Method Article

طريقة بسيطة وغير مكلفة لتحديد الباردة الحساسية والتكيف في الفئران

DOI:

10.3791/52640

⸱

March 17th, 2015

 ,  ,  , 
1MSTP, Neuroscience Program, Washington University in St. Louis, 2Washington University Pain Center, Department of Anesthesiology, Washington University in St. Louis

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يقيس الفحص الأخمصي البارد (CPA) الاستجابة للبرد بين 30 درجة مئوية و 5 درجات مئوية ، ويمكنه أيضا قياس التكيف مع البرودة. يصف هذا البروتوكول كيفية استخدام CPA لقياس فرط الحساسية للبرد والتسكين والتكيف في الفئران.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فرط الحساسية للبرد هو مشكلة سريرية خطيرة ، تؤثر على مجموعة فرعية واسعة من المرضى وتسبب انخفاضا كبيرا في نوعية الحياة. يسمح الاختبار الأخمصي البارد بالتقييم الموضوعي وغير المكلف لحساسية البرودة في الفئران ، ويمكنه تحديد كل من التسكين وفرط الحساسية. تتأقلم الفئران مع صفيحة زجاجية ، ويتم تثبيت حبيبات ثلج جافة مضغوطة على السطح الزجاجي أسفل المخلب الخلفي. يتم استخدام زمن انتقال الانسحاب من زجاج التبريد كمقياس لحساسية البرودة.

الإحساس بالبرد مهم أيضا للبقاء على قيد الحياة في المناطق ذات التغيرات الموسمية في درجات الحرارة ، ومن أجل الحفاظ على الحساسية ، يجب أن تكون قادرة على ضبط عتبات استجابتها الحرارية لتتناسب مع درجة الحرارة المحيطة. يسمح الفحص الأخمصي البارد (CPA) أيضا بدراسة التكيف مع التغيرات في درجة الحرارة المحيطة عن طريق اختبار حساسية الفئران للبرودة في درجات حرارة تتراوح من 30 درجة مئوية إلى 5 درجات مئوية. تتأقلم الفئران كما هو موضح أعلاه ، ولكن يتم تبريد الصفيحة الزجاجية إلى درجة حرارة البدء المطلوبة باستخدام صناديق الألمنيوم (أو عبوات رقائق الألومنيوم) المملوءة بالماء الساخن أو الثلج الرطب أو الثلج الجاف. يتم قياس درجة حرارة اللوحة في المركز باستخدام مسبار مزدوج حراري من النوع T. بمجرد أن تصل اللوحة إلى درجة حرارة البداية المطلوبة ، يتم اختبار كما هو موضح أعلاه.

يسمح هذا الاختبار باختبار الفئران في درجات حرارة تتراوح من غير ضارة إلى ضارة. ينتج عن CPA استجابات سلوكية لا لبس فيها ومتسقة في الفئران غير المصابة ويمكن استخدامها لتحديد كل من فرط الحساسية والمسكن. يصف هذا البروتوكول كيفية استخدام CPA لقياس فرط الحساسية للبرد والتسكين والتكيف في الفئران.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قياس الاستجابة الباردة في القوارض المهم لتحسين فهم الآليات المحتملة للحساسية الباردة في البشر في إطار كل من الظروف العادية والمرضية. والباردة أخمصي الفحص (CPA)، وضعت أصلا منذ عدة سنوات 1، يهدف إلى توليد استنساخه، لا لبس فيها الاستجابات السلوكية الفئران لحافز البارد ألقاها في RT. وقد أتاحت المزيد من التحسينات الأخيرة من هذا الاختبار قياس استنساخه من حساسية الباردة في مجموعة واسعة من درجات الحرارة 2. تم تصميم كلا الإصدارين أيضا أن يكون نسبيا عالية الإنتاجية، وغير مكلفة للاستخدام.

أحرز قدر كبير من التقدم في فهم آليات حساسية الباردة باستخدام ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكانت جميع البروتوكولات الماوس وفقا للمبادئ التوجيهية المعاهد الوطنية للصحة وتمت الموافقة من قبل لجنة الدراسات الحيوانية من كلية الطب بجامعة واشنطن (سانت لويس، MO).

