مقالة منهجية

رسم الخرائط البصرية البينية العضلية شبكية كاليفورنيا 2+ وإمكانية الغشاء في قلب الأرنب Langendorff perfused-

DOI:

10.3791/53166

⸱

سبتمبر 10, 2015

 ,  , 
1Department of Pharmacology, University of California Davis, 2Departments of Pharmacology and Biomedical Engineering, University of California Davis

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

توضح هذه المقالة بروتوكول مفصلة والمعدات اللازمة لرسم الخرائط الضوئية المزدوجة من الغشاء المحتملين (V م) وخالية شبكية داخل الهيولى العضلية (SR) كا 2+ في قلب الأرنب Langendorff perfused. وتسمح هذه الطريقة للمراقبة المباشرة والكمي لV م وريال كا 2+ ديناميكية في قلب سليمة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تلعب معالجة الشبكة الساركوبلازمية (SR) Ca2+ دورا رئيسيا في اقتران الإثارة والانكماش الطبيعي ومن المعروف أن التعامل الشاذ SR Ca2 + يلعب دورا مهما في أنواع معينة من عدم انتظام ضربات القلب. نظرا لأن عدم انتظام ضربات القلب هو ظواهر ناعمة ومميزة مكانيا ، فيجب التحقيق فيها على مستوى الأنسجة. ومع ذلك ، تظل طرق التحقيق المباشر ل SR Ca2+ في القلب السليم محدودة. توضح هذه المقالة بروتوكول رسم الخرائط البصرية المزدوجة لإمكانات الغشاء (Vm) وداخل SR الحر [Ca2+] ([Ca2+] SR) في قلب الأرنب المنفخ في Langendorff. يستفيد هذا النهج من مؤشر Ca2+ منخفض التقارب Fluo-5N ، والذي يحتوي على الحد الأدنى من التألق في العصارة الخلوية حيث يكون داخل الخلايا [Ca2+] ([Ca2 +] i) منخفضا نسبيا ولكنه يظهر مضان كبير في تجويف SR حيث يكون [Ca2 +] SR في نطاق المليمول. بالإضافة إلى الكشف عن خصائص SR Ca2+ مكانيا عبر سطح النخابي للقلب ، يتمتع هذا النهج بميزة مميزة تتمثل في المراقبة المتزامنة ل Vm ، مما يسمح بإجراء تحقيقات في العلاقة ثنائية الاتجاه بين Vm و SR Ca2+ ودور SR Ca2+ في ظواهر عدم انتظام ضربات القلب.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أصبح رسم الخرائط البصرية المزدوجة للكالسياديوم2+ داخل الخلايا وإمكانات الغشاء (Vm) في القلب السليم المليء ب Langendorff الدعامة الأساسية للتحقيقات في الفيزيولوجيا الكهربية للقلب ، بما في ذلك آليات عدم انتظام ضربات القلب واقتران الإثارة والانكماش1-4. قدم هذا النهج معرفة غير مسبوقة في الفيزيولوجيا الكهربية الطبيعية وغير الطبيعية ، والأهم من ذلك ، في العلاقة ثنائية الاتجاه بين Vm و Ca2 + داخل الخلايا. ومع ذلك ، فإن رسم الخرائط البصرية ل Ca2+ داخل الخلايا مع مؤشرات الفلورسنت عالية التقارب (مثل Rhod-2 و Fluo-4) يبلغ فقط عن التغيرات المجمعة في Ca2+ داخل الخلايا وغير قادر على التمييز بين ما إذا كانت هذه التغييرات ناتجة عن تدفق Ca2+ عبر الغشاء ، وإطلاقه وإعادة امتصاصه في المخازن داخل الخلايا ، أو في معظم الحالات ، مزيج من الاثنين معا. علاوة على ذلك ، فإن مؤشرات Ca2+ عالية التقارب لها حركية بطيئة وإيقاف التشغيل وقد لا تبلغ بدقة عن التغيرات السريعة في تركيز Ca2+ 5.

يؤدي كل جهد فعل إلى ارتفاع في Ca2+ داخل الخلايا ، والمعروف باسم Ca2+ العابر داخل الخلايا (CaT). في قلب الثدييات ، يرجع ما يقرب من 70 إلى 90٪ من إجمالي CaT إلى إطلاق Ca2+ من الشبكة الساركوبلازمية (SR) عن طريق فتح مستقبلات الريانودين (RyRs) 6. داخل SR ، يرتبط ما يقرب من نصف إجمالي Ca2+ ب calsequestrin (CSQ) والمخازن المؤقتة الأخرى داخل SR7 ، والتي تلعب دورا مهما في التوازن SR Ca2+ 8،9. تملي كمية SR Ca2+ الحرة القوة الدافعة لإطلاق SR Ca2+ بالإضافة إلى بوابات RyR ، وبالتالي لها تأثير كبير على CaT داخل الخلايا. علاوة على ذلك ، يمكن أن تؤثر التعديلات في إطلاق SR Ca2+ أو إعادة امتصاصها ، بدورها ، على Vm عبر تبادل Na + - Ca2 + الكهربائي ، والذي قد يكون له عواقب غير منتظمة. لذلك ، بالإضافة إلى CaT ، يمكن أن توفر مراقبة SR Ca2+ المجاني رؤى مهمة حول الخلل الوظيفي الانقباضي والفيزيولوجي الكهربي.

على مدى السنوات العديدة الماضية ، حقق الباحثون تقدما كبيرا في مراقبة SR Ca2+ في الخلايا العضلية القلبية المعزولة ومن مكان واحد على القلب السليم. تتطلب إحدى هذه الطرق نبضات سريعة من الكافيين لفتح RyRs ثم يتم استنتاج محتوى SR Ca2 + أو حسابه من الارتفاع الفوري في Ca2 + 10 داخل الخلايا. يستخدم نهج آخر مثير للاهتمام مؤشرات Ca2+ منخفضة التقارب ، مثل Fluo-5N11 أو Mag-Fluo412 ، والتي ترتبط ب SR Ca2+ الحر. تحتوي هذه المؤشرات على ثوابت تفكك (Kd) في حدود 10-400 ميكرومتر ، وبالتالي تظهر الحد الأدنى من التألق في العصارة الخلوية مقارنة بالتجويف SR ، حيث يكون تركيز Ca2+ ([Ca2 +] SR) في نطاق المليمول. باستخدام مؤشرات Ca2+ منخفضة التقارب ، تم التحقيق في العديد من جوانب دورة SR Ca2 + على مستوى الخلايا العضلية المعزولة ، بما في ذلك إطلاق SR Ca2+ الجزئي وآليات البدائل Ca2+ 13،14. ومع ذلك ، من أجل فهم الطبيعة غير المتجانسة لركوب SR Ca2 + في القلب السليم ودور SR Ca2 + في ظواهر عدم انتظام ضربات القلب المتميزة مكانيا ، يلزم وجود طرق لتصوير SR Ca2 + عبر سطح النخابي للقلب السليم15.

توضح هذه المقالة منهجية رسم الخرائط البصرية المزدوجة ل SR Ca2+ و Vm الحرة في قلب الأرنب السليم المغطى ب Langendorff مع مؤشر Ca2+ منخفض التقارب Fluo-5N. بالإضافة إلى الكشف عن خصائص SR Ca2+ مكانيا عبر سطح النخابي للقلب ، يتمتع هذا النهج بميزة المراقبة المتزامنة ل Vm ، مما يسمح بإجراء تحقيقات في العلاقة ثنائية الاتجاه بين Vm و SR Ca2+.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد وافق جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان من جامعة كاليفورنيا في ديفيز، والالتزام بها دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية التي نشرتها المعاهد الوطنية للصحة.

1. إعداد

  1. إعداد اثنين تتركز (25X) الأسهم المعدلة حل تايرود مسبقا وتخزينها في 4 ° C: (1) ألبوم I (في ملي: كلوريد الصوديوم 3205، CaCl 2 32.5، بوكل 117.5، ناه 2 PO 4 29.75، MgCl 2 26.25) و (2) سهم II (في ملي: NaHCO 3 500).
    1. طازجة إعداد الحل 2 L تايرود من التشكيل التالي (مم): كلوريد الصوديوم 128.2، CaCl 2 1.3، بوكل 4.7، MgCl 2 1.05 ناه 2 PO 4 1.19، NaHCO 3 20 والجلوكوز 11.1 عن طريق الجمع بين 1840 مل من منزوع الأيونات (DI) الماء، 80 مل الأسهم I، 80 مل من الأسهم II، و 4 غرام من الجلوكوز. لا تخلط مباشرة المالية الأول والمالية II؛ إضافةم إلى 1840 مل DI لتجنب الأمطار.
  2. إعداد محلول المخزون من الإثارة، تقلص uncoupler blebbistatin في 10 ملغ / مل في اللامائية دى methylsulfoxide (DMSO) مقدما وتخزين الحل السهم عند 4 درجات مئوية.
  3. إعداد الحلول الأسهم من الأصباغ الفلورية: (1) RH237 الجهد تراعي صبغ (1 ملغ / مل في DMSO) و (2) انخفاض مؤشر تقارب الكالسيوم فلوو-5N AM (2 ملغ / مل في DMSO) وفقا لتوصيات الشركة الصانعة. استخدام الاستعدادات على الفور لتجنب التحلل مع الخسارة اللاحقة من قدرة التحميل.
  4. رئيس إعادة تدوير نظام نضح Langendorff مع الاوكسيجين (95٪ O 2، 5٪ CO 2) حل تايرود. ضبط تدفق O 2 / CO 2 للحفاظ على درجة الحموضة من الحل تايرود بنسبة 7.4 ± 0.05. استخدام صافي مرشح في خط النايلون المنسوجة (حجم المسام: 11 ميكرون) لتصفية باستمرار الإرواء.
    1. رئيس نظام نضح في RT، كما loadi اللاحقةيتم تنفيذ نانوغرام من فلوو-5N AM في RT. لفلوو-5N AM التحميل واستخدام كمية صغيرة من إعادة تدوير الإرواء (~ 150 مل). بعد صبغ التحميل واستخدام كميات أكبر من سائل الإرواء (1-2 L، انظر الشكل 1C).
  5. تشغيل نظام الحصول على البيانات وتحضير لأعمال الرصد المستمر لECG ونضح الضغط. إعداد نظام الضغط رصد: قم بتوصيل محول الضغط إلى خط نضح ورصد ضغط التروية مع مكبر للصوت transbridge. ضبط ضغط التروية الأساسي ل0 مم زئبق عندما لا يرد القلب إلى نظام الارواء.
  6. محاذاة كاميرات رسم الخرائط البصرية لضمان المواءمة المكانية بين م V وريال كا 2+ الإشارات.
    1. أولا، تركيز الكاميرات عن طريق وضع مسطرة أو كائن مع النص في طبق الارواء. تحويل كاميرات رسم الخرائط في وضع العرض الحي وضبط التركيز حتى النص هو هش واضحة. الحصول على صورة إطار واحد من كل كاميرا.
    2. غطاءهذه الصور وضبط شفافية الصورة العليا بحيث أن كلا من صور مرئية. النص في الصور يجب أن تتداخل تماما. إن لم يكن المنحازة تماما، وضبط زاوية المرآة مزدوج اللون أو موقف كل الكاميرا حتى يتم محاذاة الصورتين.

