نصف الخطوات الرئيسية للاستشعار الحيوي باستخدام ترانزستورات التأثير الميداني للأسلاك النانوية من البولي سيليكون ، بما في ذلك تحضير الجهاز وتثبيت وتأكيد مسبار جزيئي للحمض النووي على سطح الأسلاك النانوية ، بالإضافة إلى شروط استشعار الحمض النووي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نصف الخطوات الرئيسية للاستشعار الحيوي باستخدام ترانزستورات التأثير الميداني للأسلاك النانوية من البولي سيليكون ، بما في ذلك تحضير الجهاز وتثبيت وتأكيد مسبار جزيئي للحمض النووي على سطح الأسلاك النانوية ، بالإضافة إلى شروط استشعار الحمض النووي.
تعد المراقبة باستخدام المؤشرات الحيوية أمرا بالغ الأهمية للكشف المبكر والتدخل السريع والحد من حدوث الأمراض. في هذه الدراسة ، نصف تحضير ترانزستورات التأثير الميداني متعددة الكريستالات ذات الأسلاك النانوية المصنوعة من السيليكون (pSNWFETs) التي تعمل كأجهزة استشعار حيوي للكشف عن المؤشرات الحيوية. يتم تقديم بروتوكول للاستشعار الكيميائي والجزيئي الحيوي باستخدام pSNWFETs. تم إثبات جهاز pSNWFET على أنه محول طاقة واعد لتطبيقات الاستشعار الحيوي في الوقت الفعلي والخالية من الملصقات وعالية الحساسية. إن موصلية قناة المصدر / التصريف ل pSNWFET حساسة للتغيرات في البيئة حول سطح الأسلاك النانوية المصنوعة من السيليكون (SNW). وبالتالي ، من خلال تثبيت المجسات على سطح SNW ، يمكن استخدام pSNWFET للكشف عن الأهداف الحيوية المختلفة التي تتراوح من الجزيئات الصغيرة (الدوبامين) إلى الجزيئات الكبيرة (الحمض النووي والبروتينات). يعد تثبيت المسبار الحيوي على سطح SNW ، وهو إجراء متعدد الخطوات ، أمرا حيويا لتحديد خصوصية المستشعر الحيوي. من الضروري أن يتم تنفيذ كل خطوة من خطوات إجراء الشلل بشكل صحيح. لقد تحققنا من تعديلات السطح من خلال المراقبة المباشرة للتحول في الخصائص الكهربائية ل pSNWFET بعد كل خطوة تعديل. بالإضافة إلى ذلك ، تم استخدام التحليل الطيفي للإلكترون الضوئي بالأشعة السينية لفحص تكوين السطح بعد كل تعديل. أخيرا ، أظهرنا استشعار الحمض النووي على pSNWFET. يوفر هذا البروتوكول إجراءات خطوة بخطوة للتحقق من تجميد المسبار الحيوي وتطبيق الاستشعار الحيوي للحمض النووي اللاحق.
أسلاك متناهية الصغر السيليكون الترانزستورات مجال التأثير (SNWFETs) لديها مزايا من حساسية فائقة والاستجابات الكهربائية مباشرة لاختلاف المسؤول البيئي. في نوع ن SNWFETs على سبيل المثال، عندما يقترب جزيء سلبا (أو إيجابا) اتهم أسلاك متناهية الصغر السيليكون (SNW)، تنضب شركات الطيران في SNW (أو تجمع). ونتيجة لذلك، والتوصيل من SNWFET انخفاض (أو زيادة) 1. ولذلك، فإن أي جزيء اتهم بالقرب من سطح SNW الجهاز SNWFET يمكن الكشف. الجزيئات الحيوية الحيوية بما في ذلك الإنزيمات والبروتينات، النيوكليوتيدات، والعديد من الجزيئات الموجودة على سطح الخلية هي حاملات الشحنة ويمكن رصدها باستخدام SNWFETs. مع تعديلات مناسبة، وخاصة شل حركة تحقيقا الجزيئية البيولوجية على SNW، يمكن وضع SNWFET إلى جهاز الاستشعار البيولوجي خالية من التسمية.
