وقد وافق جميع الدراسات على الحيوانات من قبل مؤسسات الرعاية الحيوانية واللجنة الاستخدام (IACUC) في مايو كلينيك.
1. تصميم وتحليل من 2205 الفولاذ المقاوم للصدأ الدعامة
- تصميم الدعامات المعدنية العارية باستخدام CAD
- جعل اسطوانة جوفاء مقذوف عن طريق تحديد على ميزة "مقذوف مدرب / القاعدة 'مع سمك الجدار مساو لسمك الدعامة تبختر.
- تصميم نمط الدعامة على متن طائرة رسم مختلفة عرضية إلى الاسطوانة مقذوف. جعل عرض نمط شقة لتتناسب مع محيط اسطوانة جوفاء مقذوف.
- نقل نمط تصميم شقة على اسطوانة جوفاء باستخدام ميزة التفاف.
- حفظ جزء في شكله الأصلي، وكذلك في شكل المعلومات المسبقة عن البضائع التي يتم تصديرها للالهيئة الاتحادية للبيئة.
- تحليل العناصر المحدودة لنماذج الدعامات
- استيراد الهندسة الصلبة المحفوظة بتنسيق المعلومات المسبقة عن البضائع داخل الوحدة النمطية جزءا من برنامج الهيئة الاتحادية للبيئة لمزيد من ANALYSهو.
- نموذج 2 اسطوانات التحليلية محوري لالدعامات في التماثيل جزء من برنامج الهيئة الاتحادية للبيئة. الاسطوانة الخارجية لديها قطر الأولي أكبر من قطر الدعامة لمحاكاة المكشكش والاسطوانة الداخلية لديها قطر الأولي من 1 ملم إلى محاكاة بالون للتضخم.
- انقر مرتين على البند شجرة "حالات" للمصمم نماذج التجميع لتجميع ما سبق وقال أجزاء في الأوضاع النسبية.
- استخدام وحدة شبكة من برنامج الهيئة الاتحادية للبيئة، حدد نوع عنصر الى 20 عقدة عنصر مسدس الأضلاع مع انخفاض التكامل، تحديد حجم العنصر، وشبكة الدعامات.
- تحديد أزواج اللاصقة الصلبة الاحتكاك بين الدعامات واثنين من اسطوانات على التوالي في "خصائص التفاعل" من شجرة النموذج.
- تعيين سلوك الإجهاد والانفعال-elasto البلاستيكية من 2205 الفولاذ المقاوم للصدأ لنموذج الدعامات.
- تحديد شروط الحدود لتجعيد أولا الاسطوانة الخارجية إلى 1 مم، تحاكي جrimping من الدعامات. إزالة الاسطوانة الخارجي لمحاكاة التخفيف من الدعامات معقوص. توسيع الاسطوانة الداخلية إلى 3 ملم إلى محاكاة التوسع وأخيرا، وإزالة الاسطوانة الداخلية لمحاكاة الارتداد من الدعامات.
- تعريف المعلمات محاكاة بما في ذلك عدد من المعالجات وكمية من ذاكرة الوصول العشوائي المخصصة في 'تحليل' البند نموذج شجرة وتشغيل المحاكاة.
- مرة واحدة في محاكاة كاملة، فتح الملف نتيجة (filename.odb) وبعد عملية نتائج لدراسة السلالات الرئيسية وتكرارا تحسين تصميم الدعامات لتحقيق سلالة الرئيسي من 20٪ وهو أقل من الحد فشل المواد .
2. الدعامة تصنيع واختبار لالعقص والتوسع
- الدعامة تلفيق
- الحصول على 2205 أنابيب الفولاذ المقاوم للصدأ الحفر بندقية والدقة بار طحن المواد الأسهم في شركة الآلات الدقيقة مثل عمل منتجات الدقة في بايونير،OH.
- نقل أنابيب الأرض الدقة وشقة نمط تصميم الدعامات لشركة الدعامة قطع مثل شركة تكنولوجيا Laserage في وكغن]، IL القطع بالليزر وبالكهرباء.
- إيقاف فاعلية سطح الدعامات electropolished بواسطة الغمر لهم في حمض قوي (50٪ حمض الهيدروكلوريك) لمدة 10 دقيقة تليها قاعدة (10٪ NaHCO 3) لمدة 10 دقيقة أخرى. تنبيه: التعامل مع المواد الكيميائية مع معدات الوقاية المناسبة وتحت غطاء الدخان. وأخيرا، وغسل الدعامات مع الكحول الإيثيلي والماء منزوع الأيونات. وتسمى هذه العملية بالحامض.
