Method Article

بقعة الأنسجة الصحيحة في كل مرة في كتل متعددة النسيج

DOI:

10.3791/52868

⸱

May 31st, 2015

 ,  , 
1Center for Advanced Preclinical Research (CAPR), Frederick National Laboratory for Cancer Research, 2Leidos Biomedical Research, Inc., 3Department of Oncology, Georgetown University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الغرض من توجيه بطاقة العينة (البقعة) أن يعمل كأداة توجيه للمساعدة في تحديد الأنسجة الفردية في كتل البارافين متعددة الأنسجة. تظهر هذه البروتوكولات كيف يتم بناؤها بسهولة من المشتركة، والمواد الأنسجة ذات التكلفة المنخفضة وبمثابة علامة بصرية موثوقة في كتل البارافين والأقسام.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

توفر كتل البارافين متعدد الأنسجة تحليل إنتاجية عالية مع زيادة الكفاءة والاتساق التجريبية، وخفض الوقت والتكلفة. ميكروأرس الأنسجة يشكلون غالبية كتل البارافين متعددة الأنسجة، ولكن على نحو متزايد، يستخدم الباحثون كتل غير المحتشدة التي تحتوي على الأنسجة أكبر من الأفراد متعددة والتي يمكن أن توفر العديد من المزايا من ميكروأرس الأنسجة دون استثمارات كبيرة في التخطيط والمعدات. ثمة عنصر حاسم في أي تحليل متعدد الأنسجة هو الأسلوب التوجه المستخدمة لتعريف كل الأنسجة الفردية. على الرغم من وجود طرق للحفاظ على التوجه السليم وتحديد الأنسجة في كتل متعددة الأنسجة، معظمهم ليسوا مناسبة تماما لكتل ​​غير المحتشدة، قد تستهلك حيزا هاما ضمن مجموعة و / أو من الصعب أن تنتج في مختبر الأنسجة القياسية. التوجه بطاقة العينة (البقعة) هي بسيطة، وانخفاض أداة التوجه التكلفة التي هي واضحة للعيان في كتل البارافين وجميع أقسام الأنسجة FOص تحديد العينة موثوق بها في تخطيطات المحتشدة وغير المحتشدة. يوفر بقعة المزايا على أساليب التوجيه الحالية لكتل ​​غير المحتشدة كما أنها لا تتطلب أي تعديل المباشرة للأنسجة ويسمح للمرونة في ترتيب قطع الأنسجة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

القدرة على تضمين عينات الأنسجة من الأفراد متعددة في كتلة البارافين واحد تمكن من السهل جنبا إلى جنب مقارنة بين العلاج والأفراد، ويزيل التباين بين الشرائح، ويقلل من التكاليف وحجم العمل من باجتزاء وتلطيخ العينات. وتنتج عادة هذه الكتل متعددة الأنسجة إما ميكروأرس الأنسجة (TMA) أو كتل البارافين تحتوي على الأنسجة من الأفراد متعددة في تخطيط غير صفيف. الحفاظ على الهوية عينة أمر بالغ الأهمية لنجاح أي تحليل الأنسجة المتعدد. وكان الباحثون باستخدام الواجبات الشهرية منذ تنميتها لتحسين كفاءة التحليل، والحد من التباين بين الشرائح والحفاظ على الموارد الأنسجة القيمة، وتقليل الوقت والتكلفة من التجارب 1. التوجه الصحيح من الواجبات الشهري....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. البناء من البقعة

  1. إضافة 50 ملغ من الأبقار مصل الزلال (BSA) إلى 1 مل الأنسجة بمناسبة الصبغة في 15 مل أنبوب مخروطي أو 2 مل microfuge أنبوب ودوامة لمدة 1 دقيقة أو حتى يذوب تماما.
    ملاحظة: للحصول على هذا البروتوكول، واستخدام الكيمياء الحيوية العلمية BSA. في حين لم يتم اختبارها درجات ودرجات نقاء أخرى، فإنه من المتوقع أن الصف ونقاء لن يكون لها تأثير كبير على نجاح الفور.
  2. الحرارة 9 هيدروكسي مل جل معالجة الاغاروز في 15 مل أنبوب مخروطي الشكل في الميكروويف في السلطة بنسبة 30٪ لمدة 10 ثانية بز....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يبدو أن بقعة بمثابة الجولة، النقطة ذات الألوان الزاهية في كتلة البارافين (1A الشكل و 2D)، في جميع أقسام البارافين، ويبقى على شريحة زجاجية من خلال إجراء H & E أو IHC تلطيخ (أرقام 1B - 1D، و2D). وهذا يمكن واضحة المساعدات جديلة البصرية على حد سواء histotechnician والباحث في تحديد كل قطعة نسيج الفردي، ويبسط الاتصالات باعتبارها histotechnician استخدام هذا جديلة البصرية للدلالة على ترتيب القطع الأنسجة إلى الباحث جمع.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الإعداد الناجح والاستفادة من البقع يتطلب الالتزام الدقيق بضع خطوات التقنية. وينبغي أن يتم ذوبان الاغاروز هيدروكسي إيثيل ببطء وعلى درجة حرارة منخفضة. يمكن أن يذوب بسرعة في درجة حرارة عالية يؤدي في بعض انهيار الاغاروز لأقل من النتائج المثلى. عندما قطع المقابس صبغ لادن إلى قطع للتجهيز، وضمان أن سمك كل قطعة أكبر من 4.5 ملم ولا يتجاوز 7 ملم. تتم إزالة نهايات مدورة كنفايات لأنها ليست موحدة 5 مم في السمك. وقطع أقل من 5 مم يؤدي إلى خلق بؤر أقصر أن خطر التعرض للأنهكته باجتزاء قبل استنفاد ا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فإن الكتاب أود أن أشكر الدكتور هاريس برنت لتقديم مراجعة نقدية للمخطوطة. وأجريت هذه الدراسات في لومباردي الشامل للسرطان مركز التشريح والأنسجة الموارد المشتركة التي يتم بدعم جزئي من المعاهد الوطنية للصحة / NCI منحة P30-CA051008. المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للمعهد الوطني للسرطان أو المعاهد الوطنية للصحة.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
هلام معالجة عينات HistogelThermo ScientificHG-4000-012http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html< / a>
Tissue Marking DyeTriangle Biomedical Sciences، Inc. TMD-5المرجح أن تكون أي صبغة لتمييز الأنسجة كافية.
مجموعة Arraymold A 2 مم (60 نواة)Arraymold20015Aأي مصفوفة أنسجة يدوية ستعمل بالمثل.
من

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Jawhar, N. Tissue microarray: a rapidly evolving diagnostic and research tool. Ann. Saudi. Med. 29 (2), 123-127 (2009).
  2. Dhir, R. Tissue microarrays: an overview. Methods Mol. Bio. 441, 91-103 (2008).
  3. Parsons, M., Grabsch, H.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Specimen Orientation TagTissue IdentificationMulti tissue BlocksHistoGel PlugTissue Marking DyeBiopsy PunchParaffin EmbeddingTissue Orientation DiagramBiospecimen MapTissue Microarray

Related Articles