يقدم المؤلفون بروتوكولا لجمع مناديل أنف الخنازير للكشف عن فيروسات الأنفلونزا A وعزلها.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الأنف المسحات لمكافحة الأنفلونزا A الكشف عن الفيروسات وعزل من الخنازير
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
مراقبة لفيروسات الأنفلونزا A في الخنازير أمر بالغ الأهمية لصحة الإنسان والحيوان بسبب فيروس الانفلونزا يتطور بسرعة في السكان الخنازير وسلالات جديدة آخذة في الظهور باستمرار. الخنازير قادرة على أن تصاب الأنساب متنوعة من فيروس إنفلونزا أي جعلها تستضيف مهم لظهور وصيانة أنفلونزا رواية A سلالات الفيروس. أخذ العينات الخنازير في إعدادات متنوعة مثل المزارع التجارية الخنازير، المعارض الزراعية، وأسواق الحيوانات الحية مهم لتوفير رؤية شاملة لتعميم حاليا سلالات IAV. وقبل الوفاة تقنية أخذ العينات الحالية معيار الذهب (أي جمع مسحات الأنف) هي العمل المكثفة لأنه يتطلب ضبط النفس الجسدي من الخنازير. مناديل الأنف تنطوي على فرك قطعة من القماش عبر خطم الخنزير بدون أدنى درجات ضبط النفس من الحيوان. الأنف مسح إجراء بسيط لأداء و لا يتطلب موظفين ذوي البيطرية المهنية أو التدريب التعامل مع الحيوانات. While قليلا أقل حساسية من مسحات الأنف، ومعدلات الكشف عن الفيروسات والعزلة كافية لجعل الأنف مناديل بديل قابل للتطبيق لأخذ عينات الخنازير الفردية عندما يطلب الضغط المنخفض طرق أخذ العينات. ويحدد البروتوكول إجراءات والخطوات اللازمة لجمع الأنف قابلة للحياة مسح من خنزير الفردية.
المقدمة
فيروسات الانفلونزا (IAV) تسبب أمراض الجهاز التنفسي في كثير من الأنواع، بما في ذلك الطيور الداجنة والخنازير والبشر. بسبب إعادة التشكيل من مجزأة IAV الجينوم الفيروسي التطور السريع يمكن أن يحدث وسلالات IAV جديدة تظهر في كثير من الأحيان. الخنازير هي الأنواع التي يمكن أن تكون بمثابة وعاء خلط لإعادة التشكيل من IAVs من الأنواع المضيفة متعددة. 1 يوجد حاليا ثلاثة أنواع فرعية رئيسية من IAV المتداولة عادة بين الخنازير في أمريكا الشمالية (H1N1، H1N2، H3N2)، ولكن مقدمات IAV متعددة من البشر لها أدى إلى تنوع IAV واسعة النطاق داخل تلك الأنواع الفرعية. وقد 2 التطور السريع لIAVs تصيب الخنازير واضحا منذ عام 1998 عندما ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
جميع الخنازير المستخدمة في جمع البيانات التالية ممن تشملهم بالحماية اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام جامعة ولاية أوهايو (استخدام الحيوانات بروتوكول عدد 2009A0134-R1).
1. إعداد الفيروسية نقل متوسطة وجمع العينات قوارير
- إضافة 37 غرام من الدماغ القلب التسريب إلى 900 مل من المياه النقية وتخلط جيدا مع بقضيب ومحرك مغناطيسي بينما التدفئة إلى 70 درجة مئوية إلى حل تماما المسحوق.
- الأوتوكلاف مرق على 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الاستخدام الناجح لهذه الطريقة تعطي RRT-PCR النتائج التي، ترافق مع استخدام الرقابة الداخلية خلال استخراج الحمض النووي الريبي وRRT-PCR، وتظهر عينات لا تحتوي على مثبطات PCR من أي حطام البيئي التقطت خلال أخذ العينات. بعد عينة التلقيح، وينبغي أن يكون الفيروس الآبار العزلة خالية من الحطام البيئي مرئية من العينة. وهناك اتفاق معقول بين النتائج RRT-PCR والنتائج عزل الفيروس على أساس أن PCR غالبا ما تعطي معدل إيجابي IAV أعلى من عزل الفيروس لPCR بالكشف عن الحمض النووي الفيروسي، وليس الفيروس ق.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
جمع عينات من الخنازير باستخدام مسحات أنفية ذات الرؤوس البوليستر وقد ثبت مفيدة في إجراء المراقبة IAV. ومع ذلك، فإن استخدام الإجراء مسحة الأنف يعيق جهود المراقبة بسبب استخدام المطلوبة فخا لضبط النفس. مناديل الأنف تمثل صقل التقنيات الحالية أخذ العينات الخنازير لتقليل الضغط على الناس وخنازير أثناء جمع العينات. في حين تم تطوير طريقة لوالتحقق من صحة الإعدادات في المعرض الخنازير، ويمكن تطبيقها بسهولة على حالات أخرى حيث كشف ما قبل الوفاة من IAV في الخنازير ضروري (أي الخنازير التج.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم تمويل هذا العمل جزئيا بأموال فيدرالية من مراكز التميز لأبحاث ومراقبة الأنفلونزا (CEIRS) ، والمعهد الوطني للحساسية والأمراض المعدية ، والمعاهد الوطنية للصحة ، ووزارة الصحة والخدمات الإنسانية ، بموجب رقم العقد. HHSN272201400006C.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| BBL Brain Heart Infusion | Becton و Dickinson and Company | 211059 | |
| Penicillin G Sodium | Salt MP Biomedicals، LLC | 021194537 | 1500 u / mg |
| Streptomycin Sulfate | AMRESCO LLC | 0382 | |
| Gentamicin Solution | Mediatech، Inc. | 30-005-CR | 50 مجم / مل |
| محلول الأمفوتريسين ب | فيشر | S 24 25 | 250 ميكروغرام / مل |
| كبريتات كاناميسين | Teknova | K2105 | 5000 ميكروغرام / مل |
| TPP نظام الفلتر السريع TPP | تكنو منتجات البلاستيك AG & nbsp ؛ | 99150 | |
| زجاجات Nalgen التشخيصية | Thermo Scientific | 342002-9025 | HDPE مع إغلاق PP أبيض |
| Dermacea Gauze Sponge ، 8 طبقات | Covidien | 441211 | 5.08 سم & مرات ؛ 5.08 سم (2 بوصة & مرات ؛ 2 بوصة) ؛ |
| قفازات اختبار النتريل | Saftey Choice | 19-170-010 (A-D) |
المراجع
- Ma, W., Kahn, R. E., Richt, J. A. The pig as a mixing vessel for influenza viruses: Human and veterinary implications. J. Mol. Genet. Med. 3 (1), 158-166 (2008).
- Nelson, M. I., Vincent, A. L. Reverse zoonosis of influenza to swine: ne....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
استكشف المزيد من المقالات
