نقدم هنا بروتوكولا يسمح للمرء بتصور مواقع تكوين الجليد وطرق تكاثر الجليد في النباتات باستخدام التصوير الحراري بالأشعة تحت الحمراء عالية الدقة (HRIT).
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نقدم هنا بروتوكولا يسمح للمرء بتصور مواقع تكوين الجليد وطرق تكاثر الجليد في النباتات باستخدام التصوير الحراري بالأشعة تحت الحمراء عالية الدقة (HRIT).
يمكن أن تكون أحداث التجميد التي تحدث عندما تنمو النباتات بنشاط حدثا مميتا ، خاصة إذا كان النبات لا يتحمل التجمد. غالبا ما يكون لأحداث الصقيع هذه آثار مدمرة على الإنتاج الزراعي ويمكن أن تلعب أيضا دورا مهما في تشكيل بنية المجتمع في التجمعات الطبيعية للنباتات ، خاصة في النظم البيئية في جبال الألب وشبه القطب الشمالي والقطب الشمالي. لذلك ، يمكن أن يلعب الفهم الأفضل لعملية التجميد في النباتات دورا مهما في تطوير طرق الحماية من الصقيع وفهم آليات تجنب التجمد. هنا ، نصف بروتوكولا لتصور عملية التجميد في النباتات باستخدام التصوير الحراري بالأشعة تحت الحمراء عالي الدقة (HRIT). يسمح استخدام هذه التقنية للمرء بتحديد المواقع الأساسية لتكوين الجليد في النباتات ، وكيفية انتشار الجليد ، ووجود حواجز جليدية. علاوة على ذلك ، فإنه يسمح للمرء بفحص دور النواة الخارجية والجوهرية في تحديد درجة الحرارة التي تتجمد عندها النباتات وتقييم قدرة المركبات المختلفة إما على التأثير على عملية التجميد أو زيادة تحمل التجمد. يسمح استخدام HRIT للمرء بتصور العديد من التكيفات التي تطورت في النباتات ، والتي تؤثر بشكل مباشر أو غير مباشر على عملية التجميد وتمكن النباتات في النهاية من البقاء على قيد الحياة في أحداث الصقيع.
يمكن أن انخفاض درجات الحرارة التي تحدث عند النباتات تنمو بنشاط أن تكون قاتلة، لا سيما إذا كان المصنع لديه القليل أو لا تسامح التجميد. مثل هذه الأحداث الصقيع غالبا ما يكون لها آثار مدمرة على الإنتاج الزراعي ويمكن أيضا أن تلعب دورا هاما في تشكيل بنية المجتمع في السكان الطبيعية من النباتات، وخاصة في جبال الألب، والنظم الإيكولوجية جنوب القطب الشمالي والقطب الشمالي 1-6. وكان حلقة من الصقيع الشديد الربيع تأثيرات كبيرة على إنتاج الفاكهة في الولايات المتحدة الأمريكية وأمريكا الجنوبية في السنوات الأخيرة 7-9 وتفاقمت الاصابة المبكرة الطقس الحار تليها انخفاض درجات الحرارة يعني أكثر نموذجية. الحث على الطقس الحار في وقت مبكر براعم لكسر، وتفعيل نمو البراعم الجديدة، الأوراق، والأزهار وكلها لها القليل جدا من دون الصقيع التسامح 1،3،10-12. تم الإبلاغ عن مثل هذه الأنماط المناخية المتقلبة لتكون انعكاسا مباشرا لتغير المناخ الجاري، ومن المتوقع أن يكون نمط الطقس مشترك لفوريسالمستقبل eeable 13. والجهود الرامية إلى توفير تقنيات إدارة اقتصادية وفعالة وصديقة للبيئة أو المواد الكيميائية الزراعية التي يمكن أن توفر زيادة التسامح الصقيع نجاح محدود لمجموعة من الأسباب ولكن هذا يمكن أن يعزى ذلك جزئيا إلى الطبيعة المعقدة لتجميد التسامح وتجميد آليات تجنب في النباتات. 14
وقد جرت العادة على تقسيم آليات التكيف المرتبطة بقاء الصقيع في النباتات إلى فئتين، تجميد التسامح وتجميد الإبطال. ويرتبط الفئة الأولى مع الآليات البيوكيميائية التي تنظمها مجموعة محددة من الجينات التي تسمح النباتات على تحمل الضغوط المرتبطة مع وجود وتأثير dehydrative من الجليد في أنسجته. في حين أن الفئة الأخيرة هي عادة، ولكن ليس وحدها، ويرتبط مع الجوانب الهيكلية للمحطة التي تحدد إذا، متى وأين أشكال الجليد في مصنع 14. على الرغم من انتشار تجنب تجميد بمثابة إعلانآلية aptive، وقد خصص القليل من الأبحاث في الآونة الأخيرة لفهم الآليات الكامنة وتنظيم تجنب التجميد. يشار إلى القارئ إلى مراجعة حديثة 15 لمزيد من التفاصيل حول هذا الموضوع.
في حين أن تشكيل الجليد في درجات الحرارة المنخفضة قد يبدو وكأنه عملية بسيطة، وتساهم العديد من العوامل في تحديد درجة الحرارة التي الجليد nucleates في أنسجة النبات وكيفية انتشاره داخل المصنع. يمكن المعلمات مثل وجود خارجي والجليد جوهري nucleators، غير المتجانسة مقابل الأحداث التنوي متجانسة، الحرارية التباطؤ (مضاد) البروتينات، فإن وجود من السكريات محددة وosmolytes الأخرى، ومجموعة من الجوانب الهيكلية من النبات جميع تلعب كبيرة دور في عملية التجميد في النباتات. بشكل جماعي، هذه المعايير تؤثر درجة الحرارة التي يتجمد النبات، حيث يبدأ الجليد وكيف أنها تنمو. ويمكن أن يؤثر أيضا على مورفولوجية بلورات الثلج الناتجة عن ذلك.وقد استخدمت أساليب مختلفة لدراسة عملية التجميد في النباتات تحت ظروف المختبر، بما في ذلك التحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي النووي (NMR) 16، والتصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) 17، البرد المجهر 18-19، ودرجات الحرارة المنخفضة المجهر الإلكتروني (LTSEM ) 20 تجميد النباتات الكاملة في إعدادات المختبرية والميدانية، ومع ذلك، فقد تم رصدها بشكل رئيسي مع المزدوجات الحرارية. ويستند استخدام المزدوجات الحرارية لدراسة تجميد على تحرير الحرارة (حرارة الانصهار) عندما يمر الماء مرحلة انتقالية من الحالة السائلة إلى الحالة الصلبة. ثم يتم تسجيل تجميد كحدث طارد للحرارة. 21-23 على الرغم من المزدوجات الحرارية هي طريقة نموذجية من خيار في دراسة التجمد في النباتات، واستخدامها لديها الكثير من القيود التي تحد من كمية المعلومات التي تم الحصول عليها خلال الحدث التجمد. على سبيل المثال، مع المزدوجات الحرارية فمن الصعب المستحيل تقريبا لتحديد أين يبدأ الجليد في النباتات، وكيف ينتشر،إذا كان ينتشر بمعدل حتى، وإذا بقيت بعض الأنسجة خالية من الجليد.
التقدم في عالية الدقة الحراري بالأشعة تحت الحمراء (HRIT) 24-27، ومع ذلك، فقد زادت بشكل كبير من القدرة على الحصول على المعلومات حول عملية التجميد في مصانع بأكملها، خصوصا عند استخدامها في وضع التصوير التفاضلية. 28-33 وفي هذا التقرير، ونحن وصف استخدام هذه التكنولوجيا لدراسة مختلف جوانب عملية التجميد ومختلف العوامل التي تؤثر فيها، ووفي ما الجليد درجة الحرارة يبدأ في النباتات. وسيعرض البروتوكول الذي سوف تثبت قدرة الجليد التنوي النشطة (INA) بكتيريا، الزائفة syringae (CIT-7) ليكون بمثابة nucleator خارجي الشروع في تجميد نبات عشبي في العالية ودرجات الحرارة تحت الصفر.
عالية الدقة تعمل بالأشعة تحت الحمراء
البروتوكول، والأمثلة الموثقة في هذا التقرير الاستفادة دقة عالية الأشعة تحت الحمراءالاشعاع الفيديو. والاشعاع (الشكل 1) لوازم مجموعة من الصور طيف الأشعة تحت الحمراء والمرئية والبيانات درجة الحرارة. الاستجابة الطيفية للكاميرا هي في حدود 7،5 حتي 13،5 ميكرون، ويوفر 640 × 480 بكسل. صور الطيف المرئية التي تم إنشاؤها بواسطة كاميرا يمكن أن تنصهر مع IR-الصور في الوقت الحقيقي، مما يسهل تفسير المعقدة والصور الحرارية في مدمجة. وهناك مجموعة من العدسات للكاميرا يمكن أن تستخدم لجعل عن قرب والملاحظات المجهرية. ويمكن استخدام الكاميرا في وضع قائمة بذاتها، أو ربطه والتي تسيطر عليها مع جهاز كمبيوتر محمول باستخدام برنامج propietary. يمكن استخدام البرنامج للحصول على مجموعة متنوعة من البيانات الحرارية جزءا لا يتجزأ من أشرطة الفيديو المسجلة. من المهم أن نلاحظ أن مجموعة واسعة من الإشعاع الأشعة تحت الحمراء متوفرة تجاريا. وبالتالي، فمن الضروري أن الباحث مناقشة تطبيقها المقصود مع مهندس المنتج على دراية وأن الباحث اختبار قدرة أي specifiج الاشعاع لتوفير المعلومات اللازمة. يتم وضع الاشعاع التصوير المستخدمة في بروتوكول صفها في مربع الاكريليك (الشكل 2) معزول مع الستايروفوم ط ن أجل ردع التعرض لتكاثف خلال بروتوكولات التدفئة والتبريد. ليست هناك حاجة هذه الحماية لجميع الكاميرات أو التطبيقات.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
1. إعداد المواد النباتية
2. إعداد حلول المياه التي تحتوي على الجليد في النواة النشطة (INA) البكتيريا
3. إعداد لتجربة التجميد
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النشاط الايس نواة لمن الثلج + البكتيريا، الزائفة syringae (سلالة سيت-7)
انخفاض 10 ميكرولتر من الماء و 10 ميكرولتر من المياه التي تحتوي على P. syringae وضعت (CIT-7) على سطح مجافي المحور من ورقة Hosta (Hosta النيابة.) (الشكل 4). كما هو موضح، وقطرة من المياه التي تحتوي على البكتيريا INA جمدت الأول وكان مسؤولا عن حمل ورقة تجميد في حين بقي قطرة من الماء على سطح ورقة رفع التج...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الماء لديه القدرة على التبريد الفائق لدرجات حرارة أقل بكثير من 0 درجة مئوية ودرجة حرارة المياه التي ستجمد يمكن أن تكون متغيرة تماما. 36 الحد الأقصى لدرجات الحرارة والبرودة الفائقة من الماء النقي حوالي -40 ° C ويتم تعريف كنقطة التنوي متجانسة. عندما يتجمد الماء عند درجات حرارة أكثر دفئا من -40 ° C يتم تحقيقه عن طريق وجود متغاير المنشأ nucleators التي تمكن الأجنة الثلج الصغيرة لتشكيل أي بعد ذلك بمثابة حافز لتشكيل الجليد والنمو. 37 وهناك العديد من الجزيئات في الط...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الكتاب ليس لديهم مصالح أو تضارب في المصالح المالية المتنافسة.
وقد تم تمويل هذا البحث من قبل صندوق العلوم النمساوية (FWF): P23681-B16.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| كاميرا الأشعة تحت الحمراء | FLIR | SC-660 | العديد من النماذج المتاحة اعتمادا على التطبيق |
| برنامج تحليلي بالأشعة تحت الحمراء | FLIR | ResearchIR 4.10.2.5$ | 3,500 |
| Pseudomonas syringae (سلالة Cit-7) | تفضل بتقديم الدكتور ستيفن ليندو ، جامعة كاليفورنيا ؛ بيركلي icelab@berkeley.edu< / أ> | ||
| Pseudomonas Agar F | فيشر العلمي | DF0448-17-1 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.