مقالة منهجية

جيل المعدلة وراثيا الثقافات الجلد الميتة عضوي عن طريق الأدمة الإنسان

DOI:

10.3791/53280

⸱

ديسمبر 14, 2015

 , 
1Department of Dermatology, UCSD Stem Cell Program, University of California, San Diego, 2Department of Cellular and Molecular Medicine, UCSD Stem Cell Program, University of California, San Diego

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الهدف من هذه الورقة هو توفير بروتوكول شامل ومفصل حول كيفية توليد جلد عضوي بشري معدل وراثيا من الخلايا الكيراتينية للبشرة والأدمة البشرية الزاولة للحيوية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الثقافات عضوي النمط تسمح إعادة تشكيل بيئة 3D الحرجة للاتصال خلية خلية وخلية مصفوفة التفاعلات التي يحاكي وظيفة وظائف أعضاء في الجسم الحي نظرائهم الأنسجة. ويتمثل ذلك من خلال الجلد الثقافات عضوي النمط الذي يلخص بأمانة التمايز البشرة وبرنامج الطبقية. الكيراتينية البشرة الإنسان الأساسية هي للتلاعب وراثيا من خلال الفيروسات القهقرية حيث الجينات يمكن overexpressed بسهولة أو طرقت إلى أسفل. ويمكن بعد هذه الخلايا الكيراتينية المعدلة وراثيا يمكن استخدامها لتجديد البشرة الإنسان في الثقافات الجلد عضوي النمط تقديم نموذج قوي لدراسة مسارات الوراثية نمو الارتطام البشرة، والتمايز، وتطور المرض. البروتوكولات المعروضة هنا تصف أساليب لإعداد الأدمة البشرية الميتة فضلا عن التلاعب وراثيا الخلايا الكيراتينية الإنسان الأساسية من أجل توليد الثقافات الجلد عضوي النمط. جلد الإنسان مجدد يمكن استخدامها في downstrتطبيقات زير الشئون الخارجية مثل التنميط التعبير الجيني، المناعية، وimmunoprecipitations لونين تليها عالية الإنتاجية التسلسل. وهكذا، فإن جيل من هذه الثقافات الجلد عضوي النمط المعدلة وراثيا تسمح تحديد الجينات التي تعتبر بالغة الأهمية للحفاظ على توازن البشرة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

البشرة الإنسان هو ظهارة طبقية الذي يصل إلى الأدمة الكامنة من خلال المصفوفة خارج الخلية يعرف باسم الغشاء القاعدي البشرة zone.The يخدم ليس فقط بمثابة حاجز كتيمة لمنع فقدان الرطوبة ولكن أيضا باعتبارها خط الدفاع الأول لحماية الجسم من المواد الغريبة والسامة 1. الطبقة القاعدية، وهو أعمق طبقة من البشرة، ويحتوي على الخلايا الجذعية البشرة والسلف التي تؤدي إلى ذرية المتباينة التي تشكل بقية البشرة 2. كما الخلايا الاصلية البشرة تفرق تهاجر صعودا لتشكيل الطبقة الأولى من الخلايا المتمايزة المعروفة باسم طبقة الشائكة 3. في الطبقة الشائكة، والخلايا تتحول على التعبير عن keratins 1 و 10، والذي ثم توفير القوة لتحمل الإجهاد البدني للطبقات متباينة من البشرة. كما خلايا الطبقة الشائكة مزيد من التمييز، وأنها تتحرك صعودا في البشرة للم الطبقة الحبيبية التي تتميز تشكيل كيراتوهيالينية ورقائقي حبيبات وكذلك البروتينات الهيكلية التي يتم تجميعها تحت غشاء البلازما. كما الخلايا المضي قدما في عملية التمايز، والبروتينات تحت غشاء البلازما عبر ربطها بعضها البعض في حين تنبثق حبيبات رقائقي من الخلايا لتشكيل الدهون يسمى حاجز الغنية الطبقة القرنية 4.

الأمراض التي تنطوي على تغييرات في نمو البشرة وأثر التمايز ~ 20٪ من السكان 5. وبالتالي، فهم آليات هذه العملية هو من أهمية كبيرة. منذ مظهر من مظاهر العديد من هذه الأمراض يتوقف على خلية خلية أو خلايا مصفوفة الاتصال والثقافات عضوي النمط حيث يتم إعادة تشكيل البشرة الإنسان في بيئة 3D تم إنشاء 10/06. هذه الطرق تشمل عادة استخدام الخلايا الكيراتينية الأولية أو تحويلها المصنف على المصفوفة خارج الخلية مثل الإنسان مماتالأدمة، Matrigel، أو الكولاجين.

لفهم الآليات التنظيمية الجينات التي تعتبر مهمة في نمو البشرة والتمايز، الخلايا الكيراتينية يمكن التلاعب بها وراثيا من خلال ناقلات فيروسات لضربة قاضية أو بإفراط عن الجينات في الثقافة 2D ثم إعادة تشكيل في 3D. وقد استخدمت هذه الأساليب على نطاق واسع لوصف الجينات المسؤولة عن الجذعية البشرة والخلايا الاصلية تجديد الذات والتمايز، وكذلك التقدم إلى الأورام 11-21. هنا، يتم توفير بروتوكول معمقة حول كيفية تغيير التعبير الجيني في الثقافات عضوي النمط البشرة من خلال استخدام الفيروسات القهقرية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تنفيذ بروتوكول جلد الإنسان وفقا للمبادئ التوجيهية للجامعة كاليفورنيا، جنة أخلاقيات البحوث سان دييغو. ويمكن الحصول على جلد الإنسان من العينات الجراحية التخلص منها أو شراؤها من البنوك الجلد (يتم سرد بنك الجلد في جدول المواد / المعدات). الموقع حيث يتم اشتقاق الجلد من أو سن المتبرع ليست حرجة إلى التجربة طالما أن البروتينات منطقة الغشاء القاعدي (الكولاجين / laminin) في الأدمة ليست متدهورة.

1. إعداد ممات الأدمة الإنسان

  1. عند استلام جلد الإنسان، ووضع الأنسجة في نسيج الثقافة هود لذوبان الجليد (~ 3-5 دقيقة). اعتمادا على حجم الجلد، ووضع الأنسجة إذابة في التخلص منها 50 مل أنبوب مخروطي معقمة أو 125 مل زجاجة. حجم نموذجية من الجلد من البنك الجلد هو 0.75 قدم مربع.
  2. ملء حاوية 75٪ كاملة مع البنسلين والستربتومايسين 4X (القلم / بكتيريا) في برنامج تلفزيوني 1X. هزة بقوة ل5 دقائق والتخلص من السائل. كرر هذه الخطوة 3 مرات أكثر.
  3. بعد غسل الماضي، ونقل الأنسجة لأنبوب جديد / زجاجة وإضافة 4X جديد القلم / بكتيريا / PBS لملء 75٪ من الحاويات. احتضان هذا الخليط في حاضنة زراعة الأنسجة عند 37 درجة مئوية لمدة 2 أسابيع للسماح للفصل الأدمة من البشرة.
  4. تحت ظروف معقمة، واستخدام ملقط لقشر بعيدا البشرة من الأدمة. الأدمة بيضاء تماما في حين أن البشرة سيكون التلوين اعتمادا على السباق من الجهة المانحة (الشكل 1A). تجاهل البشرة وفقا لبروتوكول المؤسسة للتعامل مع الأنسجة البشرية.
  5. وضع الأدمة في أنبوب أو زجاجة، وأغسلها في 4x والقلم / بكتيريا مخففة في برنامج تلفزيوني 1X مع قوية تهز (5 دقائق يغسل لمدة 4 مرات). بعد غسل الماضي، ونقل الأدمة إلى أنبوب جديد / زجاجة في 4X القلم / بكتيريا مخففة في برنامج تلفزيوني 1X وتخزينها في 4 درجات مئوية حتى جاهزة للاستخدام. ويمكن تخزين الأدمة عند 4 درجة مئوية لمدة تصل الى عام.

    6. 2. وراثيا التعديل الابتدائية الخلايا الكيراتينية الإنسان

    ملاحظة: استخدام الخلايا طائر الفينيق amphotropic تزرع في كامل وسائل الاعلام DMEM [DMEM + 10٪ الجنين مصل بقري (FBS) + القلم / بكتيريا] لإنتاج فيروسات أن تصيب الخلايا الكيراتينية الإنسان الأساسية. يتم دمج الجينات التعبئة والتغليف الفيروسية التي ترميز البروتينات مثل هفوة-POL والظرف مستقر في جينوم الخلية طائر الفينيق الذي يسمح لإنتاج فيروس عندما مع transfected متجه فيروسات. خلايا طائر الفينيق يمكن مع transfected كفاءة عالية تتيح لإنتاج عالية عيار الفيروسية. فيروس تنتج من هذا خط التعبئة والتغليف ويمكن أيضا أن تصيب مجموعة كبيرة ومتنوعة من خلايا الثدييات بما فيها الإنسان.

    1. اليوم 1: قبل يوم واحد ترنسفكأيشن، وخلايا طائر الفينيق البذور في لوحة 6 جيدا في مناطق ذات كثافة من 800،000 الخلايا لكل بئر في كامل وسائل الاعلام DMEM.
    2. يوم 2: يوم ترنسفكأيشن، استخدام 3 ميكروغرام من ناقلات فيروسات لكل بئر. قسامة 3 ميكروغرام من ناقلات فيروسات في أنبوب 1.5 مل. استخدام مزيج من 100 μ؛ ل DMEM زائد 6 ميكرولتر من كاشف ترنسفكأيشن لكل 3 ميكروغرام من ناقلات. مزيج 6 ميكرولتر من كاشف ترنسفكأيشن مع 100 ميكرولتر DMEM في أنبوب 1.5 مل. (يتم سرد ناقلات فيروسات التي تستخدم في الجدول المعدات / المواد).
      1. احتضان لمدة 5 دقائق ويضاف خليط 106 ميكرولتر في الأنبوب قبل aliquoted تحتوي على ميكروغرام 3 ناقلات فيروسات. خلط واحتضان في RT لمدة 30 دقيقة. إضافة هذه قطرة قطرة الخليط كله إلى كل بئر من الخلايا طائر الفينيق.
    3. يوم 3: بعد يوم واحد ترنسفكأيشن، وإزالة وسائل الإعلام من الخلايا طائر الفينيق وإضافة 2 مل من اكتمال جديدة وسائل الاعلام DMEM. وفي اليوم نفسه، البذور الكيراتينية الإنسان الأساسية في 6 لوحات جيدة في كثافة 75،000 الخلايا لكل بئر. الحفاظ على الخلايا الكيراتينية في وسط مصل خلية كيراتينية مجانا (KCSFM) مع المضادات الحيوية (القلم / بكتيريا).
      ملاحظة: تم شراؤها الكيراتينية الإنسان الأساسية. الخلايا يمكن شراؤها من مجموعة متنوعة من البائعين (المدرجة في جدول المواد / المعدات).
    4. اليوم 4: هارسترة وسائل الإعلام من الخلايا transfected طائر الفينيق، الذي يحتوي الآن الجسيمات الفيروسية. تمر وسائل الإعلام من خلال 0.45 ميكرون التصفية باستخدام حقنة (لإزالة أي خلايا طائر الفينيق تلويث) وضعت 2 مل على الخلايا الكيراتينية (مطلي على 75000 خلية / جيدا في اليوم السابق: راجع الخطوة 2.3). إضافة بروميد hexadimethrine (5 ميكروغرام / مل) إلى وسائل الإعلام للمساعدة في التوسط في عملية العدوى. التتر الفيروسية ~ 1 × 10 7 TU / مل.
      1. تدور 6 لوحات جيدا في جهاز للطرد المركزي في 200 x ج لمدة 1 ساعة على RT. بعد زيادة ونقصان، وإزالة وسائل الإعلام التي تحتوي على فيروسات وغسل خلايا مرة واحدة مع 1X PBS قبل إضافة KCSFM.
    5. اليوم 5: تصيب نفس دفعة من الخلايا القرنية مرة أخرى كما في الخطوة 2.4.
      ملاحظة: حدد الخلايا القرنية باستخدام دواء إذا كان هناك علامة اختيار على ناقلات فيروسات وتوسيع لاستخدامها في تحليل المصب أو التطبيقات مثل الثقافات عضوي النمط.

