نحن قياس حساسية وتنشيط الخلايا البدينة الميكانيكية محيط بالغدد التناسلية في البروستاتا من الذكور C57BL / 6 الفئران التي خضعت في وقت مبكر نموذج ضغوط الحياة - فصل الأمهات حديثي الولادة، وذلك للحث على نموذج ما قبل السريرية لمتلازمة آلام الحوض / المزمنة المزمنة التهاب البروستات.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تقييم محيط بالغدد التناسلية حساسية والبروستات ماست تنشيط خلية في نموذج الفأر من فصل الأمهات حديثي الولادة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
التهاب البروستاتا المزمن / متلازمة آلام الحوض المزمنة (CP / CPPS) يحتوي على انتشار عمر 14٪ و هو التشخيص المسالك البولية الأكثر شيوعا للرجال الذين تقل أعمارهم عن 50 عاما، ومع ذلك هو اضطراب مزمن آلام الحوض لا يقل عن فهمها ودراستها. مجموعة فرعية كبيرة من المرضى الذين يعانون من ألم مزمن في الحوض التقرير بعد أن شهدت ضغوط الحياة في وقت مبكر أو إساءة المعاملة، التي يمكن أن تؤثر بشكل ملحوظ على أداء وتنظيم الغدة النخامية، الغدة الكظرية (HPA) المحور. تنشيط الخلايا البدينة، وهو ما ثبت على أن تزاد في كل من البول وإفرازات البروستاتا أعرب من المرضى CP / الهادئ، وينظم جزئيا تفعيل المصب من محور HPA. وقد استخدم الأطفال حديثي الولادة فصل الأمهات (NMS) لأكثر من عقدين من الزمن لدراسة نتائج ضغوط الحياة في وقت مبكر من نماذج القوارض، بما في ذلك التغيرات في المحور HPA والحساسية الحشوية. نحن هنا نقدم بروتوكول مفصل لاستخدام NMS كنموذج قبل السريرية لCP / CPPS في الذكور C57BL / 6 الفئران. وصفنا منهجيةلأداء NMS، وتقييم آلام جلدية الميكانيكية محيط بالغدد التناسلية، والأدلة النسيجي للتنشيط الخلايا البدينة. ونحن نقدم أيضا أدلة على أن الإجهاد النفسي المبكر يمكن أن يكون لها تأثيرات طويلة الأمد على الجهاز البولي التناسلي الذكور في الفئران.
المقدمة
آلام الحوض المزمنة ليست في حد ذاتها مرضا، بل هو مصطلح يرتبط مع الألم المستمر عفوية و / أو استحضر التي يعاني منها المرضى الذين شخصت مع متلازمة القولون العصبي (IBS)، والتهاب المثانة الخلالي / متلازمة المثانة المؤلمة (IC / PBS)، التهاب الأعضاء الأنثوية، أو التهاب البروستاتا المزمن / متلازمة آلام الحوض المزمنة (CP / الهادئ). وغالبا ما المرضية هذه المتلازمات ومشاركة العديد من الخصائص في أنه ليس لديهم علم الأمراض المرتبطة بها أو تحديد المسببات الكامنة، وإن كان قد أظهرت ضعف في جهاز المناعة والجهاز العصبي المركزي، والجهاز العصبي المحيطي للمساهمة في صيانة وتطور هذه الاضطرابات 1 -3. المرضى الذين يعانون من ألم مزمن في الحوض أكث....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
جميع التجارب الموصوفة في هذا البروتوكول تتفق مع المبادئ التوجيهية المعاهد الوطنية للصحة وفقا للمبادئ التوجيهية المحددة من قبل مركز جامعة كانساس الطبية المؤسسي رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام.
1. حديثي الولادة الأم الفصل (NMS)
- مراقبة السدود الحوامل يوميا لولادة القمامة.
ملاحظة: اليوم يعتبر القمامة ولدت P0. - على P1، إزالة السد من قفص المنزل ووضع في وعاء الثانوية نظيفة.
- ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وأظهرت الفئران التي خضعت NMS الأدلة السلوكية يدل على CP / الهادئ. عند اختباره مع سلسلة متدرجة من المجذوذه فون فراي، الفئران للمرفق القديمة أسابيع 8 (ن = 4) ظهور آلام جلدية الميكانيكية محيط بالغدد التناسلية بالمقارنة مع نظرائهم ساذجة (ن = 5، الشكل 2). ويتضح هذا الأمر انخفاضا كبيرا (P <0.01؛ ر الطالب اختبار) في العتبة انسحاب الميكانيكية التي أثارت استجابة سلوكية إيجابية، كما هو مسجل رعشة السريع أو القفز استجابة لطلب حيدة أو لعق أو سلوك العض الموجهة نحو ح.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يوفر هذا البروتوكول منهجية لاستخدام الضغط حديثي الولادة، في شكل NMS، للحث على symptomology يدل على CP / CPPS في الفئران الذكور البالغين. كما الكبار، وتعرض الفئران للمرفق آلام جلدية الميكانيكية محيط بالغدد التناسلية كبير، وكذلك دليل على تحبب الخلايا البدينة في أنسجة البروستاتا. استخدام NMS هو نهج جديد لتطوير نموذج ما قبل السريرية لCP / الهادئ في أنه يعيد ضغوط الحياة المبكر الذي غالبا ما أوردته المرضى الذين يعانون من ألم مزمن في الحوض 12-14، فضلا عن دمج التعريفي غير الغاز.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
يود المؤلفون أن يشكروا جانيل ريالز وراشيل سوبل وفرانك وانغ على المساعدة الفنية. تم دعم هذا العمل من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة R03 DK080182 (JAC) ، و R01 DK099611 (JAC) ، و R01 DK103872 (JAC) ، ومنحة مركز التميز في البحوث الطبية الحيوية (COBRE) P20 GM104936 (JAC) ، وأموال بدء التشغيل والدعم الأساسي من جائزة كانساس للتطوير المؤسسي (IDeA) P20 GM103418 ، والدعم الأساسي من Kansas IDDRC P30 HD002528 ، وبرنامج زمالة ماديسون وليلى الذاتي (ANP).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الحوامل C57BL / 6 إناث الفئران | نهر تشارلز | 027 | يجب مراقبة الإناث الحوامل الموقوتات أو غير الموقوتات يوميا للولادة المنزلية. |
| 2 لتر من الدورق الزجاجي | Sigma-Aldrich | CLS10002L | سيتم الاحتفاظ بكل فضلات NMS في نفس الدورق طوال فترة الفصل البالغة 21 يوما. |
| حاضنة الهواء القسري VWR ، VWR الدولية الأساسية | 414005-124 | يجب أن تقام الحاضنة عند 33 درجة ؛ C و 50٪ رطوبة. | |
| مقيم حسي لاختبار اللمس ، مجموعة من 20 (مقياس تجميل Semmes-Weinstein Von Frey لتقييم اللمس) | Stoelting | 58011 | يجب استخدام الشعيرات الأحادية التالية لتقييم حساسية الفترة التناسلية: 1.65 جم ، 2.36 جم ، 2.83 جم ، 3.22 جم ، 3.61 جم ، 4.08 جم ، 4.31 جم ، و 4.74 جم. |
| الضميمة الحيوانية (12 فأر 6 جرذان) | IITC | 435 | تأكد من وضع جسم ثقيل فوق حاويات الفردية المصنوعة من الأكريليك لمنع الفئران من الهروب. |
| حامل شبكي للفئران والجرذان (12 فأر 6 فئران) | IITC | 410 | ضع الوقوف على سطح طاولة ثابت للوصول المريح. |
| ملحي مخزن بالفوسفات | Sigma-Aldrich | P5493 | يخفف مخزون 10x PBS إلى 1x PBS. |
| بارافورمالدهايد | سيجما ألدريتش | P6148 | هناك حاجة إلى محلول بارافورمالدهايد بنسبة 4٪ لاختراق الفئران داخل القلب والأنسجة اللاحقة استعدادا لتلوين الخلايا البدينة. |
| السكروز | Sigma-Aldrich | S5016 | الأنسجة الثابتة Cryoprotect في محلول السكروز بنسبة 30٪ عند 4 درجات ؛ ج بين عشية وضحاها. |
| Heptane | Sigma-Aldrich | 246654 | قم بتبريد السباع على الثلج الجاف لتجميد الأنسجة. |
| معيار Cryomold | VWR International | 4557 | للمساعدة في تجميد أنسجة البروستاتا قبل تقطيع ناظم |
| Tissue-Tek OCT | Compound Sakura | 4583 | 12 × 125 مل |
| VWR Superfrost Plus Micro Slide | VWR International | 48311-703 | 75 × 25 × 1 مم |
| Toluidine Blue O | Sigma-Aldrich | 198161 | معتمد من قبل لجنة البقع البيولوجية. مناسب للاستخدام كصبغة متلازمة اللون للخلايا البدينة. |
| الإيثانول ، المطلق (200 برهان) | فيشر Scientific | BP2818-4 | درجة البيولوجيا الجزيئية ، كواشف فيشر الحيوية ؛ ستكون هناك حاجة إلى حلول 95٪ و 100٪ لتجفيف عمليات القطع الملطخة بالتبريد قبل تصور الخلايا البدينة. |
| كلوريد الصوديوم | Sigma-Aldrich | S9888 | يجب أن يكون محلول كلوريد الصوديوم المحمض طازجا قبل تلطيخ التشريح بالتبريد. |
| GeneMate Sterile 50 مل أنابيب الطرد المركزي | BioExpress | C-3394 | أنابيب يمكن التخلص منها تستخدم لخلط عناصر توليدين الزرقاء أو غمس الشرائح في 1xPBS. |
| طبق تلطيخ كوبلين ل 10 شرائح ، مع غطاء زجاجي أرضي | فيشر ساينتفيك | 08-815 | يحمل ما يصل إلى 10 قياسي 3 × 1 بوصة. (75 × 25 مم) تنزلق من الخلف إلى الخلف. استخدم أطباق منفصلة لمحلول عمل Toluidine Blue و 95٪ EtOH و 100٪ EtOH والزيلين. |
| الزيلين (النسيجي) | فيشر Scientific | X3P | بمجرد الجفاف ، يتم تنظيف الأنسجة بالزيلين. |
| يمكن استخدام صناديق الشرائح المجهرية ، صناديق VWR International 82003 ذات 100 مكان | لتخزين ونقل الشرائح. | ||
| فيشربراند مجهر شريحة مربع | فيشر العلمي | 22-363-400 | عادة ما تكون صناديق الشرائح هذه صغيرة بما يكفي لتناسب داخل التبريد. |
| الجلسرين | سيجما ألدريتش | G5516 | الجلسرين هو وسيلة تركيب تقليدية. |
| متوسط التركيب ، ريتشارد آلان Scientific | VWR International | 4111 | يربط وسط التركيب بقوة الغطاء بالشريحة. |
| نظارات الغطاء الصغير، مستطيلة، رقم 1 | VWR International | 48393-106 | يتم وضع غطاء فوق الأنسجة المجففة والمنظوفة لحماية العينة. |
| مجهر ضوئي | نيكون | تم إيقاف مجهر البحث الآلي المتقدم Eclipse 90i ، الذي يستخدمه مختبرنا ، واستبداله ب Eclipse Ni-E. & nbsp ؛ |
المراجع
- Mehik, A., Leskinen, M. J., Hellstrom, P. Mechanisms of pain in chronic pelvic pain syndrome: influence of prostatic inflammation. World journal of urology. 21, 90-94 (2003).
- Schaeffer, A. J. Epidemiology and evaluati....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