2. الحصاد، والإرواء، وصبغ تحميل الأرنب القلب

  1. تأمين أرنب في رادع أرنب المعتمدة. تخدير عميق عن طريق الحقن في الوريد (الوريد الأذن هامشية) من بنتوباربيتال الصوديوم (50 ملغ / كلغ) والهيبارين (1000 IU).
    1. عندما تفتقر يعرض أرنب من ردود الفعل مسبب للألم، وجعل شق الجلد خط الوسط لفضح القص والضلوع. قطع طريق القص مع صريحا معلومات سرية مقص جراحي من سيفي الشكل إلى المقبض. الحرص على عدم تلف القلب أثناء فتح القص. نشر الأضلاع لفضح القلب.
    2. المكوس بسرعة كامل كتلة القلب والرئة عن طريق خفض سرعة جميع السفن والنسيج الضام. Immediaوضع tely كتلة القلب والرئة إلى حل المثلج تايرود.
  2. تحديد الشريان الأورطي لنضح الوراء. قطع الشريان الأبهر الصاعد للتو الأقرب إلى الفروع الثلاثة للقوس الأبهر. يقني؛ يدخل القنية الشريان الأورطي إلى قنية 8 G متصلا نظام الارواء. استخدام قطعة من USP 0 خياطة الحرير لتأمين الشريان الأورطي على قنية.
  3. تشريح بعناية القصبة الهوائية والرئتين، والدهون النخابية من القلب. مع ملقط حادة ومقص تشريح، موقع الصمام التاجي وبعناية ضرر أو إزالة النشرة واحدة لمنع الازدحام الحل في البطين الأيسر.
  4. يغرق القلب في غرفة نضح-تغلف الزجاج أفقيا مع السطح الأمامي للقلب مواجهة للتصوير. تأمين قنية إلى قطعة من Sylgard مع دبابيس على شكل حرف U على الجزء السفلي من السيليكون الطبق لمنع حركة القلب أثناء رسم الخرائط (1D الشكل). إذا رغبت في ذلك، اضافة الى وجود دبوس حشرة صغيرة في قمة القلب لستاbilization.
  5. موقف الكهربائي (ECG) الأقطاب الكهربائية في الحمام على الجانب الأيمن والأيسر من القلب. يغرق تماما الأقطاب في الحمام والتأكد من أنهم ليسوا على اتصال مع سطح القلب لتوفير ECG-أجرت حجم مماثل لتكوين I الرصاص. التحقق من الرصاص العادي I ECG التشكل. ضبط تدفق (25-35 مل / دقيقة) للتأكد من أن ضغط الأبهر هو الحفاظ على 60-70 مم زئبق.
  6. إطفاء الأنوار الغرفة وإضافة 0،3-0،6 مل من محلول المخزون blebbistatin (الخطوة 1.2) إلى الإرواء (تركيز النهائي 10-20 ميكرومتر).
    1. إطفاء الأنوار الغرفة لتجنب تعطيل ضوئي من blebbistatin. إذا لزم الأمر، الضوء صغير أو كشافات يمكن أن تستخدم لتوفير الإضاءة المهمة.
      ملاحظة: Blebbistatin هو الميوسين أتباز المانع وuncoupler الإثارة، تقلص. لأن فلوو-5N التحميل يتطلب طويلة (60 دقيقة) RT (انخفاض حرارة الجسم) شروط (انظر الخطوات 2،8 حتي 2،10)، قد يكون خطر إنتاج الطاقة القلبية. عشرerefore، إضافة blebbistatin في الإرواء قبل أن تصبغ التحميل قد يقلل من الطلب على الطاقة 16 و القضاء على الحركة الفنية خلال التسجيلات البصرية اللاحقة 17.
  7. عندما توقف انقباض القلب (10-15 دقيقة، والتحقق منها على تسجيل ضغط الأبهر)، والتحول إلى نظام إعادة تدوير نضح صغيرة الحجم (راجع الخطوة 1.4.1).
  8. إعداد وتحميل فلوو-5N AM تحميل الحل: إضافة 0.25 مل من فلوو-5N AM الأسهم الحل (الخطوة 1.3) إلى 0.25 مل دافئ 20٪ F127 Pluronic. إضافة 0.5 مل من محلول دافئ تايرود إلى الخليط، وتخلط جيدا، وإضافة إلى نظام إعادة تدوير نضح صغيرة الحجم.
  9. مراقبة مستمرة ضغط التروية وECG وضبط تدفق إذا لزم الأمر. صبغ التحميل يستغرق حوالي 1 ساعة على RT. 45 دقيقة بعد تحميل بدأت، بدوره على حمام ماء المتداولة لبدء ارتفاع درجة حرارة نظام نضح وسائل الإرواء إلى 37 درجة مئوية.
  10. بعد 60 دقيقة من فلوو-5N AM التحميل، مفاتتك نضح في وحدة تخزين النظام إعادة تدوير نضح أكبر (راجع الخطوة 1.4).
  11. تمييع 50 ميكرولتر من الجهد حساسة محلول المخزون صبغ RH237 (الخطوة 1.3) في 1 مل من محلول دافئ تايرود وإضافة ببطء (أكثر من ~ 5 دقائق) إلى الأقرب ميناء حقن للقنية.

3. الخرائط الضوئية

  1. خلال اللحظات الأخيرة من صبغ تحميل، ضع قلب وتركيز الكاميرات رسم الخرائط الضوئية لضمان الحقل المناسب النظر للتجربة.
  2. إذا رغبت في ذلك، ضع سرعة الكهربائي بين القطبين على سطح النخابية من القلب للسرعة.
  3. وضع البلاستيك أو الزجاج غطاء الانزلاق على سطح غرفة نضح للحد من حركة القطع الأثرية على سطح السائل التي قد تكون موجودة بسبب إعادة تدوير سائل الإرواء.
    ملاحظة: كبديل لزلة غطاء، واستخدام البلاستيك 50 ملم بيتري غطاء طبق نظيف.
  4. تركيز أدلة الخفيفة لإلقاء الضوء بشكل موحد على سطح القلب مع البريدضوء xcitation. استخدام الضوء الأزرق الصمام الثنائي الباعث لل(LED) مصادر الضوء وكذلك تصفية ضوء مع 475-495 نانومتر مرشح ممر الموجة (الشكل 1A).
  5. جمع مضان المنبعثة مع macroscope واثنين تكميلية المعادن أكسيد أشباه الموصلات (CMOS) كاميرات رسم الخرائط البصرية. تقسيم الضوء المنبعث مع مرآة مزدوج اللون في 545 نانومتر.
    1. تمرير طويل تصفية أطول الطول الموجي شاردة، التي تحتوي على V متر إشارة، في 700 نانومتر. الفرقة تمرير تصفية أقصر طول موجي شاردة، التي تحتوي على الكالسيوم ريال 2+ إشارة، 502-534 نانومتر (الشكل 1A). ضبط تردد من الحصول على البيانات الضوئية ل0،5-1 كيلو هرتز.
  6. لكل تسجيل البصرية، والشروع في أول بروتوكول سرعة المطلوبة، بدوره على ضوء الإثارة، وجمع 1-4 ثانية من البيانات. إذا رغبت في ذلك، وتزامن اكتساب بروتوكولات سرعة والبيانات.
    ملاحظة: ليس من الممكن لإعادة تحميل وفلوو-5N AM، وبالتالي فإن نسبة الإشارة إلى الضوضاء (SNR) سوف decreaحد ذاتها في كافة مراحل التجربة بسبب صبغ تسرب من SR. لحد بروتوكول تجريبي ل1-2 ساعة لضمان القيم SNR عالية.
  7. بعد التجربة، وغسل نظام نضح في سلسلة من المياه DI و 70٪ كاشف الكحول، ومرة ​​أخرى بالماء DI.
  8. تصفية كل مجموعة بيانات مع فلتر التمويه المكاني (دائرة نصف قطرها 3 بكسل) باستخدام حزم البرامج المتاحة تجاريا وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة.
  9. إذا لزم الأمر، محاذاة مكانيا م V ومجموعات البيانات الكالسيوم 2+ ريال. كما في الخطوة 1.6، تراكب الصور من كل كاميرا والتحقق من أن الهياكل التشريحية للقلب (أي.، الأوعية الدموية التاجية، وحواف من الأذينين أو البطينين) أو العناصر الأخرى في مجال الرؤية (أي، قنية، سرعة القطب) بالضبط التداخل. إن لم يكن، والمحاذاة المكانية من قواعد البيانات غير الضرورية.
  10. تحويل أعلى صورة شفافة في يتحقق X- و ص الاتجاه حتى التداخل المحدد، مما يجعل علما أن عدد بكسليجب أن تحول صورة في كل اتجاه. مجموعة البيانات بأكملها الموافق الصورة العليا (إما V م أو الكالسيوم ريال 2+) ثم يجب أن تحول من قبل عدد محدد من بكسل في كل اتجاه لضمان المواءمة الدقيقة بين م V وريال كا 2+ قواعد البيانات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويبين الشكل 1A الرسم التخطيطي من التكوين البصري للV المزدوج م وريال كا 2+ رسم الخرائط. مع هذا الإعداد، هناك فصل الطيفي الكامل للمتر V وريال كا 2+ إشارات (الشكل 1B). ويوضح شكل توضيحي لنظام نضح المزدوج حلقة استخدامها لفلوو-5N صبغ التحميل في الشكل 1C. ويبين الشكل 1D اتجاه أفقي للقلب في طبق الارواء. وتظهر V التمثيلي م وريال كا 2+ آثار ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مفاتيح النجاح فلوو-5N صبغ التحميل هي صغيرة الحجم الإعداد إعادة تدوير التروية، والذي يسمح لتركيز فلوو-5N عالية دون الحاجة إلى كميات كبيرة من الصبغة، وطول وقت التحميل (1 ساعة)، وأداء التحميل في RT. إذا تم تنفيذ التحميل في درجات الحرارة الفسيولوجية والنشاط الأنزيمي الخلوي بسرعة يشق العلامة -AM عندما يعبر صبغ غشاء الخلية، محاصرة جزيئات الصبغة في العصارة الخلوية وعدم السماح لهم بعبور الغشاء ريال. في RT، ومع ذلك، تباطأ النشاط الأنزيمي والمشقوق على كمية كافية من الصبغة يمكن أن يعبر كل من...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل جزئيا من قبل المعاهد الوطنية الأمريكية للصحة (R01 HL 111600) وجمعية القلب الأمريكية (12SDG9010015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
كلوريد الصوديومفيشر العلميS271-1مكون حل Tyrode
CaCl2< / sub> (2H2< / sub>O)Fisher ScientificC79-500مكون من حل Tyrode
KClFisher ScientificS217-500مكون من حل Tyrode
MgCl2< / sub> (6H2< / sub>O)فيشر ScientificM33-500مكون من حل Tyrode
NaH2< / sub>PO4< / sub> (H2< / sub>O)Fisher ScientificS369-500مكون من حل Tyrode
NaHCO3< / sub>Fisher ScientificS233-3مكون من محلول Tyrode
D-GlucoseFisher ScientificD16-1مكون محلول Tyrode
95٪ O2< / sub> 5٪ CO2< / sub>AirGascarbogenللأكسجين ودرجة الحموضة لمحلول Tyrode
BlebbistatinTocris Bioscience1760مفك اقتران الإثارة والانكماش
RH237Biotium61018صبغة حساسة للجهد
Fluo-5N AMInvitrogenمؤشر F-26915Ca2+ منخفض التقارب؛ البديل: Invitrogen F-14204; يجب أن يتم التحميل في درجة حرارة الغرفة
Pluronic F127Biotium59004لتحميل مؤشر Ca2 + < / sup> ؛ يسخن حتى يصبح المحلول صافيا قبل الاستخدام
ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)سيجما ألدريتشD2650لإذابة البلبيستاتين والأصباغ
مرشحEMD MilliporeNY110470011 &# 956; م مرشح في الخط
محول الضغطWPIBLPR2لقياس ضغط التروية
محول الجسر مضخمWPISYS-TBM4Mلتحويل / تضخيم إشارة الضغط ؛ يمكن أيضا استخدام PowerLab مع BioAmp
PowerLab 26TADInstrumentsالمناسب للتسجيل المستمر للضغط وإشارات تخطيط القلب
THT MacroscopeSciMediaالإعداد البصري العياني للتخطيط. التفاصيل: الهدف 0.63X (NA = 0.31) ، هدف التكثيف 2X ، مجال الرؤية الناتج = 3.1 سم × 3.1 سم ، عمق التركيز = ~ 1.5 مم
MiCam Ultima-L CMOSSciMediaكاميرات رسم الخرائط البصرية
الدقة LED بقعة ضوءMightexPLS-0470-030-15-Sمصدر ضوء LED

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Herron, T. J., Lee, P., Jalife, J. Optical imaging of voltage and calcium in cardiac cells. tissues. Circulation research. 110, 609-623 (2012).
  2. Efimov, I. R., Nikolski, V. P., Salama, G. Optical imaging of the heart. Circulation research. 95, 21-33 (2004).
  3. Lou, Q., Li, W., Efimov, I. R. Multiparametric optical mapping of the Langendorff-perfused rabbit heart. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2011).
  4. Choi, B. R., Salama, G. Simultaneous maps of optical action potentials and calcium transients in guinea-pig hearts: mechanisms underlying concordant alternans. The Journal of physiology. 529 (Pt 1), 171-188 (2000).
  5. Kong, W., Fast, V. G. The role of dye affinity in optical measurements of Cai(2+) transients in cardiac muscle. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 307, H73-H79 (2014).
  6. Bers, D. M. Excitation-Contraction Coupling and Cardiac Contractile Force. , 2nd edn, Kluwer Academic. (2001).
  7. Bers, D. M., Shannon, T. R. Calcium movements inside the sarcoplasmic reticulum of cardiac myocytes. Journal of molecular and cellular cardiology. , (2013).
  8. Knollmann, B. C. New roles of calsequestrin and triadin in cardiac muscle. The Journal of physiology. 587, 3081-3087 (2009).
  9. Chen, H., et al. Mechanism of calsequestrin regulation of single cardiac ryanodine receptor in normal and pathological conditions. The Journal of general physiology. 142, 127-136 (2013).
  10. Diaz, M. E., O'Neill, S. C., Eisner, D. A. Sarcoplasmic reticulum calcium content fluctuation is the key to cardiac alternans. Circulation research. 94, 650-656 (2004).
  11. Shannon, T. R., Guo, T., Bers, D. M. Ca2+ scraps: local depletions of free [Ca2+] in cardiac sarcoplasmic reticulum during contractions leave substantial Ca2+ reserve. Circulation research. 93, 40-45 (2003).
  12. Kornyeyev, D., Reyes, M., Escobar, A. L. Luminal Ca(2+) content regulates intracellular Ca(2+) release in subepicardial myocytes of intact beating mouse hearts: effect of exogenous buffers. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 298, H2138-H2153 (2010).
  13. Picht, E., DeSantiago, J., Blatter, L. A., Bers, D. M. Cardiac alternans do not rely on diastolic sarcoplasmic reticulum calcium content fluctuations. Circulation research. 99, 740-748 (2006).
  14. Shkryl, V. M., Maxwell, J. T., Domeier, T. L., Blatter, L. A. Refractoriness of sarcoplasmic reticulum Ca2+ release determines Ca2+ alternans in atrial myocytes. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 302, H2310-H2320 (2012).
  15. Wang, L., et al. Optical mapping of sarcoplasmic reticulum Ca2+ in the intact heart: ryanodine receptor refractoriness during alternans and fibrillation. Circulation research. 114, 1410-1421 (2014).
  16. Wengrowski, A. M., Kuzmiak-Glancy, S., Jaimes, R. 3rd, Kay, M. W. NADH Changes During Hypoxia, Ischemia, and Increased Work Differ Between Isolated Heart Preparations. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. , (2013).
  17. Fedorov, V. V., et al. Application of blebbistatin as an excitation-contraction uncoupler for electrophysiologic study of rat and rabbit hearts. Heart rhythm : the official journal of the Heart Rhythm Society. 4, 619-626 (2007).
  18. Myles, R. C., Wang, L., Kang, C., Bers, D. M., Ripplinger, C. M. Local beta-adrenergic stimulation overcomes source-sink mismatch to generate focal arrhythmia. Circulation research. 110, 1454-1464 (2012).
  19. Marks, A. R. Calcium cycling proteins and heart failure: mechanisms and therapeutics. The Journal of clinical investigation. 123, 46-52 (2013).
  20. Cutler, M. J., et al. Targeted sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase 2a gene delivery to restore electrical stability in the failing heart. Circulation. 126, 2095-2104 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Fluo 5N AM

مقالات ذات صلة