Method Article

بروتوكول للثلاثي الأبعاد متحد البؤر تحليل المظهرية من النجمية

DOI:

10.3791/53113

⸱

December 11th, 2015

 ,  ,  ,  , 
1Department of Clinical and Experimental Medicine, Linköping University, 2Neurophysiology Research Center, Shahed University, 3Cellular and Molecular Research Center, Iran University of Medical Sciences, 4School of Advanced Technologies in Medicine, Iran University of Medical Sciences

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخلايا النجمية في الجهاز العصبي المركزي تغير خصائصها الوظيفية والهيكلية استجابة للمنبهات الضارة. يقدم هذا التقرير بروتوكولا لتقييم مورفولوجيا الخلايا النجمية ثلاثية الأبعاد في الحالات المريضة أو بعد التدخلات العلاجية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كما الخلايا الدبقية في الدماغ، الخلايا النجمية لها أدوار وظيفية متنوعة في الجهاز العصبي المركزي. في ظل وجود مؤثرات الضارة، النجمية تعديل خصائصها الوظيفية والهيكلية، وهي حالة تسمى دباق النجمي رد الفعل. هنا، يتم تقديم بروتوكول للتقييم الخصائص المورفولوجية من الخلايا النجمية. ويشمل هذا البروتوكول الكمي من 12 معلمات مختلفة أي مساحة وحجم الأنسجة من قبل (إقليم نجمية) نجمية المشمولة، ونجمية بأكملها بما في ذلك الفروع، وخلايا الجسم، والنواة، وكذلك الطول الإجمالي وعدد من الفروع، وشدة من مناعية مضان من الأجسام المضادة المستخدمة للكشف عن نجمية، وكثافة نجمية (رقم / 1000 ميكرون 2). لهذا الغرض تم إنشاء ثلاثية الأبعاد (3D) الصور المجهرية مبائر، وصورة 3D برامج التحليل مثل Volocity 6.3 كان يستخدم لقياس. أنسجة المخ الفئران المعرضة للاميلويد بيتا 1-40 1-40) مع أو بدون تدخل علاجي لتقديم الأسلوب. ويمكن أيضا أن هذا البروتوكول استخدامها ل3D تحليل المورفومترية من الخلايا الأخرى في الجسم الحي من أي أو في ظروف المختبر.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في صحي الجهاز العصبي المركزي (CNS)، النجمية تلعب دورا هاما في تنظيم تدفق الدم، واستقلاب الطاقة، وظيفة متشابك واللدونة، والأيونات خارج الخلية والعصبي التوازن 1-3. بالإضافة إلى ذلك، النجمية تستجيب للمؤثرات الضارة المختلفة وظروف غير طبيعية مثل الصدمات النفسية، والعدوى، ونقص التروية أو التنكس العصبي عن طريق رد الفعل دباق النجمي الذي يتميز تضخم وانتشارها وإعادة عرض وظيفي من الخلايا النجمية 4،5.

دباق النجمي رد الفعل يمكن أن مهندس الاستجابة الالتهابية وعملية الإصلاح في الأنسجة، وبالتالي، يمكن أن تؤثر على النتائج السريرية من التدخلات العلاجية. وف....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد أجريت هذه الدراسة وفقا للسياسات المنصوص عليها في دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية (NIH) التي وافقت عليها لجنة الأخلاق من جامعة ايران للعلوم الطبية (طهران، إيران).

1. الحيوانات والجراحة وعينة الاستعدادات

ملاحظة: إعداد أنسجة المخ ل3D التحليل المجهري متحد البؤر.

  1. الحيوانات الانقسام عشوائيا إلى مجموعتين: Aβ 1-40 -injection (ن = 8)، وAβ 1-40 -injection مع العلاج جينيستين (ن =....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعرض هذا القسم بعض الأمثلة من الملاحظات النوعية والكمية التي تنتجها تحليل المورفومترية 3D. للحصول على نتائج كاملة لجميع المعلمات 12 المذكورة سابقا، يرجى الاطلاع على المنشور السابق 10.

ملاحظات النوعية

الخلايا النجمية أظهرت فروع رقيقة أو سميكة التي كانت عادة ما يكون طويلا في Aβ 1-40 حقن الجرذان (الشكل 1). لوح.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في البروتوكول الحالي، نحن العاملين 3D قياس الأشكال متحد البؤر لتقييم 12 المعلمات المختلفة التي ارتبطت نجمية التشكل. لهذا الغرض، والأنسجة قرن آمون من الفئران مع Aβ 1-40 - استخدمت دباق النجمي التي يسببها، مع أو بدون المعالجة جينيستين كعامل مضاد للالتهابات. باستخدام صور 3D والبرمجيات المورفولوجية، كنا قادرين على إظهار تأثير جينيستين على دباق النجمي أي مورفولوجيا الخلايا النجمية.

التغيرات في البيئ.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من مجلس مقاطعة Östergötland، (السويد) والخلوية ومركز الأبحاث الجزيئية في جامعة ايران للعلوم الطبية (طهران، إيران).

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
أميلويد بيتا 1-40سيجما ألدريتش79793يحفظ في -70 درجة ؛ C
GenisteinSigma Aldrich446-72-0الحفاظ على -20 درجة ؛ C
الأجسام المضادة للأرانب متعددة القولون ضد البروتين الحمضي الليفي الدبقيDAKOZ0334
الخنازير القلوية المترافقة بالفوسفات المضادة للأرانب الأجسام المضادة IgGDAKO
السائل الدائم الكروموجينDAKOK0640
سائل دائم الركيزة الحمراء عازلةDAKOK0640
Cremophor ELSigma Aldrich27963زيت الخروع متعدد الإيثوكسيلات - الخطوة 1.1
LSM 700 الفحص المجهري للمسح الضوئي بالليزر متحد البؤرCarl Zeiss
Volocity 6.3Perkin Elmer Inc. ،
تحليل الصور 2000Tekno Optic
StreotaxicStoelting
Graph pad Pad Prism 5Graph pad software Inc.
جهاز

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Barres, B. A. The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease. Neuron. 60 (3), 430-440 (2008).
  2. Pellerin, L., et al. Activity-dependent regulation of energy metabolism by astrocytes: an update. Glia. 55

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Astrocyte MorphologyConfocal Microscopy3D Image AnalysisVolocity SoftwareGFAP ImmunostainingFluorescence IntensityAstrocyte TerritoryNuclear VolumeBranch LengthCell Density

Related Articles