    3. إعداد الثقافات الجلد عضوي النمط

    1. بناءكاسيت عضوي النمط من المواد شيوعا وجدت في المختبر أو الأشرطة يمكن أن يكون العرف من خلال متجر تصنيع المعادن (الشكل 2A - F). لجعل هذه الأشرطة من 3.5 سم لوحة زراعة الأنسجة، استخدام الكي لإزالة 1.0 سم × 1.0 سم مربع من وسط غطاء من صحن 3.5 سم (الشكل 2A-B). القيام بذلك تحت ظروف معقمة.
      1. إرفاق أوتاد مربع في الجزء السفلي من الكاسيت (غطاء 3،5 سم الطبق) باستخدام طلاء الأظافر واضحة (الشكل 2C). سماح 5 دقائق لطلاء الأظافر لتجف والوجه الكاسيت أكثر بحيث يوضع على أوتاد مربع (الشكل 2D). وضع الكاسيت في طبق 6 سم.
        ملاحظة: ساحة تربط يمكن شراؤها من مجموعة متنوعة من الفنون والحرف اليدوية المخازن.
    2. إعداد نمو الخلايا الكيراتينية المتوسطة (KGM) تتألف من 66٪ DMEM، و 22٪ F12 هام، و 100 وحدة / مل البنسلين، 100 ميكروغرام / مل الستربتومايسين، و 10٪ FBS، 2.67 ميكروغرام / مل الأدنين، 40 نز / مل الهيدروكورتيزون، 10 نانوغرام / مل السم الكوليرا، 4.94 ميكروغرام / مل الأنسولين، 5 ميكروغرام / مل ترانسفيرين، 1.36 نانوغرام / مل Triiodo-L-ثيرونين، 10 نانوغرام / مل EGF، و 10 ميكروغرام / مل هيدروكلوريد السيبروفلوكساسين. تصفية وسائل الإعلام من خلال مرشح 0.22 ميكرون وتخزينها في 4 درجات مئوية حتى جاهزة للاستخدام.
    3. اتخاذ الأدمة من 4X القلم / بكتيريا + حل PBS ويغسل 2 مرات في KGM ثم احتضان في KGM عند 37 درجة مئوية لمدة يومين قبل استخدامها.
    4. قطع الأدمة باستخدام مشرط إلى 1.5 سم × 1.5 سم قطعة الحجم ثم ضع على كاسيت عضوي النمط. وضع الأدمة مع الجزء العلوي من الأدمة مواجهة. والجزء العلوي من الأدمة يكون الجانب الذي يأتي في اتصال مع الخلايا القرنية (الشكل 1B).
    5. وضع قبل قطع الأدمة على حفرة مربعة من الكاسيت عضوي النمط مع الجانب العلوي من الأدمة مواجهة (الشكل 3A).
    6. الوجه الكاسيت عضوي النمط بأكمله تحتوي الأدمة على استخدام ملقط (الشكل 3B). ذوبان الجليد في حل المصفوفة خارج الخلية على الجليد. استخدام الإبر والمحاقن لاستخلاص 100 ميكرولتر من حل المصفوفة خارج الخلية في شريط كاسيت. إضافة 5 قطرات إلى أسفل الأدمة (الجانب اللامع) ويهز قليلا لضمان حتى التوزيع في جميع أنحاء الأدمة (الشكل 3B).
    7. سماح 5 دقائق للالتجاري اضافية حل مصفوفة الخلوية ليصلب تماما (الشكل 3C). بعد التصلب، استخدام ملقط لقلب كاسيت على ظهره. إضافة 4 مل من KGM إلى 6 سم الطبق.
    8. وضع 0،5-1٬000٬000 الكيراتينية المعدلة وراثيا على أشرطة عضوي النمط تحتوي الأدمة (الشكل 3D).
      1. يعرض للتريبسين الكيراتينية عن طريق وضع 4 مل من 0.05٪ التربسين على 10 سم لوحات لمدة 5 دقائق وإخماد مع 4 مل من وسائل الاعلام DMEM.
      2. عد الخلايا القرنية باستخدام عدادة الكريات ثم تدور باستمرار في 200 x ج لمدة 5 دقائق. 0،5-1٬000٬000 الخلايا resuspend (اعتمادا على عدد من الخلايا المتاحة) في 90 μلتر من KGM ووضع جميع الخلايا على الأدمة.
        ملاحظة: من المهم أن تضع نفس العدد من الخلايا في الأدمة داخل نفس التجربة لضمان أن أي خلافات ينظر في سمك البشرة مجدد ليست بسبب الاختلافات في بدء عدد الخلايا. يمكن وضع أقل من 0.5 مليون خلية في الأدمة تؤدي إلى ضعف التكوين الطبقي والتمايز.
    9. تغيير وسائل الإعلام KGM على الثقافات عضوي النمط كل يوم. حصاد الأنسجة 1-14 أيام بعد إيداع الخلايا الكيراتينية في الأدمة. التقسيم الكامل والتفريق بين البشرة وعادة ما يحدث بعد يوم 5.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخطوة الأولى في توليد جلد الإنسان عضوي النمط لإزالة البشرة من الأدمة. حضانة لمدة أسبوعين من الجلد عند 37 درجة مئوية في 4X القلم / بكتيريا / PBS ينبغي أن يسمح للفصل الأدمة من البشرة (الشكل 1A). إذا فصل البشرة والأدمة من الصعب ثم ضع الأنسجة عند 37 درجة مئوية في 4x والقلم / بكتيريا / برنامج تلفزيوني لمدة أسبوع آخر ثم حاول مرة أخرى تقشير باستخدام ملقط.

