يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

العمل مع الأنسجة البشرية لبالحركة أبحاث السرطان

9.8K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/53189

⸱

نوفمبر 26, 2015

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgical Oncology, University of Texas MD Anderson Cancer Center, 2Department of Genomic Medicine, University of Texas MD Anderson Cancer Center, 3Department of Pathology and Institutional Tissue Bank, University of Texas MD Anderson Cancer Center

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

تعتمد أبحاث السرطان الانتقالية على استخراج الأنسجة البشرية. تم بذل الكثير من العمل لتحسين طرق الاستخراج لتحليل خارج الجسم الحي. هنا ، نصف طرق معالجة الأنسجة التي تسمح بإخراج أقصى قدر من البيانات من عينات محدودة.

الملخص

يتم إعاقة البحث الطبي للمنفعة البشرية بشكل كبير بسبب ضرورة الأنسجة البشرية والأشخاص. ومع ذلك ، عند الحصول على الموافقة على العينات البشرية ، يجب التعامل مع العينات الثمينة بعناية فائقة من أجل ضمان سلامة الأعضاء والأنسجة والخلايا إلى أعلى درجة. لسوء الحظ ، تتطلب معالجة الأنسجة بحكم تعريفها استخراج الأنسجة من المضيف ، وهو تغيير يمكن أن يسبب إجهادا خلويا كبيرا وله تداعيات كبيرة على التحليلات اللاحقة. يمكن أن تؤدي هذه الضغوط إلى أن العينة لم تعد ممثلة للموقع الذي تم استردادها منه. لذلك ، يجب الالتزام ببروتوكول صارم أثناء معالجة هذه العينات لضمان التمثيل. يجب أيضا أن تؤخذ المقايسة (المقايس) المطلوبة في الاعتبار لضمان استخدام التقنية المثلى لمعالجة العينات. الموضح هنا هو بروتوكول لاسترجاع الأنسجة ومعالجتها والتحليلات المختلفة التي يمكن إجراؤها على الأنسجة المعالجة من أجل زيادة الإنتاج النهائي من عينات الأنسجة المحدودة.

المقدمة

وقد استفادت البحوث الطبية كثيرا من دراسة كل من خطوط الخلايا البشرية والنماذج الحيوانية. خطوط الخلايا تسمح لتحسين السيطرة على عناصر في النظام، وكذلك استخدام الخلايا من الكائن الحي السليم. العمل مع الخلايا البشرية، في حين أن أكثر تمثيلا، ويعرض لقطة مبسطة بشكل كبير من الآليات التي قد تكون مسؤولة عن الصحة والمرض، وذلك لأن خطوط الخلايا قد لا ألخص تأثير الخلايا الأخرى، مكونات اللحمية، والأجهزة التي قد تؤثر على ردود 1. من ناحية أخرى، النماذج الحيوانية، وإن لم يكن دقيقا تماما في استنساخ الأمراض التي تصيب البشر وعدم التجانس الوراثي، وتقديم مزيد من التبصر من خلال السماح لإدخال نظم الحيوانية كلها في معظم النماذج 2،3.

أوجه القصور جانبا، سواء الطرق لها فوائدها ومتكاملان. ومع ذلك، يبقى الهدف الرئيسي لدراسة الخلايا البشرية والأجهزة، في كامل الجسم، ونظام متعدد الجهاز. وفقا لذلك، والبحوث متعدية ديه تاكأون خطوات كبيرة في تسهيل دراسة بالأعضاء والأنسجة البشرية المستخرجة من المرضى، من أجل فهم أفضل للآليات المرض الأساسي. يقدم البحوث متعدية الاستفادة من دراسة نتيجة العلاجات والأمراض في الجسم بأكمله و في الخلايا المناسبة، وبالتالي توفير أفضل ما في العالمين بين الخلية والحيوان العمل 4.

الأبحاث المترجمة هو أيضا لا يخلو من العيوب. العينات المأخوذة من المرضى من البشر، على إزالة من المضيف، تخضع مباشرة لنقص التروية وغيرها من العوامل الخارجية التي من شأنها أن تكون محمية خلاف ذلك. هذا قد يؤدي إلى التغيرات الجزيئية والجينية الناجمة عن الإجهاد، ويسبب التحيز في دراسات لاحقة. ولذلك، فقد تم وضع الكثير من الجهد في استخراج ومعالجة الأنسجة من خلال وسائل صارمة للحفاظ على أفضل جهاز وسلامة الخلية للدراسات المصب 5. الأهم من ذلك، يجب أن يتم النظر في الطلبات المستقبلية بشكل وثيق عند اختيار أساليب سو تجهيز العينات البشرية، وأساليب معينة قد يكون ضارا المكونات الخلوية ومسارات إشارات في حين أن يجنب الآخرين.

