مقالة منهجية

مسمار الخرز في تطوير الدجاج أطراف الجنين لتحديد مسارات نقل الإشارة التي تؤثر على التعبير الجيني

DOI:

10.3791/53342

⸱

يناير 17, 2016

 , 
1Division of Animal Sciences, School of Biosciences, University of Nottingham

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عن طريق تطعيم الخرز المنقوع في عوامل النمو أو مثبطات محددة لمسارات الإشارات إلى الأجنة النامية ، من الممكن اختبار آثارها مباشرة في الجسم الحي. في هذا البروتوكول ، يتم تطعيم الخرز في برعم الطرف لتحديد تأثيرات هذه الجزيئات على التعبير الجيني ونقل الإشارة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

باستخدام أجنة الدجاج فمن الممكن لاختبار مباشرة آثار إما عوامل النمو أو مثبطات محددة من مسارات إشارات على التعبير الجيني وتفعيل مسارات نقل الإشارة. هذه التقنية تتيح إيصال إشارات الجزيئات في مراحل نمو محددة بدقة لأوقات محددة. بعد هذه الأجنة يمكن حصاده ودراسة التعبير الجيني، على سبيل المثال عن طريق التهجين الموضعي، أو تفعيل مسارات نقل الإشارة لاحظ مع المناعية في.

في هذا الفيديو حبات الهيبارين غارقة في FGF18 أو AG الخرز 1-X2 غارقة في U0126، مثبط مجاهدي خلق، والمطعمة في برعم الطرف في البيضة. هذا يدل على أن FGF18 يدفع التعبير عن MyoD وERK الفسفرة وكلا الذاتية وFGF18 الناجم عن التعبير MyoD وتحول دون U0126. يمكن الخرز غارقة في خصم حمض الريتينويك تحفيز سابق لأوانه MyoD تحريض من قبل FGF18.

هذا النهج يمكن أن يكون لناإد مع مجموعة واسعة من عوامل النمو المختلفة، ومثبطات وتتكيف بسهولة إلى الأنسجة الأخرى في الجنين النامي.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد وفرت أجنة الطيور أداة قوية لدراسة تطوير لسنوات عديدة 1. واحدة من خصائصها الأكثر فائدة هي أنها سهلة نسبيا للتلاعب. تنمية الخارجية يجعل من الممكن لفتح البيض للوصول إلى الجنين وأداء micromanipulations المختلفة بما في ذلك أمثلة مثل نظام الوهم السمان-فرخ الكلاسيكية لدراسة مصير خلية 2،3، وحقن الفيروسات القهقرية لoverexpression في أنسجة معينة أثناء نمو 4،5 والثقافة يزدرع لتحديد مصادر الإشارات التنموية 6. وفي الآونة الأخيرة الوهم ولدت بين المضيفين الخالي من الملصقات مع الطعوم من خط الدجاج المعدل وراثيا معربا عن GFP أظهرت أن الجمع بين التطعيم الكلاسيكية والتعديل الوراثي يمكن أن توفر معلومات هامة في التنمية 7،8.

جعلت السهولة التي يمكن التلاعب بها الجنين الطيور يجعلها نموذجا ممتازا لدراسة أطرافهمتنمية 9. وقد تم تطبيق عوامل النمو محددة لأطرافه النامية في الجسم الحي دورا أساسيا في تحديد العوامل التي تغير الطرف الزخرفة 10،11 ويستمر في تقديم رؤى في هذه العملية 12. كما تم استخدام هذا النهج لدراسة العوامل التي تنظم تنمية العضلات وكشفت عن العديد من الأدوار إشارات مثل Wnts 13، 14 أفضل الممارسات الإدارية وHGF 15.

مؤخرا تم استخدام هذه التقنية للتحقيق في إشارات التحكم عضلي التعبير الجيني في برعم الطرف، وأظهرت أن التفاعلات بين FGF18 وحمض الريتينويك يمكن السيطرة على توقيت MyoD التعبير 16. باستخدام مزيج من عوامل النمو والجزيئات الصغيرة التي يمكن تحميلها على حبات ثم المطعمة مباشرة إلى أنسجة معينة في مراحل نمو محددة يعطي فرصة للتدخل في أي وقت تقريبا والمنطقة خلال التنمية. وقد استخدم هذا إنفيstigate العديد من العمليات بما في ذلك الجسيدة الزخرفة 17،18، مواصفات العصبية 19، العصبية الهجرة قمة 20 و محور التمديد 21.

نحن هنا تصف طريقة لتطعيم حبات غارقة في أي عوامل النمو أو مثبطات في تطوير أطرافه الدجاج. وقد استخدم هذا لتحديد آثار هذه الإشارات على تكون العضل عن طريق تحليل العضلات التعبير جين معين مع التهجين في الموقع. وصفنا ترقيع باستخدام الهيبارين غارقة الخرز، والتي تستخدم لعوامل النمو، أو AG الخرز 1-X2 لجزيئات صغيرة مسعور مثل حمض الريتينويك أو مثبطات جزيء صغير من مسارات إشارات محددة. ومع ذلك الخرز الأخرى المتاحة والتي تم استخدامها لتقديم كل عوامل النمو FGFs 22 و Shh على 23 أيضا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بيان الأخلاق: كل هذه التجارب تتبع رعاية الحيوان ومبادئ توجيهية أخلاقية من جامعة نوتنغهام.

1. إعداد الهيبارين الخرز للتطعيم

  1. تغسل حبات الهيبارين بدقة في برنامج تلفزيوني قبل الاستخدام. ملاحظة: يمكن تخزين حبات عند 4 درجة مئوية كما الطين في برنامج تلفزيوني.
    1. اختيار حبات لتطعيم عن طريق نقلهم من الأسهم مع ماصة 20 ميكرولتر إلى قطرة 1 مل من برنامج تلفزيوني. ثم استخدام micropipette معينة إلى 2 ميكرولتر لنقل الخرز إلى قطرة 20 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني في طبق بتري 3 سم. اختيار حبات استنادا إلى حجم و، وذلك باستخدام جهاز ستيريو تشريح المجهر، ونقل حبات المختارة مع طرف P2 ماصة. تلك حوالي 100 ميكرون قطرها مثالية.
  2. إزالة PBS من الخرز. إزالة معظم السائل مع 20 ميكرولتر ماصة والسائل المتبقي عن طريق عمل شعري مع الساعات غرامة ملقط. ملاحظة: من المهم لإزالة أكبر قدر ممكن حتى النمو الفعليلا المخفف ص عندما يتم إضافته إلى الخرز.
  3. ماصة عامل النمو مباشرة على الخرز. لFGF18 إضافة 0.5 ميكرولتر من FGF18 المؤتلف أعيد تشكيلها في 0.5 ملغ / مل في 0.1٪ BSA في برنامج تلفزيوني. ضع عدة قطرات من الماء حول حواف الطبق لمنع السائل من التبخر.
  4. احتضان حبات لمدة 1 ساعة على RT. إزالة قطرات من الماء من الطبق مع ماصة باستور ووضعها على الجليد جاهزة للتطعيم.
  5. إذا لزم الأمر (لحبات شفافة) نقل 4-5 حبات إلى 2٪ الفينول الأحمر قبل التطعيم للمساعدة في تصور لهم. شطف في برنامج تلفزيوني قبل ان ينتقل الى الجنين.

2. إعداد AG الخرز 1-X2 للتطعيم

  1. قبل استخدام derivatize الخرز مع 0.2 N حمض الفورميك.
    1. للقيام بذلك استخدام ملعقة لنقل الخرز لأنبوب microcentrifuge 1.5 مل. إضافة 1ml من 0.2 N حمض الفورميك وتغسل على منصة تهتز لمدة 1 ساعة.
    2. ثم إزالة حمض الفورميك مع ماصة P1000 واستبدالها مع 1مل من الماء. يغسل لمدة 1 ساعة وكرر ست مرات لإزالة ما تبقى من حمض الفورميك.
    3. إزالة السائل المتبقي مع ماصة P1000 وتخزين حبات عند 4 درجات مئوية. ملاحظة: ليس من الضروري إزالة جميع المياه المتبقية في هذه المرحلة.
  2. إزالة بيليه صغيرة من الخرز حوالي 5-10 حجم ميكرولتر من المخزون باستخدام ملعقة صغيرة في طبق بتري 3 سم وإضافة 1 مل من DMSO (أو أي مذيب يذوب الدواء في). ملاحظة: يجب أن توفر عدة مئات من الخرز من خلالها تحديد تلك من الحجم الصحيح.
  3. ثم استخدم ماصة P2 معينة إلى 2 ميكرولتر لنقل حبات من حوالي 100 ميكرون قطرها إلى انخفاض 20 ميكرولتر من المذيب في طبق بتري آخر 3 سم.
  4. إزالة المذيب مع 20 ميكرولتر ماصة وأي مذيب المتبقية مع ماصة 2 ميكرولتر. استبدال 20 ميكرولتر من المخدرات ليتم تطبيقها.
    ملاحظة: للحصول على تناسق حل المخدرات في تركيز 100 ميكرومتر في DMSO (أو التي من أي وقت مضى تستخدم المذيبات)،قسامة 20 ميكرولتر وتخزينها في -80 ° C إلى بعض مثبطات جزيء صغير غير مستقرة وأنه من الأفضل لتجنب تكرار تجميد الذوبان. إذا لزم الأمر ثم تمييع المخدرات إلى التركيز المطلوب قبل تمرغ الخرز. قد تحتاج إلى أن تحدد تجريبيا لكل المخدرات تركيزات فعالة.
  5. احتضان لمدة 1 ساعة. حماية من الضوء حيث أن العديد من هذه الجزيئات خفيفة حساسة.
  6. قبل التطعيم نقل 4-5 حبات مع ماصة P2 معينة إلى 2 ميكرولتر في 20 ميكرولتر من 2٪ أحمر الفينول يذوب في الماء. تنفيذ هذه الخطوة باستخدام مجهر تشريح ستيريو لتصور الخرز. إزالة حبة واحدة مع الساعات غرامة ملقط أو حلقة الأسلاك وشطف في برنامج تلفزيوني قبل ان ينتقل الى الجنين. لا تترك حبات في 2٪ الفينول الأحمر لأكثر من 15 دقيقة قبل الاستخدام وهذا يمكن أن يسبب فقدان النشاط.

3. إعداد إبر التنغستن

  1. قطع أسلاك التنجستن ناعم إلى 3-4 أطوال سم. أدخل قطعة واحدة من السلك في نهايةماصة باستير الزجاج وتذوب في موقد بنسن لإصلاح في الموقف. إعداد ما يصل إلى 10 الإبر لضمان عدم وجود قطع الغيار إذا كانت معطوبة أثناء الاستخدام.
  2. ضع نهاية السلك إلى لهب موقد اللحام والاحتفاظ بها هناك حتى يضيء التنغستن الأبيض وطرف حاد (حوالي 2-3 دقائق). ملاحظة: خلال استخدام الإبرة يمكن تنظيفها وإعادة شحذ في موقد اللحام حسب الحاجة.
    ملاحظة: يمكن أيضا أن هذه الإبر يمكن استخدامها لجعل الحلقات لنقل الخرز. تلمس برفق الإبرة إلى مقاعد البدلاء، وسوف ينحني لتشكيل حلقة.

4. الأجنة التحضير لالخرزة الطعوم

  1. احتضان البيض مع نهاية حادة تصل حتى يصلوا إلى المرحلة المطلوبة (3-5 أيام لمعظم التلاعب برعم الطرف). باستخدام الملقط حادة الحنفية على نهاية حادة لكسر قذيفة ثم استخدام ملقط لإزالة القشرة وفضح الجنين. ضمان غشاء قشر البيض تتم إزالة أيضا.
    ملاحظة: 1-2 مل من برنامج تلفزيوني ويمكن أن يضاف مع ماصة باستور للمساعدةهذا إذا العصي الغشاء إلى الصفار. بلطف ماصة PBS على سطح الصفار، فهم الغشاء مع ملقط، مع الحرص على عدم الإضرار صفار البيض، وسحب بلطف بعيدا عن البيض.
  2. إزالة ما يصل إلى 5 مل من الزلال من البيضة مع حقنة 10 مل و إبرة 19 G. يستغرق سوى بقدر اللازمة لضمان الجنين لا يجعل الاتصال مع الشريط تستخدم لختم البيض عن إزالة كميات أكبر يمكن أن تقلل من معدلات البقاء على قيد الحياة الجنين.
  3. لتصور الجنين إضافة 5-6 قطرات من الفنانين الحبر الهند إلى 15 مل من PBS تحتوي على 100 U البنسلين و 0.1 ملغ الستربتوميسين / مل. حقن 0.5-1 مل مباشرة تحت الجنين مع حقنة 1 مل و إبرة 25 G.
  4. إضافة 2-3 مل من برنامج تلفزيوني مع 1٪ مصل العجل الجنين و 100 U البنسلين و 0.1 ملغ الستربتوميسين / مل داخل البويضة لضمان الجنين لا يذوى. عن طريق شحذ الساعات ملقط إزالة الغشاء المحي وفتح السلى على براعم الأطراف النامية. ضمان الجنين لا تجف و، إذا لزم الأمر، إضافة المزيد من PBS / FCS.
    ملاحظة: براعم الأطراف يمكن رؤيتها بوضوح حيث الامتداد تقرن على الجناح الجنين. في هذه المراحل الجنين سوف تتحول مثل الجانب الأيمن عادة العلوي. ونتيجة لذلك فمن عادة أسهل في الكسب غير المشروع الخرز في أطرافه اليمنى واستخدام تلك اليسار والضوابط المقابل.
  5. استخدام سلك التنغستن شحذ إلى إجراء شق في برعم الطرف حيث سيتم زرع حبة. تجنب قطع على طول الطريق من خلال برعم الطرف حيثما أمكن ذلك على الرغم من أن في مراحل الشابة وهذا أمر صعب.
    ملاحظة: في الأجنة القديمة (HH المرحلة 22 وما فوق) فمن الممكن لتحديد مناطق معينة من برعم الطرف للتطعيم ولكن في المراحل الشابة وهذا هو أكثر صعوبة كما برعم الطرف نفسها صغيرة. ومن المهم أيضا أن نتذكر أن برعم الطرف سينمو الماضي حبة المطعمة ذلك، وخاصة في المراحل الشابة، سوف تبقى حبة في الطرف القريب.
  6. التقاط حبة من أي عامل النمو أو المخدرات باستخدام إما إضافي وا على ما يرامtchmakers ملقط أو حلقة مصنوعة من إبرة التنغستن. إذا كان قد تم غارقة حبة في أي DMSO أو الفينول الأحمر، وشطف في برنامج تلفزيوني قبل التقدم إلى الجنين. نقل حبة إلى الجنين مع ملقط / سلك حلقة. ثم استخدم سلك التنغستن شحذ لإدراج حبة في شق.
  7. إضافة 1-2 مل من PBS / FCS إلى البويضة التأكد من أن الجنين يتم الاحتفاظ رطب ولكن تجنب تطبيق مباشرة على الجنين نفسه وهذا يمكن أن يضر الأجنة وتسبب حبة يتم إقصاؤه. ختم البيض مع الشريط والعودة إلى الحاضنة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في مرحلة HH لم يتم أعرب 21 MyoD في تطوير myoblasts أطرافه على الرغم من تلطيخ يمكن أن ينظر إليه في بضعة عضلية من و somites النامية (الشكل 1A). ويبين الشكل 1B الموقع التهجين لMyoD 6 ساعات بعد الكسب غير المشروع FGF18 حبة. هو فعل MyoD في myoblasts قريبة من حبة في حين ليس هناك تعبير في الطرف المقابل. شارك في تطعيم حبة غارقة في U0126، مثبط محددة من مجاهدي خلق، وكتل FGF18 تحريض MyoD (الشكل 1C). تطعيم بالمثل حبة ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

استخدام الطعوم حبة تطبيقها مباشرة على الأنسجة النامية في البيضة هو أداة قوية لتشريح دور عامل النمو الإشارات خلال تطوير يعطي سيطرة لا مثيل لها خلال المرحلة التنموية التي يتم تطبيقها ومدة التعرض.

اختيار حبة لكل نوع من جزيء مهم. الجزيئات الكارهة للماء صغيرة، مثل مثبطات الموصوفة هنا وحمض الريتينويك، وعادة ما تربط جيدا لAG derivatized الخرز 1-X2 على الرغم من أنه من الضروري لاختبار فعالية كل المانع على هذه الخرز تجريبي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل هذا العمل جزئيا من قبل جائزة جامعة نوتنغهام المهنية المبكرة ل DS. يتم تمويل RM من قبل اللجنة العليا لتطوير التعليم في العراق.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
حبات الهيبارين الاكريليكSigmaH5263تم إيقاف حبات الأكريليك والهيبارين المستخدمة. ومع ذلك ، يتوفر منتج بديل ، حبات الهيبارين الاغاروز ، القط رقم H6508. هذه شفافة بحيث يصعب التعامل معها ولكن يمكن تلطيخها بالفينول الأحمر بنفس طريقة حبات AG 1-X2 ،
حبات AG 1-X2Bio-Rad140-1231
Affi Gel الخرز الأزرقBio-Rad153-7301 ؛ 153-7302تم استخدام هذه الخرزات مع مجموعة من عوامل النمو بما في ذلك Shh و FGFs ويمكن استخدامها لاستبدال حبات الهيبارين
FGF18Peprotech100-28قم بإعادة التعليق في PBS مع 0/1٪ BSA ، وقم بإعداد حصص للاستخدام الفردي من 0.5-1ul وتخزينها عند -80 درجة مئوية. يمكن أن تختلف الدفعات والموردين ، لذا يجب اختبار تركيزات مختلفة لتحديد جرعة فعالة.
U0126Cell Signalling9903قم بعمل مخزون 20 ملي متر في DMSO وتخزينه في كميات للاستخدام الفردي عند -80 درجة مئوية. حماية من الضوء.
BMS-493Tocris Biosciences3509قم بتعليقه في DMSO وتخزينه في حصص للاستخدام الفردي عند -80 درجة مئوية. حماية من الضوء.
حبر هندي أسودوندسورونيوتن 5012572003384 (30 مل)بينما تتوفر بدائل لهذا المنتج ، يجب توخي الحذر لأن بعض الأحبار سامة للأجنة
سلك التنجستن ، قطر 0.1 مم 99.95٪ألفا إيسار10404
البنسلين / الستربتومايسينسيجماP0781تمييع 100X في PBS / الحبر و PBS / FCS