واحد من مفاتيح لتجديد البشرة الإنسان في الأدمة ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التلاعب الجيني في جلد الإنسان الثقافات عضوي النمط توفر العديد من المزايا لدرس عادة 2D الخلايا المستزرعة وكذلك نماذج الماوس. ثقافات 2D تفتقر إلى خلية خلية وخلية الخلية التفاعلات مصفوفة ثلاثية الأبعاد الموجودة في الأنسجة والأعضاء السليمة. وقد وجدت الدراسات الحديثة أيضا اختلافات هائلة بين 2D و 3D خلايا سرطان الجلد مثقف مع الخلايا 3D مثقف تظهر أكثر من ذلك بكثير التشابه التعبير الجيني لجلد الإنسان الأساسي الأورام 16. يكون الجلد الثقافات عضوي النمط الإنسان أيضا العديد من المز...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدينا ما نكشف عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكان هذا العمل supportedby الأمريكية سرطان جمعية أبحاث علماء جرانت (RSG-12-148-01-DDC) وجائزة البيولوجيا CIRM الأساسية (RB4-05779).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
جلد الإنسانبنك الجلد لرجال الإطفاءفي نيويوركhttp://www.cornellsurgery.org/pro/services/burn-surgery/skin-bank.html< / a>
PEN / STREPGIBCO15140-122
خطوط خلايا العنقاء البرمائيةATCCCRL-3213
FUGENE 6 التعداء الكاشفPromegaE2691
وسائط الخلايا الكيراتينية (KCSFM)Life Technologies17005042
DMEMGIBCO11995
Ham's F12Cambrex12-615F
FBSGIBCO10437-028
AdenineSigmaA-9795
Cholera ToxinSigma  C-8052
هيدروكورتيزونكالبيوكيم3896
الأنسولينسيجماI-1882
EGFInvitrogen13247-051
Transferrin سيجماT-0665
سيبروفلوكساسين هيدروكلوريدالمصلية89-001-1
كيBovie Medical CorporationAA01
MatrigelCorning354234
الكيراتين 1 الجسم المضادBiolegendPRB-149P
أوتاد مربعة مخازنالفنون والحرف
البشرية الخلايا الكيراتينية لحديثي الولادةATCCPCS-200-010
الخلايا الكيراتينية لحديثي الولادة البشريةتطبيقات الخلايا102K-05n
MSCV ناقل الفيروسات القهقريةClontech634401
LZRS ناقل الفيروسات القهقريةAddgene
pSuper.Retro.Puro ناقلات الفيروسات القهقريةOligoengineVEC-PRT-0002  
سداسي ديميثرين بروميد سيجماH9268-5G

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Tadeu, A. M., Horsley, V. Epithelial stem cells in adult skin. Current topics in developmental biology. 107, 107-131 (2014).
  2. Sen, G. L. Remembering one's identity: the epigenetic basis of stem cell fate decisions. FASEB J. 25, 2123-2128 (2011).
  3. Segre, J. A. Epidermal barrier formation and recovery in skin disorders. J Clin Invest. 116, 1150-1158 (2006).
  4. Eckert, R. L., Sturniolo, M. T., Broome, A. M., Ruse, M., Rorke, E. A. Transglutaminase function in epidermis. J Invest Dermatol. 124, 481-492 (2005).
  5. Lopez-Pajares, V., Yan, K., Zarnegar, B. J., Jameson, K. L., Khavari, P. A. Genetic pathways in disorders of epidermal differentiation. Trends Genet. 29, 31-40 (2013).
  6. Fuchs, E. Epidermal differentiation: the bare essentials. J Cell Biol. 111, 2807-2814 (1990).
  7. Green, H., Kehinde, O., Thomas, J. Growth of cultured human epidermal cells into multiple epithelia suitable for grafting. Proc Natl Acad Sci U S A. 76, 5665-5668 (1979).
  8. Khavari, P. A. Modelling cancer in human skin tissue. Nat Rev Cancer. 6, 270-280 (2006).
  9. Parenteau, N. L., Bilbo, P., Nolte, C. J., Mason, V. S., Rosenberg, M. The organotypic culture of human skin keratinocytes and fibroblasts to achieve form and function. Cytotechnology. 9, 163-171 (1992).
  10. Oh, J. W., Hsi, T. C., Guerrero-Juarez, C. F., Ramos, R., Plikus, M. V. Organotypic skin culture. J Invest Dermatol. 133, e14(2013).
  11. Sen, G. L., et al. ZNF750 Is a p63 Target Gene that Induces KLF4 to Drive Terminal Epidermal Differentiation. Dev Cell. 22, 669-677 (2012).
  12. Sen, G. L., Webster, D. E., Barragan, D. I., Chang, H. Y., Khavari, P. A. Control of differentiation in a self-renewing mammalian tissue by the histone demethylase JMJD3. Genes Dev. 22, 1865-1870 (2008).
  13. Mistry, D. S., Chen, Y., Wang, Y., Zhang, K., Sen, G. L. SNAI2 controls the undifferentiated state of human epidermal progenitor cells. Stem Cells. 32, 3209-3218 (2014).
  14. Truong, A. B., Kretz, M., Ridky, T. W., Kimmel, R., Khavari, P. A. p63 regulates proliferation and differentiation of developmentally mature keratinocytes. Genes Dev. 20, 3185-3197 (2006).
  15. Kretz, M., et al. Control of somatic tissue differentiation by the long non-coding RNA TINCR. Nature. 493, 231-235 (2013).
  16. Ridky, T. W., Chow, J. M., Wong, D. J., Khavari, P. A. Invasive three-dimensional organotypic neoplasia from multiple normal human epithelia. Nat Med. 16, 1450-1455 (2010).
  17. Mistry, D. S., Chen, Y., Sen, G. L. Progenitor function in self-renewing human epidermis is maintained by the exosome. Cell Stem Cell. 11, 127-135 (2012).
  18. Kretz, M., et al. Suppression of progenitor differentiation requires the long noncoding RNA ANCR. Genes Dev. 26, 338-343 (2012).
  19. Mulder, K. W., et al. Diverse epigenetic strategies interact to control epidermal differentiation. Nat Cell Biol. 14, 753-763 (2012).
  20. Boxer, L. D., Barajas, B., Tao, S., Zhang, J., Khavari, P. A. ZNF750 interacts with KLF4 and RCOR1, KDM1A, and CTBP1/2 chromatin regulators to repress epidermal progenitor genes and induce differentiation genes. Genes Dev. 28, 2013-2026 (2014).
  21. Jameson, K. L., et al. IQGAP1 scaffold-kinase interaction blockade selectively targets RAS-MAP kinase-driven tumors. Nat Med. 19, 626-630 (2013).
  22. Mistry, D. S., Chen, Y., Wang, Y., Sen, G. L. Transcriptional profiling of SNAI2 regulated genes in primary human keratinocytes. Genomics data. 4, 43-46 (2015).
  23. Mali, P., et al. RNA-guided human genome engineering via Cas9. Science. 339, 823-826 (2013).
  24. Doebis, C., et al. Efficient in vitro transduction of epithelial cells and keratinocytes with improved adenoviral gene transfer for the application in skin tissue engineering. Transpl immunol. 9, 323-329 (2002).
  25. Melo, S. P., et al. Somatic correction of junctional epidermolysis bullosa by a highly recombinogenic AAV variant. Mol Ther. 22, 725-733 (2014).
  26. Nanba, D., Matsushita, N., Toki, F., Higashiyama, S. Efficient expansion of human keratinocyte stem/progenitor cells carrying a transgene with lentiviral vector. Stem cell res ther. 4, 127(2013).
  27. Sen, G. L., Reuter, J. A., Webster, D. E., Zhu, L., Khavari, P. A. DNMT1 maintains progenitor function in self-renewing somatic tissue. Nature. 463, 563-567 (2010).
  28. Shamir, E. R., Ewald, A. J. Three-dimensional organotypic culture: experimental models of mammalian biology and disease. Nat Rev Mol Cell Biol. 15, 647-664 (2014).
  29. Krejci, N. C., Cuono, C. B., Langdon, R. C., McGuire, J. In vitro reconstitution of skin: fibroblasts facilitate keratinocyte growth and differentiation on acellular reticular dermis. J Invest Dermatol. 97, 843-848 (1991).
  30. Mathes, S. H., Ruffner, H., Graf-Hausner, U. The use of skin models in drug development. Adv Drug Deliv Rev. 69-70, 81-102 (2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة