من أجل تحديد الطفرات الجديدة التي تؤثر على الإحساس الميكانيكي ، قمنا بتصميم اختبار يقيس الاستجابة السلوكية للتحفيز اللمسي لشعيرات الذباب في المستنسخة الطافرة الناتجة عن طريقة MARCM. يسمح الجمع بين التقنيات بتحديد الطفرات الحساسة للميكانيكا التي قد تكون قاتلة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
النسخ في والسلوكية الفحص لMechanosensation من MARCM المستندة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
بسبب التماثل البنيوي والوظيفي لخلايا الشعر في الأذن الداخلية الثدييات والخلايا العصبية التي يعصب على ذبابة الفاكهة الحواس الخارجية توفر نظام نموذجا ممتازا لدراسة mechanosensation. يصف هذا البروتوكول سلوك مسة بسيطة في ذباب الفاكهة التي يمكن استخدامها لتحديد الطفرات التي تتداخل مع mechanosensation. التحفيز عن طريق اللمس من macrochaete الخشن على الصدر من الذباب يثير رد فعل الاستمالة إما من المحطة الاولى أو الثالثة. الطفرات التي تتداخل مع mechanotransduction (مثل NOMPC)، أو مع غيرها من جوانب القوس الانعكاسي، يمكن أن تمنع استجابة الاستمالة. ومن شأن الشاشة التقليدية للسلوكيات الكبار قد غاب المسوخ التي لها أدوار أساسية خلال التنمية. بدلا من ذلك، هذا البروتوكول يجمع بين شاشة تعمل باللمس مع تحليل الفسيفساء مع علامة الخلية كظوم (MARCM) للسماح فقط مناطق محدودة من خلايا متحولة متماثل إلى أن تتولد والتي تمثلت في EXPRession من البروتين الفلوري الأخضر (GFP). عن طريق اختبار استنساخ MARCM عن الاستجابات السلوكية الشاذة، فمن الممكن أن يحجب مجموعة من الطفرات المميتة ف عنصرا للبحث عن جينات جديدة تشارك في mechanosensation التي كان غاب عن الأساليب الأكثر تقليدية.
المقدمة
يعتمد البشر على القدرة على تحويل المحفزات الميكانيكية من بيئتهم ، مثل اللمس أو الضغط أو الاهتزاز أو الموجات الصوتية ، إلى معلومات حسية يمكن معالجتها بواسطة الجهاز العصبي ، في عملية تسمى النقل الميكانيكي. العديد من السمات الميكانيكية الشاملة للنقل الميكانيكي بين البشر واللافقاريات هي نفسها1 ، مما يجعل ذبابة الفاكهة نموذجا مفيدا لدراسة الآليات الجزيئية للنقل الميكانيكي. ذبابة الفاكهة السوداء تحتوي على مجموعتين من الأعضاء الحسية المتخصصة (النوع الأول والثاني) القادرة على تحويل المحفزات الميكانيكية إلى إمكانات عمل. تحتوي المستقبلات الميكانيكية من النوع الأول على خلية عصبية ذات عملية تغصنات أو حسية واحدة ، محاطة بثلاث خلايا دعم2. تشتمل المستقبلات الميكانيكية من النوع الأول على المستقبلات الميكانيكية ذات الشعر الخشن ، والأعضاء الحرضية السمعية الحساسة (عضو جونستون) ، وحساسية الجريسية التي تنقل معلومات حول دقات الجناح3. الشعيرات التي تغطي الجانب الظهري للذبابة هي الأكثر وفرة ويمكن الوصول إليها بسهولة من بين أعضاء النوع الأول. على غرار البيئة خارج الخلية لخلايا الشعر المرتبطة بالسمع والتوازن في الفقاريات ، تفرز الخلايا الداعمة المحيطة بالخلايا العصبية الحساسة للذباب الليمفاوية العليا من البوتاسيوم الذي يخلق تدرجا غير عادي للتركيز للبوتاسيوم1. تستخدم الخلايا العصبية الحساسة للميكانيكا ، من كل من أنظمة الثدييات والذباب ، هذا البوتاسيوم العالي خارج الخلية لإزالة استقطاب الخلية. استجابة للتحفيز الميكانيكي لشعيرات macrochaete نحو جدار الجسم ، تستجيب الخلايا العصبية الحسية بدفعة من إمكانات العمل مدفوعة بإزالة استقطاب البوتاسيوم لغشاءالخلية 4. ذبابة الفاكهة الخلايا العصبية الحسية التي تغذي الشعيرات تشبه الخلايا الحساسة للميكانيكا للكائنات الحية الأخرى ، بما في ذلك خلايا الشعر الفقارية ، في كل من الهيكل والوظيفة1،5. إن إمكانية الوصول إلى ذبابة الفاكهة الأعضاء الحسية الخارجية للتلاعب التجريبي ووفرة التقنيات الجينية المتاحة للباحثين تجعل ذبابة الفاكهة نظاما نموذجيا ممتازا للتحقيق في الأسس الجزيئية للحس الميكانيكي.
في الذبابة ، يؤدي تحفيز خلية عصبية حسية واحدة تؤدي إلى استجابة سلوكية يمكن ملاحظتها. يثير تحفيز الشعيرات المختلفة استجابات سلوكية محددة وقابلة للتكرار ، اعتمادا على الشعيرات التي يتم تحفيزها. عند التحفيز اللمسي ، يظهر الذباب البري المقطوع الرأس منعكس معقدا للعناية حيث ينظفون المنطقة القريبة من الشعيرات المحفزة بمجموعة منقوشة من حركات الساق5-7. عندما يكون الذباب متماثلا اللواقح للطفرات أحادية الجين المعروفة التي تتداخل مع التعلم7 أو التنسيق والنشاط الحركي5 ، يستجيب الذباب بشكل غير طبيعي للتحفيز الميكانيكي. لذلك فإن منعكس الاستمالة هذا هو أداة مفيدة لدراسة تأثيرات الطفرات أحادية الجين على سلوك محدد قابل للتكرار.
تحمل الاستجابة السلوكية القوية لتحفيز شعيرات واحدة كبيرة القدرة على المساعدة في تحديد الجينات الجديدة المشاركة في النقل الميكانيكي. يستخدم هذا البروتوكول لاختبار مجموعة من الذباب المتحور لعدم وجود استجابة سلوكية للإشارة إلى أن الطفرة تتداخل مع الإحساس الميكانيكي. في المجموعة الطافرة المختارة للفحص ، تسبب الطفرات الفتك قبل سن البلوغ ، وبالتالي سيكون من المستحيل اختبارها باستخدام شاشات سلوك البالغين التقليدية. في الأصل ، تم دمج هذه المجموعة من العناصر p المميتة مع مواقع إعادة تركيب FRT لاختبار عيوب نمو الخلايا في المستنسخة. تم صنع المستنسخة على وجه التحديد في العين لأن الذباب البالغ يمكنه البقاء على قيد الحياة في المختبر دون رؤيةوظيفية 8. ومع ذلك ، فإن إزالة كل الإحساس الميكانيكي يمكن أن يتسبب في عدم تناغم البالغين بشدة أو الموت قبل الإغلاق5. يستخدم هذا البروتوكول نهج الفسيفساء للتحايل على فتاكة الطفرات والسماح باختبار مرحلة البالغين. تستخدم تقنية وراثية تسمى تحليل الفسيفساء باستخدام علامة خلية قابلة للكبت (MARCM) 9 لتوليد خلايا متحولة متماثلة اللواقح في عدد محدود من الأعضاء الحسية للذباب البالغ ، بينما يظل باقي الكائن الحي متغاير الزيجوت. يعيش ذباب MARCM هذا بسهولة حتى سن البلوغ ، ومع ذلك فإن الشعيرات متماثلة اللواقح للجينات القاتلة ذات الأهمية.
