نظام 1. النمو

الشكل 1. الطحالب النظام النمو. (A) rotometer الهواء، (B) CO 2 rotometer، (C) وحدة تحكم الحموضة مع الملف اللولبي، (D) مسجل بيانات، (E) في خط مرشحات الهواء، (F) رأس توزيع الهواء، (G) بنك ضوء الفلورسنت، (H) متر الرقم الهيدروجيني، ونظام (I) التبريد، (J) حمام الماء، (K) الأسلاك الحرارية، (L) رفع الهواء photobioreactor، (M) سخان، (N) سيرا على الأقدام في الدخان غطاء محرك السيارة، (O) تنفيس، (P) تسليم الهواء الأنابيب الشعرية، (Q) مرشحات الهواء، (R) أنبوب أخذ العينات، (S) PBR غطاء سيليكون، و (T)درجة الحموضة بشكل جيد في غطاء سيليكون. يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
- بناء الطحالب النظام النمو التجريبية التالية (الشكل 1).
- الحصول على اثني عشر PBRs النقل الجوي يتكون من المفاعلات أنبوب زجاجي 4.5 سم وقطرها 80 سم في الطول بسعة زراعة 1.1 L مع أغطية السيليكون. اكتساب قبل قطع أنابيب زجاجية الشعرية (5 ملم القطر الخارجي و 1 مم القطر الداخلي) 10 سم (3 في PBR) و 85 سم (1 في PBR) في الطول.
- تجميد أغطية السيليكون في الفريزر -80 درجة مئوية. تليين مثقاب مع الجلسرين وبينما يتم تجميد أغطية حفر 3 ثقوب لاستضافة تنفيس، وأخذ العينات وتسليم الغاز الأنابيب الشعرية، و1 ثقب 17 مم لاستضافة مسبار درجة الحموضة.
- إدراج الأنابيب الشعرية 3 في مكان مع أطول أنبوب يمتد 2 سم من الجزء السفلي من PBR. في الأنابيب الشعرية الأخرى إضافة واي أنبوب السيليكونث أنبوب شعري تعلق على الطرف الآخر يمتد إلى نقطة أخذ العينات المطلوبة. تغطية فتحة للمتر الرقم الهيدروجيني مع حجم سيليكون سدادة 21D.
- ترطيب الهواء المحيط من خلال السطح من خلال الماء وتسليم الهواء مرطب لرأس توزيع الهواء. تمرير الغاز من خلال مرشح 0.2 ميكرون وتسليمها إلى تعليق الطحالب من خلال أطول تسليم الزجاج الأنابيب الشعرية.
- تقديم CO مضغوط 2 في مجرى الهواء مرطب من أجل الحفاظ على درجة الحموضة محايدة من 7.0 ± 0.1 في تعليق الثقافة. السيطرة على معدلات CO 2 تسليم مع الآلية CO 2 نظام مستوصف (وحدة تحكم درجة الحموضة) الذي يفتح الملف اللولبي المغناطيسي عندما تصل درجة الحموضة 7.1 ثقافة الطحالب ويغلق عند pH 6.9.
- توفير الضوء باستخدام 24 T5 مصابيح الفلورسنت التي تنتج عنها في المتوسط الإضاءة من 984 ميكرومول م -2 -1 ثانية مماثلة إلى الذروة الظروف في الهواء الطلق.
- تزج PBRs في حمام مائي من أجل مaintain على درجة حرارة ثابتة من حوالي 25 ° C. التحكم في درجة حرارة النظام باستخدام مبرد إعادة تدوير والتدفئة إعادة تدوير مياه الاستحمام وحدة التحكم الآلي.
- مراقبة درجة الحرارة ودرجة الحموضة في الوقت الحقيقي وتسجيل مع مسجل بيانات.
- التأكد من أن جميع مكونات النظام نمو الطحالب تعمل بشكل صحيح، لا سيما قبل حصاد الطحالب اللقاح أو إعداد الملوثات غير العضوية لأنها لا يمكن الحفاظ عليها.
2. مختبر وير التحضير
- غسل القوارير الحجمية، PBRs، قوارير وأي حاويات، مع الصابون وماء الصنبور. شطف مع الماء منزوع الأيونات (DW).
- حمض شطف وير مختبر من أجل القضاء على أي آثار الملوثات غير العضوية. ويمكن القيام بذلك عن طريق واحدة من طريقتين:
- نقع مختبر وير O / N في 10٪ حامض النيتريك الصف المعادن النزرة (تنبيه: لا أبخرة التنفس، ويتركز حامض النيتريك يمكن أن تنتج حرق شديد والأبخرة السامة، والعمل في هوو الدخاند باستخدام قفازات النتريل، نظارات واقية ومعطف المختبر).
- نقع مختبر وير لمدة 15 دقيقة في 50٪ المعادن النزرة حمض النيتريك الصف.
- شطف وير مختبر مع DW بدقة 3 مرات على الأقل التأكد من إزالة كافة حامض. فمن الأهمية بمكان أن PBRs وتشطف جيدا، وخاصة أنابيب أخذ العينات والأنابيب الشعرية. والفشل في القيام بذلك تنتج تحمض تثبيط المتوسط وإمكانية للنمو. اختبار الرقم الهيدروجيني للماء الشطف للتحقق من جميع الأحماض تم إزالتها.
- تعقيم PBRs والحاويات وقوارير من قبل التعقيم لهم في 120 ° C والضغط الجوي القياسي لمدة 30 دقيقة على الأقل.
3. N. سالينا إعداد المتوسطة
- تحضير محلول A: ملء جزئيا على الحجمي قارورة 1 لتر مع DW. إدراج شريط مغناطيسي وإضافة المواد الكيميائية هو مبين في الجدول رقم 1 واحدا تلو الآخر. تأكد من أن كل عنصر يذوب قبل إضافة التأسيسية المقبل. إزالة المغناطيس وملء عشرالبريد القارورة إلى علامة حجم 1 لتر.
| مكون | المبلغ إضافة (ز) | التركيز النهائي (ز / L) |
| H 3 BO 3 | 0.900 | 0.900 |
| غ 2 وزارة النفط 4 · 2H 2 O | 0.012 | 0.012 |
| MnCl 2 · 4H 2 O | 0.300 | 0.300 |
| ZnSO 4 · 7H 2 O | 0.060 | 0.060 |
| كبريتات النحاس 4 · 5H 2 O | 0.020 | 0.020 |
الجدول 1: الحل وصفة كميات المبالغ اللازمة في إعداد 1 لتر من محلول مركز.
- إعداد فيتامين الحل: في ثلاث المجلد منفصلقوارير umetric إضافة الفيتامينات كما هو مبين في الجدول رقم 2 النتائج كل حل من خلال فيتامين العقيمة 0.2 ميكرون فلتر حقنة لحاوية معقمة. الحفاظ على الفيتامينات في -4 درجة مئوية في الظلام.
| الفيتامينات | كمية (ملغ) | الحجم النهائي (مل) | تركيز فيتامين النهائي (ملغم / لتر) |
| البيوتين | 12.22 | 500 | 24.43 |
| فيتامين B12 | 13.50 | 100 | 135.00 |
| هيدروكلوريد الثيامين | 977.63 | 500 | 1،955.27 |
الجدول 2: فيتامين حل صفة كميات المبالغ اللازمة لإعداد المحاليل المركزةنشوئها.
- ملء جزئيا حاوية autoclavable 20 L مع DW وإدراج شريط مغناطيسي. وضع الحاوية على رأس لوحة النمام المغناطيسي وإضافة المواد الكيميائية هو مبين في الجدول رقم 3 (باستثناء الفيتامينات)، مضيفا منهم واحدا تلو الآخر، وبعد كل يذوب تماما. ملء الحاويات لتصل إلى 20 L.
| مكون | المبلغ إضافة إلى متوسطة | وحدة |
| كلوريد الصوديوم | 350.00 | ز |
| CaCl 2 · 2H 2 O | 3.00 | ز |
| بوكل | 9.60 | ز |
| نا 2 شافي 3 · 9H 2 O | 1.14 | ز |
| MgSO 4 · 7H 2 O | 29.60 | ز |
| كنو 3 | 20.40 | ز |
| KH 2 PO 4 | 1.36 | ز |
| سترات الأمونيوم الحديديك | 0.10 | ز |
| حل A | 20.00 | مل |
| البيوتين الحل * | 818.00 | ميكرولتر |
| فيتامين B12 الحل * | 296.20 | ميكرولتر |
| الحل هيدروكلوريد الثيامين * | 521.60 | ميكرولتر |
| * إضافة إلى تبريد سائل الإعلام تعقيمها | | |
الجدول 3: N. سالينا صفة المتوسطة. كميات المبالغ اللازمة في إعداد 20 L من المواد الغذائية الغنية المتوسطة.
- تعقيم متوسطة قبل التعقيم لمدة 30 دقيقة في 120 درجة مئوية وضغط جوي. السماح للسجع المتوسطلتر وصولا الى RT.
- وضع الحاوية على طبق من ذهب النمام المغناطيسي. إضافة الفيتامينات التي أعدت في الخطوة 3.2، والسماح للمزيج المتوسط بدقة.