1. إعداد لوحة اختبار واسوار

  1. تنظيف قبالة سطح الزجاج.
  2. تأمين T-نوع خيوط التحقيق الحرارية إلى السطح في منتصف لوحة من الزجاج مع الشريط المختبر.
  3. وضع مرفقات الحيوان على لوحة الزجاج في خط واحد على طول منتصف اللوحة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الاستجابات السلوكية انتزع من الفئران ابتداء من الساعة 30 ° C، 23 ° C، 17 ° C، و 12 ° C هي تكرار للغاية (الشكل 4A) 20. من أجل قياس التحفيز الباردة التي يتم توليدها تحت hindpaw، تم تخدير الفئران مع الكيتامين / زيلازين / آسيبرومازين الكوكتيل وتم تأمين الكفوف على الزجاج على رأس الحرارية نوع T-خيوط (الشكل 4B) 20. تم تبريد الزجاج أو تحسنت إلى مجموعة الاختبار المطلوب. على الرغم من أن لوحة يتم تبريده بشكل موحد على طول لوحة (ا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن استخدام CPA لتقييم حساسية البرد والتكيف مع البرد في الفئران. يوفر طريقة فعالة وبأسعار معقولة لقياس استجابات البرد في غير المقيدة والمتأقلمة في مجموعة متنوعة من نطاقات درجات الحرارة. كما أنه يوفر استجابة سلوكية لا لبس فيها مع متغير مخرجات سهل القياس الكمي والتحليل. لقد تم استخدامه بالفعل لتقييم التغيرات في حساسية البرد الناجمة عن الالتهاب1 ، وإصابة الأعصاب1 ، والمسكنات1 ، والضربة القاضية الجينية20 ، ودراسات استئصال الخلايا العصبية الجينية26. يمكن تعديله لقيا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يرغب المؤلفون في الاعتراف بالمساهمات المقدمة من مختبر جيرو بأكمله لتحرير المخطوطات. يتم دعم هذا العمل من قبل أموال NINDS 1F31NS078852 إلى DSB وصندوق NINDS NS42595 إلى RWG.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
مسبار مزدوج حراري من النوع TPhysitempIT-24pيستخدم لقياس درجة حرارة سطح الزجاج (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/) لوح زجاجي
شركة زجاجية محلية (في سانت لويس ، شركة Stemmerich Inc)نستخدم زجاج بيركس (تعويم البورسيليكات). يستخدم مختبرنا بشكل عام 1/4 بوصة ، ولكن 3/16 بوصة و 1/8 بوصة مفيدان أيضا
مسجل البيانات الحراريةExtechEA15Thermologger لتتبع درجة حرارة الزجاج (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&prodid=408)
3 مل حقنةBD309657يتم قطع الجزء العلوي ، ويتم ضغط الثلج الجاف في المحقنة لتوليد مسبار
بارد الكمبيوترإذا كنت تستخدم Extech logger ، فإن أي
بجامعة واشنطن في سانت لويسبطول 3 بوصات وعرض 4.5 بوصة وطول 3 بوصات مع غطاء مختوم. يوجد ثقب 1/2 بوصة محفور في جانب قصير واحد من كل صندوق ، بالقرب من الجزء السفلي. تمتلئ هذه الثقوب بمحبس مطاطي عندما تمتلئ الصناديق بالثلج الرطب أو الماء الساخن.
جهاز تدوير الماء الساخنVWRسيعمل أي طراز لتدوير المياه مع مضخة
21 جرام إبرةBD305165حجم الإبرة الدقيق ليس مهما
مؤقتيدوي أي مؤقت يدوي سيعمل
مرآةستعمل أي مرآة مسطحة
صناديق ألومنيوم تعمل

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. A Novel Behavioral Assay for Measuring Cold Sensation in Mice. Plos ONE. 7 (6), 8(2012).
  2. Brenner, D. S., Vogt, S. K., Gereau, R. W. A technique to measure cold adaptation in freely behaving mice. Journal of Neuroscience Method....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cold Plantar AssayCold SensitivityMouse AdaptationDry Ice PelletGlass PlateThermocouple ProbeWithdrawal LatencyAnalgesia MeasurementHypersensitivity TestTemperature Acclimation

Related Articles