لأي البحوث التي تنطوي على الأنسجة البشرية، يجب أن تعالج القضايا التنظيمية. بعد تقارير توسكيجي وبلمونت، كان هناك قبول متزايد لحقيقة أن ارتبط البحوث الطبية الحيوية مع المخاطر الكامنة يؤدي إلى المعضلات الأخلاقية التي لا مفر منها 6 في كثير من الأحيان. وقد أقر بالحاجة إلى معايير وطنية وإنشاء الحكومة الاتحادية مجالس المراجعة المؤسسية (IRBs) كوسيلة لدعم مبادئ تقرير بلمونت (احترام الأشخاص والاحسان والعدل).

IRB أي مؤسسة هو لجنة من الأطباء والباحثين وأعضاء المجتمع الذين يتحملون المسؤولية عن حماية المشاركين البحوث. ويتطلب ذلك أن الموافقة الطوعية الحصول عليها من جميع المشاركين في الدراسات والأبحاث الطبية، وأن يتم توثيق هذه الموافقة في الموافقة المسبقة FO جمهورية مقدونيا. وتهدف عملية الموافقة عن علم على توفير المعلومات الكافية لأحد المشاركين، بحيث يجوز قرار مستنير بشأن ما إذا كان أو لم يكن على الانخراط في دراسة، أو لمواصلة المشاركة. وفي هذا الصدد، يجب أن يكون وثيقة الموافقة المسبقة عن قراءة جيدة ويجب أن تكون مكتوبة في اللغة التي يمكن فهمها بسهولة (6 عشر إلى 8 مستوى القراءة الصف) على عدد السكان المستهدفين. يجب التقليل من احتمال الإكراه أو نفوذ لا مبرر له، ويجب أن يعطى موضوع متسع من الوقت للنظر في المشاركة. يجب أيضا أن يسمح للمشارك أن ممارسة حقهم في سحب الموافقة في أي مرحلة أثناء الدراسة دون عقوبة. الموافقة المستنيرة الطوعية هي شرط مسبق إلزامي للمشاركة موضوعا في مجال البحوث وكما أنها فعالة من الناحية القانونية 7.

وفقا للوائح لحماية حقوق الإنسان يخضع 21 CFR 50.25 (/45cfr46.html">http://www.hhs.gov/ohrp/humansubjects/guidance/45cfr46.html 8)، ويجب إبلاغ المشاركين في الدراسة من غرض البحث والإجراءات يشارك في البحث، والبدائل في المشاركة، جميع المخاطر المتوقعة والمضايقات (بما في ذلك الضرر ليس فقط المادية ولكن أيضا الضرر النفسي والاجتماعي، أو الاقتصادي المحتمل، وعدم الراحة، أو إزعاج)، فوائد البحوث في المجتمع وربما للفرد، وطول الوقت ومن المتوقع أن يشارك في الموضوع، شخص الاتصال للحصول على إجابات على الأسئلة أو في حال وقوع الإصابات المرتبطة البحوث أو في حالات الطوارئ، البيان مشيرا إلى أن المشاركة طوعية، وسوف أن رفضها المشاركة لم تسفر عن أي نتائج أو أي خسارة من الفوائد مثل حلا وسطا في مجال الرعاية السريرية العادية أن المشاركين يحق لهم الحصول على نتيجة له ​​/ لها التشخيص، وأخيرا بيانا بشأن حق هذا الموضوع في السرية والحق في الانسحاب منالدراسة في أي وقت دون أي عواقب. لا ينبغي أن راهن عينات الأنسجة من المشاركين الذين سحب الموافقة أثناء الدراسة وجوب استنفاد فورا. التنازل عن واحد أو أكثر من عناصر الموافقة المسبقة يمكن الحصول عليها من IRB لبعض المشاريع البحثية التي لا يمكن عمليا أن يتم دون تغيير في العناصر المطلوبة أو للدراسات حيث العناصر المطلوبة غير قابلة للتطبيق. يجب توخي الحذر الشديد لضمان سرية البيانات. نقل التأمين الصحي وقانون محاسبة (HIPAA) هو القانون الاتحادي الذي يمنع استخدام أو الكشف عن "حماية المعلومات الصحية" (PHI) بدون موافقة كتابية من المشاركين. يشمل PHI لكن لا يقتصر على المعلومات الصحية المرسلة أو الاحتفاظ بها في أي شكل أو متوسطة، وتشمل المجالات التي يمكن أن تستخدم لتحديد هوية الأفراد 9.

من خلال هذا العمل، ونحن نهدف إلى الخطوط العريضة للبروتوكول التي يجب اتباعها خلال TISSUتجهيز ه - بما في ذلك المشتريات، والتخزين، والتأكيد على أهمية اتباع هذه المبادئ التوجيهية الصارمة وذلك للحد من التحيز التي قد تنجم بسبب ضغوط تتعرض الأنسجة لبناء الاستخراج. ونحن نسعى أيضا إلى تقديم لمحة موجزة عن فحوصات أو تحاليل (الشكل 1) التي يمكن أن يؤديها على هذه العينات المصب ذلك أن القراء قد جعل الحكم المؤهلين على ما مقايسة (ق) يناسب احتياجاتهم.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

بيان الأخلاق: تمت الموافقة على هذا البروتوكول من قبل جامعة تكساس مركز أندرسون للسرطان.

1. عينة المشتريات

  1. جمع عينات الأنسجة البحوث من فائض الورم وما يتصل بها من الأنسجة الطبيعية 10-12. مخزن العينات على الجليد الرطب لتجنب انحلال ذاتي.
  2. إرسال جميع الأنسجة والأجهزة الطبية والهيئات الأجنبية إزالة أثناء إجراء العمليات الجراحية لقسم علم الأمراض لفحصها ضروري من أجل تسهيل تشخيص مرضي.
  3. التعامل مع الأنسجة المخصصة للبحوث وفقا للبحوث المعمول بها والسياسات المصرفية النسيج والإجراءات.
    ملاحظة: جمع Biospecimen ينطوي على تنسيق الأطباء، الأطباء 'المساعدين، histotechnologists والمتخصصين المشتريات الأنسجة.

2. أمراض ضمان الجودة (QA)

  1. استكمال والتحقق من سجلات المرضى كإجراء QA المبكر واستشارة الطبيب الشرعي لمراجعة سنويا التشخيصسجلات tient (تقارير علم الأمراض، والشرائح الأنسجة، الخ) وعينات الأنسجة. الأنسجة عينات القاضي على الخصائص المورفولوجية من الاهتمام مثل نسبة الورم، نخر، واجهة الأنسجة السرطانية، وما إلى ذلك وهذا وفقا لأفضل الممارسات biorepository 10-12.
  2. وبعد المراجعة الأولية، وإجراء مراجعات دورية البيانات biorepository وعينات البحث خلال كامل مدة بقاء biospecimen.
  3. نتائج الارتباط وشروحه من التحقيقات التشريحية المرضية وغيرها من العينات وتوفر هذه البيانات للباحثين من خلال نظام البرمجيات biorepository الملكية.
    ملاحظة: عمليات QA ضمان سلامة كل الجوانب السريرية والتقنية لعمليات biorepository.
  4. أداء الاختبارات الجينية والجزيئية للتحقق من وتوصيف العينات للاستخدام السريري.
  5. جمع وتحليل البيانات على أساس التغذية المرتدة من الباحثين الذين تم استخدام العينات لإجراء التجارب المعملية. مسارالعينات باستخدام تكنولوجيا الباركود. ودعا هذا النظام التتبع الإلكتروني أيضا في أفضل الممارسات biorespository 10-12.

