A السريع المظهري العصبية نظام تسجيل النقاط لتقييم مرض في التقدم SOD1-G93A نموذج الفأر من ALS

Theo Hatzipetros; Joshua D. Kidd; Andy J. Moreno; Kenneth Thompson; Alan Gill; Fernando G. Vieira

doi:10.3791/53257

Method Article

A السريع المظهري العصبية نظام تسجيل النقاط لتقييم مرض في التقدم SOD1-G93A نموذج الفأر من ALS

DOI:

10.3791/53257

⸱

October 6th, 2015

Theo Hatzipetros¹ , Joshua D. Kidd¹ , Andy J. Moreno¹ , Kenneth Thompson¹ , Alan Gill¹ , Fernando G. Vieira¹

¹ALS Therapy Development Institute

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف بروتوكول الفيديو هذا طريقة حساسة وموثوقة وسريعة لتقييم العجز العصبي العضلي في نموذج الفأر المعدل وراثيا للتصلب الجانبي الضموري.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الفأر المعدل وراثيا SOD1-G93A هو النموذج الحيواني الأكثر استخداما للتصلب الجانبي الضموري (ALS). في ALS TDI ، قمنا بتطوير بروتوكول فحص النمط الظاهري ، كما هو موضح في الفيديو هنا ، والذي يقيم بشكل موثوق الوظيفة العصبية العضلية للفئران SOD1-G93A بطريقة سريعة. يشمل هذا البروتوكول نظام تسجيل عصبي بسيط (NeuroScore) مصمم لتقييم وظيفة الأطراف الخلفية. يركز NeuroScore على وظيفة الأطراف الخلفية لأن عجز الأطراف الخلفية هو أول علامة عصبية تم الإبلاغ عنها للمرض في الفئران SOD1-G93A. يوفر البروتوكول الذي طورته ALS TDI تقييما غير متحيز لبداية الشلل الجزئي (الشلل الطفيف أو الجزئي) ، وتطور وشدة الشلل ، وهو حساس بما يكفي لتحديد التغيرات التي يسببها الدواء في تطور المرض. في هذا التقرير ، يقلل الجمع بين مخطوطة مفصلة مع الفيديو من غموض التسجيل والتباين بين المجربين مما يسمح باعتماد البروتوكول من قبل مختبرات أخرى وتمكين المقارنات بين الدراسات التي تجري في بيئات مختلفة. نعتقد أن بروتوكول الفيديو هذا يمكن أن يكون بمثابة أداة تدريب ممتازة للباحثين الحاليين والمستقبليين في مرض التصلب الجانبي الضموري.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

منذ ذلك الحين تم تطويره في منتصف عام 1990 SOD1-G93A نموذج الفأر وراثيا النموذج الحيواني الأكثر استخداما على نطاق واسع من التصلب الوحشي الضموري (ALS) ^1. تم تصميم هذا النموذج الماوس المعدلة وراثيا وراثيا لبإفراط عن شكل متحولة من البشر النحاس / الزنك الفائق 1 (SOD1) الجين إيواء الجلايسين ALS المصاحب لطفرة ألانين في الأحماض الأمينية 93 (G93A). طفرة G93A هي واحدة من العديد من الطفرات في الجين SOD1 أن الماكياج بشكل جماعي ما يقرب من خمس حالات ALS العائلية ^2.

أصبح نموذج SOD1-G93A العمود الفقري للبحوث تطوير الأدوية ALS لأنه بالإضافة إلى الارتباط ا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتجرى جميع التجارب وفقا للبروتوكولات التي وصفها المعاهد الوطنية للصحة الدليل للرعاية واستخدام الحيوانات وتمت الموافقة من قبل لجنة رعاية الحيوان المؤسسي واستخدام ALS TDI و(IACUC).

1. الحيوانات، والإسكان، وتصميم الدراسة

ملاحظة: وقد اشتق الماوس مستعمرة SOD1-G93A من نسخة عالية B6SJLTgN (SOD1G93A) 1Gur سلالة تنتج في الأصل من قبل غرني ⁷ آخرون. ويجري حاليا الحفاظ على مستعمرة طريق عبور المعدلة وراثيا الذكور C57BL / 6-SJL مع من النوع البري الإناث C57BL / 6-SJL F1. يتم إنشاؤها الحيوان....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

درس البيانات نتيجة العصبية لمدة 90 ذكور و 94 إناث الفئران غير المعالجة SOD1-G93A في ALS TDI خلال قيمت 2014. وأظهرت النتائج أن الفئران الذكور وعادة ما يكون تطور المرض أكثر عدوانية من إناث الفئران، كما يتضح من نسبة أكبر من حياتها في NS 1 مقارنة مع الإناث. NS 2 و 3 NS تحدث مع تردد يساوي تقريبا عبر الجنسين. NS 0 استبعد من التحليل لأنها تعتبر النمط الظاهري "طبيعية". تم استبعاد NS 4 أيضا لأنه من خلال تعريف أنه يمكن أن يحدث فقط مرة واحدة في حياة كل SOD1-G93A الفأر (الجدول 2 والشك.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذا التقرير، وصفنا بروتوكول الفيديو سريعة وبسيطة والتي، إذا ما طبقت بشكل صحيح، غير قادرة على تقييم موثوق تطور المرض في الفئران SOD1-G93A وتحديد التغيرات التي يسببها الدواء. بينما الجماعات المختلفة قد وضعت أنظمة التهديف المظهرية للفئران SOD1-G93A ^10/08، فإنهم غالبا ما لا توفر تفاصيل كافية عن الإجراء وغير كافية للنسخ المتماثل. ونتيجة لذلك، نادرا ما تستخدم أنظمة التهديف خارج المجموعة المحددة التي يتطور بها. في هذا التقرير، فإن الجمع بين مخطوطة مفصلة مع الفيديو يقلل من ا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نود أن نتوجه بخالص الشكر إلى Beth Levine لمراجعتها النقدية للمخطوطة ، وفاليري تاسيناري لتطوير بروتوكول التنميط الجيني ، ومات فيرولا وكارلوس مايا لرعايتهم الاستثنائية للحيوانات.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number	Comments
سلالة B6SJLTgN (SOD1G93A) 1Gur	سلالة مختبر جاكسون ، بار هاربور ، ME	002726	سلالة الفئران المستخدمة في هذه الدراسة
Breeders	Biomedical Research Models، Inc. ، Worcester ، MA		Colony
Maintainance Scale	Navigator OHAUS ، Parsippany ، NJ	موديل N14120	يستخدم لوزن الفئران
Nutra-GelH	Bio-Serv ، Flemington ، NJ		طعام رطب المقدمة للفئران المريضة
حمية المختبر المشعة	هارلان ، إنديانابوليس ، IN	2918-111914M	تشاو دايت
مختبر Sani-chips	Harlan Teklad ، إنديانابوليس ، IN	7090	Bedding
JMPH ؛	معهد SAS، Inc.، SAS Campus Drive، Cary، NC	& nbsp. v10.0.2	البرامج الإحصائية
Microsoft Excel	، Microsoft Way ، Redmond ، WA	Excel 2013 (v 15.0)	برنامج جداول البيانات
GraphPad Prism 5	GraphPad software Inc. ، La Jolla ، CA	v5.4	برنامج الرسوم البيانية
Mouse Huts	Bio-Serv ، Flemington ، NJ	K3272	للإثراء البيئي

#S4798

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gurney, M. E., et al. Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation. Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).
Rosen, D. R., et al. Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

A السريع المظهري العصبية نظام تسجيل النقاط لتقييم مرض في التقدم SOD1-G93A نموذج الفأر من ALS

In This Article

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgements

Materials

References

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles