقاف الموقت وإزالة بيليه عندما يتحرك الماوس بعيدا عن الزجاج يبرد.
    ملاحظة: إن الحركة الانسحاب يمكن أن يكون الرأسي أو الأفقي.
    1. إذا كان الماوس يتحرك لفترة وجيزة جدا مخلب ثم يعود إلى السطح التبريد، ومواصلة توقيت وتحفيز حتى يجعل الماوس تحرك دائم بعيدا.
      ملاحظة: يستخدم مختبرنا وقت التحفيز الأقصى من 20 ثانية بالنسبة للفئران في معظم الحالات.
  11. كرر هذا الإجراء الاختبار حتى يتم جمع لا يقل عن 3 القيم على كل مخلب من كل حيوان. محاكمات منفصلة اختبار الكفوف المعاكس على نفس الماوس بنسبة 7 دقيقة على الأقل، ومحاكمات منفصلة متتالية على أي مخلب واحد من قبل لا يقل عن 15 دقيقة.
  12. إذا لزم الأمر، استخدم سمك مختلفة من الزجاج لتوليد معدلات مختلفة من التبريد (الشكل 3) 1.
    ملاحظة: ويرتبط معدل التبريد عكسيا مع سمك الزجاج.

4. اختبار الفئران خلال الباردة التكيف

ملاحظة: هذا هو بروتوكول بديل الذي يسمح الاختبار وبلات الزجاجالبريد يبرد، بدلا من مرة واحدة قد استقر لوحة والفئران تكيفت تماما مع البيئة الباردة.

  1. اتبع الإرشادات المذكورة في القسم 1 لإعداد الجهاز.
  2. اتبع الإرشادات الواردة في القسم 3 لأخذ القياسات الأساسية في RT (الشكل 7A) 2.
  3. قبل صناديق تبريد الألومنيوم مع الثلج الجاف.
  4. مرة واحدة وقد تم قياس الإختفاء انسحاب خط الأساس، وضع صناديق precooled على لوحة حوالي 1.25 '' بعيدا عن العبوات على جانبي (الشكل 7A، السهم المسمى "وأضاف الجليد الجاف") 2.
  5. اتبع الإرشادات الواردة في القسم 3 لأخذ القياسات كما يبرد لوحة من الزجاج، أخذ القياسات كلما كان ذلك ممكنا.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الاستجابات السلوكية انتزع من الفئران ابتداء من الساعة 30 ° C، 23 ° C، 17 ° C، و 12 ° C هي تكرار للغاية (الشكل 4A) 20. من أجل قياس التحفيز الباردة التي يتم توليدها تحت hindpaw، تم تخدير الفئران مع الكيتامين / زيلازين / آسيبرومازين الكوكتيل وتم تأمين الكفوف على الزجاج على رأس الحرارية نوع T-خيوط (الشكل 4B) 20. تم تبريد الزجاج أو تحسنت إلى مجموعة الاختبار المطلوب. على الرغم من أن لوحة يتم تبريده بشكل موحد على طول لوحة (ا...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن استخدام CPA لتقييم حساسية البرد والتكيف مع البرد في الفئران. يوفر طريقة فعالة وبأسعار معقولة لقياس استجابات البرد في غير المقيدة والمتأقلمة في مجموعة متنوعة من نطاقات درجات الحرارة. كما أنه يوفر استجابة سلوكية لا لبس فيها مع متغير مخرجات سهل القياس الكمي والتحليل. لقد تم استخدامه بالفعل لتقييم التغيرات في حساسية البرد الناجمة عن الالتهاب1 ، وإصابة الأعصاب1 ، والمسكنات1 ، والضربة القاضية الجينية20 ، ودراسات استئصال الخلايا العصبية الجينية26. يمكن تعديله لقيا...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يرغب المؤلفون في الاعتراف بالمساهمات المقدمة من مختبر جيرو بأكمله لتحرير المخطوطات. يتم دعم هذا العمل من قبل أموال NINDS 1F31NS078852 إلى DSB وصندوق NINDS NS42595 إلى RWG.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
مسبار مزدوج حراري من النوع TPhysitempIT-24pيستخدم لقياس درجة حرارة سطح الزجاج (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/) لوح زجاجي
شركة زجاجية محلية (في سانت لويس ، شركة Stemmerich Inc)نستخدم زجاج بيركس (تعويم البورسيليكات). يستخدم مختبرنا بشكل عام 1/4 بوصة ، ولكن 3/16 بوصة و 1/8 بوصة مفيدان أيضا
مسجل البيانات الحراريةExtechEA15Thermologger لتتبع درجة حرارة الزجاج (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&prodid=408)
3 مل حقنةBD309657يتم قطع الجزء العلوي ، ويتم ضغط الثلج الجاف في المحقنة لتوليد مسبار
بارد الكمبيوترإذا كنت تستخدم Extech logger ، فإن أي
بجامعة واشنطن في سانت لويسبطول 3 بوصات وعرض 4.5 بوصة وطول 3 بوصات مع غطاء مختوم. يوجد ثقب 1/2 بوصة محفور في جانب قصير واحد من كل صندوق ، بالقرب من الجزء السفلي. تمتلئ هذه الثقوب بمحبس مطاطي عندما تمتلئ الصناديق بالثلج الرطب أو الماء الساخن.
جهاز تدوير الماء الساخنVWRسيعمل أي طراز لتدوير المياه مع مضخة
21 جرام إبرةBD305165حجم الإبرة الدقيق ليس مهما
مؤقتيدوي أي مؤقت يدوي سيعمل
مرآةستعمل أي مرآة مسطحة
صناديق ألومنيوم تعمل

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. A Novel Behavioral Assay for Measuring Cold Sensation in Mice. Plos ONE. 7 (6), 8(2012).
  2. Brenner, D. S., Vogt, S. K., Gereau, R. W. A technique to measure cold adaptation in freely behaving mice. Journal of Neuroscience Methods. , (2014).
  3. Choi, Y., Yoon, T. W., Na, H. S., Kim, S. H., Chung, J. M. Behavioral signs of ongoing pain and cold allodynia in a rat model of neuropathic pain. Pain. 59 (3), 369-376 (1994).
  4. Gauchan, P., Andoh, T., Kato, A., Kuraishi, Y. Involvement of increased expression of transient receptor potential melastatin 8 in oxaliplatin-induced cold allodynia in mice. Neuroscience letters. 458 (2), 93-95 (2009).
  5. Carlton, S. M., Lekan, H. A., Kim, S. H., Chung, J. M. Behavioral manifestations of an experimental model for peripheral neuropathy produced by spinal nerve ligation in the primate. Pain. 56 (2), 155-166 (1994).
  6. Pizziketti, R. J., Pressman, N. S., Geller, E. B., Cowan, A., Adler, M. W. Rat cold water tail-flick: A novel analgesic test that distinguishes opioid agonists from mixed agonist-antagonists. European Journal of Pharmacology. 119 (1-2), 23-29 (1985).
  7. Pinto-Ribeiro, F., Almeida, A., Pego, J. M., Cerqueira, J., Sousa, N. Chronic unpredictable stress inhibits nociception in male rats. Neuroscience letters. 359 (1-2), 73-76 (2004).
  8. Karashima, Y., et al. TRPA1 acts as a cold sensor in vitro and in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (4), 1273-1278 (2009).
  9. Knowlton, W. M., Bifolck-Fisher, A., Bautista, D. M., McKemy, D. D. TRPM8, but not TRPA1, is required for neural and behavioral responses to acute noxious cold temperatures and cold-mimetics in vivo. Pain. 150 (2), 340-350 (2010).
  10. Allchorne, A. J., Broom, D. C., Woolf, C. J. Detection of cold pain, cold allodynia and cold hyperalgesia in freely behaving rats. Molecular pain. 1, 36(2005).
  11. Colburn, R. W., et al. Attenuated cold sensitivity in TRPM8 null mice. Neuron. 54 (3), 379-386 (2007).
  12. Dhaka, A., Murray, A. N., Mathur, J., Earley, T. J., Petrus, M. J., Patapoutian, A. TRPM8 is required for cold sensation in mice. Neuron. 54 (3), 371-378 (2007).
  13. Bautista, D. M., et al. The menthol receptor TRPM8 is the principal detector of environmental cold. Nature. 448 (7150), 204-208 (2007).
  14. Obata, K., et al. TrpA1 induced in sensory neurons contributes to cold hyperalgesia after inflammation and nerve injury. The Journal of Clinical Investigation. 115 (9), 2393-2401 (2005).
  15. Tang, Z., et al. Pirt functions as an endogenous regulator of TRPM8. Nature communications. 4, 2179(2013).
  16. Lee, H., Iida, T., Mizuno, A., Suzuki, M., Caterina, M. J. Altered thermal selection behavior in mice lacking transient receptor potential vanilloid 4. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 25 (5), 1304-1310 (2005).
  17. Pogorzala, L. A., Mishra, S. K., Hoon, M. A. The cellular code for Mammalian thermosensation. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 33 (13), 5533-5541 (2013).
  18. Yalcin, I., Charlet, A., Freund-Mercier, M. -J., Barrot, M., Poisbeau, P. Differentiating thermal allodynia and hyperalgesia using dynamic hot and cold plate in rodents. The journal of pain official journal of the American Pain Society. 10 (7), 767-773 (2009).
  19. Callahan, B. L., Gil, A. S., Levesque, A., Mogil, J. S. Modulation of mechanical and thermal nociceptive sensitivity in the laboratory mouse by behavioral state. The journal of pain: official journal of the American Pain Society. 9 (2), 174-184 (2008).
  20. Brenner, D. S., Golden, J. P., Vogt, S. K., Dhaka, A., Story, G. M., Gereau, R. W. A dynamic set point for thermal adaptation requires phospholipase C-mediated regulation of TRPM8 in vivo. Pain. , (2014).
  21. Patwardhan, A. M., Scotland, P. E., Akopian, A. N., Hargreaves, K. M. Activation of TRPV1 in the spinal cord by oxidized linoleic acid metabolites contributes to inflammatory hyperalgesia. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (44), 18820-18824 (2009).
  22. Fujita, F., Uchida, K., Takaishi, M., Sokabe, T., Tominaga, M. Ambient Temperature Affects the Temperature Threshold for TRPM8 Activation through Interaction of Phosphatidylinositol 4,5-Bisphosphate. Journal of Neuroscience. 33 (14), 6154-6159 (2013).
  23. Rohacs, T., Lopes, C. M., Michailidis, I., Logothetis, D. E. PI(4,5)P2 regulates the activation and desensitization of TRPM8 channels through the TRP domain. Nature neuroscience. 8 (5), 626-634 (2005).
  24. Daniels, R. L., Takashima, Y., McKemy, D. D. Activity of the neuronal cold sensor TRPM8 is regulated by phospholipase C via the phospholipid phosphoinositol 4,5-bisphosphate. The Journal of biological chemistry. 284 (3), 1570-1582 (2009).
  25. Zhang, H., et al. Neurokinin-1 receptor enhances TRPV1 activity in primary sensory neurons via PKCepsilon: a novel pathway for heat hyperalgesia. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (44), 12067-12077 (2007).
  26. Wang, H., Zylka, M. J. Mrgprd-expressing polymodal nociceptive neurons innervate most known classes of substantia gelatinosa neurons. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (42), 13202-13209 (2009).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cold Plantar AssayCold SensitivityMouse AdaptationDry Ice PelletGlass PlateThermocouple ProbeWithdrawal LatencyAnalgesia MeasurementHypersensitivity TestTemperature Acclimation

Related Articles