3. عينة / معالجة الأنسجة

  1. دائما تخزين عينات أنسجة جديدة على الجليد الرطب، والعملية في أسرع وقت ممكن، من أجل الحد من التغيرات الناجمة عن استخراج عينة من نسيج بيئتها الطبيعية. عملية الطبيعي الورم المتطابقة وعينات أنسجة الورم بشكل منفصل لتجنب التلوث المتبادل.
    ملاحظة: بناء على بروتوكولات الأبحاث، ويمكن معالجة biospecimen تنطوي على جمع العينات في واحد أو أكثر من أنواع وسائل الإعلام.
  2. قبل البدء في عملية، وإعداد طبق بتري معقمة الثقافة، مشرط، فضلا عن إبرة أو ملقط لمعالجة الأنسجة. التأكد من أن أنابيب تم إعداد، وصفت، والتي وضعت من أجل الحد من وقت تجهيز العينات (الشكل 2).
  3. جميع المعلومات الأنسجة ذات الصلة، مثل اسم المريض ورقم والعلاج وتاريخعملية جراحية، وغيرها من المعلومات ذات الصلة التي قد تكون ملائمة للدراسة، وينبغي بذل الوصول إليها بسهولة في قاعدة بيانات الأنسجة المؤسسية. ينبغي أن تعقد معلومات محدودة المريض في المختبر في شكل ورقي أو جدول البيانات.
    ملاحظة: جمع المعلومات ذات الصلة biospecimen لطبيعة أي بحث فقط، والبحوث الطبية الحيوية الأساسية والبحوث السريرية والبحوث متعدية، وما إلى ذلك للحصول على معلومات بأمراض محددة، ينبغي للموظفين biorepository جمع البيانات تعتبر ضرورية من قبل الأدب الحالي والمنظمات التي تنظم ل ضمان التشخيص السليم والبحوث ذات مغزى. وهذا يشمل لكن لا يقتصر على الدرجات ورم وسرطان المعلومات التدريج.
  4. تخطط كل التجارب اللاحقة المطلوبة في وقت مبكر، لاتخاذ قرار بشأن حجم أقسام الأنسجة المطلوبة لكل نوع من التحليل، فضلا عن موقع الختان. من الناحية المثالية، على الرغم من المستحيل، ينبغي أن تكون جميع التحليلات ممثل قسم الأنسجة بأكمله من أجل حساب heterogenei الأنسجةتاي والحد من التحيز التحليلات المصب. وضع جميع العناصر المطلوبة مقدما كما هو مبين في الشكل (2).
  5. ضع عينة الأنسجة في طبق بتري ثقافة مفتوحة، مسطحة ضد السطح.
    ملاحظة: السماح يؤذن إلا الموظفين biorepository للتعامل مع العينات التي تم تحديدها واستعراض البيانات الصحية التي تم تحديدها. ينبغي للمحققين فقط الوصول إلى تلك المعرفات المريض كما هو مسموح به وافق على علم قعت وعلى النحو الذي ينظمه الاتحاد الدولي للرجبي. جميع العينات يجب أن يكون المسمى كاف وينبغي أن تشمل على الأقل، فريدة من نوعها رقم التعريف الأنسجة والأنسجة النوع. لا تشمل أي PHI في التسميات، وفقا للوائح HIPAA.
  6. تفقد عينة من جميع الزوايا، للحصول على فهم أفضل لهيكل وأبعادها. دبوس العينة إلى أسفل الطبق مع الإبرة، والشروع في شطر الأنسجة على طول أكبر وأفضل تمثيلا محورها.
  7. قطع قطعة صغيرة من الأنسجة ووضعه في العقيمة 1.5 مل ميكرأنبوب ocentrifuge تحتوي على 1ml من حل استقرار RNA. يمكن وضع هذه العينة على الجليد للفترة المتبقية من عملية وتخزينها في 4 درجات مئوية لحين الحاجة إليها.
    ملاحظة: عند العمل مع RNA، ينبغي دائما أن ترتديه والقفازات، ويجب استخدام نصائح مرشح ريبونوكلياز خالية للحد من فرص تدهور وتلوث RNA.
  8. وضع كاسيت خزعة مفتوحة وصفت قبل في غطاء الطبق الثقافة بيتري. قطع قطعة من الأنسجة لا أكثر سمكا من 3-5 ملم وتحويلها إلى الكاسيت. وضع الكاسيت في 10٪ محايد مخزنة الفورمالين (NBF) مدة لا تقل عن 72 ساعة. نقل الكاسيت في 70٪ من الإيثانول للتخزين طويل الأجل قبل البارافين التضمين.
    يجب أن يتم وصفها من أشرطة في قلم رصاص أو مع علامات على النحو الموصى به استخدام زيلين أثناء المعالجة سوف يمحو إلا التسميات: ملاحظة.
  9. قطع قطعة من النسيج ووضعه في قالب الأنسجة. تغطية قسم الأنسجة في درجة الحرارة المثلى القطع (أكتوبر) المركب، وتجميده مباشرةعند درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة cryosectioning. يمكن تخزين هذا القسم الأنسجة في -20 درجة مئوية لتصبح جاهزة للcryosectioning.
  10. قطع واحد أو العديد من القطع من الأنسجة ونقلها إلى أنبوب 50 مل تحتوي على MACS العازلة (1X الفوسفات مخزنة المالحة (PBS)، و 0.5٪ مصل بقري جنيني (FBS)، 2 حامض ملي Ethylenediaminetetraacetic (EDTA)) للتدفق لاحقة تحليل الخلوي . لالتدفق الخلوي، قد تكون عينات أكبر من الأفضل كما قد تفقد الخلايا خلال تبرؤ الورم، وتثبيت الخلية وpermeabilization عند الاقتضاء. عموما، يمكن أن تؤخذ هذه المادة في النهاية، وقد تم تجهيزها مرة واحدة كل قطعة أخرى. بقايا يمكن استخدام عينة الورم تمثيلية للالتدفق الخلوي. اختياريا، يمكن تخزين هذا الأنبوب في 4 درجات CO / N أو استخدامها لتدفق cytometric تلطيخ الهضم التالية فورا الى تعليق خلية (راجع الخطوة 4 - تدفق Cytometric تلطيخ).
  11. قطع ما تبقى من النسيج الى قطع لا يزيد حجمها على حجم الحد الأقصى 0.5 مم × 0.5 مم ونقلها إلى التجميدقارورة لتجميد فوري في النيتروجين السائل. ويمكن استخدام هذه العينات المفاجئة المجمدة ليحلل وأغراض تعاونية المستقبل.
    ملاحظة: عناية إضافية ينبغي أن تؤخذ عند العمل مع النيتروجين السائل عن الاتصال المباشر يمكن أن يسبب إصابة شديدة. ينبغي حماية العينين مع نظارات السلامة مع الجانب الدروع أو مع درع الوجه. كما ينبغي ارتداء القفازات المبردة للحماية من حروق النيتروجين السائل الناجم عن الرش والاتصال المباشر. يجب قفازات تناسب بشكل صحيح ولكن تكون فضفاضة بما يكفي لإزالتها بسرعة يجب أن ينفق النيتروجين السائل فيها.

4. تدفق Cytometric تلطيخ

  1. الأنسجة التجانس
    1. إعداد الهضم المتوسطة مع DMEM (40 مل)، الدناز I (50 U / مل)، وكولاجيناز I (2 ملغ / مل). مكان الورم الطازجة أو O / N المخزنة في المخزن MACS في غطاء طبق بتري، ويغرق في الهضم المتوسطة.
      ملاحظة: أساليب الهضم مختلفة موجودة، ولكل منها مزايا (أي سطح الخلية البروتين السابقالضغط و، والسلامة). ضمان لديك الطريقة الصحيحة لتطبيق المصب المطلوب.
    2. دبوس الورم إلى أسفل الطبق مع إبرة، وقطع من الخارج إلى المركز مع مشرط، حتى الورم لديه نسيج يشبه عجينة. نقل مزيج الورم إلى 50 مل أنبوب، وختم وضعها في كيس من البلاستيك لتجنب التسريبات. نقل أنبوب للحاضنة، وتناوب على 225 دورة في الدقيقة، 37 ° C، 1 ساعة.
    3. تصفية ورم الخلايا تعليق من خلال مصفاة الخلية 70μm. تعليق خلية الطرد المركزي في 250 x ج، 4 ° C، 5 دقائق. بيليه resuspend خلية في 1 مل FACS العازلة (500 مل PBS، 1 مل 0.5 M الأسهم EDTA، 10 مل FCS أو FBS).
    4. عد الخلايا باستخدام عدادة الكريات وإعادة تعليق بتركيز 1X10 7 خلية / مل. نقل 100 ميكرولتر لكل بئر (10 6 خلايا) في 96 جولة جيدا لوحة أسفل لتلطيخ.
  2. الجدوى وتلوين الأجسام المضادة
    1. إضافة 200 ميكرولتر من محلول الجدوى وصمة عار على كل بئر وتخلط. Incuباتي لمدة 30 دقيقة، في 4 درجات مئوية، في الظلام. تدور باستمرار الخلايا في 250 x ج، 4 ° C، 5 دقائق، ونضح طاف.
    2. إضافة مزيج الأجسام المضادة في أوصت / تركيز معاير (حسب الشركة المصنعة) لمستضدات السطحية في 200 ميكرولتر من العازلة FACS. احتضان الخلايا عند 4 درجات مئوية، 30 دقيقة، في الظلام. تدور باستمرار الخلايا في 250 x ج، 4 ° C، 5 دقائق، ونضح طاف.
    3. يغسل مع 200 ميكرولتر من العازلة FACS، وتدور أسفل الخلايا في 250 x ج، 4 ° C، 5 دقائق، ونضح طاف. الخلايا resuspend في 200 ميكرولتر من العازلة FACS، والشروع في قياس التدفق الخلوي لاقتناء والتحليل.
      ملاحظة: إذا كان أداء الخلايا التدفق الخلوي تلطيخ، نفذ التثبيت والخطوات permeabilization وتلطيخ الخلايا بين الخطوات 4.2.2 و4.2.3. إذا كان أداء خلوى تلطيخ، وينبغي أن تكون خلايا تلطيخ السابق تفعيلها مسبقا على النحو الموصى به، وينبغي أن تستخدم مانع من النقل البروتين داخل الخلايا وإفراز مثل مونينسين خلال تفعيل لضمان الإبقاء على العوامل القابلة للذوبان. قد يتم تخزين خلايا ثابتة على المدى القصير (أسبوع واحد) في 4 درجات مئوية في الظلام قبل الاستحواذ على تدفق عداد الكريات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

النتائج المعروضة أدناه تصور تدفق استراتيجية الخلوي النابضة لphenotyping المناعة واسع على الورم القتامي معالجتها. يوم تلطيخ، وهضمها عينة الأنسجة والمتجانس مع كولاجيناز الأول والدناز I الحضانة لمدة 60 دقيقة، عند 37 درجة مئوية تحت 225 دورة في الدقيقة دوران. بعد الهضم، وتصفية تعليق الخلية من خلال مصفاة الخلية 70 ميكرون لإزالة الأنقاض وكانت ملطخة الخلايا مع تدفق المسمى مضان الخلوي الأجسام المضادة لphenotyping الخلايا المناعية. هو مبين أدناه (الشكل 3) هو استراتيجي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في نهاية المطاف، ويجب أن تكون طرق المعالجة من قبل فرضية المطلوب والمتوقع المقايسات الفنية التي يتعين القيام بها (الشكل 1). يقدم القسم التالي لمحة عامة لوصف المقايسات المحتملة التي يمكن القيام بها في مثل هذه المقاطع الأنسجة. فمن بأي حال من الأحوال وجهة نظر شاملة ولكن الغرض للمساعدة في توجيه طرق تجهيز العينات واختيار المقايسات المصب بوصف التقنيات وسرد نقاط القوة والضعف فيها.

التدفق الخلوي تلطيخ يمك...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين تضارب في المصالح للإفصاح عنها.

شكر وتقدير

وأيد هذا العمل من قبل التبرعات الخيرية من جون جي ومؤسسة ماري ستيلا كينيدي التذكاري (المنحة # 0727033) والتحالف أبحاث سرطان الجلد. الكتاب أود أن أشكر جامعة الأنسجة تكساس MD اندرسون مركز سرطان المؤسسي البنك (ITB) لتنسيق توزيع الأنسجة وجمع وتسهيل الأبحاث المترجمة، وكذلك الدكتور اجناسيو Wistuba، الدكتور فيكتور برييتو، وإدارة مركز إم دي أندرسون للسرطان من علم الأمراض وبرنامج أطلق عليه الرصاص الميلانوما القمر. وأخيرا، والكتاب نود أن ننوه جميع المرضى والأسر المتضررة من سرطان الجلد.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
إبرBD305167
مشارط من الفولاذ المقاوم للصدأ يمكن التخلصMiltex4-410
طبق زراعة الأنسجةخزعة كور353003
ثيرمو فيشر58931
محلول تثبيت الحمض النوويالريبي AmbionAM7021
1.5 مل أنابيب EppendorfفينيكسMAX-815
50 مل أنابيبCorning430290
10٪ محايدة مخزنة الفورمالينStatLab المنتجات الطبية28600-5
حاويات الفورمالينفيشر Scientific23-032-059
حل درجة حرارة القطع الأمثل (OCT)ساكورا فينيتيك4583
Tissue-Tek CryomoldSakura Finetek4557
Dnase IRoche10104159001
Collagenase IRoche11088793001
70 & mu ؛ مصافي الخلايا mBD Bioscience352350
96 ألواح سفلية مستديرةجيدا Corning3799
محلول وصمة عار حية / ميتةLifeTechnologies L34957
منها أشرطة نينج

المراجع

  1. Lorsch, J. R., Collins, F. S., Lippincott-Schwartz, J. Cell Biology. Fixing problems with cell lines. Science. 346, 1452-1453 (2014).
  2. van der Worp, H. B., et al. Can animal models of disease reliably inform human studies. , PLoS Med. 7, e1000245 (2010).
  3. McCabe, P. M., et al. Animal models of disease. Physiol. Behav. 68, 501-507 (2000).
  4. Woolf, S. H. The meaning of translational research and why it matters. JAMA. 299, 211-213 (2008).
  5. Brockbank, K. G., Taylor, M. J. Tissue Preservation. Advances in Biopreservation. , 157-159 (2006).
  6. Bulmer, M. The ethics of social research. Researching social life. Gilbert, N. , Sage. London. 45-57 (2001).
  7. Penslar, R. L. IRB guidebook. , US Government Printing Office. (1993).
  8. Protection of human subjects. CFR Title 21 Section 50.25. , Food and Drug Administration. Available from: http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/cfcfr/CFRSearch.cfm?FR=50.25 (2011).
  9. HIPAA privacy rule and public health. Guidance from CDC and the US Department of Health and Human Services. , Centers for Disease Control and Prevention. Available from: http://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/su5201a1.htm (2003).
  10. MD Anderson Cancer Center Institutional Tissue Bank Standard Operating Procedures. 3, Institutional Tissue Bank. (2009).
  11. Collection, Storage, Retrieval and Distribution of Biological Materials for Research. , 3rd ed., International Society for Biological and Environmental Repositories. Available from: http://biorepository.uic.edu/Contact_Us_files/ISBERBestPractices3rdedition.pdf (2011).
  12. NCI Best Practices for Biospecimen Resources. , 2nd ed., Office of Biorepositories and Biospecimen Research. Available from: http://biospecimens.cancer.gov/bestpractices/2011-NCIbestpractices.pdf (2011).
  13. Ruffell, B., et al. Leukocyte composition of human breast cancer. Proc. of the Ntnl. Aca. of Sci. 109, 2796-2801 (2012).
  14. Shapiro, H. M. Practical flow cytometry. , John Wiley & Sons. (2005).
  15. Baker, A. F., et al. Stability of phosphoprotein as a biological marker of tumor signaling. Clin. Cancer Res. 11, 4338-4340 (2005).
  16. Jacobs, S. Sample processing considerations for detecting copy number changes in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. Cold Spring Harbor protocols. 2012, 1195-1202 (2012).
  17. Chung, J. -Y., et al. Factors in tissue handling and processing that impact RNA obtained from formalin-fixed, paraffin-embedded tissue. J. Histochem. Cytochem. 56, 1033-1042 (2008).
  18. Guo, H., et al. An efficient procedure for protein extraction from formalin-fixed, paraffin-embedded tissues for reverse phase protein arrays. Proteome Sci. 10, 1477-5956 (2012).
  19. Feldman, A. L., et al. Advantages of mRNA amplification for microarray analysis. Biotechniques. 33, 906-914 (2002).
  20. Francino, O., et al. Advantages of real-time PCR assay for diagnosis and monitoring of canine leishmaniosis. Vet Parasitol. 137, 214-221 (2006).
  21. Grunberg-Manago, M. Messenger RNA stability and its role in control of gene expression in bacteria and phages. Annu. Rev. Genet. 33, 193-227 (1999).
  22. Lesnik, E. A., Freier, S. M. Relative thermodynamic stability of DNA, RNA, and DNA:RNA hybrid duplexes: relationship with base composition and structure. Biochemistry. 34, 10807-10815 (1995).
  23. MacBeath, G. Protein microarrays and proteomics. Nat Genet. 32, 526-532 (2002).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

RNA
العمل مع الأنسجة البشرية لبالحركة أبحاث السرطان
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.