مقالة منهجية

مراقبة الحركة الهدبية من الخلايا المشيمية الضفيرة طلائي السابقين فيفو

DOI:

10.3791/52991

⸱

يوليو 13, 2015

 ,  ,  ,  , 
1Department of Life Science and Medical Bioscience, Faculty of Science and Engineering, Waseda University, 2Department of Anatomy and Cell Biology, Interdisciplinary Graduate School of Medicine & Engineering, University of Yamanashi

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذه الدراسة ، تم تحسين تقنية مجهرية ضوئية مفصلة للمراقبة والتحليل في الوقت الفعلي لحركة أهداب CPEC خارج الجسم الحي جنبا إلى جنب مع طريقة مجهرية إلكترونية لتحليل البنية الفوقية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقع الضفيرة المشيمية في جدار البطين في الدماغ ، ويعتقد أن وظيفتها الرئيسية هي إنتاج السائل النخاعي. تحتوي الخلايا الظهارية للضفيرة المشيمية (CPECs) التي تغطي سطح أنسجة الضفيرة المشيمية على العديد من الأهداب الفريدة ، ولكن لا يزال يتعين التحقيق في معظم وظائف هذه الأهداب. للكشف عن وظيفة أهداب CPEC مع الإشارة بشكل خاص إلى حركتها ، تم تطوير نظام مراقبة خارج الجسم الحي لمراقبة الحركة الهدبية خلال فترات الجنين والفترة المحيطة بالولادة وما بعد الولادة. تم تشريح الضفيرة المشيمية من بطين الدماغ ولاحظت تحت مجهر تباين محسن بالفيديو مزود بصريات تباين التداخل التفاضلي. في ظل هذه الحالة ، تم تطوير طريقة بسيطة وكمية لتحليل الملامح المتحركة لأهداب CPEC لعدة ساعات خارج الجسم الحي. بعد ذلك ، لوحظت التغيرات المورفولوجية للأهداب أثناء التطور عن طريق الفحص المجهري الإلكتروني لتوضيح العلاقة بين النضج المورفولوجي للأهداب والحركة. ومن المثير للاهتمام أن هذه الطريقة يمكن أن تحدد التغيرات في عدد وطول الأهداب ، والتي بلغت ذروتها في يوم ما بعد الولادة (P) 2 ، بينما وصل تواتر الضرب إلى الحد الأقصى عند P10 ، يليه توقف مفاجئ عند P14. ستمكن هذه التقنيات من توضيح وظائف الأهداب في الأنسجة المختلفة. بينما تم نشر التقنيات ذات الصلة في تقرير سابق1 ، تركز الدراسة الحالية على التقنيات التفصيلية لمراقبة حركة ومورفولوجيا أهداب CPEC خارج الجسم الحي.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأهداب هي نتوءات تشبه الشعر على سطح معظم خلايا الفقاريات ، والتي جذبت انتباه الباحثين الطبيين بسبب فئة من الأمراض تسمى الاعتلال الأهدبي 2-4. على الرغم من التعبير المنتشر عن العضية في كل مكان ، فقد تم الإبلاغ عن مجموعة متنوعة من الوظائف الهدبية ، بما في ذلك الحركة والاستشعار الحيوي. على سبيل المثال ، تنقل الأهداب المتحركة على سطح الغشاء الظهاري المخاط5 والحطام الظهاري إلى مخرج المسالك ، وبالتالي منع المرض عن طريق تطهير سطح الظهارة. علاوة على ذلك ، خلال فترات النمو المبكرة والمراحل الجنينية ، تنظم الأهداب تكاثر الخلايا الجذعية6 ، وتشارك في تحديد عدم تناسق اليسار واليمين لجسم الفقاريات7.

الخلايا الظهارية للضفيرة المشيمية (CPECs) هي مشتقات من الخلايا الظهارية العصبية التي تغطي سطح نسيج الضفيرة المشيمية في الدماغ ، والتي تلعب أدوارا مهمة في الحفاظ على التوازن في البيئة داخل الجمجمة عن طريق إنتاج السائل النخاعي (CSF). لقد ثبت سابقا أن CPECs لديها العديد من الأهداب غير المتحركة التي تنظم إنتاج السائل الدماغي النخاعي من خلال المستقبلات المقترنة ببروتين G والتي تتركز بشكل خاص على الأهداب8. على الرغم من أن هذه الأهداب كانت تعتبر أهداب هادئة غير متحركة ، فقد تم اكتشاف أن بعض أهداب CPEC تظهر حركية عابرة خلال فترة حديثيالولادة 1. كانت هذه النتيجة مهمة للغاية لأنها كشفت أن ما يسمى بالأهداب غير المتحركة ليست بالضرورة غير متحركة منذ بداية التطور وقد تظهر حركة عابرة خلال نوافذ زمنية محددة ، ربما استجابة لمتطلبات ووظائف فسيولوجيةمحددة 9. لوصف الطبيعة المتحركة لأهداب CPEC بدقة ، من الضروري تطوير نظام مراقبة خارج الجسم الحي يشمل تحليل الملامح الحركية الفريدة لأهداب CPEC.

< p class = 'jove_content'>فيما يتعلق بالحركة ، على الرغم من أن العديد من التقارير الفنية قد وصفت ملاحظات للأهداب المتحركة لظهارة القصبة الهوائية5،10 ، والسوط أحادي الخلية11 ، وما يسمى بالأهداب المتحركةالتقليدية 12 ، والأهداب العقدية13 ، فإن الطرق التحليلية التفصيلية المطبقة على الهياكل المتموجة نسبيا مثل الضفيرة المشيمية لم يتم توثيقها جيدا حتى الآن. علاوة على ذلك ، يلزم وجود دقة زمنية عالية لتحليل الحركة الهدبية ل CPECs ، حيث لا غنى عن الكاميرات عالية السرعة باهظة الثمن. للتحايل على هذه الضرورة وتبسيط مراقبة الحركة الهدبية لأنواع الخلايا المختلفة ، تم إدخال كاميرا منخفضة التكلفة وعالية السرعة ، وتم تطوير طريقة يسهل الوصول إليها ومريحة لتسجيل حركة الأهداب المتحركة ، خاصة لوصف سرعة ونمط حركة كل أهداب1. علاوة على ذلك ، تم استخدام برنامج تحليل الصور الأصلي "TI Workbench" هنا لتسهيل التحليل التفصيلي للحركة. بشكل جماعي ، توفر هذه الطريقة استراتيجية موجزة جديدة لتحليل الحركة الهدبية جنبا إلى جنب مع المجهر الإلكتروني الماسح المترابط (SEM) ، والذي يمكن اعتماده في مجموعة واسعة من أبحاث الأهداب.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على البروتوكولات واستخدام حيوانات التجارب رعاية الحيوان واستخدام اللجان المؤسسية في جامعة ياماناشي وجامعة واسيدا. وقد أجريت رعاية الحيوان وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية.

1. إعداد CPEC

  1. إعداد الأجهزة والمواد التالية: المجهر ستيريو، ويفضل أن يكون قادرا على نقل الإضاءة من الأسفل. زوج من ملقط ساعاتي (دومون # 3 أو رقم 4)، تعقيم اللهب، مقص التشغيل على التوالي، تعقيم اللهب. اثنين العقيمة أطباق 10 سم من البلاستيك تحتوي على 20 مل الجليد الباردة يبوفيتش L-15 متوسطة. أطباق أسفل الزجاج 35 ملم يحتوي على 2 مل RT يبوفيتش L-15 متوسطة. كوب 100 مل تحتوي على 70٪ من الإيثانول. الجراء الماوس حديثي الولادة.
  2. لفترة وجيزة تزج ماوس الأطفال حديثي الولادة في 70٪ من الإيثانول والموت ببطء بسرعة عن طريق قطع الرأس باستخدام مقص التشغيل.
  3. وضع رئيس الفور في الجليد الباردة يبوفيتش L-15 متوسطة في العقيمة 10 سم ديش.
  4. إزالة الجلد من calvaria باستخدام زوج من ملقط ساعاتي، وقطع فتح الجمجمة لفضح الدماغ، ومن ثم قطع الأعصاب القحفية لعزل الدماغ كله.
  5. نقل الدماغ على طبق جديد يحتوي على الجليد الباردة يبوفيتش L-15 متوسطة ومراقبة تحت المجهر ستيريو، والتأكد من أن الدماغ هو مغمورة تماما في المتوسط.
  6. تعيين الجانب الظهري من المخ مواجهة، وتوجيه الدماغ بحيث بصيلات الشم الموجودة في الموضع 03:00 (للأشخاص اليد اليمنى). عقد الدماغ بلطف مع ملقط في اليد اليسرى.
  7. باستخدام ملقط تشريح غرامة (دومون # 3 أو رقم 4) في اليد اليمنى، وقطع الجسم الثفني وتحت لحمة يربط بين نصفي الكرة المخية، وعلى طول الشق الطولي للمخ.
  8. دفع بلطف نصفي الكرة المخية بعيدا إلى الجانبين الجانبية وفضح الشق الدماغي عرضية.
  9. فصل نصفي الكرة الأرضية عن طريق معسر من عشرالبريد حمة بين نصف الكرة الأرضية والمهاد.
  10. سحب للخارج برفق الجانبية الضفيرة المشيمية البطين أن تعلق على الجانب الوحشي من الحصين من قبل affixa الصفيحة.
  11. نقل الضفيرة المشيمية معزولة إلى 35 مم طبق زجاج القاع التي تحتوي جديدة يبوفيتش L-15 متوسطة، وتراكب على وزن (قائمة المواد) بلطف لعقد الأنسجة في المكان.

2. تصوير لايف CPEC سيليا

  1. تأكيد الأشعة فوق البنفسجية السليم (UV) ومرشح الاستدلال (IR) قطع (ق) لمنع يتم إدراج ضوء أقصر من 400 نانومتر، وأطول من 700 نانومتر، والتي محايدة الكثافة (ND) مرشحات (25٪ و 6٪) في مسار الضوء المجهر المقلوب.
  2. ضبط بؤرة العدسة الشيئية تقريبا بالعين، ومن ثم ضبط مكثف بحيث الوسط والتركيز لتتماشى مع إضاءة كوهلر. إدراج المقابل تدخل الفرق المناسب (DIC) موشور، وهو عنصر مدينة دبي للإنترنت، وكذلك محلل والمستقطب العناصر في ليمسار GHT لتتوافق مع البصريات DIC.
  3. ضبط تباين الرأي موقف المنشور DIC ذلك أن هيكل سطح النسيج هو الأكثر تميزا. إذا كان كل أهداب الخلايا المستهدفة هي متحركة، رؤية واضحة للأهداب متحركة لا يمكن الحصول عليها عن طريق العين بسبب حركتهم.
  4. تغيير مسار الضوء لكاميرا الفيديو، وإزالة مرشحات ND لزيادة قوة الضوء.
  5. استخدام الكاميرا في وضع التركيز على ضبط مجال الرؤية والتركيز. خلال التركيز، حيث يتم عرض صور الفيديو في الوقت الحقيقي على شاشة العرض، ورؤية واضحة للأهداب متحركة غير متوفر.
  6. استخدام الكاميرا في 200 هرتز مع ومدة التعرض من 0.1 مللي ثانية للفترة المطلوبة (ثواني إلى دقائق). بعد الحصول على صورة كومة، والأطر واحد عرض هياكل الهدبية واضحة. إذا حواف الهدبية غير واضحة، وزيادة معدل الإطار أو استخدام وقت التعرض أقصر.
  7. تسجيل حركة CPEC أهداب داخل 25-60 دقيقة بعد القتل الرحيم في يبوفيتشL-15 متوسطة.

3. تحليل الهدبية الحركة

  1. تتبع يدويا بفوزه على أنماط من كل هدب على شاشة الكمبيوتر. علامة مواقف الهدبية طرف في كل إطار مع مؤشر الماوس، التي يتم تجميعها للحصول على معلومات مسار كل هدب. أما تحليل المعلومات مساره باستخدام نفس البرنامج أو تصديرها إلى تطبيقات أخرى أكثر عمومية لمزيد من التحليل. يوصف كفاءة هذه الخطوة التحليل في مناقشة.
  2. تصنيف مسارات إلى وضعين للحركة، ذهابا وإيابا أو التناوب، من خلال العين.
  3. حساب التردد الهدبية الضرب (البرازيلي) باستخدام الصيغة التالية: [الاتحاد البرازيلي = (عدد الإطارات في الثانية) / (متوسط ​​عدد الإطارات للفوز واحد)] 14، والتي يمكن الحصول عليها من رسم تخطيطي الهدبية طرف الحركة (الشكل 3 ). كرر هذه العملية الحسابية لعدة دورات الهدبية الضرب، لأن الأهداب الأخرى على نفس الخلية يمكن أن تتداخل مع حركة كل ciliuم، مما أدى إلى عدم انتظام.
  4. لتحليل التوحيد الزاوي للالهدبية الضرب محاور داخل خلية واحدة، وتحديد θ زاوية الضرب لكل مسار (الشكل 4). لمسارات ذهابا وإيابا، تناسب المواقف من طرف أهداب إلى خط مستقيم، وتحديد θ كما زاوية خط يجعل مع x -axis. لمسارات التناوب، وتناسب المواقف إلى القطع الناقص، وتحديد θ كما زاوية محور رئيسي من القطع الناقص يجعل مع x -axis. ووصف تفاصيل المناسب في القسم ممثل النتائج.
  5. لوصف كمي لكل مسار، وحساب المعمم نسبة الارتفاع AR. لفترة وجيزة، وتناوب على مسار من قبل - θ وتحديد AR كما النسبة بين الاعراض من التوزيع على طول س - و-axes ص (الشكل 4B). وترد التفاصيل في القسم ممثل النتائج، وتفسيروأهميتها، وصفت القيود المفروضة على والمعلمة في مناقشة.

4. إعداد نموذج لSEM

ملاحظة: SEM هو طريقة مهمة لتقييم وضع أهداب على CPECs بطريقة شاملة. لإعداد العينات للSEM، أفاد الإجراء القياسي السابق 15 يعمل مع تعديلات طفيفة.

  1. قبل تشريح الأنسجة من الدماغ، وإعداد تثبيتي في قنينة زجاجية 5 مل مع غطاء البولي ايثيلين. يتكون تثبيتي من 2٪ امتصاص العرق، 2.5٪ غلوتارالدهيد (نصف حل Karnovsky ل16) في 0.1 م العازلة الفوسفات، ودرجة الحموضة 7.4.
  2. تشريح خارج أنسجة من المخ كما هو موضح في الخطوة 1.
  3. شطف لفترة وجيزة الأنسجة المعزولة مع محلول ملحي متوازن هانك (HBSS) في طبق جديد ثم إصلاح الأنسجة في تثبيتي في قارورة زجاجية لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة. استخدام ماصات نقل المتاح والتعامل مع العينات جنرال الكتريكntly. بعد الشطف في HBSS، وتصبح الأنسجة لزجة.
    1. لنقل العينات إلى حل تثبيتي، وطرد ببطء على كمية صغيرة من محلول يحتوي على الأنسجة من ماصة نقل بمثابة قطرة وإضافة إلى تثبيتي.
  4. بعد التثبيت، تجاهل تثبيتي، وشطف الأنسجة مع العازلة الفوسفات ثلاث مرات.
  5. تزج النسيج في محلول السكروز 10٪ لتغسل الألدهيدات المتبقية. لضمان القضاء الكامل على الألدهيدات، تزج العينات في حل لمدة 10 دقيقة ثم كرر مرتين مع السكروز النقي 10٪. هذه الخطوة مهمة لتحقيق الصحيح بعد التثبيت في الخطوات اللاحقة.
  6. تزج النسيج في محلول 1٪ رباعي أكسيد الأوزميوم في المخزن الفوسفات لمدة 30 دقيقة ثم ضع على الجليد لمرحلة ما بعد التثبيت. الحكم على درجة من المعاملة بالأوزميك من لون عينة: عندما تتم إزالة الألدهيدات تماما، وعينة سوداء.
  7. غسل الأنسجة عينات ثابتة آخر على نطاق واسع مع مقطر مزدوجد الماء عدة مرات.
  8. يذوى العينات عن طريق الغمر في تركيزات متدرجة من الإيثانول، عادة 65٪، 75٪، 85٪، 95٪، 99٪، و 100٪، لمدة 10 دقيقة لكل منهما. الحصول على الايثانول اللامائي من خلال وضع المناخل الجزيئية إلى 99.5٪ من الإيثانول من زجاجة شراؤها حديثا. تكرار الجفاف مع اللامائية الإيثانول ثلاث مرات.
  9. وضع العينات المجففة في خلات الأميل، كاشف استبدال لتجفيف نقطة حرجة، لمدة 10 دقيقة. كرر هذه الخطوة مرتين. هذا كاشف يتبخر بسرعة ويمكن أن تصبح العينة الجافة، مما أدى إلى تدمير التوتر السطحي. ولذلك، لا تجف العينة تماما.
  10. بعد تبادل النهائي من خلات الأميل، وإزالة معظم المذيبات، وعلى الفور التفاف قارورة زجاجية مفتوحة مع رقائق الألومنيوم، ووضع قنينة على الثلج الجاف. باستخدام إبرة أو ملقط غرامة، وجعل عدة ثقوب في احباط تغطية الفم من القارورة، بحيث يتدفق ثاني أكسيد الكربون السائل بسهولة إلى القارورة في مجفف نقطة حرجة. انتقل إلى الخطوة التاليةباسرع ما يمكن.
  11. في هذه الخطوة، والتقليل من المرحل من خلات الأميل في الغرفة مجفف، ولكن لا تدع العينة تجف تماما قبل التجفيف نقطة حرجة. وبالإضافة إلى ذلك، لا تترك العينة على الثلج الجاف لفترة طويلة دون داع لتجنب تشكيل الصقيع على القارورة.
  12. نقل قوارير زجاجية ملفوفة احباط تحتوي على عينات الأنسجة إلى مجفف نقطة الأهمية بمكان أن يضمن بنية سطح الأنسجة لا تزال سليمة في حين إزالة المياه الوارد في الأنسجة. يمكن الحصول على معلومات مفصلة عن تشغيل مجفف نقطة حرجة من تعليمات الشركة الصانعة.
  13. التعامل مع العينات بعناية باستخدام المسواك لتقليل الأضرار الميكانيكية. ينتج عن ذلك من عينات الأنسجة المجففة هشة. جبل العينات على بذرة المعادن ومعطف مع الذهب والبلاديوم استخدام تفل أيون.

5. مراقبة من قبل SEM

  1. مراقبة من قبل SEM وتسجيل الصور مع كاميرا رقميةمجهزة لالمجهر الإلكتروني الماسح.
  2. نقل بيانات الصور الرقمية إلى جهاز كمبيوتر لتحليلها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويظهر لمحة عامة عن سير العمل في الشكل 1، بما في ذلك الصور من الأجهزة.

ملاحظات الحركة الحية من CPECs

فيلم 1 يظهر الفيلم من CPECs معزولة عن ماوس فترة ما حول الولادة، وفيلم 2 يبين وجهة نظر موسعة من الصور في الفيلم 1. وتجدر الإشارة إلى أن نصائح الهدبية الفردية هي أقل وضوحا في الصور ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وجهات النظر هذه الطريقة

على الرغم من أن تقنية الموضحة هنا لا تقدم تحليلا أكثر تفصيلا للأهداب من الطرق التي تم نشرها مسبقا، وأهمية هذه التقنية تكمن في بساطة النظام والفعالية من حيث التكلفة، والتي يمكن تطبيقها بسهولة على فحص أي نوع من الحركة الهدبية خارج الحي. على وجه الخصوص، TI طاولة العمل يوفر واجهة بسيطة وسهلة الاستعمال تمكن الباحثون إلى رصد وتحليل الهدبية الحركة أكثر سهولة. لم يتم وضعها فعالة طرق تتبع ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعلن الكتاب أنه ليس لديهم المصالح المالية المتنافسة. تهدف هذه الورقة إلى تقديم التقارير منهجية مفصلة لمراقبة الحركة من أهداب في الأنسجة الضفيرة المشيمية معزولة. وقد تم الإبلاغ عن المستجدات العلمية في الدراسات السابقة 1،8.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل من خلال مشروع للجامعات الخاصة: دعم صندوق مطابقة من وزارة التعليم والثقافة والرياضة والعلوم والتكنولوجيا (MEXT) في اليابان (T.I.) ومنح المعونة للبحث العلمي (C) من MEXT (S.T. و K.N).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات < td colspan = "4" > لإعداد SEM < / قوي > الإيثانول اللامائي (PBS) عازلة الفوسفات الجاف < td colspan = "4" > أدوات ومواد للتشريح < / strong > < td colspan = "4" > لكل من التصوير المباشر وإعداد SEM < / مجهر قوي > ورقية مسطحةبلاستيكي 10 سم < td colspan = "4" > لتصوير الخلايا الحية < / طبقtd colspan = "4" ><قوي> لتحضير SEM < / معدنية قوية > دقيقة أسنان نقل العينة < td colspan = "4" ><قوية > معدات ومواد مجهرية < / strong > < td colspan = "4" > لتصوير الخلايا الحية < / مجهر قوي > يمكن استخدام مرشح طاولة عزل الاهتزاز مجموعات

<قوي>الكواشف المطلوبة< / strong>
لتصوير الخلايا الحية< / قوي >
إيثانولواكو كيماويات057-00456
Leibovitz L-15 تقنيات العمر المتوسط11415-064
إيثانولواكو كيماويات057-00456
محلول الملح المتوازن من هانكLife Technologies14170112
paraformaldehyde ميرك1040051000
الجلوتارالديهايد Nacalai tesque17003-05
isoamyl acetateNacalai tesque02710-95
المناخل الجزيئية 4A 1/8   ؛واكو للكيماويات130-08655لتحضير
محلول ملحي عازل لفوسفاتSigma-AldrichD1408
، 0.1 ملصنع 100 مل ، امزج 19.0 مل من 0.1   ؛ M NaH2PO4 و 81.0 مل من 0.1  M Na2< / sub>HPO4< / sub>
فوسفات أحادي الصوديوم (ثنائي هيدرات)Nacalai tesque31718-15
فوسفات ثنائي الصوديوم (اللاماء)Nacalai tesque31801-05
sucloseNacalai tesque30406-25
رابع أكسيد الأوزميومNisshin EM300
الثلج
[header]
ستيريوOlympusSZX7
منشفة
&Phi ؛ طبق
100 مل دورق
مقص تشغيل مستقيمSansyoS-2B
صانع الساعات ملقطDumontNo.DU-3 أو -4 ، INOX
سفلي قوي > زجاجيماتسوناميزجاج D110300 <
رقائق
قارورة زجاجية 5 مل مع غطاء بولي إيثيلينNichiden Rika-GlassPS-5A
ماصة نقلSamco ScientificSM251-1Sلعود
لنقل العينات
أيون الرش مع الذهب البلاديومهيتاشيمجفف النقطة الحرجة E-1030
هيتاشيHCP-2
[header]
مقلوبأوليمبوسIX81
100 واط مبيت مقطوع زئبق وإمدادات الطاقةأوليمبوسU-ULH و BH2-RFL-T3
100 واط مصباح زئبقUshioUSH103D
DIC مكثف ، NA 0.55OlympusIX-LWUCD
مصراع كهربائيVincent AssociatesVS35S22M1R3-24 و VMM-D1مصراع يدوي.
مرشح تمرير النطاق (400-700 & nbsp ؛ نانومتر ، & فاي ؛ 45  مم)Koshin KagakuC10-110621-1
ND (&Phi ؛ 45 مم)أوليمبوس45ND6 ، 45ND25، يتم استخدام مجموعة من مرشحات 25٪ و 6٪ ND
عدسة موضوعية (الغمر في الماء) مع عنصر DICOlympusUApo 40XW / 340 ، NA ، 1.15 مع كاميرا فيديو عالية السرعة IX-DPAO40
Allied Vision TechnologiesGE680& # 8805 ؛ 200 هرتز معدل الإطارات و 1 مللي ثانية تكشف الوقت
الحصول على الصور / تحليل البرمجياتفي المنزلTI Workbenchقادرة على الحصول على معدلات إطارات عالية.
كمبيوتر للتحكم في الكاميرا / تحليلApple Mac Pro
Meiritsu SeikiAD0806
الوزن للأنسجةمرساة شريحةWarner Instrumentsيمكن صنعه بشبكة نايلون ملتصقة على شكل حرف U مطحون & 0.5  سلك بلاتيني مم.
غطاء زجاجي (وزن بديل للأنسجة)ماتسوناميمصنوع حسب الطلبيمكن استخدام زجاج الغطاء كوزن للنسجة.
<قوي> ل SEM< / مجهر قوي >
مقلوبOlympusIX81
مجهر إلكتروني ماسحJEOLJSM-6510

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Nonami, Y., Narita, K., Nakamura, H., Inoue, T., Takeda, S. Developmental changes in ciliary motility on choroid plexus epithelial cells during the perinatal period. Cytoskeleton. 70 (12), 797-803 (2013).
  2. Bisgrove, B. W., Yost, H. J. The roles of cilia in developmental disorders and disease. Development. 133 (21), 4131-4143 (2006).
  3. Fliegauf, M., Benzing, T., Omran, H. When cilia go bad: cilia defects and ciliopathies. Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 8 (11), 880-893 (2007).
  4. Oh, E. C., Katsanis, N. Cilia in vertebrate development and disease. Development. 139 (3), 443-448 (2012).
  5. Shah, A. S., Ben-Shahar, Y., Moninger, T. O., Kline, J. N., Welsh, M. J. Motile cilia of human airway epithelia are chemosensory. Science(New York, N.Y). 325 (5944), 1131-1134 (2009).
  6. Kiprilov, E. N., et al. Human embryonic stem cells in culture possess primary cilia with hedgehog signaling machinery). The Journal of Cell Biology. 180 (5), 897-904 (2008).
  7. Hirokawa, N., Tanaka, Y., Okada, Y., Takeda, S. Nodal flow and the generation of left-right asymmetry. Cell. 125 (1), 33-45 (2006).
  8. Narita, K., Kozuka-Hata, H., et al. Proteomic analysis of multiple primary cilia reveals a novel mode of ciliary development in mammals. Biology Open. 1 (8), 815-825 (2012).
  9. Takeda, S., Narita, K. Structure and function of vertebrate cilia, towards a new taxonomy. Differentiation; Research in Biological Diversity. 83 (2), S4-S11 (2012).
  10. Ikegami, K., Sato, S., Nakamura, K., Ostrowski, L. E., Setou, M. Tubulin polyglutamylation is essential for airway ciliary function through the regulation of beating asymmetry. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (23), 10490-10495 (2010).
  11. Foster, K. W. Analysis of the ciliary/flagellar beating of Chlamydomonas. Methods in Cell Biology. 91, 173-239 (2009).
  12. Lechtreck, K. -F., Sanderson, M. J., Witman, G. B. High-speed digital imaging of ependymal cilia in the murine brain. Methods in Cell Biology. 91, 255-264 (2009).
  13. Okada, Y., Hirokawa, N. Observation of nodal cilia movement and measurement of nodal flow. Methods in Cell Biology. 91, 265-285 (2009).
  14. Chilvers, M. A., Rutman, A., O’Callaghan, C. Ciliary beat pattern is associated with specific ultrastructural defects in primary ciliary dyskinesia. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 112 (3), 518-524 (2003).
  15. Takeda, S., et al. Left-right asymmetry and kinesin superfamily protein KIF3A: new insights in determination of laterality and mesoderm induction by kif3A-/- mice analysis. The Journal of Cell Biology. 145 (4), 825-836 (1999).
  16. Karnovsky, M. J. A formaldehyde-glutaraldehyde fixative of high osmolarity for use in electron microscopy. The Journal of Cell Biology. 27, 137-138A (1965).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة