يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

قياس مقاومة الاكسدة من

15.9K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/52746

⸱

مايو 9, 2015

 , 
1Goodman Cancer Research Center, McGill University, 2Department of Biochemistry, McGill University

في هذه المقالة

إشعار تصحيح

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

ملخص

C. elegans هو كائن حي نموذجي جذاب لدراسة مسارات نقل الإشارة المشاركة في مقاومة الإجهاد التأكسدي. نقدم هنا بروتوكولا لقياس مقاومة الإجهاد التأكسدي ل C. ايليجانس في الطور السائل ، باستخدام العديد من العوامل المؤكسدة في 96 لوحة بئر.

الملخص

الاكسدة، الذي هو نتيجة لاختلال التوازن بين الإنتاج وإزالة السموم من أنواع الاكسجين التفاعلية، هو المساهم الرئيسي في اضطرابات البشرية المزمنة، بما في ذلك القلب والأوعية الدموية والأمراض العصبية، ومرض السكري، والشيخوخة، والسرطان. وبالتالي، فمن المهم دراسة الاكسدة ليس فقط في الأنظمة الخلية ولكن أيضا باستخدام الكائنات كلها. C. ايليجانس هو كائن نموذجا جذابا لدراسة علم الوراثة من المؤكسدة مسارات نقل الإشارة الإجهاد، والتي يتم حفظها للغاية من الناحية التطورية.

هنا، ونحن نقدم بروتوكول لقياس مقاومة الاكسدة في C. ايليجانس في السائل. تذاب لفترة وجيزة، ROS الذي يحفز الكواشف مثل الباراكوات (PQ) وH 2 O 2 في المخزن M9، وaliquoted الحلول في الآبار لوحة microtiter 96 أيضا. L4 متزامنة / الشباب البالغين C. يتم نقل الحيوانات ايليجانس إلى الآبار (5-8 الحيوانات / جيد) ويتم قياس البقاء على قيد الحياةكل ساعة حتى معظم الديدان قد لقوا حتفهم. عند إجراء مقاومة الاكسدة فحص باستخدام تركيز منخفض من الضغوطات في لوحات، والشيخوخة قد تؤثر على سلوك الحيوانات على الاكسدة، والتي يمكن أن تؤدي إلى تفسير غير صحيح من البيانات. ومع ذلك، في مقايسة الموصوفة هنا، هذه المشكلة غير المحتمل أن يحدث منذ تستخدم فقط L4 / حيوانات الشباب البالغين. وعلاوة على ذلك، وهذا البروتوكول هو غير مكلف ويتم الحصول على نتائج في يوم واحد، مما يجعل هذه التقنية جذابة للشاشات الوراثية. عموما، هذا سوف يساعد على فهم الأكسدة مسارات إشارة التوتر تنبيغ، التي يمكن ترجمتها إلى توصيف أفضل للأكسدة اضطرابات البشرية المرتبطة الإجهاد.

المقدمة

في حقيقيات النوى، الفسفرة المؤكسدة التي تجري في سلسلة نقل الإلكترون من الميتوكوندريا هي المحرك الرئيسي لإنتاج الطاقة في شكل ATP. أنواع الاكسجين التفاعلية (ROS) هي نتاج طبيعي لهذه العملية. على الرغم من الدور الهام الذي يقومون به كما يشير الجزيئات، يمكن أن الإفراط ROS تؤدي إلى تلف الحمض النووي والبروتينات كربنلة، وأكسدة الدهون. اختلال التوازن بين الإنتاج ROS وإزالة السموم يسبب الإجهاد التأكسدي، الأمر الذي يؤدي إلى استنزاف الطاقة، وتلف الخلايا، ويؤدي موت الخلايا 1،2. يساهم الإجهاد التأكسدي الشيخوخة وتطوير العديد من الأمراض التي تهدد الحياة بما في ذلك السرطان والسكري والقلب والأوعية الدموية والأمراض العصبية 3-9.

وقد تطورت الخلايا استراتيجيات الدفاع الأنزيمية وغير الأنزيمية للحفاظ على مستويات ROS المناسبة وحماية ناخبيهم من التلف التأكسدي 1،2. الفائق (الاحمق) الانزيمات تعمل أول من conveRT الفائق إلى H 2 O 2، والتي يتم تحويلها لاحقا إلى المياه عن طريق الكاتلاز أو الانزيمات البيروكسيديز. وتشمل استراتيجيات الدفاع غير الأنزيمية معظمهم من الجزيئات التي تتفاعل بشكل أسرع مع ROS بالمقارنة مع الجزيئات الخلوية، وحماية المكونات الخلوية الأساسية. على الرغم من الدور الوقائي للROS إزالة السموم والإنزيمات، وبعض الجزيئات ROS هربا من آليات الدفاع المضادة للأكسدة، وتؤدي إلى الضرر التأكسدي. كشف وإصلاح، وتدهور المكونات الخلوية التالفة واستراتيجيات الدفاع الأساسية خلال الاكسدة 1،2.

مسارات إشارات تشارك في مقاومة التوتر والإجهاد التأكسدي على وجه التحديد هي موضع الحفظ تطويريا 10،11. على عكس تجارب زراعة الخلية حيث ترد إلا بصورة جزئية الظروف عضوي، ودراسة الاكسدة في الكائنات النموذج 12،13 لها أهمية كبيرة. C. ايليجانس هو الخيطية حرة المعيشة التي يمكن أن تكون بسهولة وبتكلفة زهيدة طريق مسدودبناءه من جديد على العشب البكتيرية على وسائل الإعلام أجار. انها صغيرة في الحجم (حوالي 1 ملم في الطول) وعادة ينمو باعتباره خنثى-التسميد الذاتي، مما يسهل التلاعب الجيني. أنه يحتوي على دورة الحياة السريعة والقدرة على الإنجاب عالية، تنتج نحو 300 ذرية في جيل، مما يجعلها أداة قوية لأداء شاشات الوراثية على نطاق واسع (14). وC. والتسلسل ايليجانس الجينوم بالكامل وتوقع 40-50٪ من الجينات لتكون المتماثلات من الأمراض المرتبطة الجينات البشرية 15-18. ضربة قاضية للجينات ذات الاهتمام باستخدام رني هي سريعة وسهلة في C. ايليجانس. الجيني أسفل اللائحة يمكن أن يتحقق عن طريق تغذية الحيوانات E. البكتيريا القولونية التي تأوي البلازميد معربا عن RNA المزدوج تقطعت بهم السبل التي تستهدف مرنا من الفائدة 19. لذلك، وتحديد وظيفة الجين باستخدام شاشات رني على نطاق واسع له تأثير كبير على فهم الأمراض التي تصيب الإنسان بما في ذلك السرطان 20،21.

دراسات سمقاومة الإجهاد xidative في C. أدت ايليجانس إلى تحديد آليات الحفظ لمقاومة الاكسدة 13،22. بعض المسارات التي تم تحديدها هي مسارات المشتركة التي تعدل طول العمر ومقاومة للضغوط أخرى أيضا مثل نقص الأكسجين والحرارة والضغط الاسموزي. وتشمل هذه المسارات إشارات الأنسولين، TOR الإشارات، والالتهام الذاتي. وتشمل مسارات رئيسية أخرى إزالة السموم من ROS مثل الانزيمات الفائق الفائق والإنزيمات الكاتلاز، أو في إصلاح الأضرار مثل الصدمة الحرارية والبروتينات كوصي 11،13،22.

يصف هذا البروتوكول كيفية تحديد مقاومة الاكسدة من C. ايليجانس في السائل. كنا flcn-1 (ok975) والبرية من نوع الحيوانات للتدليل على البروتوكول منذ أظهرنا سابقا زيادة مقاومة الاكسدة عند فقدان flcn-1 (ok975) في C. ايليجانس 23. لقد أظهرنا أيضا أن هذه المقاومة تعتمد زيادةعلى AMPK والالتهام الذاتي، محور الإشارات التي تعمل على تحسين الطاقة الحيوية الخلوية ويعزز مقاومة الإجهاد 23. PQ هو الإجهاد التأكسدي الذي يتداخل مع سلسلة نقل الإلكترون لإنتاج أنواع الاكسجين التفاعلية 24. ويمكن أن تتكيف نفس الفحص ويمكن استخدام مصادر ROS أخرى أو ROS المركبات توليد مثل H 2 O 2 و روتينون. وقد وضعت فحوصات مماثلة على لوحات التي تستخدم فيها تركيزات منخفضة من PQ 25،26. الاستفادة من هذا الاختبار هو أنه سريع جدا، ويمكن الحصول على النتائج في يوم واحد. بالإضافة إلى ذلك، إجمالي حجم السائل المستخدم لأداء المقاومة الاكسدة فحص في 96 لوحات جيدة منخفضة بالمقارنة مع حجم المستخدمة في إعداد PQ التي تحتوي على لوحات. ولذلك، فإن كمية PQ المستخدمة في فحص السائل منخفضة، مما يجعل فحص غير مكلف ويحد من إنتاج النفايات السامة. ومع ذلك، القيود المفروضة على هذا الاختبار بالمقارنة مع المقايسات لوحة تشمل لاالمسيخ الطعام في فحص السائل وأقل تركيز الأوكسجين في السائل بالمقارنة مع الهواء. هذه هي العوامل الهامة التي في بعض الحالات، قد تؤثر على النتائج. لذلك، مؤكدا استنساخ باستخدام وسائل أخرى للمقاومة الاكسدة ويوصى لدعم النتائج التي تم الحصول عليها في هذا الاختبار.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. إعداد الكواشف

  1. إعداد وسائل الاعلام للC. ايليجانس النمو (في هذه الحالة، والحيوانات البرية من نوع والحيوانات flcn-1 (ok975) متحولة).
    1. استعد تعديلها إلا Bacto-ببتون (MYOB) مزيج Youngren والجافة التي تحتوي على 5.5 غرام من تريس حمض الهيدروكلوريك، و 2.4 غرام من قاعدة تريس، 31 غرام من Bactopetone، 20 غرام من كلوريد الصوديوم و 0.08 غرام من الكولسترول. تخلط جيدا مع اهتزاز.
      ملاحظة: هذا المزيج هو كاف لإعداد 10 L من MYOB المتوسطة.
      ملاحظة: يمكن استخدام عادي متوسط ​​النمو (NGM) لوحات بدلا من لوحات MYOB 27. ومع ذلك، فإن نفس النوع من لوحات يجب أن تستخدم لمقارنات صحيحة بين السلالات وبين يكرر مستقلة. في هذا البروتوكول، ونحن تستخدم فقط لوحات MYOB.
    2. إعداد 1 L من MYOB المتوسطة وذلك بإضافة 6 غرام من MYOB المزيج الجاف، 17 غرام من أجار وجعل ما يصل الى 1 L مع H 2 O والأوتوكلاف لمدة 45 دقيقة في 122 درجة مئوية. صب لوحات واسمحوا الجافة في RT لمدة 2 أيام.
    3. باستخدام تقنية معقمة، تطعيم 100 مل من cultuإعادة من مرق LB المتوسطة مع E. البكتيريا القولونية OP50 وتنمو O / N عند 37 درجة مئوية.
    4. لوحات MYOB البذور مع E. البكتيريا القولونية OP50. السماح لها أن تنمو في RT لمدة 48 ساعة.
  2. استعدادا لdownregulation الجينات باستخدام رني
    1. إعداد MYOB لوحات رني الرضاعة. المضي قدما كما هو الحال في الخطوات 1.1.1 و1.1.2. بعد التعقيم، والسماح للمتوسطة ليبرد إلى حوالي 55 درجة مئوية، وإضافة 1 مل من 1 M الآيزوبروبيل β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) و 1 مل من 100 ملي الأمبيسلين.
    2. خط E. القولونية HT115 البكتيريا تحولت مع البلازميد، والذي يعبر إما السيطرة أو flcn EV-1 رني خاص على الأمبيسلين (50 ميكروغرام / مل) / تتراسايكلين (15 ميكروغرام / مل) أجار لوحات. تنمو ثقافة O / N عند 37 درجة مئوية.
    3. اختيار المستعمرات وتطعيم E. القولونية HT115 البكتيريا تحولت مع البلازميد الذي يعبر إما السيطرة أو flcn EV-1 رني محددة وتنمو الثقافة في LB / الأمبيسلين (50 ميكروغرام / مل) والمتوسطة O / N عند 37 & #176؛ C.
    4. لوحات البذور مع E. البكتيريا القولونية HT115 EV أو HT115 flcn-1 البكتيريا رني.
      ملاحظة: حافظ على لوحات 48 ساعة على RT قبل الاستخدام. إذا رني ضربة قاضية من قبل الرضاعة في فعالية استخدام وسائل أخرى للتسليم DS-RNA 28.
  3. حمل الاكسدة باستخدام الباراكوات (PQ):
    1. إعداد العازلة M9 عن طريق خلط 3 غرام من KH 2 PO 4 و 6 غرام من نا 2 هبو 4، 5 غرام من كلوريد الصوديوم و 0.25 غرام من MgSO 4 · 7 H 2 O. حتى تصل الى 1 L مع الماء المقطر. حل الأوتوكلاف لمدة 45 دقيقة في 122 درجة مئوية، وتخزين الزجاجات على RT.
    2. في يوم الفحص، وإعداد حل M9 / PQ التي تحتوي على. لهذا البروتوكول، استخدم 100 ملي PQ (0.1028 غرام من PQ الذائبة في 4 مل من العازلة M9 يسد كامل 96 لوحات جيدا مع 40 ميكرولتر من M9 / PQ لكل بئر).
      تنبيه: PQ هو مركب خطرة وشديدة السمية. التعامل وفقا للمبادئ التوجيهية الملائمة.
      ملاحظة: عند تشغيل أولا الجديدالقطار أو شرطا جديدا، فمن المستحسن لفحص البقاء على قيد الحياة في زيادة تركيزات PQ لتحديد أفضل تركيز لاستخدامها من أجل قتل الحيوانات في غضون 7-10 ساعة.

2. إعداد العمر متزامنة-L4 السكان

  1. نقل 20 المنحرفين الكبار حامل لوحة MYOB جديدة مع المصنف E. البكتيريا القولونية OP50. إعداد لوحات عدة استنادا إلى عدد من الديدان اللازمة أثناء الفحص.
  2. تسمح لهم لوضع البيض لمدة 6 ساعة ثم استخدام دودة سلك البلاتين الإختيار إزالة الأمهات. تحقق لوحات تحت المجهر لتقدير عدد البيض الذي تضعه.
  3. السماح للفقس البيض وتنمو عند 20 درجة مئوية لمدة 48 ساعة. في هذا الوقت، والحيوانات في أواخر L4 / الشباب مرحلة البلوغ. اختيار الحيوانات نفس المرحلة ونقل إلى الآبار التي تحتوي على حل PQ.
    ملاحظة: منذ 48 ساعة حضانة ينطبق فقط على المسوخ التي تنمو على نحو مماثل لالبرية من نوع الحيوانات، فمن المهم رصد التنمويةمعدل طفرات اختبار حديثا لضمان توافقه مع معدل التنمية النوع البري، وإلا، يجب استخدام الجداول الزمنية الأخرى.
  4. بدلا من ذلك، استخدام تقنيات التزامن. توليد السكان متزامنة من الديدان L1 اليرقات باستخدام محلول هيبوكلوريت (25 مل من الماء و 125 مل من 5.25٪ هيبوكلوريت الصوديوم، و 50 مل من 4 M هيدروكسيد الصوديوم؛ التفاف زجاجة مع رقائق الألومنيوم لعزل من الضوء). ومع ذلك، لهذا الاختبار، فمن غير المستحسن، لأن التبييض المكثف قد تؤثر على سلوك الحيوانات أثناء الفحص.
    تنبيه: التعامل مع محلول هيبوكلوريت فقا للمبادئ التوجيهية.
    ملاحظة: عند استخدام رني إلى أسفل تنظيم الجينات في المصالح، مزامنة المنحرفين كما هو موضح في الباب 2، باستثناء نقل الأمهات إلى لوحات رني المصنف مع البكتيريا محددة رني. عندما ضربة قاضية مع رني ضعيفة، فمن المستحسن التغذية لأجيال متعددة.

3. المسرحية الإجهاد التأكسدي المقاومة الفحص

  1. ماصة 40 ميكرولتر من 100 ملي PQ الحل (إعداد الطازجة) إلى كل بئر من 96 لوحة جيدا. استخدام لا يقل عن 12 بئرا كما يعيد كل حالة (العلاج، متحولة، وما إلى ذلك). باستخدام دودة اختيار سلك البلاتين، ونقل 5-8 الحيوانات L4 اليرقات على كل جانب مما يدل على وقت البدء ووقت الانتهاء.
  2. عند بدء شرط آخر، لاحظ وقت البدء ووقت الانتهاء. وضع لوحة في 20 درجة مئوية في فترة حضانة بين نقل الديدان وسجل الحيوانات النافقة بعد ساعة من وقت البدء.
  3. باستخدام مجهر تشريح، عد بقاء كل ساعة. يهز بلطف لوحة قبل البدء في العد. تشير الديدان التي لا تتحرك، حتى بعد اكتشاف ضوء عالي الكثافة، والحيوانات النافقة. يشير أيضا إلى عدد من الحيوانات على قيد الحياة.
    ملاحظة: عند النظر إلى شكل دودة، والذيول وحركة الرأس في تضخم عالية، تساعد في تحديد الديدان الميتة من على قيد الحياة.
  4. كرر هذه الخطوة كل ساعة حتى معظم الديدان قد لقوا حتفهم.
<ص الطبقة = "jove_title"> 4. تقرير من البقاء على قيد الحياة نسبة في كل مرة نقطة

  1. حساب العدد الكلي للحيوانات في حالة بإضافة العدد الكلي للحيوانات نقلها إلى كل جانب. تجاهل الحيوانات التي تضررت أو قتل على النقل.
  2. لكل نقطة زمنية، وحساب العدد الكلي للحيوانات الميتة في حالة (مجموع الحيوانات النافقة في 12 بئرا). لكل نقطة زمنية، وحساب النسبة المئوية للموت (عدد الحيوانات النافقة مقسوما على العدد الكلي للحيوانات ومضروبا 100) ونسبة البقاء على قيد الحياة (100 ناقص الموت في المئة).
  3. كرر هذا الاختبار 3 مرات على الأقل مستقلة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

مقارنة البرية من نوع C. ايليجانس إلى flcn-1 (ok975) الحيوانات متحولة

نحن هنا تستخدم 100 ملي PQ لتحديد المقاومة البرية من نوع C. ايليجانس الحيوانات مقارنة flcn-1 (ok975) وهو ما ثبت لمقاومة الاكسدة، والحرارة، ونقص الأكسجين 23. بعد 4 ساعات من العلاج، 48.3٪ من النوع البري على قيد الحياة بالمقارنة مع٪ 77.8 البقاء على قيد الحياة في 1 flcn (ok975) الحيوانات. كما هو...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

C. ايليجانس هو كائن نموذجا جذابا لدراسة مقاومة الاكسدة في الجسم الحي وراثيا لأنه يمكن أن يكون مثقف بسهولة، ويؤدي إلى عدد كبير من نسل متطابقة وراثيا بسرعة. أساليب متعددة لقياس مقاومة الاكسدة وقد وصفت في وقت سابق، وأنها تستند إلى مكملات لوحات الثقافة مع مختلف مصادر ROS مثل PQ، روتينون، H 2 O 2، وجغلون 25،26،29-32. نحن هنا وصف البروتوكول الذي يقيس الأكسدة المقاومة الضغط في السائل في 96 لوحات جيدة باستخدام 100 ملي PQ. وقد أجريت فحص مم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

نعترف مركز علم الوراثة انواع معينة لC. سلالات ايليجانس. وقدمت الدعم المالي من قبل معهد بحوث فوكس تيري. علينا أيضا أن نعترف الدعم الممنوح للEP من Rolande ومارسيل غوسلين العليا Studentship ومنحة التدريب CIHR / FRSQ في FRN53888 أبحاث السرطان من برنامج التدريب أبحاث السرطان ماكجيل المتكاملة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Agar الصف البكتريولوجيMulticell800-010-LG
الببتون البكتريولوجيOxoidLP0037
كلوريد الصوديوم درجة التكنولوجيا الحيويةBioshop7647-14-5
الكوليسترولSigmaC8503-25G
UltraPure tris hydrochlorideInvitrogen15506-017
Tris أمينوميثانبيو بيسك كندا77-86-1
IPTGسانتا كروز التكنولوجيا الحيويةsc-202185A
أمبيسيلينبيوشۆب69-52-3
مستخلص الخميرةBio Basic Inc.8013-01-2
هيدرات ثنائي كلوريد الميثيل فيولوجينألدريتش كيمياء856177-1G
طبق بتري 60 × 15 ممفيشرFB0875713A
بيبت 10 ملفيشر1367520
فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدةG-BiosciencesRC-084
كبريتات المغنيسيوم سباعي الهيدراتسيجماM-5921
فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدةBioshop7558-79-4
ديسكفري v8 مجهر
زايس 96 لوحة
جيدا flcn-1< / em> مكتبة RNAi المصدرAhringer
ستيريو ميكروتيتر واضحة

المراجع

  1. Schieber, M., Chandel, N. S. ROS function in redox signaling and oxidative stress. Curr Biol. 24, R453-R462 (2014).
  2. Alfadda, A. A., Sallam, R. M. Reactive oxygen species in health and disease. J Biomed Biotechnol. 2012, 936486(2012).
  3. Finkel, T., Holbrook, N. J. Oxidants, oxidative stress and the biology of ageing. Nature. 408, 239-247 (2000).
  4. Di Carlo, M., Giacomazza, D., Picone, P., Nuzzo, D., San Biagio, P. L. Are oxidative stress and mitochondrial dysfunction the key players in the neurodegenerative diseases. Free Radic Res. 46, 1327-1338 (2012).
  5. Gandhi, S., Abramov, A. Y. Mechanism of oxidative stress in neurodegeneration. Oxid Med Cell Longev. 2012, 428010(2012).
  6. Trushina, E., McMurray, C. T. Oxidative stress and mitochondrial dysfunction in neurodegenerative diseases. Neuroscience. 145, 1233-1248 (2007).
  7. Touyz, R. M., Briones, A. M. Reactive oxygen species and vascular biology: implications in human hypertension. Hypertens Res. 34, 5-14 (2011).
  8. Gorrini, C., Harris, I. S., Mak, T. W. Modulation of oxidative stress as an anticancer strategy. Nat Rev Drug Discov. 12, 931-947 (2013).
  9. Sosa, V., et al. Oxidative stress and cancer: an overview. Ageing research reviews. 12, 376-390 (2013).
  10. Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. Reactive Oxygen Species and Aging in Caenorhabditis elegans: Causal or Casual Relationship. Antioxid Redox Signal. 13, 1911-1953 (2010).
  11. Baumeister, R., Schaffitzel, E., Hertweck, M. Endocrine signaling in Caenorhabditis elegans controls stress response and longevity. J Endocrinol. 190, 191-202 (2006).
  12. Markaki, M., Tavernarakis, N. Modeling human diseases in Caenorhabditis elegans. Biotechnol J. 5, 1261-1276 (2010).
  13. Rodriguez, M., Snoek, L. B., De Bono, M., Kammenga, J. E. Worms under stress: C. elegans stress response and its relevance to complex human disease and aging. Trends Genet. 29, 367-374 (2013).
  14. Hope, I. A. Practical approach series. , Oxford University Press. 282(1999).
  15. C. elegans Sequencing Consortium. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology. Science. 282, 2012-2018 (1998).
  16. Ahringer, J. Turn to the worm! Current opinion in genetics & development. 7, 410-415 (1997).
  17. Wheelan, S. J., Boguski, M. S., Duret, L., Makalowski, W. Human and nematode orthologs--lessons from the analysis of 1800 human genes and the proteome of Caenorhabditis elegans. Gene. 238, 163-170 (1999).
  18. Culetto, E., Sattelle, D. B. A role for Caenorhabditis elegans in understanding the function and interactions of human disease genes. Hum Mol Genet. 9, 869-877 (2000).
  19. Fire, A., et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391, 806-811 (1998).
  20. Lamitina, T. Functional genomic approaches in C. elegans. Methods Mol Biol. 351, 127-138 (2006).
  21. Poulin, G., Nandakumar, R., Ahringer, J. Genome-wide RNAi screens in Caenorhabditis elegans: impact on cancer research. Oncogene. 23, 8340-8345 (2004).
  22. Moreno-Arriola, E., et al. Caenorhabditis elegans: A Useful Model for Studying Metabolic Disorders in Which Oxidative Stress Is a Contributing Factor. Oxid Med Cell Longev. , 705253(2014).
  23. Possik, E., et al. Folliculin regulates ampk-dependent autophagy and metabolic stress survival. PLoS Genet. 10, e1004273(2014).
  24. Fukushima, T., Tanaka, K., Lim, H., Moriyama, M. Mechanism of cytotoxicity of paraquat. Environ Health Prev Med. 7, 89-94 (2002).
  25. Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. Superoxide dismutase is dispensable for normal animal lifespan. Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 5785-5790 (2012).
