Method Article

تحليل وضع الأسنان جرثومة تعصيب استخدام أجهزة ميكروفلويديك المشارك الثقافة

DOI:

10.3791/53114

⸱

August 14th, 2015

 ,  , 
1Institute of Oral Biology, Unit of Orofacial Development and Regeneration, University of Zurich

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
تمثل الثقافات المشتركة

طريقة قيمة لدراسة التفاعلات بين الأعصاب والأنسجة والأعضاء المستهدفة. تسمح أنظمة الموائع الدقيقة بالزراعة المشتركة للعقد والأعضاء أو الأنسجة النامية الكاملة في وسائط الثقافة المختلفة ، وبالتالي تمثل أداة قيمة للدراسة المختبرية للحديث المتبادل بين الخلايا العصبية وأهدافها.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعصيب يلعب دورا رئيسيا في تطوير والتوازن وتجديد الأعضاء والأنسجة. ومع ذلك، فإن الآليات الكامنة وراء هذه الظواهر ليست مفهومة جيدا حتى الآن. على وجه الخصوص، وإهمال دور تعصيب في نمو الأسنان والتجدد.

قدمت عدة الدراسات المجراة على معلومات هامة حول أنماط تعصيب من أنسجة الأسنان خلال عمليات التنمية وإصلاح مختلف النماذج الحيوانية. ومع ذلك، فإن معظم هذه الأساليب ليست الأمثل لتسليط الضوء على الأساس الجزيئي للتفاعلات بين الألياف العصبية والأجهزة المستهدفة والأنسجة.

المشترك الثقافات تشكل وسيلة قيمة للتحقيق والتعامل مع التفاعلات بين الألياف العصبية والأسنان في بيئة تسيطر عليها والمعزولة. في العقود الأخيرة، وقد أجريت التقليدية المشترك الثقافات باستخدام نفس مستنبت لفترات قصيرة جدا (على سبيل المثال، يومين)للتحقيق في الآثار جذابة أو مثيرة للاشمئزاز لتطوير أنسجة الفم والأسنان على الألياف العصبية الحسية. ومع ذلك، لا بد من تمديد فترة ثقافة للتحقيق في آثار تعصيب على التشكل الأسنان وتمايز خلوي.

نظم على microfluidics تسمح المشترك الثقافات من الخلايا العصبية وأنواع مختلفة من الخلايا في وسائل الإعلام ثقافة المناسب لها. لقد أثبتنا في الآونة الأخيرة أن العقد الثلاثي التوائم (TG) والأسنان قادرين على البقاء على قيد الحياة لفترة طويلة من الزمن عندما شارك في تربيتها في أجهزة ميكروفلويديك، وأنها تحافظ في هذه الظروف نمط تعصيب نفسه أنها تظهر في الجسم الحي.

على هذا الأساس، نحن تصف كيفية عزل ويصف التعاون ثقافة تطوير مثلث التوائم العقد والأسنان الجراثيم في البروتوكول ميكروفلويديك شارك في الثقافة system.This وسيلة بسيطة ومرنة للمشاركة في ثقافة العقد / الأعصاب والأنسجة المستهدفة ودراسة الأدوار من جزيئات محددة بشأن هذه التفاعلات في مقاولاتolled وبيئة معزولة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعصيب يلعب دورا رئيسيا في تطوير والتوازن وتجديد الأعضاء والأنسجة 1،2. وعلاوة على ذلك، تشارك تعصيب في تنظيم تكاثر الخلايا الجذعية، وتعبئة والتمايز 3-5. في الواقع، أظهرت الدراسات الأخيرة التي تحققت في أنسجة مجمع فموي وجهي أن الأعصاب الحركية ضرورية لالظهارية وظيفة الخلايا الاصلية خلال تطوير وتجديد اللعابية الغدد 6،7. وبالمثل، فقد ثبت أن تعصيب ضروري لتطوير وصيانة براعم الذوق 8-11. وبالتالي، فمن المهم تحليل الأدوار إلا أنها مهملة من تعصيب في تطوير أجهزة فموي وجهي الهامة الأخرى والأنسجة مثل الأسنان.

على الرغم من تعصيب غنية....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

واستمرت كل الفئران والتعامل معها وفقا لقانون رعاية الحيوان السويسري وامتثالا لتعليمات مكتب كانتون البيطرية، زيورخ.

1. إعداد تشريح المواد، الثقافة وسائل الإعلام، أجهزة ميكروفلويديك

  1. الأوتوكلاف ملقط تشريح الصغرى والمقص (121 ° C، التعقيم الوقت: 20 دقيقة) وتخزينها في حاوية معقمة.
  2. تعقيم coverslips الزجاج (24 ملم × 24 ملم) التي يحتضنها منهم في 1 M حمض الهيدروكلوريك لمدة 24 ساعة على شاكر المداري عند 37 درجة مئوية. غسلها ثلاث مرات....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتشير هذه النتائج إلى أن العقد الثلاثي التوائم معزولة يمكن أن تنمو في حجرة واحدة من الجهاز ميكروفلويديك وبالإضافة إلى ذلك، أن تطور جراثيم الأسنان معزولة وتدوم لفترة طويلة من الوقت في حجرة أخرى من الجهاز ميكروفلويديك. وتستخدم وسائل الإعلام ثقافة مختلفة في القسمين، وmicrogrooves بين القسمين تسمح تمديد محور عصبي من عقدة العصب الثلاثي التوائم نحو جراثيم الأسنان النامية. الشكل 3 يمثل التصور من خيط عصبي عبر المناعي 37، في ثقافة مشتركة من ماوس عقدة العصب الثلا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

سابقة في الدراسات المختبرية من تعصيب الأسنان استندت شارك الثقافات التقليدية من العقد مثلث التوائم وأنسجة الأسنان أو خلايا 26،28،29. وأجريت هذه الدراسات للتحقيق أساسا الآثار جذابة من هذه الخلايا أو الأنسجة على محاور الحسية 38. على الرغم من تحقيق تقدم كبير في هذا المجال، أثيرت العديد من القضايا الفنية. جراثيم الأسنان تبدأ في التدهور بعد بضعة أيام الثقافة 37. وبناء على هذه الملاحظات، وتزايد الخلايا العصبية والأسنان في ظروف الثقافة نف.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل العمل من قبل جامعة زيورخ. يود المؤلفون أن يشكروا إستريلا نيتو والدكتورة مريم لمغاري على المساعدة في تهيئة ظروف الثقافة المشتركة.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
أجهزة عزل محورتتوفر MilliporeAX15010-TCMicrochannels ذات أطوال مختلفة
LamininSigma AldrichL2020
NeurobasalGibco21103-049
B27Gibco17504
ماوس مؤتلف بيتا NGFR & D Systems1156-NG-100الإنسان والفئران beta-NGF (R & أنظمة D) مكافئة
DMEM-F12Gibco11320-033
محور عصبي

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Pagella, P., Jiménez-Rojo, L., Mitsiadis, T. A. Roles of innervation in developing and regenerating orofacial tissues. Cellular and molecular life sciences : CMLS. 71, 2241-2251 (2014).
  2. Kumar, A., Brockes, J. P. Nerve dependence in tissue,....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Tooth Germ InnervationMicrofluidic Co cultureTrigeminal GangliaTooth Germ IsolationNeurite OutgrowthImmunofluorescence StainingLight MicroscopyCulture Medium ChangeAxonal ChambersMicro Grooves

Related Articles