تم استخدام الفئران في 7 أسابيع من العمر ويزن 300-350 جرام في هذه التجربة: الذكور ويستار (WI يستار HSD). تم الحفاظ على جميع الفئران على 12 ساعة دورة الضوء / الظلام وتلقى القياسية طعام الفئران المخبرية والمياه libitum الإعلانية. تتفق جميع الإجراءات التجريبية مع دليل لرعاية واستخدام حيوانات التجارب التي وضعها المجلس الكندي للرعاية الحيوان وموافقة الأخلاق التي تمنحها جامعة كولومبيا البريطانية. أجريت عملية جراحية ورعاية الحيوان وفقا للاجراءات المتبعة في المختبر لدينا (رمزي وآخرون 2010) 17.
1. إعداد الحيوانات: العمليات الجراحية
- زرع جهاز القياس عن بعد
ملاحظة: تم تنفيذ البروتوكول وفقا لمواصفات الشركة الصانعة والخبرة السابقة لدينا مع زرع الجهاز: 16 - قبل علاج الحيوانات مع إينروفلوكساسين، مرة واحدة في اليوم لمدة 3 أيام (10 ملغ / كغ، ق.C.)، قبل الجراحة.
- إزالة الأطعمة الصلبة من قفص 9-13 ساعة قبل الجراحة. ويمكن توفير نظام غذائي لينة التغذية استبدال وجبة خلال هذه الفترة.
- تخدير الحيوانات باستخدام جرعة تحريض 4٪ الأيزوفلورين في غرفة الاستقراء وجرعة صيانة ما يقرب من 1.5٪ الأيزوفلورين (مع 1-1.5 لتر / دقيقة الأوكسجين) باستخدام الدائرة باين. استخدام منعكس قرصة أخمص قدميه وردود الفعل القرنية لتقييم ما إذا كانت الحيوانات في الطائرة من التخدير الجراحي. يجب مراقبة التنفس لتقييم ما إذا كان عمق التخدير مرتفع جدا (أي معدل التنفس بطيئا جدا ويلهث، شاحب الأغشية المخاطية) أو منخفضة جدا (أي سريعة، التنفس الضحلة مما يدل على الحيوان قد لا تكون على طائرة من التخدير الجراحي ). كرر رصد الطائرة من التخدير الجراحي تقريبا كل 5 دقائق أثناء الجراحة وضبط الأيزوفلورين جرعة عند الضرورة.
ملاحظة: يتم إجراء جميع العمليات الجراحية باستخدام تقنية العقيم: على وجه التحديد، ملابس الجراحينالدعك الجراحية، وكأب، وقناع، وقفازات معقمة. ويلاحظ إجراء تغطية بقفاز فتح، تعقيمها حزمة الجراحية التي تحتوي على الأدوات الجراحية يتم فتح باستخدام تقنية معقمة ورايات الحيوان قبل البدء بالجراحة. الأدوات الجراحية هي في الخرز الساخنة بين العمليات الجراحية (لمدة تصل إلى خمس عمليات جراحية) تعقيم الحافة. وتعقيمها الإسفنج الجراحية والشاش قبل استخدامها. أثناء الجراحة، يتم الاحتفاظ الحيوانات على بطانية-تدوير المياه الحفاظ على 37 درجة مئوية. - إدارة البوبرينورفين (0.02 ملغ / كغ. الشوري) على الفور قبل الجراحة. وعلاوة على ذلك، إدارة كيتوبروفين (5 مغ / كغ. الشوري) قبل الجراحة لتوفير تسكين المتعدد الوسائط. إدارة بوبيفكين (5 ملغم / كغم، SC) مباشرة قبل الجراحة لتوفير كتلة خط المحلي. على حلق البطن، وتطبيق بالتناوب مسحات من الكلورهيكسيدين و 70٪ من الإيثانول (ثلاث مرات لكل منهما)، تليها اليود البوفيدون لا يقل عن 1 دقيقة، وإزالة 70٪ من الإيثانول (في كل مرة مع الكحول الذي افتتح حديثا مسح). ينظف الجلدمصنوع بطريقة مركزية ابتداء من منتصف الخط شق وتحلق الخارج (حتى لا يلوث المنطقة من قبل "/ العودة اليها" الحركات). استخدام مسحات شاش معقم وتجاهل بين كل تطبيق. يتم تكرار هذه العملية ثلاث مرات قبل البدء جراحة الحيوان. في حين قص وتنظيفها جراحيا، والحفاظ على الحيوانات في مخروط الأنف متصلة الدوائر غير إعادة التنفس-باين تحت ما يقرب من 1.5٪ جرعة صيانة الأيزوفلورين. ضبط مستوى الأيزوفلورين كما هو مطلوب للحفاظ على الحيوانات في خطة من التخدير الجراحي.
- جعل شق البطن خط الوسط 5 سم قطع طريق العضلات والغشاء البريتوني تعريض الامعاء.
- سحب الأمعاء (وهذا سوف فضح الشريان الأورطي النازل في الخلفية جدار البطن)، وتغطي القناة الهضمية بشاش معقم مبلل الجراحي مع 2-3 مل من محلول قارعو الأجراس والحفاظ رطبة مع قارعو الأجراس إضافية كلما كان ذلك ضروريا لمنع جفاف الأنسجة من خلال إجراء .
- بلانت تشريح حول الشريان الأورطي والشريان الأورطي فصل من الوريد الأجوف السفلي الاستفادة من spatulae القزحية.
- مكان الحروف المركبة (8-0 خيوط حيدة) حول نهايات منقاري والذيلية للطبقة الغلالة البرانية الخارجية من الشريان الأورطي، فقط البعيدة إلى الشريان الكلوي.
- رفع الأربطة الاغلاق لفترة وجيزة من تدفق الدم وثقب الشريان الأبهر على مستوى 1-2 ملم الأمامي إلى التشعب الحرقفي مع عازمة إبرة قياس 25 على 90 درجة على الحافة.
- توجيه غيض من القسطرة لجهاز القياس في الشريان الأورطي باستخدام 20 عيار إبرة منحنية. تقدم rostrally للتأكد من أن الطرف هو مجرد البعيدة للشرايين الكلوية
- بإصلاحه باستخدام كمية صغيرة من مادة لاصقة الأنسجة. إزالة الأربطة وضمان عدم وجود تدفق الدم انسداد المقرر أن القسطرة أو الأنسجة لاصق.
- تأمين جسم الجهاز القياس عن بعد في جدار البطن باستخدام 4-0 خيوط الحرير. استخدام 4-0 Vicryl و4-0 الغرز البرولين لإغلاق muscلو والجلد، على التوالي.
- العناية القياس عن بعد زرع في مرحلة ما بعد الجراحة
ملاحظة: للحصول على ال 14 يوما الأولى يجب فحص الحيوانات بعد الجراحة لا يقل عن 3 مرات يوميا، بالإضافة إلى تقييم رصد مفصل مرة واحدة في اليوم. تقييم الحيوانات في 7 فئات هي: وزن الجسم، والمظهر المادي (يتم تقييم على أساس الألم على علامات مثل زيادة إنتاج البورفيرين ينظر حول العينين والأنف والجبهة الكفوف، وعلامات التجهم الوجه)، والسلوك / النشاط، التغوط، والجلد (بما في ذلك hunching، انتصاب الشعر ، وتضميد الجراح شق وتورم مصلي)، الماء والتنفس. - تغذية الحيوانات مع الفاكهة، ومجموعة متنوعة من الحبوب، لينة حمية غذائية استبدال وجبة، وتوفير المياه libitum الإعلانية، لمدة 6 أيام بعد زرع جهاز القياس عن بعد. يجب أن يكون الحيوانات منتظم طعام القوارض الصلبة المحتجزة لأول رد يوم الجراحة. حقن الحيوانات مع درجة حرارة الحل قارعو الأجراس Lactated (5 مل) تحت الجلد لمدة 3 أيام الأولى بعد الجراحة وعند ظهورأعراض الجفاف. إدارة الحل قارعو الأجراس (5 مل) عند الضرورة بناء على تقييم للحيوانات (علامات خيمة الجلد، وآذان شاحب / الأغشية المخاطية) خلال عمليات التفتيش في الصباح والمساء.
- إدارة إينروفلوكساسين (10 ملغم / كغم، SC) وكيتوبروفين (5 مغ / كغ، الشوري) مرة واحدة يوميا، لمدة 3 أيام بعد العملية. إدارة البوبرينورفين (0.02 ملغ / كغ، SC) خلال فترة الصباح والمساء (أي كل 12 ساعة) لمدة 3 أيام التالية بعد الجراحة. يمكن أن تدار جرعة منتصف النهار من البوبرينورفين (0.02 ملغ / كغ، SC) إذا لاحظت علامات الألم / الشدة.
- Transection كامل للحبل الشوكي
ملاحظة: السماح للحيوانات للتعافي من جراحة زرع القياس عن بعد لمدة 14 يوما على الأقل قبل T3 جراحة كاملة transection. - حيوانات ما قبل تعامل مع إينروفلوكساسين وقائية (10 ملغم / كغم، SC) لمدة ثلاثة أيام قبل الجراحة اصابات النخاع الشوكي.
- تخدير الحيوانات تحت جرعة تحريض 4٪ الأيزوفلورين كما هو موضح سابقا. وعلاوة على ذلك،حقن الحيوانات مع هيدروكلوريد الكيتامين (70 ملغ / كلغ، والملكية الفكرية)، وهيدروكلوريد ديكسميديتوميدين (0.5 ملغ / كغ، والملكية الفكرية).
ملاحظة: للحصول على جراحات transection كاملة، وتوسع الأوعية التي تسببها الأيزوفلورين في كثير من الأحيان إلى حدوث مشاكل مع الارقاء بمجرد مقطوع الحبل. يمكن منع هذه المشكلة عن طريق استخدام الكيتامين / ديكسميديتوميدين كوكتيل. يجب تخدير الحيوانات لمدة 20-25 دقيقة، وعكس باستخدام atipamezole (1 ملغم / كغم، SC) في أعقاب عملية جراحية في العمود الفقري الحبل transection. - قبل الجراحة إدارة البوبرينورفين تحت الجلد (0.02 ملغ / كلغ)، وكيتوبروفين (5 مغ / كغ). إدارة بوبيفكين (5 ملغم / كغم، SC) مباشرة قبل الجراحة لتوفير كتلة خط المحلي. على حلق البطن، بالتناوب فرش من الكلورهيكسيدين و 70٪ من الإيثانول (ثلاث مرات لكل منهما)، تليها اليود البوفيدون ينبغي أن تطبق على الأقل 1 دقيقة، وإزالة 70٪ من الإيثانول (في كل مرة مع الكحول الذي افتتح حديثا مسح). وإلى أن يتم فرش بطريقة مركزية بدايةفي مركز خط شق وتحلق الخارج (حتى لا يلوث المنطقة من قبل "/ العودة اليها" الحركات). استخدام شاش معقم وتجاهل بين كل تطبيق. كرر هذه العملية ثلاث مرات قبل البدء جراحة الحيوان. في حين قص وتنظيفها جراحيا، والحفاظ على الحيوانات في مخروط الأنف تحت ما يقرب من 1.5٪ جرعة صيانة الأيزوفلورين (تعديل كما هو مطلوب للحفاظ على الطائرة من التخدير الجراحي). طوال مدة الحيوانات جراحة يتم الاحتفاظ على بطانية-تدوير المياه الحفاظ على 37 درجة مئوية.
- جعل شق ظهري خط الوسط، 2 سم في الطول، في العضلات السطحية التي تغمر C8-T3 فقرات.
- بلانت تشريح من أجل الكشف عن طبقة الجافية.
- يخترق طبقة الجافية مع microscissors أو مع طرف إبرة قياس 25.
- فتح الجافية في الفجوة بين الفقرتين T2-T3 وإجراء transection كاملة باستخدام microscissors. فتح microscissors ولكن ليس أفقيا يكفي أن تنفجر arterie الفقريالصورة والأوردة. في حركة سريعة القطع في الحبل الشوكي وبحث عن نشل مبالغ فيه في الأطراف الخلفية الحيوان. تأكيد transection كاملة عن طريق الفصل البصري من جذوعها الحبل الشوكي منقاري والذيلية.
- بعد تأكيد، ضع جلفوم بين جذوعها لتحقيق الارقاء. تطبيق جلفوم كافية لوقف النزيف وفصل جذوعها من الحبل الشوكي.
- استخدام 4-0 Vicryl و4-0 الغرز البرولين لإغلاق العضلات والجلد، على التوالي. بعد جراحة النخاع الشوكي، وإعطاء الحيوانات قبل حرارة حل أفرز اللبن قارع الأجراس (5 مل، الشوري في 30 درجة مئوية)، والسماح لهم لاسترداد في بيئة تسيطر عليها درجة الحرارة.
- الحبل الشوكي Transection العناية بعد الجراحة
ملاحظة: للحصول على ال 14 يوما الأولى يجب فحص الحيوانات بعد الجراحة 3 مرات يوميا، بالإضافة إلى تقييم رصد مفصل مرة واحدة في اليوم. بعد 14 يوما ويمكن تكرار تقييم مفصل للرصد كل يوم. تقييم الحيوانات في 7 categoريس: وزن الجسم، والمظهر المادي (يتم تقييم على أساس الألم على علامات مثل بورفيرين وكشر الوجه)، والسلوك / النشاط، التغوط، والجلد (بما في ذلك hunching، انتصاب الشعر، وتضميد الجراح شق وتورم مصلي)، الماء والتنفس. لأول 5-7 أيام قربة ينبغي فحصها وأعرب على الأقل 3 مرات في اليوم الواحد. - تغذية الحيوانات مع الفاكهة، ومجموعة متنوعة من الحبوب والغذائية لينة استبدال وجبة غذاء، وتوفير المياه libitum الإعلانية، عن 8-14 أيام بعد جراحة الحبل الشوكي transection. حقن الحيوانات مع الحل أفرز اللبن قارع الأجراس في درجة حرارة (5 مل) تحت الجلد لمدة 3 أيام الأولى بعد الجراحة، وبناء على أعراض الجفاف. إدارة حل رينغر (5 مل) عند الضرورة بناء على تقييم من الحيوانات خلال الشيكات.
ملاحظة: بعد transection الحبل الشوكي، الفئران يحمل شلل في الأطراف الخلفية، وambulate باستخدام انثناء والإرشاد من الأطراف الأمامية، التي يتم الاحتفاظ في هذا النموذج الاصابة. الفئران تفتقر الجذع والذيل الدعم. لتسهيلالحركة في القفص، يجب وضع شبكة المطاط تحت الفراش الشوفان تدحرجت. وهذا يسمح الفئران لفهم الشبكة مع الأرجل الأمامية، وتتحرك بسهولة في القفص للوصول إلى الغذاء والماء. يجب تغيير الفراش يوميا. في يوم 7 بعد transection الحبل الشوكي، يجب أن يتم استبدال الفراش الشوفان من قبل الأصلي الفراش رقائق الخشب. يتم استخدام الفراش الشوفان توالت منذ الفئران التي أعطيت البوبرينورفين يمكن أن تتطور بيكا الذي يأكلون الفراش وهذا يمكن أن يسبب الانحشار المريء. لفائف الشوفان هي لم يحترم الانحشار ماصة من المريء مع لفائف الشوفان. - إدارة إينروفلوكساسين (10 ملغم / كغم، SC) وكيتوبروفين (5 مغ / كغ، الشوري) مرة واحدة يوميا لمدة 3 أيام بعد العملية. إدارة البوبرينورفين (0.02 ملغ / كغ، SC) خلال فترة الصباح والمساء (أي كل 12 ساعة) لمدة 3 أيام التالية بعد الجراحة. يمكن أن تدار جرعة منتصف النهار من البوبرينورفين إذا لاحظت علامات الألم / الشدة.
2. القياسرصد معلمات الدورة الدموية
- جمع تغلب على حدة مكافحة ضغط الدم الشرياني (ABP) ودرجة حرارة الجسم الأساسية كل يوم لمدة 24 ساعة، قبل وبعد اصابات النخاع الشوكي. أخذ عينات من ضغط الدم الشرياني ودرجة حرارة الجسم الأساسية عند 1000 هرتز في 24 كتل ساعة باستخدام جهاز القياس عن بعد.
- وضع SmartPad تحت قفص الحيوان لإعادة شحن لاسلكي للمحول ولاستقبال إشارات مقياس البعد الرقمي من محولات الطاقة.
ملاحظة: يتم تمرير انتاج التيار الكهربائي في وقت لاحق على لتحديد مواصفات وصله بجهاز الكمبيوتر، الذي ينظم تدفق البيانات من كل قناة. يتم تحويل الجهد لضغط الدم الشرياني ودرجة الحرارة التسجيلات مستمرة. تصور بيانات العينة باستخدام برنامج الحصول على البيانات، مثل LabChart. - تجاهل بيانات القياس عن بعد التي تم جمعها خلال مراقبة الحيوانات، فضلا عن 10 دقيقة مباشرة قبل مراقبة و 10 دقيقة بعد الرصد.
3. تقييم عفوية Incidبسبب الخلافات من الاستقلال الذاتي خلل المنعكسات (AD)
ملاحظة: تم تقييم وتيرة وشدة ومدة الأحداث م عفوية باستخدام خوارزمية ضعت لمنطقتنا رواية م كشف جافا منصة برمجيات (الشكل 4). وقد تم تطوير خوارزمية جديدة للكشف عن أحداث م عفوية على أساس 24 ساعة متوسط ضغط الدم الانقباضي والقياس عن بعد الموارد البشرية التسجيلات قبل وبعد اصابات النخاع الشوكي باستخدام المعايير المحددة في الشكل 2 تلقائيا.
- استخراج القيم متوسط ضغط الدم الانقباضي والموارد البشرية من بيانات القياس الخام خلال الفترة من الاهتمام باستخدام برنامج الحصول على.
ملاحظة: برنامج شراء يكتشف ويحدد قيمة قمم متوسط ضغط الدم الانقباضي من تسجيلات برنامج الجسر الأكاديمي المستمر. ومن استقراء معدل ضربات القلب عن طريق تحديد المسافة الزمنية بين قمم متوسط ضغط الدم الانقباضي المجاورة. - تحميل ملف CSV من التسجيلات القياس عن بعد مع الفاصل بين الضربات في العمود A والقيم متوسط ضغط الدم الانقباضي في العمود B، القيم MAP في العمود C والوقت من اليوم طن العمود D (الشكل 4A).
- باستخدام برنامج (الشكل 4B-D)، حدد مجموعة الموارد البشرية الفسيولوجية ذات الصلة (أي آر لفترة R) للتسجيلات متوسط ضغط الدم الانقباضي بين 180 نبضة في الدقيقة و 625 نبضة في الدقيقة. تحديد نطاق الموارد البشرية ذات الصلة على البرنامج بموجب وحات معدل ضربات القلب والحد الأدنى والحد الأقصى لمعدل ضربات القلب.
- إنشاء عتبة متوسط ضغط الدم الانقباضي والموارد البشرية من خلال المتوسط المتحرك نافذة من 240 ثانية. بيان طول نافذة متوسط عتبة الانتقال للتحليل في لوحة عتبة م المدة.
- وضع الخطة الاستشرافية عتبة نقلها في 20 مم زئبق أعلى من متوسط خط الأساس تتحرك. تشير قيمة تبديل في المتوسط المتحرك عتبة لوحة إبدال BP.
- عزل التجمعات ذروة الخطة الاستشرافية التي تتجاوز عتبة نقلها مع ذروة إلى ذروة فترة أقل من 2 ثانية ولمدة تزيد عن 10 ثانية. تحديد الذروة إلى الذروة الفاصلة باستخدام Interpeak الفاصل BP ودوفترة التموينية باستخدام ألواح الذروة العنقودية الفاصل BP.
- مجموعات قمة مجموعة الخطة الاستشرافية التي هي في غضون 120 ثانية من بعضها البعض.
ملاحظة: سوف الكشف عن أحداث م المحتملة التي هي في غضون 120 ثانية من بعضها البعض تصنيفها كما حدث واحد. تحديد المدة القصوى المسموح به بين مجموعات متتالية الخطة الاستشرافية للتمييز الأحداث م منفصلة في لوحة AD مدة عتبة. - تأكيد ما اذا ترتبط مجموعة من مجموعات ذروة متوسط ضغط الدم الانقباضي مع الحدث عفوية م المحتملين عن طريق الكشف عن انخفاض في الموارد البشرية من 40 نبضة في الدقيقة أو أكثر.
- متوسط 10٪ من قيم الموارد البشرية على بداية الحدث المحتملين (تحدد هذه النسبة في معدل ضربات القلب العلوي إسقاط متوسط وحة المدى). متوسط 75٪ من قيم معدل ضربات القلب من نهاية لهذا الحدث المحتملين (تحديد هذه النسبة في انخفاض معدل ضربات القلب هبوط متوسط وحة المدى).
- طرح عتبة أدنى معدل ضربات القلب من عتبة أعلى معدل ضربات القلب، وذلك لضمان corresponانخفاض دينغ من 40 نبضة في الدقيقة أو أكثر. تحديد انخفاض تقييد معدل ضربات القلب باستخدام معدل ضربات القلب لوحة قطرة قيود.
- مرة واحدة وقد تم شغلها لوحات، واضغط موافق. وقدم عرضا رسومية من الأحداث AD الكشف، والتي تشمل ارتفاع في متوسط ضغط الدم الانقباضي وبيانات الموارد البشرية المرتبطة بها (الشكل 4C-D). يتم إنشاء إخراج ملف إكسل أيضا مع استجابة رافع للضغط (مم زئبق)، مدة (ثانية)، أقصى ضغط الدم الانقباضي (مم زئبق)، والحد الأدنى للموارد البشرية (نبضة في الدقيقة) وانخفاض الموارد البشرية (نبضة في الدقيقة) من كل حدث AD الكشف.
4. القولون والمستقيم الإنتفاخ للحصول تعمد م
ملاحظة: شدة الناجمة م يمكن تحديد من خلال انتفاخ القولون والمستقيم (CRD)، حافزا ذات الصلة سريريا الذي يحاكي الأمعاء الروتيني 3،18،19.
- التحقق من بالون قسطرة الفرنسية (على التوالي، 10 الفرنسية، 3 مل، 35 سم، اللاتكس الحرة) لا يتسرب من خلال تضخيم مع 2 مل من الهواء.
- كبح عشرالبريد الحيوانية عن طريق لف في منشفة والسماح BP والموارد البشرية لتحقيق الاستقرار لمدة نصف ساعة.
- وضع مواد التشحيم على طرف القسطرة. وضع علامة على القسطرة مع علامة دائمة، 2CM من منتصف البالون. يتم إدخال القسطرة عن طريق فتحة الشرج إلى القولون حتى العلامة يمكن رؤيته عند الافتتاح. تأمين القسطرة إلى الذيل مع الشريط الجراحية. إعادة مكان الحيوان ملفوفة في قفصه المنزل وضعت على المتلقي SmartPad مطابقة محول مزروع داخل الحيوان. السماح BP الحيوان للتطبيع لمدة 10 دقيقة.
- بعد إدخال القسطرة وفترة تأقلم المرتبطة بها (أي 10 دقيقة)، ولبث البالون مع 2 مل من الهواء أكثر من 10 ثانية، والسماح BP والموارد البشرية لتحقيق الاستقرار. الحفاظ على انتفاخ لمدة 1 دقيقة. تأكد من أن طرف القسطرة لا يزال داخل المستقيم. ومن المهم عدم المبالغة في تضخيم بالون (أي 3 مل +) من أجل تجنب تمزق القولون.
ملاحظة: التمدد لمدة 1 دقيقة و# 160؛ سمح الوقت المناسب لتطوير الاستجابة رافع للضغط ومستقبلة الضغط بوساطة انخفاض الموارد البشرية المرتبطة حلقة الناجم عن مرض الزهايمر. وبالإضافة إلى ذلك، كما يوفر هذا الفترة من 1 دقيقة وقتا كافيا لتطبيع مؤشرات القلب والأوعية الدموية. - كرر انتفاخ 3 مرات في محاكمة، وتكرار التجارب يوميا مع الحد الأدنى للفترة من 10 دقيقة بين التجارب. مرة واحدة التقييم الكامل، وإزالة القسطرة فولي من الحيوان.
- بيانات متوسط ضربات تلو ضربات أكثر من 1 فترات ثانية، وتبلغ أقصى زيادة في متوسط ضغط الدم الانقباضي وأقصى انخفاض في الموارد البشرية على تجارب متعددة.