4. الملوثات غير العضوية إعداد الأوراق المالية
- ملء جزئيا القوارير الحجمية مبين في الجدول رقم 4 مع DW وإضافة الملح الفردية المدرجة. ملء مع DW إلى الحجم النهائي المطلوب وتخلط جيدا. لا الحفاظ على هذه الأسهم كما كثف بعض العناصر إلى قارورة الجدران
تنبيه: العديد من الملوثات غير العضوية المستخدمة في هذا البروتوكول مسببة للسرطان، ماسخة والتشوهات الخلقية، وارتداء قناع الوجه، والقفازات ومعطف المختبر عند التعامل مع الأملاح.
| الحليلة | مصدر الملح | حجم المخزون لإعداد (L) | الملح إضافة إلى قارورة60؛ (الملح ملغ) | وأضاف تركيز تحليلها للثقافة (الحليلة ملغ / L) |
| مثل | NaAsO 2 | 0.1 | 14.8 | 7.74E-02 |
| القرص المضغوط | CdCl 2 | 0.5 | 13.5 | 1.50E-02 |
| شارك | كوكلي 2 .6H 2 O | 0.5 | 34.7 | 1.56E-02 |
| كر | نا 2 كر 2 O 7 · 2H 2 O | 0.1 | 40.6 | 1.29E-01 |
| النحاس | CuCl 2 .2H 2 O | 0.1 | 38.3 | 1.30E-01 |
| زئبق | HgCl 2 | 1.0 | 14.6 | 9.80E-03 |
| مليون | MnCl 2 .4H 2 O | 0.1 | 58.8 | 1.49E-01 |
| ني | NiCl 2 .6H 2 O | 0.1 | 112.0 | 2.51E-01 |
| برميل | PbCl 2 | 0.5 | 39.9 | 5.41E-02 |
| بينالي الشارقة | بينالي الشارقة 2 O 3 | 0.5 | 26.7 | 4.06E-02 |
| SE | نا 2 سيو 3 | 0.5 | 11.8 | 9.80E-03 |
| SN | SnCl 2 .2H 2 O | 0.5 | 3.9 | 3.76E-03 |
| الخامس | V 2 O 5 | 0.1 | 22.2 | 1.13E-01 |
| الزنك | ZnCl 2 | 0.1 | 99.9 | 4.36E-01 |
تنتج المركزة غير العضوية إعداد الأسهم الملوثات إضافة 1 مل من هذا المخزون المركزة إلى 1.1 L PBR المتوسطة التركيز النهائي هو مبين في العمود الأخير: الجدول 4.
- تعقيم الأسهم الملوثات غير العضوية عن طريق تمرير الحل من خلال العقيمة 0.2 ميكرون تصفية المحاقن وجمع الرشاحة في أنبوب العقيمة.
5. N. سالينا اللقاح الإنتاج
- في قارورة 500 مل مخروطي إضافة 200 مل من المتوسط أعدت في الخطوة 3 ثم قم بإضافة 3 غرام من أجار. تغطية قارورة مع رقائق الألومنيوم والأوتوكلاف لمدة 20 دقيقة في 120 درجة مئوية. صب الحل في بتري أطباق معقمة وندعه يبرد حتى يتصلب. هذا ينبغي أن يستكمل يكون غطاء العقيمة أو على الأقل بالقرب من اللهب في بيئة نظيفة للحد من مخاطر التلوث.
- خط N. خلايا سالينا في العقيمة بتري ديس[هس أعدت في الخطوة 5.1 باستخدام بذر حلقة عقيمة. وضع الثقافات طبق بتري على طاولة مضاءة بأنوار T12 الحفاظ على RT. السماح الطحالب تنمو حتى المستعمرات مرئية.
- المستعمرات نقل إلى معقمة حير قوارير مخروطي يحتوي على 200 مل من المغذيات المتوسطة الغنية التي أعدت في الخطوة 3 والاحتفاظ بها على طاولة شاكر مضيئة (1000 RPM). السماح للثقافة تنمو حتى يصبح المتوسطة الأخضر.
- نقل الطحالب الدقيقة إلى PBR العقيمة 1.1 L. وضع PBR في حمام ماء اللقاح مضيئة في 200 ميكرومول م -2 ثانية -1 مع مصابيح الفلورسنت T8 والحفاظ على 23 ° C بواسطة مبرد إعادة تدوير وإعادة تدوير التدفئة السيطرة حمام ماء الآلي. ضبط الهواء وCO 2 rotometers إلى 2.5 L دقيقة -1 و 25 سم مكعب دقيقة -1، على التوالي.
- بعد أسبوع من الكتلة الحيوية تقسيم النمو إلى 1 الجديدة 0.1 L PBRs تحتوي على الوسيلة الجديدة وتركها تنمو حتى ما مجموعه لا يقل عن 28 غرام من الكتلة الحيوية الجافة والوزنحصلت بين المفاعلين الذي يمكن تحديده من خلال الكثافة الضوئية.
- حصاد الكتلة الحيوية اللقاح عن طريق الطرد المركزي في 2054 × ز لمدة 15 دقيقة في 10 ° C باستخدام زجاجات الطرد المركزي معقمة وتقنيات معقمة لتجنب التلوث. التخلص من طاف ومواصلة تركيز خلية حسب الحاجة.
- مرة واحدة يتم طرد كل الكتلة الحيوية، وإعادة تعليق الخلايا في 300 مل من المتوسط العقيمة الطازجة.
- تمييع 0.1 مل من ثقافة الطحالب الدقيقة في 3 مل من DW ثم تمييع 0.1 مل من هذا الحل الجديد في 3 مل من DW. ضمان العينة غير مختلطة تماما. قياس الكثافة الضوئية (OD) من تركيز الطحالب في 750 نانومتر () فورا باستخدام مقياس الطيف الضوئي.