المراقبة باستخدام المؤشرات الحيوية هو أمر حاسم لتشخيص الأمراض. كما هو مبين في الجدول رقم 1، وقد استخدمت العديد من الدراسات NWFEأجهزة الاستشعار على أساس T-مجانا التسمية، فائقة الحساسية، وكشف في الوقت الحقيقي من الأهداف الحيوية المختلفة، بما في ذلك فيروس واحد 2، أدينوسين ثلاثي الفوسفات وكيناز ملزمة 3، الإشارات العصبية 4، ايونات المعادن 5،6، والسموم البكتيرية 7، 8 الدوبامين، والحمض النووي 11/09، RNA 12،13، الانزيم والمؤشرات الحيوية سرطان 14-19، وهرمونات الإنسان 20، والسيتوكينات 21،22. وقد أظهرت هذه الدراسات أن أجهزة الاستشعار على أساس NWFET-تمثل منصة كشف قوية لمجموعة واسعة من الأنواع البيولوجية والكيميائية في محلول.
في أجهزة الاستشعار مقرها SNWFET، التحقيق ثبتوا على سطح SNW الجهاز يعترف biotarget محددة. شل حركة لbioprobe عادة ما ينطوي على سلسلة من الخطوات، وأنه من الأهمية بمكان أن كل خطوة يتم تنفيذ بشكل صحيح لضمان حسن سير العمل في جهاز الاستشعار البيولوجي. وقد تم تطوير تقنيات مختلفة لتحليل الصورةتكوين urface، بما في ذلك الأشعة السينية الضوئية الطيفي (XPS)، قياس إهليلجي، وقياس زاوية الاتصال، القوة الذرية المجهر (AFM)، والمجهر الإلكتروني الماسح (SEM). أساليب مثل فؤاد ووزارة شؤون المرأة توفر دليلا مباشرا على تجميد bioprobe على الجهاز أسلاك متناهية الصغر، في حين أساليب مثل XPS، قياس إهليلجي، وقياس زاوية الاتصال تعتمد على تجارب موازية أجريت على مواد أخرى مماثلة. في هذا التقرير، وصفنا تأكيد كل خطوة التعديل باستخدام طريقتين مستقلة. يستخدم XPS لفحص تركيز ذرات معينة على رقائق البولي سيليكون، ويتم قياس التغيرات في الخصائص الكهربائية من الجهاز مباشرة إلى تأكيد الاختلاف تهمة على سطح SNW. نحن نوظف biosensing الحمض النووي باستخدام SNWFETs الكريستالات (pSNWFETs) كمثال لتوضيح هذا البروتوكول. شل حركة مسبار الحمض النووي على سطح SNW تتضمن ثلاث خطوات: تعديل مجموعة أمين على سطح الهيدروكسيل الأصلي من SNW، آلتعديل مجموعة dehyde، و5'aminomodified-تجميد DNA التحقيق. في كل خطوة تعديل، ويمكن للجهاز الكشف عن مباشرة التباين في المسؤول عن مجموعة وظيفية ثبتوا على سطح SNW، لأن التهم سطح تسبب تغيرات المحتملة بينية المحلية خلال عازل بوابة التي تغير القناة الحالية وتصرف 1. رسوم المحيطة سطح SNW يمكن أن تعدل كهربائيا الخصائص الكهربائية للجهاز pSNWFET. ولذلك، فإن خصائص سطح SNW تلعب دورا حاسما في تحديد الخصائص الكهربائية للأجهزة pSNWFET. في الإجراءات المبلغ عنها، وتجميد لbioprobe على سطح SNW يمكن تحديد مباشرة، وأكد من خلال قياس الكهربائية، وإعداد الجهاز لتطبيقات biosensing.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
1. تصنيع والحفاظ على أجهزة pSNWFET
2. المعالجة المسبقة للجهاز
3. الشلل من مسبار الحمض النووي على سطح الجهاز
4. تأكيد وتحليل تعديل على سطح pSNWFET
5. الحمض النووي Biosensing
ملاحظة: في تجربة نموذجية، وأنا D - يتم تحديد الخامس ب G منحنى ثلاث مرات للتأكد من عدم وجود اختلاف آخر هو observed.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وقد تم الإبلاغ عن SNWFETs مختلف لتكون بمثابة محولات الطاقة من أجهزة الاستشعار (الجدول 1). SNWFETs واحدة البلورية (sSNWFETs) وpSNWFETs تظهر الخصائص الكهربائية للمقارنة كما محولات الطاقة في المحاليل المائية، وتم الإبلاغ عن كل من لدينا العديد من التطبيقات biosensing. ميزة مفيدة للجهاز pSNWFET المستخدمة في هذه الدراسة هي في إجراء بسيط وتصنيع منخفضة التكلفة. ويوضح الشكل 1A الخطوات الرئيسية المشاركة في افتعال pSNWFET. وق...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تسويق من أعلى إلى أسفل ونهج تلفيق من أسفل إلى أعلى لsSNWFETs يعتبر صعبا نظرا لتكلفته 32،33، SNW السيطرة على الموقف 34،35، وانخفاض إنتاجها على نطاق و36. على النقيض من ذلك، افتعال pSNWFETs بسيطة ومنخفضة التكلفة 37. من خلال نهج من أعلى إلى أسفل وجانب تقنية تشكيل جدار فاصل (الشكل 1)، وحجم SNW يمكن السيطرة عليها عن طريق ضبط مدة الحفر البلازما رد الفعل. إجراءات إعداد أسلاك من pSNWFET هو موضح في الشكل 1A يمكن أ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
تم دعم هذا البحث ماليا من قبل وزارة العلوم والتكنولوجيا ، تايوان (104-2514-S-009 -001 ، 104-2627-M-009-001 و 102-2311-B-009-004-MY3). نشكر المختبرات الوطنية لأجهزة النانو (NDL) على مساعدتها القيمة أثناء تصنيع الجهاز وتحليله.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أسيتون | إيكو | AH-3102 | |
| (3-أمونوبروبيل) ثلاثي إيثوكسيسيلان (APTES) ، & ge ؛ 98٪ | Sigma-Aldrich | A3648 | خطر |
| الإيثانول ، اللامائي ، 99.5٪ | ECHO | 484000203108A-72EC | |
| محلول الجلوتارالديهايد (GA) ، 50٪ | Sigma-Aldrich | G7651 | تجنب |
| سيانوبوروهيدريد الصوديوم الخفيف ، & ge ؛ 95.0٪ | Fluka | 71435 | خطر وخفيف |
| فوسفات الصوديوم ثلاثي القاعدة دوديكاهيدرات ، & 98٪ | سيجما | 04277 | |
| حمض الفوسفوريك ، & ge ؛ 99.0٪ | فلوكا | 79622 | Deliquescent |
| Photoresist (iP3650) | طوكيو Ohka Kogyo Co.، LTD | THMR-iP3650 HP | |
| قليل النوكليوتيدات الاصطناعية ، HPLC منقى | Protech Technology | ||
| Tris (hydroxymethyl) aminomethane (Tris) ، & ge ؛ 99.8٪ | USB | 75825 | |
| Keithley 2636 System SourceMeter | Keithley | ||
| SR830 DSP قفل مكبر للصوت | ستانفورد أنظمة | ||
| SR570 مضخم التيار منخفض الضوضاء | أنظمة أبحاث ستانفورد | ||
| Ni PXI Express | National Instruments |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.