مقالة منهجية

دراسة وظيفة البروتين ودور التعبير البروتين يتغير عن طريق التدخل الأجسام المضادة وإعادة بناء ثلاثية الأبعاد

DOI:

10.3791/53049

⸱

أبريل 21, 2016

 ,  ,  ,  , 
1Institute for Biochemistry, Emil-Fischer Centre, University of Erlangen-Nuremberg, 2Department of Biology, Animal Physiology, University of Erlangen-Nuremberg

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التحكم في التعبير عن البروتين ليس ضروريا فقط لكل كائن حي على قيد الحياة ، ولكنه أيضا استراتيجية مهمة للتحقيق في وظائف البروتين في النماذج الخلوية. يوضح البروتوكول المقدم تطبيق تداخل الأجسام المضادة في خلايا الثدييات بما في ذلك الخلايا العصبية الأولية في الحصين ويوضح استخدام عمليات إعادة البناء ثلاثية الأبعاد في دراسة وظيفة البروتين.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وإدارة صارمة التعبير البروتين ضروري ليس فقط لكل كائن حي على قيد الحياة، ولكن أيضا استراتيجية هامة للتحقيق في وظائف البروتين في النماذج الخلوية. لذلك، اخترع البحوث التي أجريت مؤخرا أدوات مختلفة لاستهداف بروتين تعبير في خطوط الثدييات خلية أو حتى النماذج الحيوانية، بما في ذلك الحمض النووي الريبي وتدخل الأجسام المضادة. في حين أن الاستراتيجية الأولى جمعت الكثير من الاهتمام خلال العقدين الماضيين، والببتيدات التوسط إزفاء من الشحنات الأجسام المضادة عبر الأغشية الخلوية وداخل الخلايا، الحصول على الفائدة أقل من ذلك بكثير. في هذا المنشور، ونحن نقدم بروتوكول مفصلة كيفية الاستفادة من الناقل الببتيد اسمه عربة في خلايا الكلى الجنينية البشرية، وكذلك في الخلايا العصبية الحصين الابتدائية لإجراء تجارب تدخل الأجسام المضادة وزيادة توضيح تطبيق إعادة البناء الثلاثية الأبعاد في تحليل وظيفة البروتين. وتشير النتائج التي توصلنا إليها أن عربة هو، ربما نظرا لإشارة توطين النووية، particulaRLY مناسبة تماما لاستهداف البروتينات المقيمين في سوما والنواة. بشكل ملحوظ، عند تطبيق عربة على الثقافات الحصين الابتدائية، وتحول الكاشف إلى أن من المستغرب قبولا من قبل الخلايا العصبية فصلها.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ورقابة مشددة من التعبير البروتين ضروري لكل كائن حي لقيادة تنميتها وكذلك للرد على إشارات البيئية. ومن هنا، فقد تم اختراع العديد من الآليات أثناء التطور لتنظيم بالضبط مستوى التعبير من كل البروتين المشفرة بواسطة التطبيق. 20000 الجينات الموجودة في أي خلية حقيقية النواة في أي وقت من حياته. تجري في مراحل مختلفة من الإنتاج بروتين، وتتراوح آليات تنظيمية من إدارة هيكل لونين، النسخ وRNA التعامل مع لاتجاه التعديلات البروتين posttranslational والنقل والتدهور.

وبالتالي فإنه ليس من المستغرب أن الأعطال في الأجهزة الجزيئية ومستويات بروتين تعبير غيرت الكامنة ارتبطت الأمراض المختلفة مثل السرطان أو الإعاقة الذهنية. في الواقع، بالنظر إلى تعقيد المتميز لتطوير الخلايا العصبية وظائف المخ لدى الثدييات، وسينسيالناقلية هذه الأنظمة المتطورة إلى تغييرات في التعبير البروتين يتجلى في العديد من العجز الفكرية المعروفة بما في ذلك مرض الزهايمر ومرض باركنسون (AD وPD)، فضلا عن اضطرابات طيف التوحد (ASD) مثل متلازمة X الهشة (FXS). يتميز هذا المرض الأخير من قبل misexpression واسعة من مجموعة متنوعة من البروتينات، والذي يرجع إلى فقدان واحد ترجمة تنظيم البروتين، FMRP (الهشة البروتين التخلف X العقلية) 1-4. وعلاوة على ذلك، إعادة ترتيب الكروموسومات التي تؤثر على تهمة متغير X يرتبط البروتين (VCXA)، وهو بروتين، التي تدير الاستقرار مرنا والترجمة عن طريق تعديل مرنا متوجا 5، ومؤخرا ارتبط مع العجز الفكرية، في حين لم تحدد الطفرات نقطة في المرضى الذين يعانون من الإعاقة الإدراكية اعتبارا من الآن 6، 7، مما يدل على أن التخلف العقلي احظ تنبع من التعبير VCXA تغير والتعبير dysregulated من المتواجد المستهدفالإضافية. وتماشيا مع هذه النتائج، دراسة تحقق فيما اذا كانت دي نوفو أنشأت عدد نسخ الاختلافات من الجينات ترتبط مع ASD أن الازدواجية الجينات الجديدة والحذف هي عامل خطر كبير للASD 8، مما يدعم فكرة أن ارتفاع أو تناقص مستويات التعبير البروتين قد يسبب العجز الفكرية.

بشكل ملحوظ، شريطة البحوث التي أجريت مؤخرا دليلا آخر على أن مستوى التعبير عن بروتين معين يتم تعديل على وجه التحديد لمنع تجميع لها نتيجة لكميات عالية من البروتين مع هوامش أمان تقريبا أي 9. ولذلك فقد تم اقتراح أنه حتى زيادات صغيرة تكفي للحث على أمراض مثل م وPD 9. على الرغم من أن العديد من الآليات الجزيئية التي تسهم في السيطرة على بروتين تعبير يشير إلى وجود مخطط التنظيم تعقيدا في ضوء هذه النتائج، أظهرت دراسة تحقق في مستوى التعبير من أكثر من 5،000 الجينات الثدييات 10 التيطبيعة فضل مخطط أكثر شحيح جدا: وتبين أن وفرة البروتينات الخلوية إلى أن ينظم في الغالب على مستوى الترجمة 10، وبالتالي توضح أن إدارة توافر RNA يخدم أساسا لضبط تعبير البروتين.

دراسة جرعة من البروتينات المهمة (POIs) وبالتالي ليس مهما فقط لفهم وظائف الذاتية للبروتين، ولكن أيضا إلى تحقيق العديد من الأمراض وتطوير العلاجات. وهكذا، فقد شهدت العقود الأخيرة قبل عدة استراتيجيات باستخدام تدخل الحمض النووي الريبي لمعالجة البوي الجرعة. على الرغم من استخدامها على نطاق واسع تدخل الحمض النووي الريبي لدراسة وظيفة البروتين وحتى يتم تطبيقها في التجارب السريرية لعلاج السرطان أو العين من الأمراض وكذلك لمتابعة العلاجات المضادة للفيروسات في المرضى الذين يعانون 11-13، قد تنشأ بعض الصعوبات التي يمكن أن تجعل الاستراتيجية المستحيل. على سبيل المثال، تسلسل البذور، والذي يحرك ضربة قاضية من التماثل هو comparaبلي الآثار قصيرة، وبالتالي تعزيز بعيدا عن الهدف. منذ متواليات عالية الكفاءة نادرة وتحتاج إلى أن توجد من بين آلاف الخيارات (التي استعرضت في 14)، وتحديد التسلسل الصحيح يمكن أن يكون مضيعة للوقت ومكلفة، ولكن النتائج قد تكون لا تزال مخيبة للآمال.

استراتيجية بديلة هو استهداف مباشر البوي من الأجسام المضادة. هنا، نحن لتوضيح استخدام عربة البروتين الناقل (المصنعة من قبل النشطين الحافز) للحد من توافر البروتين الخلوي، وتوظيف إعادة البناء الثلاثية الأبعاد لدراسة وظيفة البروتين التالية تدق إلى أسفل.

عزر نشاطا من عربة، في حد ذاته 2.8 كيلو دالتون الببتيد، ويستخدم لالببتيدات المكوك والبروتينات والأجسام المضادة عبر أغشية خلايا الثدييات 15. واستوعبت الزميلة الببتيد مع النقاط المهمة من خلال تشكيل جانب غير تساهمي المجمعات الجزيئات باستخدام التفاعلات الطاردة للماء، وعندها المجمعات عربة-البوي إلى خلايا في جسيم داخلي، دائرة الهجرة والجنسيةالطريقة ependent. الأهم من ذلك، أشير إلى عربة للا تؤثر على توطين الخلايا من البروتينات مكوكية، ولا لممارسة تأثيرات السامة للخلايا أو أن تؤثر على النشاط البيولوجي للحمولتها 15.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. الحلول المالية

  1. Resuspend ومسحوق مجفف بالتجميد عزر نشط في H 2 O معقمة لتركيز النهائي من 2 ميكروغرام / ميكرولتر. اضغط بعناية لخلط.
  2. إعداد قسامات صغيرة (على سبيل المثال، 12 ميكرولتر لكل منهما، ويطلب 2 ميكرولتر في رد الفعل) وتخزينها في -20 درجة مئوية.

2. إعداد الخلايا

  1. البذور خلايا الثدييات مثل الخلايا HEK293 أو الخلايا العصبية الأولية على 24 لوحة جيدا في 500 ميكرولتر المتوسطة النمو بما في ذلك المضادات الحيوية.
    ملاحظة: عند استخدام الخلايا العصبية، البذور الخلايا في كثافة منخفضة وتستخدم سوى صفين الوسطى من 24 لوحة جيدا. وبالتالي فإن كل جانب لديهم نظيره فارغة الى الميناء المتوسط ​​أثناء الحضانة (الخطوة 4.2). عند التعامل مع الخلايا العصبية، ودائما تأكد من أن الخلايا لا تبقى خارج الحاضنة لأكثر من بضع دقائق.
  2. ثقافة الخلايا في ظروف مناسبة (ترطيب، 5٪ CO 2 و 37 درجة مئوية) حتى الخلايا هي التطبيق. 50٪متموجة.
    ملاحظة: عند استخدام الخلايا العصبية، ثقافة الخلايا حتى المرحلة التنموية المرجوة يتم التوصل إلى وتغيير التطبيق. 25-50٪ من المتوسط ​​مرتين في الأسبوع. المتوسطة: Neurobasal المتوسطة (التي تحتوي على 1X B27، 5 مم L-الجلوتامين و1X البنسلين والستربتوميسين، مقارنة مع المرجع 16).

3. عربة تشكيل مجمع

  1. في رد الفعل، وتمييع 0،1-2 ميكروغرام من البوي أو الأجسام المضادة المقابلة وكذلك البروتين السيطرة، أو مراقبة الأجسام المضادة، على التوالي، في 50 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني.
    ملاحظة: يعمل هذا الأسلوب أيضا مع المجمعات الجزيئات تتكون من الأجسام المضادة الأولية والثانوية ملزمة مسبقا (حزب المحافظين "ممثل النتائج، الشكل 1). خلط وزيادة ونقصان.
  2. لكل عينة، وتمييع 2 ميكرولتر عربة حل الأسهم في 50 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني باستخدام أنابيب منفصلة من أجل تجنب الارتباط الذاتي للعربة. خلط وزيادة ونقصان.
  3. نقل البوي المخفف أو الأجسام المضادة (الخطوة 3.1) إلى تخفيف عربة بواسطة الماصةتينغ. خلط وزيادة ونقصان.
  4. احتضان الخليط لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (والمجمعات عربة-البوي تشكيل).