- استخدام المعادلة (1) لتحديد كمية الكتلة الحيوية في التركيز.
ملاحظة: المعادلة (1) تم الحصول عليها من الانحدار الخطي بين مقابل إجمالي المواد الصلبة العالقة (في غرام / لتر -1) لN. سالينا (R 2 = 0.9995). وقد وضعت المعادلة (1) لspectrophotometer نموذج في جدول المواد، وتوليد معايرة جديدة في حالة استخدام نموذج معمل آخر. - باستخدام المعادلة (2) حساب حجم التركيز الطحالب (في L) اللازمة للحصول على كثافة 4 ز / L -1 الثقافة في PBR 1.1 L حجم (في L).


- باستخدام تقنيات معقمة، إضافة حجم الطحالب ركاز العثور عليها في الخطوة 5.9 إلى PBR تعقيمها من أجل التوصل إلى كثافة ثقافة الأولية من 4 جم / لتر -1. ملء PBR مع المتوسط إلى 1.1 L. كرر هذه الخطوة حتى يتم تلقيح 6 PBRs. وضع PBRs في حمام ماء اللقاح.
- السماح للالطحالب في PBRs تنمو لمدة 8 أيام ثم حصاد الكتلة الحيوية (بتكرار الخطوات 5،6-5،7). كرر الخطوة 5.8 لحساب الأوليحجم اللقاح لكثافة ثقافة الأولية من 1 جرام / لتر -1.
6. التجريبية المفاعلات
- باستخدام تقنيات معقمة تضيف ما يقرب من 1 L المتوسطة أعدت في الخطوة 3 لكل من 12-تشطف حمض PBRs معقمة. وضع PBRs في حمام مائي لنظام النمو التجريبية. تحويل الهواء sparge على 1.5 في L دقيقة -1.
- تعقيم درجة الحموضة متر معايرة من قبل تنظيفه مع 70٪ من الإيثانول. قياس درجة الحموضة من المتوسط في PBR وضمان درجة الحموضة ما يقرب من 7.0؛ إذا لم يكن كذلك، كرر الخطوة 2 لإزالة حمض تتسرب من الخطوة الشطف حامض.
- معايرة كل وحدة تحكم الرقم الهيدروجيني باستخدام العازلة درجة الحموضة 7، تطهير تحقيقات باستخدام الإيثانول (70٪) ومن ثم إدراجها في الأغطية PBRs.
- إلى كل PBR (باستثناء PBRs السيطرة) إضافة 1 مل من كل من معقمة الأسهم الملوثات غير العضوية أعدت في الخطوة 4. السماح للملوثات تخلط جيدا في PBR. التركيز النهائي من الملوثات غير العضوية في PBRs وعرضن في العمود الأخير في الجدول 4، وتركيزات القصوى المقدرة المتوقعة من التكامل محطة توليد الكهرباء التي تعمل بالفحم.
- إضافة 14 مل من DW المعقم في PBRs السيطرة.
- إضافة اللقاح الطحالب المركزة التي تم الحصول عليها في الخطوة 5.11 إلى PBRs التجريبية من أجل الحصول على كثافة ثقافة الأولية من 1 جرام / لتر -1. دعونا مزيج الكتلة الحيوية بدقة.
- بدوره أضواء شدة الضوء العالية (من 984 ميكرومول م -2 ثانية -1) وحدات التحكم ودرجة الحموضة في وضبط CO 2-30 سم مكعب دقيقة 1. زيادة تدفق CO 2 إلى 50 سم -1 دقيقة من يوم 3 بعد ذلك. الأولي انخفاض معدل تدفق CO 2 أمر بالغ الأهمية من أجل تجنب التغيرات الكبيرة في درجة الحموضة بسبب التأخير في الغاز / نقل السائل وقياس درجة الحموضة.
- قياس وأخذ عينات حسب الحاجة. تأكد بمناسبة منسوب المياه بعد أخذ العينات. (تنبيه: بعض الملوثات غير العضوية في PBR مسببة للسرطان، ماسخة والتشوهات الخلقية، قفازات استخدام وكابحاويات إد عند التعامل مع العينات).
- إضافة عقيمة DW يوميا إلى PBRs من أجل التعويض عن الخسائر الناجمة عن التبخر.
- بعد 7 أيام من النمو، حصاد الكتلة الحيوية بواسطة الطرد المركزي في 9936 × ز والمحافظة على حد سواء، والكتلة الحيوية وطاف المتوسطة، في -80 ° C.
- تجميد تجفيف الكتلة الحيوية عند 0.1 ملي بار و-50 ° CO / N. مسحوق الكتلة الحيوية (استخدام ملعقة لمسحوق الكتلة الحيوية داخل أنبوب الطرد المركزي). الحفاظ على تجميد الكتلة الحيوية المجففة في -80 ° C.
7. ميكروويف بمساعدة الهضم العينات
مطلوب هضم العينات الكتلة الحيوية كخطوة المعالجة المسبقة للتحليل ICP-MS.
ملاحظة: هذه الخطوات استخدام وعاء الميكروويف نظام الهضم مغلقة مع تخفيف الضغط التي تسيطر عليها. (تنبيه: ضغوط عالية تتطور أثناء عملية الهضم الحمضي والإطلاع على السلامة الجسدية للسفن الهضم والدروع، وإعادة تشكيل أغطية الأوعية الهضم الميكروويف قبل كل استخدام).
- غسل تفلون سفن الهضم الميكروويف بالماء والصابون، شطف مع DW، والسماح سفن الهواء الجاف. لإزالة تلوث المعادن النزرة في الأوعية هضم حامض كما هو موضح في الخطوات التالية.
- إعادة تشكيل أغطية الأوعية الهضم الميكروويف وإغلاق قارورة بإحكام.
- إضافة 10 مل من حمض النيتريك لكل منهما.
- إدخال السفينة في درع السلامة. ضمان عدم وجود الكتلة الحيوية، الماء أو أي الكواشف يتم ترك على جدران درع السلامة أو في الجدران الخارجية للسفن الهضم من أجل تجنب الأضرار التي لحقت درع السلامة. تتويج درع السلامة مع صمام الأمان التأكد من فصل الربيع في القارورة هو مطاردة. وضع الدرع الصاروخي على الدوار مع فتحات سقف مشيرا إلى الخارج في الصف الخارجي والداخل في الصف الداخلي.
- على السفينة رقم واحد، إدراج و thermowell السيراميك واستشعار درجة الحرارة. هذه الحرارة يراقب درجة الحرارة الداخلية الفعلية في القارورة، وتقوم بدور المعلمة مسيطرة لتنفيذ progr الهضمأنا. ضمان قارورة رقم واحد يحتوي على نفس العينة وكاشف كميات كما قارورة أخرى.
- إدخال المعلمات الهضم هو مبين في الجدول (5) وتبدأ عملية الهضم. عند الانتهاء من البرنامج، الهواء البارد قارورة حتى تصل RT.
| خطوة | قارورة الشطف | | | عينة الهضم | | |
| درجة الحرارة (° C) | الوقت (دقيقة) | كحد أقصى. الطاقة (W) | درجة الحرارة (° C) | الوقت (دقيقة) | كحد أقصى. الطاقة (W) |
| 1 | RT إلى 190 | 25 | 1000 | RT إلى 180 | 15 | 1000 |
| 2 | 190 | 10 | 1000 | 180 | 15 | 1000 |
| العادم | - | 20 | - | - | 20 | - |
الجدول 5: معلمات المستخدمة في البرنامج الهضم الميكروويف.
- داخل غطاء الدخان، إدراج أداة لتخفيف الضغط على الغطاء الدرع مع فتحات سقف تشير بعيدا عنك. مرة واحدة يتم تحرير الضغط فتح غطاء (تنبيه: قارورة هضم مفتوحة دائما داخل غطاء الدخان منذ الهضم الكتلة الحيوية باستخدام حمض تنتج أبخرة سامة).
- التخلص من الحمض. شطف الأوعية تفلون مع DW 3 مرات. السماح قارورة الهواء الجاف.
- لهضم الكتلة الحيوية، إضافة 50 ملغ من تجميد المجفف الكتلة الحيوية للسفن الهضم الميكروويف. لمراقبة الجودة (QC) تستعد قارورة التالية: في اثنين من قوارير مختلفة إما إضافة 5 مل من مستوى 7 ICPMS أو 5 مل من مستوى 7 زئبق CVAAS مستوى أعد في الخطوات 9.1 و 10.1 (الحل هضمها من هذه القارورة يسمى المختبر المحصنة فارغة (LFB))، وترك فارغا (حل آخر قارورة هضمهامن هذه القارورة يسمى مختبرية فارغة (LRB)).
- لهضم المتوسطة، إضافة 10 مل المتوسطة طاف لتجف حمض تشطف الأوعية الهضم الميكروويف. لمراقبة الجودة (QC) تستعد قارورة التالية: في اثنين من قوارير مختلفة إضافة 5 مل من مستوى 7 ICPMS أو CVAAS معيار المعادن أعدت في الخطوة 9.1 و 10.1 (الحل هضمها من هذه القارورة يسمى LFB)، إلى قارورة أخرى إضافة 10 (ويسمى الحل هضمها من هذه القارورة وLRB) مل من DW.
- إعادة تشكيل أغطية الأوعية الهضم الميكروويف وإغلاق قارورة بإحكام.
- إضافة 7 مل من أثر المركزة الصف المعادن حمض النتريك و 3 مل بيروكسيد الهيدروجين لكل قارورة. تجانس المحتويات عن طريق يحوم بلطف الحل. هضم محتويات قارورة بتكرار الخطوات 7،4-7،7 (استخدام المعلمات الهضم الميكروويف لعينة الهضم في الجدول 5).
- إضافة العينة هضمها إلى 25 مل الحجمي قارورة، الشطف السفن مع DW لزيادة الانتعاش. ملء قارورة حجمية مع DWإلى العلامة.
- نقل هضمها عينات إلى حاوية توج. الحفاظ على العينات عند 4 درجات مئوية حتى يمكن الانتهاء من التحليل. لهذا التحليل دراسة يتم في نفس اليوم للزئبق وخلال ثلاثة أيام للعناصر الأخرى.
8. مراقبة الجودة (QC) عينات
ملاحظة: تحليل عينات QC من أجل ضمان مصداقية النتائج من العينات التجريبية.
- ملء جزئيا حمض تشطف 1 L الحجمي قارورة مع DW. إضافة 280 مل من المركز التتبع الصف المعادن حمض النيتريك وتخلط جيدا (ويسمى هذا الحل أيضا الحل فارغ) (تنبيه: دائما إضافة حمض إلى الماء، وعدم إضافة الماء إلى حامض كما تفاعل طارد للحرارة يمكن أن تكون عنيفة). دعونا حل بارد لRT.
- بالإضافة إلى عينات QC أعد في الخطوات 7.9 و 7.10، وإعداد العينات QC التالية.
- لمواصلة عملية التحقق المعايرة (CCV): ملء أنبوب البوليسترين مع المعايرة القياسية (لإعداد رؤيةالخطوة 9.2 و 10.1). وضع حل زئبق القياسية على الرف CVAAS وICPMS حل القياسية في الاوتوماتيكى ICPMS.
- لمعايرة استمرار فارغة (بنك): ملء اثنين من أنابيب البوليسترين (16 مل) مع فارغة (حل أعدت في الخطوة 8.1). ضع عينة واحدة في رف CVAAS وعينة أخرى في الاوتوماتيكى ICPMS.
- لمصفوفة المدعمة مختبر (LFM): عشوائيا اختر 1 عينة من كل 12 عينة لكل نوع العينة (أي الكتلة الحيوية أو المتوسطة) واستخدامها لإعداد LFM. لICPMS، إضافة 0.5 مل من ICPMS مستوى قياسي 7 و 3 مل من هضم العينة التجريبية (سواء من الكتلة الحيوية أو المتوسطة) لأنبوب البوليسترين.
- خلط محتويات ووضع قنينة على الاوتوماتيكى ICPMS. لCVAAS، إضافة 2 مل زئبق مستوى قياسي 7 و 6 مل من هضم العينة التجريبية (سواء من الكتلة الحيوية أو المتوسطة) لأنبوب البوليسترين. خلط محتويات وقوارير مكان على الرف CVAAS.
- لعينات مزدوجة: عشوائيا اختر 1 عينة من أي وقت مضىص 12 عينة لكل نوع من مصفوفة (على سبيل المثال، والكتلة الحيوية والمتوسطة، LFM أو أي مصفوفة المخفف) وتكرار القارورة. ضع قارورة المتكررة في الاوتوماتيكى ICPMS أو رف CVAAS.
- لعينات مزدوجة: عشوائيا اختر 1 عينة من كل 12 عينة لكل نوع من مصفوفة (على سبيل المثال، والكتلة الحيوية والمتوسطة، LFM أو أي مصفوفة المخفف) وتكرار القارورة. ضع قارورة المتكررة في الاوتوماتيكى ICPMS أو رف CVAAS.
- تحديد معايير جودة البيانات للدراسة. لهذه الدراسة مكررة معايير الجودة التي وضعتها إيتون، Clesceri ورايس وغرينبرغ 25. المعلمات التي أنشئت لمراقبة الجودة هي: اختلاف النسبة المئوية (٪ D) لجنة تنسيق المفردات داخل ± 10٪ 25 (مع استثناء من الرصاص والأنتيمون، انظر المناقشة)، والانتعاش LFB النسبة المئوية (٪ R) ضمن ± 70-130٪ 25، LFM في المئة الانتعاش (٪ R) ضمن 75-125٪ 25، ونسبة النسبية الفرق (RPD) ضمن ± 20٪ 25، وكاليفورنيا المستمرالميسان فارغة (بنك) تحت الحد المسموح الإبلاغ طريقة (MRL) 25. رؤية المعادلات الحسابية في الخطوة 9.7.
9. الكمي من قبل بالحث إلى جانب البلازما الطيف الكتلي (ICPMS)
- في يوم من التحليل، ونقل ما يقرب من 5 مل من العينة هضمها لأنابيب البولي ستايرين ووضعها في الاوتوماتيكى ICPMS. إضافة حوالي 15 مل من عينات هضمها لأنابيب البولي ستايرين ووضعها في رف CVAAS.
- وفي اليوم نفسه التحليل إعداد معايير المعايرة. إضافة ICPMS شراؤها حل معيار وإعادة ملء مع فارغة (حل أعدت في الخطوة 8.1) كما هو موضح في الجدول رقم 6 (انظر وصف الحل القياسي في المواد الجدول) لقوارير حجمية حمض تشطف.
0.0
| معلمة | المرحلة 1 | مستوى 2 | مستوى 3 | مستوى 4 | مستوى 5 | مستوى 6 | مستوى 7 |
| مستوى شراؤها لتضاف (مل) | - | - | - | - | - | - | 10.0 |
| مستوى 7 التي يمكن ان تضاف (مل) | 0.0 | 1.0 | 2.5 | 5.0 | 20.0 | 25.0 | - |
| الحجم النهائي * (مل) | - | 50.0 | 50.0 | 50.0 | 100.0 | 50.0 | 100.0 |
| التركيز النهائي (ميكروغرام / لتر) | | | | | | | |
| 75 وكما | 0.0 | 2.0 | 5.0 | 10.0 | 20.0 | 50.0 | 1000.0 |
| 111 الكادميوم | 0.0 | 1.0 | 2.5 | 5.0 | 10.0 | 25.0 | 50.0 |
| 59 شركة | 0.0 | 10.0 | 25.0 | 50.0 | 100.0 | 250.0 | 500.0 |
| 52 ساعة معتمدة | 0.0 | 2.0 | 5.0 | 10.0 | 20.0 | 50.0 | 100.0 |
| 63 النحاس | 0.0 | 5.0 | 12.5 | 25.0 | 50.0 | 125.0 | 250.0 |
| 55 المنغنيز | 0.0 | 3.0 | 7.5 | 15.0 | 30.0 | 75.0 | 150.0 |
| 60 ني | 0.0 | ثمانية | 20.0 | 40.0 | 80.0 | 200.0 | 400.0 |
| 208 الرصاص | 0.0 | 1.0 | 2.5 | 5.0 | 10.0 | 25.0 | 50.0 |
| 121 بينالي الشارقة | 0.0 | 12.0 | 30.0 | 60.0 | 120.0 | 300.0 | 600.0 |
| 51 V | 0.0 | 10.0 | 25.0 | 50.0 | 100.0 | 250.0 | 500.0 |
| 66 الزنك | 4.0 | 10.0 | 20.0 | 40.0 | 100.0 | 200.0 |
| * تحقيق هذا الحجم بإضافة الحل أعد في الخطوة 8.1 | | | | |
الجدول 6: تركيز المعايير معايرة مستويات 1-7.
- إزالة المخاريط من ICPMS ويصوتن لهم لمدة 1 دقيقة في DW. تجفيف الأقماع ووضعها من جديد في الصك.
- بدوره على الماء المبرد، والغازات (AR، H 2، و)، وICPMS، وخطوط التوصيل للمعيار الداخلية، وملء الحاويات لصناعة السيارات في العينات شطف (DW، حمض النيتريك 10٪، 1٪ حامض النيتريك + حمض الهيدروكلوريك 0.5٪) .
- فتح برنامج محطة Masshunter وبدوره على البلازما، وضبط ICPMS وتحميل طريقة لتعيين المعلمات في الجدول 7.
الجدول 7: ظروف التشغيل ICPMS.
- وضع معايير والمعايرة، QC عينات ونماذج تجريبية في الاوتوماتيكى. في البرنامج ICPMS إضافة تسلسل تحليل العينات وتحليلها. نضح العينة داخل أداة لالبلازما حيث تأين العناصر. ثم فراغ ينسحب الأيونات إلى عداد. فإن أيونات منفصلة اعتمادا على الوزن الذري بهم من الأخف وزنا إلى أثقل.
تنبيه: جمع النفايات ICPMS في احتواء الخطرة والتعامل معها بشكل مناسب للتخلص منها. - تأكد من أن معامل الارتباط (R) قيمة منحنى المعايرة لكل معدن أو لافلز أكبر من 0،995 24.
- خلال تحليل عينة، وحساب٪ R،٪ D وRPD كما هو موضح في المعادلات 3-6 26 و مقارنة النتائج لمشروع معايير جودة البيانات في 8.3.
- حساب الانتعاش في المائة (٪ R) لتحديد خسائر / كسب من بلوخ مختبر المحصنةNK (LFB) ومصفوفة تدخل من مصفوفة المدعمة مختبر (LFM).


- حساب الفرق النسبة المئوية (٪ D) لتحديد التغيرات الأداء الصك مع الوقت عند تشغيل عينات CCV.

- حساب الفرق في المئة النسبي (RPD) لتحديد التغيرات في طريقة دقة مع مرور الوقت عند تشغيل العينات التجريبية.

- للحد من التدخل مصفوفة (٪ R خارج النطاق المقبول)، ويخفف من عينات للفقراء٪ R إلى نسبة 1: 3 (نموذج: DW).
10. زئبق الكمي عن طريق امتصاص بخار الباردة الذرية مقياس الطيف الضوئي (CVAAS)
- إعداد معايير المعايرة في اليوم نفسه التحليل. تمييع شراؤها مستوى الزئبق عن طريق إضافة 1 مل من شراء زئبق الحل القياسي إلى 100 مل قارورة حجمية وملء مع الحل أعد في الخطوة 8.1.