تسمحMARCM بإنشاء مناطق من الخلايا الطافرة متماثلة اللواقح وتمييزها بالتعبير عن البروتين الفلوري الأخضر (GFP) ، بينما يظل باقي الكائن الحي متغاير الزيجوت في هذا الموضع المعين وغير مميز9. يجمع MARCM بين طفرات عنصر p الفردية وخمسة عناصر وراثية شائعة: GFP تحت سيطرة تسلسل تنشيط المنبع (UAS-GFP) ، وبروتين مثبط Gal80 تحت سيطرة محفز عام (tub-Gal80) ، وعامل النسخ Gal4 تحت سيطرة محفز عام (tub-Gal4) ، وإنزيم إعادة تركيب FRT المعبر عنه من خلال محفز يتم التحكم فيه بالصدمة الحرارية ، وموقع إعادة تركيب FRT10. من خلال دفع إعادة التركيب الانقسامي من خلال إعادة التركيب المنشط بالصدمة الحرارية ، يتم جعل عدد محدود من الخلايا متماثلة اللواقح للطفرة ويتم تمييزها ب GFP. يتم قمع تعبير GFP في الخلايا غير المتجانسة من خلال وجود Gal80 على نسخة الكروموسوم من النوع البري.
تم تحسين بروتوكول الصدمة الحرارية ل MARCM للحث على إعادة التركيب في أعضاء الإحساس الخارجية ذات الشعر الخشن للذبابة ، بينما يظل الكثير من الكائن الحي متغاير الزيجوت ، وبالتالي لا يحمل علامة GFP. احتوت ذباب الفسيفساء الذي تم إنشاؤه باستخدام هذا البروتوكول على طفرات متماثلة اللواقح في أغلب الأحيان في الشعيرات المركزية الظهرية أو الظهرية على سطح العقد.
لقد اختبرنا فائدة هذا المزيج من MARCM وشاشة سلوك الحلاقة مع طفرة حساسة للميكانيكا معروفة ، NOMPC. القناة الأيونية ، التي لا توجد مستقبلات ميكانيكية محتملة C (NOMPC) ، هي عنصر أساسي في مسار النقل الميكانيكي في ذبابة الفاكهة5،11-13. ينتمي NOMPC إلى العائلة الفائقة لإمكانات المستقبل العابرة (TRP) للقنوات الكاتيونية5 وتفي بجميع المعايير للتأهل كقناة حساسة للميكانيكا في ذبابة الفاكهة14،15: 1) يتم التعبير عن NOMPC في الأطراف المهدبة للخلايا العصبية الحسية من النوع 1 ذبابة الفاكهة 13،16-18 ، 2) لا تحتوي يرقات NOMPC الفارغة على استجابة كهربائية للتحفيز اللمسي13، 3) يمكن أن يؤدي التعبير خارج الرحم ل NOMPC في الخلايا غير الحساسة التي تعمل باللمس إلى الحساسية للتحفيز الميكانيكي13 ، 4) التعبير غير المتجانس ل NOMPC في خلايا شنايدر 2 ينتج قناة حساسةللميكانيكا 13 ، و 5) تظهر الطفرات البالغة NOMPC عيوبا في استجابتها للتحفيز الميكانيكي5. بالنظر إلى هذا الدليل ، توقعنا أن المستنسخة الطافرة من NOMPC ستظهر استجابة حلاقة متغيرة أو مثبطة استجابة للتحفيز الميكانيكي للشعيرات.
تم تطوير مخزون MARCM الذي يحتوي على طفرة NOMPC لاستخدامه في تجربة إثبات المبدأ لمقايسة الاستمالة. تم تحفيز ذباب الفسيفساء عند شعيرات الماكروشايت التي تحتوي على خلايا متحولة NOMPC متماثلة اللواقح. توقعنا تثبيط استجابة الاستمالة بعد تحفيز شعيرات الماكروشايت. وجدنا أن 2 فقط من 14 ذبابة ذات شعيرات متحولة تم اختبارها أعطت استجابة واحدة للتحفيز المتكرر. لم يستجب معظمهم لتحفيز الشعيرات الطافرة متماثلة اللواقح. بعد التأكيد على أن هذا الاختبار السلوكي المستند إلى MARCM ينتج منعكس غير طبيعي للعناية الشخصية في متحولة فسيفساء حساسة للميكانيكا معروفة ، يمكن استخدام هذه التقنية في شاشة للطفرات الإضافية الحساسة للميكانيكا.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. الصلبان لتوليد الذباب MARCM
- الحفاظ على الذباب على وسائل الإعلام الذرة الدبس (6.5 غرام / L أجار، 23.5 غرام / لتر خميرة، و 60 غرام / L دقيق الذرة، و 60 مل / لتر دبس؛ 4 مل / L مزيج حمض، 0.13٪ Tegosept) أو معيار وسائل الإعلام ذبابة الفاكهة في 22 درجة مئوية في ضوء 12 ساعة / دورة الظلام.
ملاحظة: يتم استخدام أقل من درجة حرارة قياسية للحفاظ على MARCM المخزونات صحية. ويمتد هذا الوقت التنموي بين البيض والبلوغ إلى 14 يوما. - استخدام الإناث البكر (حوالي 1-8 أيام من العمر) من الأسهم MARCM جاهزة تحتوي على العناصر الجينية اللازمة (GFP تحت سيطرة تسلسل تفعيل المنبع (UAS-GFP)، وبروتين كاظمة Gal80، عامل النسخ GAL4، ل الحرارة صدمة recombinase مدفوعة، وموقع إعادة التركيب FRT).
ملاحظة: لدينا مخزون MARCM الجاهزة تحتوي على المورثات التالية: elavGal4، UAS-CD8-GFP، HS-flipase. FRT40A، tubGal80 / CYO. tubGal4 / TM3Sb.
ملاحظة: سوف يتوقف الموقع FRT معين على موقع طفرةفي الجينوم. على سبيل المثال، يتم استخدام FRT40A لاختبار الطفرات على ذراعه اليسرى من كروموسوم 2، مثل NOMPC (انظر 10 لمزيد من التفاصيل حول بروتوكولات MARCM). - عبر MARCM استعداد الإناث البكر للذكور التي تحتوي على طفرة في المصالح وما يقابلها من موقع FRT (على سبيل المثال، W-؛ NOMPC3، FRT40A / CYO؛ + / +). للسيطرة على فعالية تحريض MARCM، تعيين عرضية الثاني باستخدام الذباب الذكور تحتوي على نفس الموقع FRT، ولكن من دون الطفرة. استخدام نسبة تقريبية من 5 إناث: 1 ذكر في الصلبان.
2. توقيت وضع البيض
- بعد السماح الذباب للتزاوج ليلة واحدة على الأقل، نقل البالغين في قوارير جديدة مع وسائل الإعلام الجديدة. السماح الذباب لتضع بيضها في بيئة مظلمة لنحو 4 ساعات قبل نقل الصلبان مرة أخرى في قوارير جديدة. نلاحظ بداية ونهاية أوقات فترة وضع البيض.
ملاحظة: فترات أقصر مقبولة عندما يبدو أن هناك عددا كبيرا من البيض على وسائل الإعلام قبل نهاية interva 4 ساعةل.- الحفاظ على قارورة مع وجود عدد كاف من البيض (نحو أكبر من 20) وتخزينها في ضوء 12 ساعة / دورة الظلام في 22 درجة مئوية لتكون الحرارة صدمت في وقت لاحق.
ملاحظة: قوارير مع عدد قليل من البيض على وسائل الإعلام (أقل من حوالي 20) من غير المرجح أن تسفر عن أعداد كافية من الذباب الكبار لاختبار السلوك ولمصلحة من الكفاءة فمن المستحسن ألا يتم الاحتفاظ بها لإجراء مزيد من التجارب.
ملاحظة: يتم رفع الذباب لدينا مع أضواء على 08:00 حتي 08:00. لقد وجدت الوقت مساء تؤدي نقطة لكثافة البيض أعلى، وبالتالي تؤدي عادة الصلبان التوقيت بين 4-8 مساء و 8:00 منتصف الليل. الذباب تضع بيضها في RT في خزانة مظلمة ثم يتم إرجاعها إلى حاضنة في اليوم التالي حتى لا تعكر صفو دورة ضوء الظلام العادية في الحاضنة.
- الحفاظ على قارورة مع وجود عدد كاف من البيض (نحو أكبر من 20) وتخزينها في ضوء 12 ساعة / دورة الظلام في 22 درجة مئوية لتكون الحرارة صدمت في وقت لاحق.
3. تنفيذ صدمة الحرارة للحث على الميتوزى إعادة التركيب
- حوالي 85-100 ساعة بعد وضع البيض، المكان الخامسأمية في حمام مائي عند 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة. تأكد من أن مستوى المياه تصل إلى أعلى ذروة وسائل الإعلام في قارورة، ولكن لا تغرق بالكامل في قارورة لمنع اليرقات من الغرق.
- إزالة قارورة من الحمام المائي والسماح لفترة نقاهة 1 ساعة على RT.
- مكان قارورة مرة أخرى إلى 37 درجة مئوية حمام الماء لمدة 1 ساعة.
- إزالة قارورة من الحمام المائي وتخزينها في حاضنة على 12 ساعة ضوء / دورة الظلام في 22 درجة مئوية حتى eclosion.
4. التحضير لاختبار السلوكي
- بعد eclosion، تخدير الذباب على الجليد. حدد الذباب مع المورثات التي تحتوي على جميع العناصر الوراثية لMARCM وتشير من المرجح أن تكون لوحظ GFP استنساخ بعلامات التعبير استنادا إلى علامات النمط الظاهري ملاحظتها المستخدمة في مخزونات الأصل. قطع رأس الذباب مع مقص قطع القزحية.
ملاحظة: على سبيل المثال، اخترنا لالذباب دون علامات وراثية CYO (أجنحة مجعد) وبينالي الشارقة (الشعر الخشن قصبة) إلى هوية منذالذباب السنة المالية التي من شأنها أن تحتوي على جميع العناصر الوراثية اللازمة لإنشاء مناطق الفسيفساء التي تحمل علامة GFP.
ملاحظة: قطع الرأس ضروري لمنع الكبار من التحليق بعيدا عندما حفز. - وضع الذباب مقطوعة الرأس في بيئة رطبة المغلقة والسماح حوالي 10-20 ساعة من الانتعاش. استخدام الوحيد الذباب هذا الحق بأنفسهم عندما يستسلم لإجراء مزيد من التجارب. الذباب اختبار غضون 30 ساعة من قطع الرأس.
5. اختبار السلوكي
- من خلال مراقبة الذباب مقطوعة الرأس تحت المجهر مضان تشريح وتحديد استنساخ متماثل ملحوظ مع GFP في الشعر الخشن الحواس الخارجية. تسجيل اسم الشعر الخشن والجانب الأيسر أو الأيمن. للقضاء على أي تحيز محتمل، يجب على أعضاء المختبر أداء تحفيز الشعر الخشن يكون أعمى لوراثى من الشعر الخشن، من النوع البري أو متحولة.
- تثير رد فعل الاستمالة من خلال تشتيت GFP ملحوظ الشعر الخشن في اتجاه الجسم الطاير مع شعرة قاسية أو ملقط غرامة ومراقبة إعادة الساقاستجابته. إعطاء درجة واحدة إلى الذباب الذي رفع الساق في الاستجابة لتحفيز الشعر الخشن وعلى درجة من صفر إلى الذباب التي لا تتحرك أرجلهم.
ووصفت السابق الدراسات 6،7 الاستجابة الساق التي يتم استخلاصها من خلال تحفيز الشعر الخشن خاص: مذكرة. وهذا يشمل المحطة التي تستجيب لكل الشعر الخشن ونسبة الذباب التي تستجيب لتحفيز ذلك الشعر الخشن معين. سجلنا فقط عن تحركات المحطة التي كنا نتوقعها للرد على أساس تصنيف Vandervorst في 6. - إجراء خمس تجارب متباعدة 2 دقيقة بعيدا.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
نجاح هذا البروتوكول يعتمد إلى حد كبير على المحصول الكلي من الذباب قابلة للاختبار، فعالية الصدمة الحرارية للحث على إعادة التركيب الإنقسامية، والقدرة على الحصول على استجابة سلوكية قوية في الذباب حفز على فترات 2 دقيقة. وبالنظر إلى أن ما يقدر ب 12.5٪ من الأجنة تحتوي على عناصر MARCM الضرورية ويقدر 16.67٪ من البالغين أن eclose لديها القدرة على GFP التعبير، فمن الأهمية بمكان الحصول على عدد كبير من البيض خلال يضع في الوقت المناسب. مثال على توقيتها الناجح ي...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هذا البروتوكول يستخدم لفحص السلوكي الكبار للكشف عن الطفرات التي تؤثر mechanosensation في ذبابة الفاكهة. لأن مجموعة من المسوخ يحتوي قاتلة الطفرات ف العنصر من شأنه أن يحول دون فحص كبالغين، هذا البروتوكول يجعل من استخدام تقنية جينية معقدة وصف لأول مرة من قبل لي ولوه (1999) وتفصيلا كما بروتوكول وو ولوه، (2006) للتحايل على الفتك الكبار. MARCM يدفع إعادة التركيب الإنقسامية بين الكروموزومات المتماثلة لتوليد المناطق نسيلي من الخلايا متماثل. وتتميز هذه المناطق مع GFP بسبب فقدان ال...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم المصالح المالية المتنافسة.
شكر وتقدير
الكتاب أود أشكر مركز بلومينغتون الأسهم، لى تشون لوه، تشارلز زوكر، والزنبق ويوه نانج يناير لتبادل سخي من الأسهم الطيران والتالية للتمويل: SOMAS-URM (دينار وSW)، وبكالوريوس فورد كلية زمالة الصيف (لSW)، BD مؤسسة زمالة البحوث الصيفية (لCL وDL)، ورينيه وانطوني M. مارلون، MD '63 زمالة البحوث الصيفية (لDL) جيمس C. '75 وجين Colihan زمالة أبحاث الصيف (TO) من خلال خريجي / الرئيسي صندوق أبحاث الصيفي للكلية الصليب المقدس وزمالة أبحاث الصيف مؤسسة Stransky (لTO). شكر خاص لقسم الأحياء ومكتب العميد في كلية الصليب المقدس لدعم كل عمل في المختبر.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| خميرة البيرة (25 رطلا) | MP Biomedicals | ICN90331225 | يطير الطعام |
| الذرة (25 رطل) | MP Biomedicals | ICN90141125 | يطير الطعام |
| أجار (1 رطل) | شركة MoorAgar Inc. | 41004 | فلاي فود |
| تيجوسيبت (5 كجم) | جينيسي | 20-259 | طبابة |
| (1 جالون) | ماركة مطحنة السكر - تومسن فود سيرفيس | 0 2625 | فلاي فود |
| حمض البروبيونيك | فيشر | A258-500 | فلاي فود |
| حمض الفوسفوريك | فيشر | A260-500 | طبابة الفاكهة الغذائية الضيقة |
| (PS) | جينيسي | 32-109 | ثقافات الذباب |
| زجاجة قاع مربعة 6 أوقية (PP) | Genesee | 32-130 | Fly Cultures |
| Flugs - زجاجات ذبابة بلاستيكية | Genesee | 49-100 | مزارع الذباب |
| كرات رايون ، Genesee كبيرة | 51-100 | مزارع ذبابة | |
| Droso-Filler ، Genesee الضيق | 59-168 | Fly Food | |
| ، زجاجات | Genesee | 59-170 | Fly Food تحضير |
| 8A-C / محرك مختبر مدفوع بالعتاد مع حامل C-clamp 1/15 حصان ، 700 دورة في الدقيقة سرعة متغيرة ، 115 فولت ، 50/60 هرتز | خلاط كليفلاند | 8A-C | يطير إعداد الطعام |
| مغلف بالماء غلاية | تطير إعداد الطعام | ||
| النهارية | فورما درجة | الحرارة العلمية ودورة الضوء / الظلام التي يتم التحكم | |
| صدمة | |||
| MicroScissors | أدوات العلوم الدقيقة | 15000-08 | لإزالة الرؤوس |
| Fluroscence تشريح المجهر | Zeiss | SteREO Discovery V8 & nbsp ؛ | مع مرشح تمرير النطاق مكعب GFP (KSC295-814D |
| Fluroscence Light Source | Zeiss | X-Cite 120 | الخفيفة الأنابيب يجعل هذا من السهل تكوينه |
| كاميرا لنطاق | Zeiss | AxioCam ICc1 | |
| برنامج الحصول على الصور | Zeiss | ||
| دلو | للخمرة الباردة | ||
| صينية | لقطع رأس الأنثيزيا الباردة | ||
| صناديق | لاستعادة الذباب منزوع الكفاءة في بيئة رطبة |
المراجع
- Grünert, U., Gnatzy, W. K+ and Ca++ in the receptor lymph of arthropod cuticular mechanoreceptors. J Comp Physiol A. 161, 329-333 (1987).
- Kernan, M. J. Mechanotransduction and auditory transduction in Drosophila. Pflugers Arch. 454, 703-720 (2007).
- Gillespie, P. G., Walker, R. G. Molecular basis of mechanosensory transduction. Nature. 413, 194-202 (2001).
- Corfas, G., Dudai, Y. Adaptation and fatigue of a mechanosensory neuron in wild-type Drosophila and in memory mutants. J Neurosci. 10, 491-499 (1990).
- Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila. Neuron. 12, 1195-1206 (1994).
- Vandervorst, P., Ghysen, A. Genetic control of sensory connections in Drosophila. Nature. 286, 65-67 (1980).
- Corfas, G., Dudai, Y. Habituation and dishabituation of a cleaning reflex in normal and mutant Drosophila. J Neurosci. 9, 56-62 (1989).
- Chen, J., et al. Discovery-based science education: functional genomic dissection in Drosophila by undergraduate researchers. PLoS Biol. 3, e59(2005).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis. Neuron. 22, 451-461 (1999).
- Wu, J. S., Luo, L. A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila. Nature Protocols. 1, 2583-2589 (2006).
- Eberl, D. F., Hardy, R. W., Kernan, M. J. Genetically similar transduction mechanisms for touch and hearing in Drosophila. J Neurosci. 20, 5981-5988 (2000).
- Walker, R. G., Willingham, A. T., Zuker, C. S. A Drosophila mechanosensory transduction channel. Science. 287, 2229-2234 (2000).
- Yan, Z., et al. Drosophila NOMPC is a mechanotransduction channel subunit for gentle-touch sensation. Nature. 493, 221-225 (2013).
- Arnadottir, J., Chalfie, M. Eukaryotic Mechanosensitive Channels. Annual Review of Biophysics. 39, 111-137 (2010).
- Christensen, A. P., Corey, D. P. TRP channels in mechanosensation: direct or indirect activation? Nature Reviews Neuroscience. 8, 510-521 (2007).
- Cheng, L. E., Song, W., Looger, L. L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. The Role of the TRP Channel NompC in Drosophila Larval and Adult Locomotion. Neuron. 67, 373-380 (2010).
- Lee, J., Moon, S., Cha, Y., Chung, Y. D. Drosophila TRPN(=NOMPC) channel localizes to the distal end of mechanosensory cilia. PLoS One. 5, e11012(2010).
- Liang, X., Madrid, J., Saleh, H. S., Howard, J. NOMPC, a Member of the TRP Channel Family, Localizes to the Tubular Body and Distal Cilium of Drosophila Campaniform and Chordotonal Receptor Cells. Cytoskeleton. 68, 1-7 (2011).
- de Vries, S. E., Clandinin, T. R. Loom-sensitive neurons link computation to action in the Drosophila visual system. Curr Biol. 22, 353-362 (2012).
- Jarman, A. P. Studies of mechanosensation using the fly. Hum Mol Genet. 11, 1215-1218 (2002).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