4. ترنسفكأيشن من الخلايا

  1. تمييع المجمعات عربة (الخطوة 3.4) في 100 ميكرولتر المتوسطة النمو قبل تحسنت (37 درجة مئوية، أي إضافات). إزالة المتوسطة وغسل الخلايا مرة واحدة باستخدام قبل تحسنت برنامج تلفزيوني 1X.
    ملاحظة: عند استخدام الخلايا العصبية، لا تجاهل المتوسطة، سيتم إعادة استخدامها. يبقيه عند 37 درجة مئوية. لغسل، استخدم برنامج تلفزيوني تحتوي على 0.5 ملي MgCl 2 و CaCl 2.
    اقتراح: الحفاظ على المتوسط ​​في الآبار الفارغة في حين تفرخ لوحة (الخطوة 4.5).
  2. تطبيق حل معقد عربة (الخطوة 4.1) إلى الخلايا والصخور الخلايا بلطف لضمان التوزيع حتى من الحل. تنمو الخلايا تحت الظروف القياسية (الخطوة 2.2) لمدة 1 ساعة. إضافة المصل إلى تركيز النهائي من 10٪. عند استخدام الخلايا العصبية، إضافة المتوسطة من الخطوة 4.1. تنمو الخلايا لمدة 1-2 ساعات أكثر.
    لاحظ الفترة حضانة الأمثل يعتمد على حجم وخصائص البضائع وقد تحتاج إلى تعديل تجريبيا. الاقتراحات التالية قد تكون بمثابة المبدأ التوجيهي: للحصول على الببتيدات، 1 ساعة عادة ما تكون كافية، للبروتينات ينصح 1-2 ساعة، عن الأجسام المضادة 2 ساعة، ولترنسفكأيشن من الخلايا العصبية مع الأجسام المضادة 4 ساعة.
  3. خلايا عملية التحليل على النحو المعتاد. يرجى ملاحظة: هذه التقنية متوافقة مع التجارب باستخدام بروتوكولات تثبيت وكذلك التصوير الحي.

5. التصوير

  1. باستخدام الليزر مجهر المسح، واتخاذ مداخن ض الخلايا و / أو المقصورات خلية ذات الاهتمام باستخدام ما يقرب من 0.25-0.5 ميكرون بعد. المسافة طبقة دقيقة تعتمد على حجم وهيكل من أجل إعادة بنائها وتحتاج إلى أن تحدد بشكل فردي.

6. إعادة الإعمار

  1. في الخطوات التالية، استخدم أسفل خروج للتبديل بين تحديد وانتقل، CNTR لتحديد كائنات متعددة عن طريق النقر سن لهم ومفتاح التحول إلى قطع الكائنات (حزب المحافظين. الخطوة 6.10).
  2. فتح ملف مغلق في Imaris.
  3. باستخدام تعديل العرض لكل قناة، على النقيض من الصورة حتى ألمع هياكل تصل إلى التشبع. يرجى ملاحظة أن هذا التعديل لن تؤثر على تشييد سطح، فإنه لا يؤدي إلا إلى مساعدة مجرب في العتبة الصورة.
  4. انقر على إضافة السطوح جديدة رمز. سيتم فتح المعالج.
  5. اختر: الجزء فقط منطقة الفائدة. انتقل إلى الخطوة التالية.
  6. ضبط هوامش مربع التحديد لتناسب وجوه الخاص بك من الفائدة. يرجى أن تضع في الاعتبار أن الصورة لديها 3 الأبعاد والتي تحتاج التحديد إلى أن تعدل في الطائرة ض كذلك. إذا كان شكل مستطيل مربع التحديد لا يجب أن يطابق موضع اهتمام بشكل صحيح، وتحويل الكائن و / أو توسيع مربع حتى هي جزء لا يتجزأ جميع الهياكل المطلوبة. يمكن إزالة الكائنات غير المرغوب فيها في وقت لاحق (حزب المحافظين. الخطوة 6.10). تقدم.
  7. حدد الفصل المناسبannel. مستوى التفاصيل المساحة بالمتر المربع أو القطر المجال يجب تعيين لتتناسب مع الهياكل يعاد بناؤها. اعتمادا على خصائص إشارة، إما الكثافة المطلقة أو التباين المحلي يمكن استخدامها. عموما، على النقيض المحلي يعمل بشكل أفضل لإشارات منتشر. في أي حال، يجب أن يتم تعديلها بشكل منفصل لكل إشارة أو بنية الفائدة، على التوالي الإعدادات.
  8. باستخدام أداة استيفاء الحد الأدنى، وإعادة بناء هيكل الفائدة.
  9. استكمال إعادة الإعمار من خلال النقر على السهم أسفل الأخضر.
  10. ضبط الكائن مزيد باستخدام أداة القلم الرصاص لخفض وإزالة الأسطح كما هو مطلوب. فمن الممكن فقط لقطع في اتجاه الشمال والجنوب، وبالتالي، إمالة الصورة من أجل خفض الكائن المطلوب.
  11. الحصول على قياسات حجم والمساحة وكثافة لكل سطح عن طريق تحديد الإحصاء، الإحصائيات المفصلة، ​​ومتوسط ​​القيم.
  12. (خطوة اختيارية) لمراقبة إحصاءات مرمزة (حزب المحافظين. 2E الشكل وF)، حدد علامة التبويب لون السطح المقابل ووضع علامة "الإحصاء الأكواد 'بدلا من' قاعدة '. سيتم عرض عدة خيارات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في الفقرات التالية، نتائج نموذجية توضح ضربة قاضية وظيفية من البوي (Simiate، لمزيد من التفاصيل يرجى الاطلاع على 16، 17) باستخدام ترد كاشف عربة وتدخل الأجسام المضادة. النتائج تثبت أن تقلص تعبير عن Simiate يضعف النشاط النسخي، وبطريقة تعتمد على الجرعة، يستحث موت الخلايا المبرمج، وبلغت ذروتها في معدلات وفيات أكثر من 99٪ إذا تم تطبيق كميات الأجسام المضادة أعلى (> 1 ميكروغرام الضد) (نشرت هذه الاكتشافات سابقا في 16). هنا، نقدم الآن التقنيات و...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا، نقدم بروتوكول لدراسة أهمية مستويات بروتين تعبير في السيطرة على الوظائف الخلوية بطريقة جرعة مدفوعة. بروتوكول صفها يسمح للتلاعب ضبطها غرامة التعبير البروتين في مختلف أنواع خلايا الثدييات، بما في ذلك الخلايا العصبية قرن آمون، وبالتالي تسهيل الدراسات التفصيلية وظيفة البروتين على المستوى الخلوي.

على الرغم من أن تدخل الحمض النووي الريبي يمثل استراتيجية معروفة إلى تنظيم أسفل النقاط المهمة، فقد لعيوب (حزب المحافظين ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد العمل المقدم في أجزاء بتمويل من المعاهد الكندية لأبحاث الصحة / مؤسسة أبحاث الهشة العاشر من برنامج الشراكة كندا إلى RD، مؤسسة جيروم لوجون إلى RD، وInterdisziplinäres Zentrum يقع FÜR klinische Forschung من جامعة إيرلانغن نورمبرغ الى RD و من الألمانية للبحوث إلى RD والطاقة المتجددة. الكتاب أود أن أشكر انغريد زنجر للمساعدة التقنية مع صيانة زراعة الخلايا وكذلك الأستاذ محمد اجنر لصنع ناقلات pCMV5-FLAG المتاحة. يرغب البلاغ كذلك أن أشكر بشكل خاص ناديا شرودر للدعم مفيدة في تصوير الفيديو.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

متجر تقنيات

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
ChariotActive Motif30025في -20 درجة ؛ C
الحياةالمتوسطة العصبية21103-049الاحماء حتى 37 درجة ؛ C قبل استخدام
تقنيات 1x B27Life17504044تخزينها عند -20 درجة ؛ C
L-glutamineLife technologies25030-149مخزن في -20 درجة ؛ C
Penicillin و StreptomycinLife technologies15140-122متجر في -20 درجة ؛ C
Imaris برنامجBitplanen.a.مكلف، ولكن لا مثيل
له مجهر المسح الضوئي بالليزرZeissn.a.

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Santoro, M. R., Bray, S. M., Warren, S. T. Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. Abbas, A. K., Galli, S. J., Howley, P. M. 7, Annual Review. 219-245 (2012).
  2. Jiang, T. F., Chen, S. D. Dysfunction of two lysosome degradation pathways of alpha-synuclein in Parkinson's disease: potential therapeutic targets? Neurosci Bull. 28, 649-657 (2012).
  3. Howlett, D. R., Richardson, J. C. The pathology of APP transgenic mice: a model of Alzheimer's disease or simply overexpression of APP? Histol Histopathol. 24, 83-100 (2009).
  4. Carlson, G. A., et al. Genetic Modification of the Phenotypes Produced by Amyloid Precursor Protein Overexpression in Transgenic Mice. Human molecular genetics. 6, 1951-1959 (1997).
  5. Jiao, X. F., Wang, Z., Kiledjian, M. Identification of an mRNA-secapping regulator implicated in X-linked mental retardation. Mol. Cell. 24, 713-722 (2006).
  6. Fukami, M., et al. A member of a gene family on Xp22.3, VCX-A, is deleted in patients with X-linked nonspecific mental retardation. Am. J. Med. Genet. 67, 563-573 (2000).
  7. Van Esch, H., et al. Deletion of VCX-A due to NAHR plays a major role in the occurrence of mental retardation in patients with X-linked ichthyosis. Human molecular genetics. 14, 1795-1803 (2005).
  8. Sebat, J., et al. Strong association of de novo copy number mutations with autism. Science. 316, 445-449 (2007).
  9. Tartaglia, G. G., Pechmann, S., Dobson, C. M., Vendruscolo, M. Life on the edge: a link between gene expression levels and aggregation rates of human proteins. Trends Biochem Sci. 32, 204-206 (2007).
  10. Schwanhausser, B., et al. Global quantification of mammalian gene expression control. Nature. 473, 337-342 (2011).
  11. Uchino, K., Ochiya, T., Takeshita, F. RNAi therapeutics and applications of microRNAs in cancer treatment. Jpn J Clin Oncol. 43, 596-607 (2013).
  12. Li, T., Wu, M., Zhu, Y. Y., Chen, J., Chen, L. Development of RNA interference-based therapeutics and application of multi-target small interfering RNAs. Nucleic Acid Ther. 24, 302-312 (2014).
  13. DeVincenzo, J. P. The promise, pitfalls and progress of RNA-interference-based antiviral therapy for respiratory viruses. Antivir Ther. 17, 213-225 (2012).
  14. Fellmann, C., Lowe, S. W. Stable RNA interference rules for silencing. Nat Cell Biol. 16, 10-18 (2014).
  15. Morris, M. C., Depollier, J., Mery, J., Heitz, F., Divita, G. A peptide carrier for the delivery of biologically active proteins into mammalian cells. Nat Biotechnol. 19, 1173-1176 (2001).
  16. Derlig, K., Gießl, A., Brandstätter, J. H., Enz, R., Dahlhaus, R. Identification and Characterisation of Simiate, a Novel Protein Linked to the Fragile X Syndrome. PLoS One. 8, e83007(2013).
  17. Derlig, K., et al. Simiate is an Actin binding protein involved in filopodia dynamics and arborisation of neurons. Frontiers in Cellular Neuroscience. 8, (2014).
  18. Loudet, A., et al. Non-covalent delivery of proteins into mammalian cells. Org Biomol Chem. 6, 4516-4522 (2008).
  19. Nagel, D., et al. Polymeric microspheres as protein transduction reagents. Mol Cell Proteomics. 13, 1543-1551 (2014).
  20. Selim, A. A., et al. Anti-osteoactivin antibody inhibits osteoblast differentiation and function in vitro. Crit Rev Eukaryot Gene Expr. 13, 265-275 (2003).
  21. Jain, A., Brady-Kalnay, S. M., Bellamkonda, R. V. Modulation of Rho GTPase activity alleviates chondroitin sulfate proteoglycan-dependent inhibition of neurite extension. J Neurosci Res. 77, 299-307 (2004).
  22. Watanabe, S., Wakasugi, K. Neuroprotective function of human neuroglobin is correlated with its guanine nucleotide dissociation inhibitor activity. Biochem Biophys Res Commun. 369, 695-700 (2008).
  23. Eguchi, A., et al. Optimization of nuclear localization signal for nuclear transport of DNA-encapsulating particles. J Control Release. 104, 507-519 (2005).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

HEK293 Imaris

مقالات ذات صلة