ويصف هذه المخطوطة طريقة لقياس تراكم خلية ورم في الرئتين في نموذج حيوان من ورم خبيث.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
للتحقيق في الآليات الجزيئية التي تحكم ورم خبيث، وقد اقترحت فحوصات مختلفة باستخدام الماوس كحيوان نموذج. هنا، علينا أن نظهر مقايسة بسيطة لتقييم التسرب خلية ورم أو ميكروميتاستاسيس. في هذا التحليل، تم حقن الخلايا السرطانية عن طريق الوريد الذيل، وبعد فترة قصيرة، تم تشريح الرئتين وهضمها لعد الخلايا الورم المسمى المتراكمة. هذا التحليل تخطي الخطوة الأولى في غزو الورم الرئيسي في الأوعية الدموية ويسهل دراسة الأحداث التي وقعت في الجهة البعيدة حيث يحدث ورم خبيث. عدد الخلايا التي تحقن في الأوعية الدموية يمكن أن يكون الأمثل لمراقبة عدد محدود من الانبثاث. وأفيد أن الخلايا اللحمية في الجهاز البعيد الذي يسهم في ورم خبيث. وهكذا، يمكن أن يكون هذا التحليل هو أداة مفيدة لاستكشاف الأدوية العلاجية المحتملة، أو أجهزة لمنع ورم خبيث.
المقدمة
ورم خبيث حسابات لارتفاع معدل الوفيات في أمراض السرطان. ومن وجهة نظر التحقيقات على المستوى الجزيئي، ورم خبيث يمكن تقسيمها إلى خطوات متعددة: بدء الورم على موقع الورم الرئيسي، ونمو الورم الرئيسي والاجتياح المحيطة بالانسجة، إينترافاسيشن، والتداول عن طريق الأوعية الدموية ، التسرب على الأجهزة البعيدة، وإعادة نمو الورم. كل خطوة تنطوي على مجموعات مختلفة من إشارات الجزيئات/1.
تعني الدراسات حتى الآن بالأحداث التي تحدث في الأجهزة البعيدة قبل أن تبدأ الخلايا السرطانية تنتشر في الدم، والذي يعرف أيضا المرحلة ما قبل المنتشر2،3،4،
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ووافق جميع إجراءات تنفيذها مع الفئران "الحيوان البحوث لجنة طوكيو النساء" للجامعة الطبية.
1. ذيل حقن الوريد للخلايا (LLC) سرطان الرئة لويس
- الحفاظ على الخلايا LLC في دميم تكملها FCS 10%، في 5% هوميديفيد CO2 حاضنة في 37 درجة مئوية. ينبغي أن تحتوي على خلايا نظام تعبير بروتين فلوري (مثل التجارة والنقل).
- إزالة خلايا من صحن الثقافة باستخدام كاشف تفكك خلية غير الأنزيمي. اتبع البروتوكول الخاص بالشركة المصنعة.
- جمع الخلايا في أنبوب 15 مل، وأجهزة الطرد المركزي في ز 400 x دقيقة 3 ريسوسبيند الخلايا في 5 مل من برنامج تلفزيوني بيبيتينج، والطرد المركزي الأنبوب (400 x ز، 3 دقيقة). ثم، قم بإزالة المادة طافية.<....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الرئتين يقدم العديد من الخلايا بروتينات فلورية خضراء-ذ ح 2 بعد الحقن (الشكل 1A). تجدر الإشارة إلى أنه ينبغي استبعاد البقع الفلورسنت اكتشفت أيضا في تصفية الحمراء من العد رقم الخلية. الغالبية العظمى من الخلايا LLC تختفي من الرئتين 24 ساعة بعد الحقن (الشكل 1).
تأكيد العدد من بروتينات فلورية خضراء-تراخيص المشروبات الكحولية في الرئتين، واحدة من الفصوص يمكن استخدامها لتحليل ت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
من الممكن معالجة مسبقة للفئران مع الأجسام المضادة، والأدوية، وحمية عالية الدهون أو مكيفة ورم المتوسطة قبل حقن الخلايا السرطانية. والخطوة الأكثر صعوبة في هذا التحليل هو حقن الوريد الذيل. نتائج الحقن غير مكتملة في البيانات غير حاسمة. على المنوال الذيل في C57BL/6 الصعوبة بمكان تحديد، أدى إلى فشل الحقن. وضع الفئران على وسادة تدفئة (37 درجة مئوية) يساعد على تمدد الوريد الذيل حيث أن الحقن يصبح أسهل.
يستخدم هذا التحليل خلايا السرطانية (1 × 104 -1 × 105) عدد كبير، وهو أكبر بكثير .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| كولاجيناز | سيجما | C6885 | |
| Dispase | Gibco | 17105-041 | |
| ألبومين مصل الأبقار | Sigma | A7030 | |
| DPBS | Gibco | 14190-144 | بدون كالسيوم ، خال من المغنيسيوم |
| Deoxyribonuclease I | Sigma | DN-25 | كمية ضئيلة |
| RBC تحلل المخزن | Sigma | R7757 | |
| مصفاة الخلية | BD | 352340 | 40 ميكرومتر |
| طقم وضع العلامات الفلورية | Sigma | MIN26-KIT | |
| DMEM | Gibco | 11965-092 | |
| 0.22 & مرشح المحقنة M | Sartorius | 17597K | |
| O.C.T. مركب | ساكورا فينيتيك | 4583 | |
| 4٪ محلول عازلة للفوسفات بارافورمالدهايد | واكو | 163-20145 |
المراجع
- Valastyan, S., Weinberg, R. A. Tumor metastasis: molecular insights and evolving paradigms. Cell. 147 (2), 275-292 (2011).
- Kaplan, R. N., et al. VEGFR1-positive haematopoietic bone marrow progenitors initiate the pre-metastatic niche. Nature. 438
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