  26. Schulz, T. J., et al. Glucose restriction extends Caenorhabditis elegans life span by inducing mitochondrial respiration and increasing oxidative stress. Cell Metab. 6, 280-293 (2007).
  27. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, 71-94 (1974).
  28. Timmons, L. Delivery methods for RNA interference in. C. elegans. Methods Mol Biol. 351, 119-125 (2006).
  29. Wang, B. Y., et al. Caenorhabditis elegans Eyes Absent Ortholog EYA-1 Is Required for Stress Resistance. Biochemistry (Mosc). 79, 653-662 (2014).
  30. Paz-Gomez, D., Villanueva-Chimal, E., Navarro, R. E. The DEAD Box RNA helicase VBH-1 is a new player in the stress response in C. elegans. PLoS One. 9, 97924(2014).
  31. Ward, J. D., et al. Defects in the C. elegans acyl-CoA synthase, acs-3, and nuclear hormone receptor, nhr-25, cause sensitivity to distinct, but overlapping stresses. PLoS One. 9, 92552(2014).
  32. Staab, T. A., Evgrafov, O., Knowles, J. A., Sieburth, D. Regulation of synaptic nlg-1/neuroligin abundance by the skn-1/Nrf stress response pathway protects against oxidative stress. PLoS Genet. 10, e1004100(2014).
  33. Greer, E. L., et al. An AMPK-FOXO pathway mediates longevity induced by a novel method of dietary restriction in. C. elegans. Curr Biol. 17, 1646-1656 (2007).
  34. Allen, E., Walters, I. B., Hanahan, D. Brivanib, a dual FGF/VEGF inhibitor, is active both first and second line against mouse pancreatic neuroendocrine tumors developing adaptive/evasive resistance to VEGF inhibition. Clin Cancer Res. 17, 5299-5310 (2011).
  35. Apfeld, J., O'Connor, G., McDonagh, T., DiStefano, P. S., Curtis, R. The AMP-activated protein kinase AAK-2 links energy levels and insulin-like signals to lifespan in C. elegans. Genes Dev. 18, 3004-3009 (2004).
  36. Lee, H., et al. The Caenorhabditis elegans AMP-activated protein kinase AAK-2 is phosphorylated by LKB1 and is required for resistance to oxidative stress and for normal motility and foraging behavior. J Biol Chem. 283, 14988-14993 (2008).
  37. Honda, Y., Honda, S. The daf-2 gene network for longevity regulates oxidative stress resistance and Mn-superoxide dismutase gene expression in Caenorhabditis elegans. FASEB J. 13, 1385-1393 (1999).
  38. Restif, C., Metaxas, D. Tracking the swimming motions of C. elegans worms with applications in aging studies. Med Image Comput Comput Assist Interv. 11, 35-42 (2008).
  39. Buckingham, S. D., Sattelle, D. B. Fast, automated measurement of nematode swimming (thrashing) without morphometry. BMC Neurosci. 10, 84(2009).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

تصحيح


Formal Correction: Erratum: Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates
Posted by JoVE Editors on 1/01/1970. Citeable Link.

A reference was corrected in the publication of Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates. There was an error with reference 34 in the Citations section. It has been updated from:

Allen, E., Walters, I.B., Hanahan, D. Brivanib a dual FGF/VEGF inhibitor,is active both first and second line againstmouse pancreatic neuroendocrine tumors developing adaptive/evasive resistance toVEGF inhibition. Clin Cancer Res. 17, (16) 5299-310 (2011).

to:

Allen, A. T., Maher, K. N., Wani, K. A., Betts, K. E., & Chase, D. L. Coexpressed D1- and D2-like dopamine receptors antagonistically modulate acetylcholine release in Caenorhabditis elegans. Genetics. 188, 579-590 (2011).

الوسوم

لوحة معايرة دقيقة ذات 96 بئرًاالمعالجة بالباراكواتمقايسة البقاءبالغون شباب متزامنون في الطور L4مجهر تشريحيمحلول M9 المنظمتداخل الحمض النووي الريبيمسوحات جينية
قياس مقاومة الاكسدة من
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.