يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

إدارة والكشف عن علامات البروتين على المفصليات للبحوث تشتت

7K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/53693

⸱

يناير 28, 2016

 , 
1USDA-ARS, Arid-Land Agricultural Research Center

في هذه المقالة

ملخص

غالبا ما تستخدم البروتينات

لتمييز المفصليات لأبحاث التشتت. يتم توضيح طرق إدارة علامات البروتين الداخلية والخارجية على المفصليات. كما يتم توضيح تقنيات الكشف عن علامات البروتين ، إما من خلال فحوصات الممتز المناعي غير المباشرة أو المرتبطة بإنزيم الساندويتش (ELISAs).

الملخص

وغالبا ما يتطلب مراقبة الحركة المفصلية إلى فهم أفضل لديناميات المرتبطة السكاني وأنماط النثر، وتفضيلات النبات المضيف، والتفاعلات البيئية الأخرى. وعادة ما تعقب المفصليات في الطبيعة عن طريق وضع علامات عليها مع علامة فريدة من نوعها ومن ثم إعادة جمعها عبر الزمان والمكان لتحديد قدرات تشتتهم. بالإضافة إلى علامات المادية الفعلية، مثل الغبار الملون أو الطلاء، وأثبتت أنواع مختلفة من البروتينات فعالة جدا لوسم المفصليات للبحث البيئي. البروتينات يمكن أن تدار داخليا و / أو خارجيا. ويمكن بعد ذلك يتم الكشف عن البروتينات على المفصليات استعادت مع انزيم مرتبط المناعي فحص بروتين معين (ELISA). نحن هنا وصف بروتوكولات للخارجيا وداخليا علامات المفصليات مع البروتين. وأظهرت مثالين تجريبية بسيطة: (1) علامة البروتين الداخلية التي أدخلت على حشرة من خلال توفير نظام غذائي التخصيب من البروتين و (2) علامة البروتين الخارجية موضعيا لpplied لحشرة باستخدام البخاخات الطبية. نحن ثم تتصل دليل خطوة بخطوة من الساندويتش وطرق ELISA غير المباشرة المستخدمة للكشف عن علامات البروتين على الحشرات. في هذه المظاهرة، وتناقش مختلف جوانب اقتناء وكشف عن علامات البروتين على المفصليات للعلامة الافراج عن الاستيلاء، علامة التقاط، وأنواع علامة التقاط النفس من البحوث، جنبا إلى جنب مع مختلف الطرق التي كان الإجراء immunomarking تكييفها لتلائم مجموعة واسعة من أهداف البحث.

المقدمة

تتبع حركة الآفات المفصلية، وأعداء الطبيعية (الطفيليات والمفترسات)، والملقحات في الطبيعة أمر ضروري لفهم أفضل لكيفية تحسين خدمات النظام الإيكولوجي. المكون الرئيسي لمعظم أنواع البحوث تشتت هو وجود طريقة يمكن الاعتماد عليها لوضع علامة على المفصلية (ق) من الفائدة. مجموعة متنوعة من المواد (على سبيل المثال، والدهانات والأصباغ والأتربة الملونة، والعلامات، والعناصر النادرة، البروتينات) وقد استخدمت للاحتفال المفصليات لتقييم ديناميات السكان، وتشتيت قدراته، والتغذية والسلوكيات، والتفاعلات البيئية الأخرى 1،2.

ومدى ملاءمة علامة تستخدم لتفريق أي بحث معين يتوقف على نوع الدراسة التي تجري. هناك ثلاثة تصنيفات واسعة لوضع علامات المفصليات: (1) علامة الإفراج الاستيلاء (MRR)، (2) علامة التقاط، و (3) علامة التقاط النفس. للبحث علامة الافراج عن الاستيلاء، المحقق عادة يصادف المفصليات جماعي في laboratoراي والنشرات لهم في نقطة مركزية في هذا المجال. ثم استعادت المفصليات في مختلف فترات الزمنية والمكانية باستخدام أجهزة جمع مختلفة (على سبيل المثال، شبكة الاجتياح، فراغ، فخ لزجة) 3،4،5. ثم يتم فحص العينات استعاد لعلامة محددة للتمييز الإفراج عن أفراد الأصلي. للبحث علامة التقاط، المحقق عادة تنطبق علامة مباشرة في مجال استخدام معدات الرش (على سبيل المثال، بخاخ على ظهره، والازدهار وبخاخ فوهة). أفضل علامات للبحوث علامة التقاط غير مكلفة وتطبيقها بسهولة على الموائل والمفصلية ل. للبحث علامة التقاط النفس، المحقق عادة تنطبق علامات إلى الطعم المفصلية 6،7 أو عش مدخل 8. في المقابل، فإن المفصلية يمثل نفسه داخليا من قبل التهام الطعم ملحوظ أو خارجيا من قبل "تنظيف" حتى مقابل المارك فور خروجها من العش.

كما ذكر أعلاه، فقد كان لنا العديد من أنواع علاماتإد وضع علامة مجموعة متنوعة من الأنواع المفصلية. ومع ذلك، عدد قليل جدا مفيدة للجميع ثلاثة من هذه الفئات البحوث النثر. وكان التطور الإجراء البروتين immunomarking انجازا كبيرا لوسم الحشرات. Immunomarking يضع تسمية البروتين على المفصليات سواء داخليا أو خارجيا والتي، بدورها، تم الكشف من قبل انزيم مرتبط المناعي فحص محدد لمكافحة البروتين (ELISA). وكانت أول علامات هذا البروتين المناعي تستخدم الأرانب (مفتش) والدجاج مفتش / IGY 9،10. فإنها تبين أن علامات فعالة جدا لMRR والبحوث علامة التقاط النفس (انظر المناقشة). للأسف، والبروتينات مفتش / IGY مكلفة وبالتالي فهي ليست عملية للبحث علامة التقاط ومعظم أنواع البحوث علامة التقاط النفس. وفي وقت لاحق، تم تطوير الجيل الثاني من ELISAs كشف عن البروتين للبروتينات الموجودة في بياض البيض الدجاج (الزلال)، حليب البقر (الكازين) وحليب الصويا (التربسين البروتين المانع). كل فحص حساس جدا ومحددة، وأكثرالأهم من ذلك، يستخدم البروتينات التي هي أقل تكلفة بكثير من البروتينات مفتش / IGY 11. وقد أثبتت هذه البروتينات الفعال لMRR، علامة التقاط، والبحوث علامة التقاط النفس (انظر المناقشة).

في هذه المقالة، وصفنا وشرح كيفية إجراء علامة البروتين الدراسات الاحتفاظ المختبر. مثل هذه الدراسات هي المرحلة الأولى من الأبحاث اللازمة لأي نوع من الدراسة تشتت المجال. على وجه التحديد، فمن الأهمية بمكان أن المحققين أعرف كم من الوقت سيتم الاحتفاظ علامة على الأنواع المفصلية المستهدفة قبل الشروع في دراسات تشتت المجال. هنا، وصفنا وشرح كيفية داخليا وخارجيا بمناسبة الحشرات لMRR، علامة التقاط، وعلامة التقاط النفس دراسات نوع الحقل. نحن بعد ذلك شرح كيفية الكشف عن وجود علامات مع ELISAs غير المباشرة وشطيرة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. الأقسام الداخلية، الاحتفاظ، والكشف الداخلي

  1. الإجراء بمناسبة الداخلي
    1. جمع الحشرات من الفائدة (ن ≈ 100 فرد) من مستعمرة المختبر تربى على النظام الغذائي الاصطناعي أو من الميدان وتقسم إلى حاويتين تربية نظيفة.
    2. وضع حزمة العادية 20 مل نظام غذائي (لا تحمل علامات علاج المراقبة السلبية) في واحدة من الحاويات. تكملة 20 مل علبة النظام الغذائي الاصطناعي الثانية مع 1.0 مل من 1.0 ملغ / مل الدجاج مفتش / IGY الحل، تخلط جيدا، ووضعه في حاوية أخرى.
      ملاحظة: إذا لم يكن لدى الحشرة من مصلحة نظام غذائي الاصطناعي، يمكن وضع علامة على أو في أي نظام غذائي مستدام وعادة ما على (على سبيل المثال، والفاصوليا الخضراء والبيض العث والماء والسكر والعسل).
    3. السماح للحشرات لاستئناف نشاط التغذية لمدة 24 ساعة.
  2. علامة الداخلية إجراء الاحتفاظ
    1. إزالة الحزم النظام الغذائي من كل حاوية وتوريد الحشرات ثإيث مصدر الغذاء أخرى للحفاظ عليها خلال مدة التجربة (على سبيل المثال، والفاصوليا الخضراء).
    2. جمع لفيف (ن = 20) من الحشرات يوميا (أو في أي الفاصل الزمني المطلوب) من كل معاملة وتجمد على الفور في -20 ° C.
  3. شطيرة إجراء ELISA
    1. إضافة 50 ميكرولتر من أرنب مكافحة الدجاج IGY الأجسام المضادة الأولية المخفف 1: 500 في تريس مخزنة المالحة (TBS) إلى كل بئر من ELISA صفيحة ميكروسكوبية نظيفة واحتضان مدة لا تقل عن 1 ساعة على RT (ملاحظة: microplates يمكن أيضا أن تكون المحتضنة O / N عند 4 درجات مئوية).
    2. تجاهل الضد من لوحة ومنع كل بئر مع 300 ميكرولتر من 1.0٪ الخالي من الدسم حل الحليب الجاف لمدة 30 دقيقة.
    3. في انتظار الخطوات الحضانة السابقة، ضع الحشرات المجمدة بشكل فردي في 1.6 مل أنابيب microcentrifuge مع 1.0 مل من TBS.
    4. تطحن كل الحشرات مع مدقة نظيفة حتى المتجانس تماما وإضافة 100 ميكرولتر من كل عينة لبئر الفردي للELISAطبق. السماح للعينات لاحتضان في RT لمدة 1 ساعة.
    5. إضافة 100 ميكرولتر من سلبية (TBS فقط) وإيجابية (بياض البيض في TBS) ضوابط لالآبار في العمود الأول من كل لوحة ELISA. أيضا، إضافة 100 ميكرولتر من الضوابط الحشرات السلبية (الحشرات لا تحمل علامات) إلى 8 آبار في العمود الأخير من كل لوحة (الشكل 1). السماح للعينات التحكم لاحتضان في RT لمدة 1 ساعة. لاحظ أن النموذج المقدم في الشكل رقم 1 هو القالب نستخدمها لفحوصات موحدة لدينا. وضع العينات في الآبار متروك للسلطة التقديرية للباحث.
    6. غسل كل بئر ثلاث مرات مع الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) -tween ثم إضافة 50 ميكرولتر من أرنب مكافحة الدجاج مفتش / IGY مترافق مع الفجل البيروكسيديز المخفف 1: 10000 في 1٪ محلول الحليب واحتضان لمدة 1 ساعة على RT.
    7. غسل كل بئر ثلاث مرات مع PBS-توين وإضافة 50 ميكرولتر من tetramethylbenzidine (TMB) الركيزة إلى كل بئر.
    8. بعد 10 دقيقة، وقراءة الآبارمع معمل صفيحة ميكروسكوبية وضعت في طول موجي 650 نانومتر.

figure-protocol-1
الشكل 1. رسم تخطيطي يظهر التسميات جيدا موحدة تستخدم لنموذجي 96 جيدا ELISA صفيحة ميكروسكوبية. كل لوحة تحتوي على 7 آبار مخصصة لضوابط السلبية المالحة تريس مخزنة (TBS)، وهي مخصصة بشكل جيد لعنصر تحكم البروتين الإيجابية (نقاط البيع على Ctrl)، 80 الآبار الفردية المخصصة للحشرات استعادت (نموذج 1 ... 80)، و 8 آبار مخصصة لتحمل أية علامات (السلبية) الضوابط الحشرات (NEG السيطرة 1 ... 8). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

2. الخارجية مارك، الاحتفاظ، والكشف الداخلي

  1. الإجراء بمناسبة الخارجي
    1. جمع الحشرات من الفائدة (ن ≈ 100الأفراد) من مستعمرة المختبر أو من مجال ومكان إلى قسمين 1.0 L حاويات من البلاستيك مع وجود ثقب قطره 2.5 سم لكمات من جانب كل حاوية.
    2. رش الحشرات في الحاوية الأولى مع 1.0 مل من درهم 2 O (العلاج السيطرة السلبية) باستخدام البخاخات الطبية. رش الحشرات في الحاويات الثانية مع 1.0 مل من محلول 5.0٪ من بياض البيض والدجاج باستخدام البخاخات الطبية.
    3. نعلق خرطوم من البخاخات لمنفذ الهواء المختبرات القياسية ثم قم بإدراج الفم من البخاخات إلى 2.5 سم حفرة من الحاوية. ثم، بدوره على منفذ الهواء تدريجيا حتى تنتج البخاخات بخار.
    4. مواصلة رش (وسم) حتى تم الاستغناء عن حل بياض البيض (حوالي 2-5 دقائق).
    5. إزالة البخاخات ووضع الفلين في حفرة من الحاويات البلاستيكية. السماح للحشرات على الوقوف في RT حتى جفت الحل تماما.
  2. علامة الخارجية إجراء الاحتفاظ
    1. وضع كل معاملة الحشرات الجافة في وعاء منفصل تربية نظيفة لتجنب التعرض لمزيد من العلامة.
    2. إضافة الغذاء والماء إلى حاويات نظيفة للحفاظ على الحشرات خلال مدة الدراسة.
    3. جمع لفيف (ن = 20) من الحشرات من كل معاملة يوميا وتجمد على الفور في -20 ° C.
  3. الإجراء ELISA غير المباشرة
    1. وضع الحشرات المجمدة بشكل فردي إلى 1.6 مل أنابيب microcentrifuge وإضافة 1.0 مل من TBS.
    2. نقع العينات لمدة 1 ساعة على مجموعة شاكر المداري في 120 دورة في الدقيقة.
    3. إضافة عناصر تحكم السلبية والإيجابية كما هو موضح في الخطوة 1.3.5.
    4. بعد النقع، ماصة قسامة 100 ميكرولتر من كل عينة في واحدة من 80 بئرا عينة المعينة على 96 الجديدة جيدا لوحة ELISA كما هو مبين في الشكل 1 السماح للعينات لاحتضان لمدة 1 ساعة على RT (ملاحظة: في microplates يمكن أيضا أن تكون O المحتضنة / N عند 4 درجات مئوية).
    5. غسل الآبار ثلاث مرات معPBS-توين ثم قم بإضافة 300 ميكرولتر من الفوسفات مخزنة المالحة التي تحتوي على 1٪ ألبومين المصل البقري (PBS-BSA) إلى كل بئر.
    6. بعد 30 دقيقة في RT يغسل مرتين مع PBS-توين.
    7. إضافة 50 ميكرولتر من أرنب مكافحة البيض الأجسام المضادة الأولية الألبومين المخفف 1: 8000 في برنامج تلفزيوني BSA-Silwet (0.05٪) إلى كل بئر واحتضان لمدة 1 ساعة على RT.
    8. غسل كل بئر ثلاث مرات مع PBS-توين ثم إضافة 50 ميكرولتر من الماعز المضادة للأرنب مفتش مترافق مع الفجل البيروكسيديز المخفف 1: 2000 في برنامج تلفزيوني BSA-Silwet (0.05٪) لمدة 1 ساعة على RT.
    9. غسل كل بئر ثلاث مرات مع PBS-توين وإضافة 50 ميكرولتر من TMB الركيزة إلى كل بئر.
    10. بعد 10 دقيقة، وقراءة الآبار مع معمل صفيحة ميكروسكوبية وضعت في طول موجي 650 نانومتر.

تحليل 3. البيانات

  1. حساب قيمة الامتصاصية متوسط ​​من 8 الحشرات سيطرة سلبية على كل لوحة ELISA ثم حساب الانحراف المعياري استنادا إلى ضوابط السلبية المجمعة جيئة وذهابام كل من لوحات ELISA لدراسة معينة 12.
  2. إضافة ست مرات الانحراف المعياري المجمعة إلى الوسط التي تم الحصول عليها عن كل لوحة ELISA للحصول على قيمة العتبة إيجابية ELISA. يعتبر أي عينة الحشرات ذات العوائد قيمة الامتصاصية مساوية أو أكبر من هذه القيمة أن تكون إيجابية لوجود علامة البروتين.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

الداخلية بمناسبة:

وأظهرت نتائج الاختبار الداخلي الاحتفاظ علامة في الشكل 2A. كانت محسوبة ELISA قيمة العتبة الحرجة 0.054. عموما (جميع التواريخ عينة أربعة مجتمعة)، والحشرات علاجها بدون بروتين أسفرت القيم المنخفضة باستمرار ELISA (X = 0.038 ± 0.002، ن = 80). على العكس، كل من الحشرات تتغذى على البروتين المخصب أس...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وقد وصفت الإجراء immunomarking البروتين المفصلية أول ما يقرب من ربع قرن منذ 9. منذ ذلك الحين، تم تكييفها الإجراء لدراسة أنماط تشتت تشكيلة واسعة من المفصليات باستخدام تدار داخليا وخارجيا مفتش / IgYs. وقد أثبتت هذه البروتينات علامات ثابتة لمجموعة واسعة من أنواع الحشرات اختبار حتى الآن. لكن، وكما ذكر أعلاه، فإن القيود الرئيسية لاستخدام مفتش / IgYs هي أنها مكلفة للغاية. ونتيجة لذلك، مفتش / IgYs لا تصلح إلا لMRR ودراسات النوع علامات النفس حيث يمكن أن تكون علامة دفعات كبيرة م...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ذكر الأسماء التجارية أو المنتجات التجارية في هذا المنشور هو فقط لغرض توفير معلومات محددة، ولا يعني توصية أو تأييد من قبل وزارة الزراعة الأمريكية. USDA هو مزود تكافؤ الفرص والعمل.

شكر وتقدير

تم توفير التمويل من قبل وزارة الزراعة الأميركية كريس 5347-22620-021-00D و، في جزء منه، من قبل الزراعة والأغذية بحوث مبادرة التنافسية منحة لا. 2011-67009-30141 من المعهد الوطني USDA الأغذية والزراعة. ونحن ممتنون للدعم الفني للجوانا ناصيف. كما نشكر بول بيكر، ديفيد هورتون، دييغو نييتو، وفرانسيس Sivakoff لتوفير بعض الصور المستخدمة في الشكل (3).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
حاوية تخزين المواد الغذائية (لتربية الحشرات)Rubbermaid / Tupperwareأحجام مختلفةمختلف المصنعين والبائعين. يتم لصق النسيج الشبكي في نافذة
البخاخات صغيرة الحجم (ضباب صغير)Teleflex-Hudson RCI1881متوفر عبر الإنترنت وفي متاجر المستلزمات الطبية. ستعمل العلامات التجارية الأخرى أيضا.
أنابيب الطرد المركزي الدقيقة ، 1.6 مل مع غطاءمنتجات مختبر كونتيننتال4445.Xأي نوع مماثل سيعمل. نحن نفضل العلامات التجارية التي يسهل فتح الأغطية.
صندوق تخزين الستايروفوم لأنابيب الطرد المركزي الدقيقة (شبكة 5 × 20) RPICorp.145746هذا التصميم جميل لأنه لا يزدحم الأنابيب.
موزع ، مكررEppendorf4982000322أي شيء مشابه سيساعد في تسريع الاستغناء.
المدقة ، مطاحن المناديل البلاستيكية التي تستخدم لمرة واحدة ، 1.5 ملKimble Chase749521-1500متوفرة مع العديد من البائعين. يمكن تنظيف المدقة وتعقيمها لإعادة استخدامها.
ألواح BD Falcon ELISA ، 96 بئر (قاع مسطح)BD351172
ماصة Ovation ، يدوية (20-200 وميكرو ؛ ل)VistaLab1057-0200 أو 1070-0200أي نوع مماثل سيعمل. هذا النموذج مريح.
الخزانات ، الكاشف المعقمVistaLab4054-1000أي شيء مشابه سيعمل.
ماصة إلكترونية ، 8 قنوات (50-1،200 وميكرو ؛ ل) (Biohit eLine)Sartorius730391إذا كان عليك اختيار نموذج إلكتروني واحد ، فهذا الحجم هو الأكثر فائدة.
ماصة إلكترونية ، 8 قنوات (10-300 & micro ؛ ل) (Biohit eLine)Sartorius730361أي شيء مشابه سينجح.
مشعب ، غسالة لوحة متعددة الآبار (8 أوضاع ، مستقيمة)Sigma-AldrichZ369802 أي شيء مشابه سيعمل مع غسل الألواح يدويا.
قارئ صفيحة دقيقة مع الكشف عن الامتصاصالأجهزة الجزيئيةSpectraMax 250أي شيء مشابه سيعمل.
دجاج IgG / IgYالولايات المتحدة البيولوجيةI1903-15Rمتوفر أيضا من مصادر أخرى
متجر بقالةبياضالبيض " جميع البيض", " مضارب البيض" ، <م > وما إلى ذلك < / م >امزج 5 مل مع 95 مل من الكثافة العميقة < الفرعية >2 < / فرعية > O لمحلول 5 ٪
تريس (قاعدة تريزما )سيجما ألدريتشT15032.42 جم / لتر لصنع كلوريد
الصوديوم TBS (كلوريد الصوديوم )سيجما ألدريتشS988829.22 جم / لتر لصنع TBS و 8.0 & nbsp ؛ g⁠/⁠ L ل PBS
ثنائي القاعدة فوسفات الصوديوم (Na2< / sub>HPO4< / sub>)Sigma-AldrichS08761.14 جم / لتر لفوسفات
البوتاسيوم أحادي القاعدة PBS (KH2< / sub>PO4< / sub>)Sigma-AldrichP56550.2 جم / لتر
لكلوريد البوتاسيوم PBS (KCl)Sigma-AldrichP95410.2 جم / لتر ل PBS
Tween 20 ، درجةEIA Sigma-AldrichP1379أضف 0.5 مل لكل لتر إلى PBS بعد إذابة الأملاح.
PBS مع 1٪ BSASigma-AldrichP3688امزج عبوة واحدة في 1 لتر dH2< / sub>O
المضاد للدجاج IgY (IgG) (جزيء كامل) أنتج في الأرانب (1: 500)Sigma-AldrichC6409Mix 100 & micro ؛ ل في 50 مل ملعقة كبيرة
حليب جاف أو حليب مجفف أو طازج (1٪)بقالةامزج 10 جم مع 1 لتر dH2< / sub>O لمحلول 1٪
أجسام مضادة للدجاج IgY (IgG) (جزيء كامل) - أجسام مضادة للبيروكسيداز المنتجة في الأرانب (1: 10،000)Sigma-AldrichA9046Mix 100 & micro ؛ ل في 1 لتر من 1٪ حليب
مضاد لألبومين بيض الدجاج ينتج في الأرانب (1: 8،000)سيجما ألدريتشC6534تمييع 125 وميكرو ؛ ل في 1 لتر PBS-BSA
الماعز المضاد للأرانب IgG بيروكسيداز مترافق (1: 2،000)سيجما ألدريتشA6154تمييع 0.5 مل في 1 لتر PBS-BSA ، ثم أضف 1.3 & nbsp ؛ مل Silwet
Vac-In-Stuff (Silwet L-77) سيليكون بوليفور بوليمرLehle SeedsVIS-01أضف كمكون أخير
TMB Microwell مكون واحد من الركيزة بيروكسيدازSurModicsTMBW-1000-01
متجر

المراجع

  1. Hagler, J. R., Jackson, C. G. Methods for marking insects: Current techniques and future prospects. Annu. Rev. Entomol. 46, 511-543 (2001).
  2. Lavandero, B. I., Wratten, S. E., Hagler, J. R., Jervis, M. A. The need for effective marking and tracking techniques for monitoring the movements of insect predators and parasitoids. Int. J. Pest Manage. 50 (3), 147-151 (2004).
  3. Hagler, J. R., Jackson, C. G., Henneberry, T. J., Gould, J. Parasitoid mark-release-recapture techniques: II. Development and application of a protein marking technique for Eretmocerus spp., parasitoids of Bemisia argentifolii. Biocontrol Sci. Techn. 12 (6), 661-675 (2002).
  4. Blackmer, J. L., Hagler, J. R., Simmons, G. S., Henneberry, T. J. Dispersal of Homalodisca vitripennis (Homoptera: Cicadellidae) from a point release site in citrus. Environ. Entomol. 35 (6), 1617-1625 (2006).
  5. Swezey, S. L., Nieto, D. J., Hagler, J. R., Pickett, C. H., Bryer, J. A., Machtley, S. A. Dispersion, distribution and movement of Lygus.spp. (Hemiptera: Miridae) in trap-cropped strawberries. Environ. Entomol. 42 (4), 770-778 (2013).
  6. Hagler, J. R., Baker, P. B., Marchosky, R., Machtley, S. A., Bellamy, D. E. Methods to mark termites with protein for mark-release-recapture and mark-capture studies. Insect. Soc. 56 (2), 213-220 (2009).
  7. Baker, P. B., et al. Utilizing rabbit immunoglobulin G protein for mark-capture studies on the desert subterranean termite, Heterotermes aureus (Synder). Insect. Soc. 57 (2), 147-155 (2010).
  8. Hagler, J. R., Mueller, S., Teuber, L. R., Machtley, S. A., Van Deynze, A. Foraging range of honey bees, Apis mellifera, in alfalfa seed production fields. J. Insect Sci. 11 (1), 1-12 (2011).
  9. Hagler, J. R., Cohen, A. C., Bradley-Dunlop, D., Enriquez, F. J. A new approach to mark insects for feeding and dispersal studies. Environ. Entomol. 21 (1), 20-25 (1992).
  10. Hagler, J. R. Field retention of a novel mark-release-recapture method. Environ. Entomol. 26 (5), 1079-1086 (1997).
  11. Jones, V. P., Hagler, J. R., Brunner, J., Baker, C., Wilburn, T. An inexpensive immunomarking technique for studying movement patterns of naturally occurring insect populations. Environ. Entomol. 35 (4), 827-836 (2006).
  12. Sivakoff, F. S., Rosenheim, J. A., Hagler, J. R. Threshold choice and the analysis of protein marking data in long-distance dispersal studies. Methods Ecol. Evol. 2 (1), 77-85 (2011).
  13. Hagler, J. R., Jackson, C. G. An immunomarking technique for labeling minute parasitoids. Environ. Entomol. 27 (4), 1010-1016 (1998).
  14. Janke, J., et al. Serological marking of Pnigalio agraules (Hymenoptera: Eulophidae) for field dispersal studies. J. Pest Sci. 82 (1), 47-53 (2009).
  15. DeGrandi-Hoffman, G., Hagler, J. R. The flow of incoming nectar through a honey bee (Apis mellifera L.) colony as revealed by a protein marker. Insect. Soc. 47 (4), 302-306 (2000).
  16. Peck, S. L., McQuate, G. T. Ecological aspects of Bactrocera latifrons (Diptera: Tephritidae) on Maui, Hawaii: Movement and host preference. Environ. Entomol. 33 (6), 1722-1731 (2004).
  17. Hagler, J. R., Durand, C. M. A new method for immunologically marking prey and its use in predation studies. Entomophaga. 39 (3), 257-265 (1994).
  18. Hagler, J. R. An immunological approach to quantify consumption of protein-tagged Lygus hesperus by the entire cotton predator assemblage. Biol. Control. 58 (3), 337-345 (2011).
  19. Fournier, V., Hagler, J. R., Daane, K., de Leòn, J., Groves, R. Identifying the predator complex of Homalodisca vitripennis (Hemiptera: Cicadellidae): A comparative study of the efficacy of an ELISA and PCR gut content assay. Oecologia. 157 (4), 629-640 (2008).
  20. Hagler, J. R. Development of an immunological technique for identifying multiple predator--prey interactions in a complex arthropod assemblage. Ann. Appl. Biol. 149 (2), 153-165 (2006).
  21. Mansfield, S., Hagler, J. R., Whitehouse, M. A comparative study of the efficiency of a pest-specific and prey-marking ELISA for detection of predation. Entomol. Exp. Appl. 127 (3), 199-206 (2008).
  22. Buczkowski, G., Wang, C., Bennett, G. Immunomarking reveals food flow and feeding relationships in the eastern subterranean termite, Reticulitermes flavipes (Kollar). Environ. Entomol. 36 (1), 173-182 (2007).
  23. Lundgren, J. G., Saska, P., Honĕk, A. Molecular approach to describing a seed-based food web: The post-dispersal granivore community of an invasive plant. Ecol. Evol. 3 (6), 1642-1652 (2013).
  24. Kelly, J. L., Hagler, J. R., Kaplan, I. Semiochemical lures reduce emigration and enhance pest control services in open-field augmentation. Biol. Control. 71, 70-77 (2014).
  25. Zilnik, G., Hagler, J. R. An immunological approach to distinguish arthropod viviphagy from necrophagy. BioControl. 58 (6), 807-814 (2013).
  26. Irvin, N. A., Hagler, J. R., Hoddle, M. S. Laboratory investigation of triple marking the parasitoid, Gonatocerus ashmeadi (Hymenoptera: Mymaridae) with a fluorescent dye and two animal proteins. Entomol. Exp. App. 143 (1), 1-12 (2011).
  27. Hagler, J. R., Mueller, S., Teuber, L. R., Van Deynze, A., Martin, J. A method for distinctly marking honey bees, Apis mellifera, originating from multiple apiary locations. J. Insect Sci. 11 (143), 1-14 (2011).
  28. Peck, G. W., Ferguson, H. J., Jones, V. P., O'Neal, S. D., Walsh, D. B. Use of a highly sensitive immunomarking system to characterize face fly (Diptera: Muscidae) dispersal from cow pats. Environ. Entomol. 43 (1), 116-122 (2014).
  29. Boina, D. R., Meyer, W. L., Onagbola, E. O., Stelinski, L. L. Quantifying dispersal of Diaphorina citri (Hemiptera: Psyllidae) by immunomarking and potential impact of unmanaged groves on commercial citrus management. Environ. Entomol. 38 (4), 1250-1258 (2009).
  30. Lewis-Rosenblum, H., Tawari, X. M. S., Stelinski, L. L. Seasonal movement patterns and long-range dispersal of Asian citrus phyllid in Florida citrus. J. Econ. Entomol. 108 (1), 3-10 (2015).
  31. Krugner, R., Hagler, J. R., Groves, R. L., Sisterson, M. S., Morse, J. G., Johnson, M. W. Plant water stress effects on the net dispersal rate of the insect vector, Homalodisca vitripennis (Germar) (Hemiptera: Cicadellidae), and movement of its egg parasitoid, Gonatocerus ashmeadi Girault (Hymenoptera: Mymaridae). Environ. Entomol. 41 (6), 1279-1289 (2012).
  32. Klick, J., et al. Distribution and activity of Drosophila suzukii in cultivated raspberry and surrounding vegetation. Entomol. Exp. App. , (2015).
  33. Basoalto, K., Miranda, M., Knight, A. L., Fuentes-Contreras, E. Landscape analysis of adult codling moth (Lepidoptera: Tortricidae) distribution and dispersal within typical agroecosystems dominated by apple production in Central Chile. Environ. Entomol. 39 (5), 1399-1408 (2010).
  34. Horton, D. R., Jones, V. P., Unruh, T. R. Use of a new immunomarking method to assess movement by generalist predators between a cover crop and tree canopy in a pear orchard. Amer. Entomol. 55 (1), 49-56 (2009).
  35. Swezey, S. L., Nieto, D. J., Pickett, C. H., Hagler, J. R., Bryer, J. A., Machtley, S. A. Spatial density and movement of the Lygus spp. parasitoid Peristenus relictus (Hymenoptera: Braconidae) in organic strawberries with alfalfa trap crops. Environ. Entomol. 43 (2), 363-369 (2014).
  36. Sivakoff, F. S., Rosenheim, J. A., Hagler, J. R. Relative dispersal ability of a key agricultural pest and its predators in an annual agroecosystem. Biol. Control. 63 (3), 296-303 (2012).
  37. Slosky, L. M., Hoffmann, E. J., Hagler, J. R. A comparative study of the retention and lethality of the first and second generation arthropod protein markers. Entomol. Exp. App. 144 (2), 165-171 (2012).
  38. Hagler, J. R., Machtley, S. A., Blackmer, F. A potential contamination error associated with insect protein mark-capture data. Entomol. Exp. App. 154 (1), 28-34 (2015).
  39. Hagler, J. R., Jones, V. P. A protein-based approach to mark arthropods for mark-capture type research. Entomol. Exp. App. 135 (2), 177-192 (2010).
  40. Hagler, J. R., Naranjo, S. E., Machtley, S. A., Blackmer, F. Development of a standardized protein immunomarking protocol for insect mark-capture dispersal research. J. Appl. Entomol. 138 (10), 772-782 (2014).
  41. Hagler, J. R. Variation in the efficacy of several predator gut content immunoassays. Biol. Control. 12 (1), 25-32 (1998).
  42. Clark, M. F., Adams, A. N. Characteristics of microplate method of enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of plant viruses. J. Gen. Virol. 34 (3), 475-483 (1977).
  43. Crowther, J. R. The ELISA guidebook. , Humana Press. Totowa, NJ. (2001).
  44. Stimmann, M. W. Marking insects with rubidium: Imported cabbageworm marked in the field. Environ. Entomol. 3 (2), 327-328 (1974).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

ELISA IgY ELISA ELISA
إدارة والكشف عن علامات البروتين على المفصليات للبحوث تشتت
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.