- إضافة 2.5 مل من هذا المحلول الى 100 مل قارورة حجمية وملء مع الحل أعد في الخطوة 8.1 (هذا الحل الجديد هو مستوى 7 زئبق قياسي). إضافة المخفف مستوى 7 زئبق القياسية لقوارير حجمية وملء مع فارغة (حل أعدت في الخطوة 8.1.) كما هو موضح في الجدول رقم 8 (انظر شراؤها زئبق وصف الحل القياسي في المواد الجدول).
| المعلمات | القيم |
| المعايير الداخلية | 72 قه، 115 في |
| قوة الترددات اللاسلكية | 1500 W |
| البلازما معدل تدفق الغاز | 14.98 |
| معدل تدفق الغاز البخاخات | 1.1 لتر / دقيقة (الناقل والتخفيف الغاز مجتمعة - 0.6 + 0.5 لتر / دقيقة) |
| أخذ العينات مخروط | النيكل ل x عدسة |
| مخروط المصفاة | النيكل |
| معدل امتصاص عينة | 0.3 RPS |
| البخاخات مضخة | 0.1 RPS |
| S / C درجة الحرارة | 2 ° C |
| حالة المسح الضوئي | يسكن الوقت 1 ثانية، وعدد من تكرار 3 |
| H تدفق غاز 2 | N / A |
| كان تدفق الغاز | 4.3 مل / دقيقة |
| معلمة | المرحلة 1 | مستوى 2 | مستوى 3 | مستوى 4 | مستوى 5 | مستوى 6 |
| L7 زئبق القياسية التي يمكن ان تضاف (مل) | 0 | 1 | 2.5 | 5 | 20 | 25 |
| الحجم النهائي * (مل) | - | 50 | 50 | 50 | 100 | 50 |
| التركيز النهائي (ميكروغرام / لتر) | 0 | 0.5 | 1.25 | 2.5 | 5 | 12.5 |
| * تحقيق هذا الحجم بإضافة الحل أعد في الخطوة 8.1 | | | |
الجدول 8: تركيز الزئبق المعايرة القياسية مستويات 1-6.
- فتح الغاز هارون وصمام الهواء، بدوره على الامتصاص الذرينشوئها مقياس الطيف الضوئي وحقن تدفق الطيفي الذرية (FIAS). فتح البرنامج CVAAS Winlab، تشغيل مصباح الزئبق والسماح لها الاحماء حتى تصل المعلمة الطاقة البرمجيات 79. تحميل برنامج لتحليل الزئبق مع المعلمات في الجدول 9. ضبط مسار الضوء في الصك لإعطاء أقصى قدر من النفاذية.
| المعلمات | القيم |
| الغاز الناقل | الأرجون، 100 مل / دقيقة |
| مصباح | الزئبق مصباح التفريغ ELECTRODELESS، والإعداد في 185 مللي أمبير |
| الطول الموجي | 253.7 نانومتر |
| شق | 0.7 نانومتر |
| درجة الحرارة خلية | 100 ° C |
| حجم العينة | 500 ميكرولتر |
| الناقل | 3٪ حمض الهيدروكلوريك، 9.23 مل / دقيقة |
| اختزال | 10٪ SnCl 2، 5.31 مل / دقيقة |
| قياس | ارتفاع الذروة |
| قراءة مكررات | 3 |
الجدول 9: ظروف التشغيل CVAAS.
- توصيل خط إلى حل الناقل مصنوع من 3٪ الصف المعادن النزرة حمض الهيدروكلوريك.
- توصيل خط إلى حل عامل مختزل مصنوعة من كلوريد قصديري 10٪ (مناسبة لتحليل زئبق) في 3٪ المعادن النزرة الصف حمض الهيدروكلوريك. يعد هذا الحل في نفس اليوم من التحليل لأنها عرضة للأكسدة في الغلاف الجوي (تنبيه: كلوريد قصديري خطرة جدا، واستخدام ملابس واقية عند التعامل معها جمع النفايات CVAAS في احتواء الخطرة والتخلص منها بشكل صحيح).
- وضع معايير زئبق، وعينات QC والعينات التجريبية في رف CVAAS وإدخال تسلسل في البرنامج CVAAS Winlab. تشغيل المعايير وتوليد معادلة المعايرة.
- تشغيل QC سامPLES والعينات التجريبية. وCVAAS توجه حوالي 5 مل من العينة في الصك، ويقلل من الزئبق الموجودة في العينة إلى عنصر الزئبق (زئبق 0) الغاز وعمليات التطهير الغاز من حل مع الغاز الناقل (ع) في نظام مغلق. بخار الزئبق يمر من خلال خلية في مسار الزئبق ضوء المصباح. وكشف يحدد ضوء استيعابها في 253.7 نانومتر، ويرتبط ذلك إلى تركيز. (تنبيه: زئبق بخار سام، وضمان الصك العادم هود في مكان).
- حساب٪ R،٪ D وRPD في الخطوة 9.7 خلال تحليل ومقارنة النتائج لمشروع معايير جودة البيانات.