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Davey, M. G., Tickle, C. The chicken as a model for embryonic development. Cytogenetic Genome Research. 117, 231-239 (2007).
  2. Le Douarin, N. The Nogent Institute--50 years of embryology. International Journal of Developmental Biology. 49, 85-103 (2005).
  3. Le Douarin, N. M. The avian embryo as a model to study the development of the neural crest: a long and still ongoing story. Mechanisms of Development. 121, 1089-1102 (2004).
  4. Bell, E., Brickell, P. Replication-competent retroviral vectors for expressing genes in avian cells in vitro and in vivo. Molecular Biotechnology. 7, 289-298 (1997).
  5. Abu-Elmagd, M., et al. Wnt/Lef1 signaling acts via Pitx2 to regulate somite myogenesis. Developmental Biology. 337, 211-219 (2010).
  6. Munsterberg, A. E., Lassar, A. B. Combinatorial signals from the neural tube, floor plate and notochord induce myogenic bHLH gene expression in the somite. Development. 121, 651-660 (1995).
  7. McGrew, M. J., et al. Efficient production of germline transgenic chickens using lentiviral vectors. EMBO Reports. 5, 728-733 (2004).
  8. Valasek, P., et al. Cellular and molecular investigations into the development of the pectoral girdle. Developmental Biology. 357, 108-116 (2011).
  9. Tickle, C. The contribution of chicken embryology to the understanding of vertebrate limb development. Mechanisms of Development. 121, 1019-1029 (2004).
  10. Riddle, R. D., Johnson, R. L., Laufer, E., Tabin, C. Sonic hedgehog mediates the polarizing activity of the ZPA. Cell. 75, 1401-1416 (1993).
  11. Tickle, C., Alberts, B., Wolpert, L., Lee, J. Local application of retinoic acid to the limb bond mimics the action of the polarizing region. Nature. 296, 564-566 (1982).
  12. Rosello-Diez, A., Torres, M. Regulative patterning in limb bud transplants is induced by distalizing activity of apical ectodermal ridge signals on host limb cells. Developmental Dynamics. 240, 1203-1211 (2011).
  13. Anakwe, K., et al. Wnt signalling regulates myogenic differentiation in the developing avian wing. Development. 130, 3503-3514 (2003).
  14. Amthor, H., Christ, B., Weil, M., Patel, K. The importance of timing differentiation during limb muscle development. Current Biology. 8, 642-652 (1998).
  15. Brand-Saberi, B., Muller, T. S., Wilting, J., Christ, B., Birchmeier, C. Scatter factor/hepatocyte growth factor (SF/HGF) induces emigration of myogenic cells at interlimb level in vivo. Developmental Biology. 179, 303-308 (1996).
  16. Mok, G. F., Cardenas, R., Anderton, H., Campbell, K. H. S., Sweetman, D. Interactions between FGF18 and retinoic acid regulate differentiation of chick embryo limb myoblasts. Developmental Biology. 396, 214-223 (2014).
  17. Abou-Elhamd, A., Cooper, O., Münsterberg, A. Klhl31 is associated with skeletal myogenesis and its expression is regulated by myogenic signals and Myf-5. Mechanisms of Development. , 126-852 (2009).
  18. Schmidt, M., Tanaka, M., Munsterberg, A. Expression of (beta)-catenin in the developing chick myotome is regulated by myogenic signals. Development. 127, 4105-4113 (2000).
  19. Stavridis, M. P., Lunn, J. S., Collins, B. J., Storey, K. G. A discrete period of FGF-induced Erk1/2 signalling is required for vertebrate neural specification. Development. 134, 2889-2894 (2007).
  20. Martinez-Morales, P. L., et al. FGF and retinoic acid activity gradients control the timing of neural crest cell emigration in the trunk. Journal of Cell Biology. 194, 489-503 (2011).
  21. Olivera-Martinez, I., Storey, K. G. Wnt signals provide a timing mechanism for the FGF-retinoid differentiation switch during vertebrate body axis extension. Development. 134, 2125-2135 (2007).
  22. Logan, M., Simon, H. G., Tabin, C. Differential regulation of T-box and homeobox transcription factors suggests roles in controlling chick limb-type identity. Development. 125, 2825-2835 (1998).
  23. Borycki, A. G., Mendham, L., Emerson, C. P. Jr Control of somite patterning by Sonic hedgehog and its downstream signal response genes. Development. 125, 777-790 (1998).
  24. Sweetman, D., et al. FGF-4 signaling is involved in mir-206 expression in developing somites of chicken embryos. Developmental Dynamics. 235, 2185-2191 (2006).
  25. Chapman, S. C., Collignon, J., Schoenwolf, G. C., Lumsden, A. Improved method for chick whole-embryo culture using a filter paper carrier. Developmental Dynamics. 220, 284-289 (2001).
  26. Sweetman, D., Wagstaff, L., Cooper, O., Weijer, C., Münsterberg, A. The migration of paraxial and lateral plate mesoderm cells emerging from the late primitive streak is controlled by different Wnt signals. BMC Developmental Biology. 8, 63(2008).
  27. Scott, B. B., Lois, C. Generation of tissue-specific transgenic birds with lentiviral vectors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the U.S.A. 102, 16443-16447 (2005).
  28. Seidl, A. H., et al. Transgenic quail as a model for research in the avian nervous system: a comparative study of the auditory brainstem. Journal of Comparative Neurology. 521, 5-23 (2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

MyoD ERK MEK

مقالات ذات صلة