- اختبار الدعامات المصنعة للالعقص والتوسع
- تجعيد الدعامات على بالون trifold باستخدام باليد أداة العقص. عقد الدعامات والبالون trifold في أداة العقص. اضغط على مقبض لتشويه شعاعيا الدعامات أن يكون مجعد على البالون.
- تفقد الدعامات معقوص باستخدام مجهر على الزي المدرسي العقص وأي علامات الفشل في هيكل المقررلتشوه البلاستيك.
- توسيعه لقطر تهدف من 3 مم الضغط على البالون trifold بالماء. دراسة الدعامات موسعة لكسور ميكروسكوبية والتوسع موحد.
3. توصيف الدعامة لالمحتجزة المجال المغناطيسي
ملاحظة: مغناطيس اسطواني من 2 بوصة وقطرها 1 بوصة ارتفاع استخدمت في هذه الدراسة. يتم محاذاة أقطاب المغناطيس على طول المحور. كثافة سطح الفيض المغناطيسي المغناطيس حوالي 1 T.
- جذب الدعامات تماما أو محوريا باستخدام مغناطيس النيوديميوم قوية. عقد الدعامات على مقربة من مغناطيس قوي لحوالي 1 دقيقة للمغنطة.
- عقد الدعامات على واحد من وجوه مسطحة مع قطر على طول خطوط الحقل المغناطيسي إلى أن ممغنط تماما أو عقد الدعامات التي تليها على سطح أسطواني مع محور على طول خطوط الحقل المغناطيسي لجذب عليه محوريا. احتفظ المجال المغنطيسي للتم العثور على (د) من الدعامة أن تكون مستقرة لا يقل عن 24 ساعة، ولكن استخدام الدعامات في أقرب وقت ممكن بعد مغنطة.
- تركيب الدعامات بشكل فردي على مماسك الزجاج ومن ثم تحميل مماسك الزجاج في ظرف دقيقة من المباراة جس المغناطيسي. المغناطيسي التحقيق microsensor يمكن وضعه بالضبط على مقربة من الدعامات دون لمس السطح باستخدام XYZ مراحل التجميع من المباراة جس المغناطيسي (الشكل 4).
- قياس القراءة الأساسية للmicrosensor المغناطيسي بعيدا عن الدعامة ومن ثم قياس المجال المغناطيسي الاحتفاظ على سطح الدعامة عن طريق تحديد المواقع التحقيق باستخدام مراحل XYZ من المباراة جس المغناطيسي.
4. المغناطيسي الدراسات القبض على خلية
- خلايا الحصول، ووضع العلامات مع SPION وتلطيخ مع صبغة الفلورسنت
- اشتقاق خلايا ثمرة البطانية (EOC) من الدم المحيطي الخنازير كما هو موضح في 5،7. الثقافة في قارورة T-75 أونتيل ما يقرب من 80٪ متموجة (5X10 6 إلى 8X10 6 خلايا).
- توليف SPIONs إلى 10 نانومتر قطر المغنتيت (الحديد 3 O 4) الأساسية محاطة 50 نانومتر بولي سميكة (اللبنيك، شارك في الجليكوليك حمض) (PLGA) قذيفة كما هو موضح في 8،9.
- احتضان EOC المستمدة مع SPION بتركيز 200 ميكروغرام / مل من مستنبت الخلية لمدة 16 ساعة على 37 درجة مئوية.
- نضح مستنبت الخلية بلطف. بلطف غسل الخلايا بإضافة 10 مل من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) إلى القارورة، هزاز، والشفط PBS.
- وصمة عار على الخلايا مع صبغة الفلورسنت (CM-الجاذبة) لتصور خلال التجارب. ويتم ذلك حسب تعليمات الشركة المصنعة عن طريق إضافة صبغ إلى 10 مل من مستنبت الخلية بتركيز 5 ميكرولتر / مل واحتضان مع الخلايا لمدة 30 دقيقة عند 37 ° C.
- غسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني كما في الخطوة 4.1.4 واحتضان مع 3 مل من 0.25٪ التربسين-EDTA حل لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية ل رفع الخلايا من القارورة.
- نقل تعليق خلية إلى 15 مل أنبوب مخروطي الشكل، أعلى قبالة مع برنامج تلفزيوني، وأجهزة الطرد المركزي في 500 x ج لمدة 5 دقائق لتشكيل خلية بيليه.
- اعادة تعليق الخلية بيليه في برنامج تلفزيوني في تركيز 1-2x10 6 خلية / مل ومزيج دقيق من قبل pipetting ويخرجون من أنبوب مخروطي الشكل عدة مرات.
- في الدراسات المختبرية الخلية
- تصميم وتصنيع (على سبيل المثال، 3D الطباعة) لاعبا اساسيا بسيط لعقد الدعامات فقط فوق سطح ساترة الزجاج.
- Demagnetize الدعامة باستخدام degausser الكهرومغناطيسي أو جذب الدعامة تماما أو محوريا باستخدام مغناطيس النيوديميوم قوية.
- ماصة EOC المسمى SPION علقت في برنامج تلفزيوني في طبق يحتوي على الدعامات السيطرة ممغنط محوريا أو الممغنطة تماما أو غير الممغنطة. صورة الدعامات مع EOC علقت في برنامج تلفزيوني على الفور لمضان باستخدام المجهر مضان مقلوب.
الطبقة = "jove_title"> 5. وفي الجسم الحي الدراسات الحيوانية
- الدعامة غرس
- سحب الدم المحيطي من 4 الخنازير يوركشاير صحية - وزنها حوالي 50 كغ - 3 أسابيع قبل الدعامة زرع على التوالي والثقافة EOC كما هو موضح في 5،7.
- إدارة الأدوية المضادة للصفائح الدموية اعتبارا من 3 أيام قبل الجراحة (الأسبرين 325 ملغ و 75 ملغ يوميا كلوبيدوقرل).
- في اليوم الدعامة الزرع، تخدير الخنازير مع العضلي Telazol، زيلازين، والأتروبين (5 / 2-3 / 0.05 مغ / كغ على التوالي) كما جاء في رعاية الحيوان واستخدام المبادئ التوجيهية المؤسسية المعمول بها.
- أنبوبا ووضع خنزير على استنشاق التخدير الأيزوفلورين 1-2،5٪.
- حلق منطقة الرقبة بطني من الخنزير واجراء العملية في ظروف معقمة العامة.
- زرع 1 ممغنط و1 الدعامات غير الممغنطة في الشريان التاجي الأيمن (RCA) باستخدام معيار تقنية قسطرة القلب.
- Catheteيجب أن يتم تنفيذ rization الحيوانات من قبل طبيب القلب التداخلية المدربين. الوصول إلى الشريان السباتي الأيمن مع 9 غمد الفرنسي.
- يقني؛ يدخل القنية الشريان التاجي الهدف وحقن صبغة معالجتها باليود على النقيض من الحصول على صور جهاز أشعة.
- وضع 0.014 بوصة سلك التوجيه التاجي القياسي في الشريان. دفع البالون وتركيب دعامات استخدام هذه الأسلاك دليل ونشر الدعامات في وعاء بقطر 3-3.5 ملم.
- انسداد تدفق الدم داخل الداني RCA إلى الدعامات زرعها باستخدام أكثر من البالون الأسلاك وتسليم حوالي 2x10 6 EOC ذاتي المسمى مع SPION مع وقف التنفيذ في 4 مل من برنامج تلفزيوني عبر القسطرة المركزية خلال فترة 2 دقيقة.
- استعادة تدفق الدم إلى RCA بعد 2 دقيقة من انسداد إضافية.
- نقل الحيوان إلى غرفة الإنعاش وتراقب عن كثب الحيوان حتى استعاد وعيه ذلك.
- تواصل إدارة الأدوية المضادة للصفائح الدموية (الأسبرين 325 ملغ و كلوبيدوقرل 75 مز) بعد الجراحة حتى التضحية.
- يزدرع الدعامات والأنسجة
- الموت ببطء الحيوانات 7 أيام بعد الجراحة بواسطة تخدير أولا الحيوان كما سبق بيانه ومن ثم إدارة عن طريق الوريد بجرعة قاتلة من بنتوباربيتال الصوديوم (100 ملغ / كلغ) وفقا لرعاية الحيوان واستخدام المبادئ التوجيهية المؤسسية المعمول بها.
- حصاد جراحيا قطاعات الشرايين stented. إصلاح الشرايين explanted في 10٪ عازلة الفورمالين لمدة لا تقل عن 30 دقيقة. ترك العينات في المخزن الفورمالين لمزيد من التحليل النسيجي.
- الاستعانة بمصادر خارجية لعينة الثابتة إلى مرافق قادرة على أداء الأنسجة مع الدعامات المعدنية. خلال هذه المعالجة، يتم تضمين العينات في methylmethacrylate، مقطوع عبر، وتحليلها نسيجيا باستخدام تقنية تلوين مالوري مع وصمة عار الأزرق البروسي لجزيئات الحديد.