Method Article

وساطة من HSV-التعبير التحوير من همي التركيبات لدراسة وظيفة السلوكية من هذه العملية من Heteromers في الفئران

DOI:

10.3791/53717

⸱

July 9th, 2016

 ,  , 
1Department of Psychiatry, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 2Department of Neurology, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 3Friedman Brain Institute, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 4Department of Physiology and Biophysics, Virginia Commonwealth University Medical School

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

توضح هذه المقالة كيفية حقن ناقلات فيروسية في القشرة الأمامية الماوس لاختبار المقايسات السلوكية التي تتطلب هذه العملية من تشكيل مغايرة التغصن.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

متورط مركب المستقبلات غير المتجانسة بين 5-HT2A و mGlu2 في بعض الأنماط الظاهرية السلوكية في نماذج الفئران للذهان1،2. وبالتالي ، فإن التحقيق في التفاصيل الهيكلية للتفاعل بين 5-HT2A و mGlu2 الذي يؤثر على السلوكيات المرتبطة بالفصام يمثل أداة انتقالية قوية. كما هو موضح سابقا ، يتم استنباط استجابة ارتعاش الرأس (HTR) في الفئران عن طريق الأدوية المهلوسة وهذه الاستجابة السلوكية غائبة في الفئران 5-HT2A بالضربة القاضية (KO)3،4. بالإضافة إلى ذلك ، من خلال التعبير المشروط عن مستقبلات 5-HT2A فقط في القشرة ، تم إثبات أن مسارات الإشارات المعتمدة على مستقبلات 5-HT2A على الخلايا العصبية الهرمية القشرية كافية لاستنباط سلوك ارتعاش الرأس استجابة للأدوية المهلوسة3. أخيرا ، فقد ثبت أن الاستجابة السلوكية لانتشاف الرأس التي تسببها المهلوسات DOI وحمض الليسرجيك ثنائي إيثيل أميد (LSD) تنخفض بشكل كبير في الفئران mGlu2-KO5. تشير هذه النتائج إلى أن mGlu2 ضروري جزئيا على الأقل للتأثيرات السلوكية الشبيهة بالذهان المعتمدة على مستقبلات 5-HT2A التي تسببها الأدوية الشبيهة ب LSD. ومع ذلك ، فإن هذا لا يقدم دليلا على ما إذا كان مركب مستقبلات 5-HT 2A-mGlu2 ضروريا لهذا النمط الظاهري السلوكي. لمعالجة هذا السؤال ، تم استخدام فيروس الهربس البسيط (HSV) للتعبير عن mGlu2 أو mGlu2ΔTM4N (mGlu2 / mGlu3 البنية الخيمرية التي لا تشكل مركب مستقبلات 5-HT2A-mGlu2) في القشرة الأمامية للفئران mGlu2-KO لفحص ما إذا كان هذا المركب غير المتجانس GPCR ضروريا للتأثيرات السلوكية التي تسببها الأدوية الشبيهة ب LSD6.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المهلوسات، مثل LSD، سيلوسيبين ومسكالين تسبب تغيرات كبيرة في الوعي البشري، والإدراك والعاطفة 7-9. تثبيط السيروتونين 5-HT 2A مستقبلات الإشارات التي كتبها النهج إما وراثية أو الدوائية يسبب مخففة بشكل ملحوظ الاستجابات السلوكية لالمهلوسات في كلا النموذجين القوارض والبشر 3،10 11. على الرغم من المهلوسات ربط فرعية مستقبلات أخرى 8، تعتبر مستقبلات 2A 5-HT حسب الضرورة لنشاط سلوكي فريد من هذه المواد الكيميائية.

وكانت المجموعة الثانية مستقبلات الجلوتامات (أي، mGlu2 وmGlu3) هدف اهتماما كبيرا بشأن الآلية الجزيئية من المهلوسات ودورها لا يتجزأ من وراء الذهان 12. سابقا، وقد تبين أن الفئران من دون التعبير عن بروتين mGlu2 (mGlu2-KO الفئران) لا تعير اهتماما للآثار الخلوية والسلوكية للنصفlucinogens 5. وقيل أيضا أن 2A 5-HT والمستقبلات mGlu2 تشكيل مجمع مغايرة التغصن محدد من خلالها السيروتونين والغلوتامات بروابط تعدل نمط G اقتران البروتين في الخلايا الحية 1،2.

هيكليا، عبر الغشاء (TM) مجالات 4 و 5 من mGlu2 تلعب دورا أساسيا في تشكيل مغايرة التغصن مع 5-HT 2A مستقبلات 5. بالإضافة إلى ذلك، أظهر مزيد من التحقيقات أن ثلاثة بقايا تقع في نهاية الخلايا من TM4 من mGlu2 ضرورية لتشكيل 5-HT 2A -mGlu2 مستقبلات heterocomplex في الخلايا 6 الحية.

وبناء على هذه النتائج لوحظ في أنظمة تعبير مغايرة، ونحن هنا وصف استخدام التعبير بوساطة HSV-من النوع البري mGlu2 وmGlu2 / mGlu3 يبني خيالية في القشرة الأمامية من الفئران mGlu2-KO لاختبار ما إذا كان تشكيل مغايرة التغصن بين 5-HT 2A وmGlu2 هو ضروري لسلوك رئيس نشل الناجمة عن الهلوسة 5-HT منبهات 2A مستقبلات.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: تم تنفيذ جميع الإجراءات اللازمة لتربية الحيوانات وهموم وفقا للائحة لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي (IACUC) من مدرسة طب ماونت سيناي. تأكد من استخدام قفازات معقمة في جميع أنحاء الداخلي.

1. المخدرات وفيروس التحضير

  1. تحضير المخدرات
    1. إعداد 15.0 مل الكيتامين / زيلازين مخدر عن طريق إذابة 1.35 مل من 100 ملغ / مل الكيتامين و 0.75 مل من 20 ملغ / مل زيلازين في 12.9 مل من 0.9٪ محلول ملحي. مزيج دقيق الحل.
  2. تحضير فيروس
    1. استنساخ mGlu2 وmGlu2ΔTM4N يبني في ناقلات bicistronic فيروس الهربس البسيط (HSV) التالية البروتوكولات القياسية الموصوفة سابقا 6. حزمة الجسيمات الفيروسية كما هو موضح سابقا 6،13،14. استبدال بقايا علاء-677 4.40، علاء-681 4.44 و 4.48 Ala685 في mGlu2 لSer686 4.40، دكتوراهE690 4.44 والغليسين-694 4.48 في mGlu3 (HA-mGlu2ΔTM4N) قد تم وصفها سابقا 6.
      ملاحظة: وقد تجلى سابقا أن بناء خيالية HA-mGlu2ΔTM4N وأعرب في غشاء البلازما مع G سليمة تعتمد البروتين مما يشير إلى 6.
    2. تخزين ناقلات فيروسية في -80 درجة مئوية عندما لا تكون قيد الاستعمال. ناقلات فيروسية ذوبان على الجليد، ومن ثم قسامة في 10 مكل. لإجراء العمليات الجراحية، والحفاظ على الجليد.

2. جراحة

  1. التحضير لعملية جراحية
    1. وزن الماوس وحقن الفأر مع الجرعة المناسبة من كوكتيل الكيتامين / زيلازين (لمزيد من التفاصيل، انظر 1.1.1).
    2. تحقق الماوس لمعرفة ما إذا كان تخدير بشكل صحيح، ضغط القدم وذيل للاستجابة الألم، وإذا كان غير قادر للحصول على رد، هو تخدير الماوس بشكل صحيح.
    3. حلق الرأس الماوس من قاعدة الجمجمة إلى طرف الأنف باستخدام كليبرز. تطبيق هلام للعين للبالعربية الماوسterward للوقاية من العمى من الفأرة.
    4. تحميل كل حقنة على الإطار التجسيمي. ثم إمالة الجزء العمودي من كل ذراع من الإطار التجسيمي بحيث تكون 10 درجة بعيدا عن وضعها الطبيعي. ضمان إمالة الأسلحة، مثل أن الإبر في مواجهة بعضهما البعض.
    5. تنظيف كل حقنة عن طريق ملء الإبرة مع 70٪ من الإيثانول. شغل الإبرة ثلاث مرات على الأقل للتأكد من أن حقنة نظيفة.
    6. مرة واحدة وقد تم تنظيف الإبرة، وتدفق إبرة عن طريق ملء الإبرة مع مزدوج H المقطر 2 O. مرة واحدة طهرتها، وملء كل إبرة مع 1.3 ميكرولتر من ضعف H المقطر 2 O. تحريف المكبس من حقنة لاطلاق سراح 0.3 ميكرولتر من ضعف H المقطر 2 O. إذا حبات الماء في رأس الإبرة، يمسح بعناية بعيدا المياه. إذا كان أي شيء يخرج من الحقنة، ودفع المكبس تماما أسفل ثم كرر تنظيف حقنة.
    7. بعد ملء مع الماء، ثم سحب ما يصل إلى حقنة ملء الحقنة مع0.5 ميكرولتر من الهواء.
    8. مرة واحدة في الهواء والماء في الحقنة، وملء بعناية المحاقن مع 1.3 ميكرولتر من حل الفيروس. في هذه المرحلة التأكد من حجم التداول الكلي في حقنة 2.8 ميكرولتر. مرة أخرى تحريف غيض من حقنة لاطلاق سراح 0.3 ميكرولتر من الفيروس. إذا حبات السائل في رأس الإبرة، يمسح بعناية بعيدا السائل. إذا كان أي شيء يخرج من الحقنة، ودفع المكبس تماما أسفل ثم كرر تنظيف حقنة.
  2. العملية الجراحية
    1. إرفاق الماوس إلى الإطار التجسيمي، مع التأكد من ضبط الإطار التجسيمي بحيث الجمجمة هو مستوى ومسطحة. تقديم طلب povodine اليود على فروة الرأس المكشوفة. باستخدام مشرط، وجعل شق السهمي على طول خط الوسط من الجمجمة داخل منطقة حلق عرضة للخطر. ثم إرفاق المشابك سحاحة على الجلد في موقع شق للتأكد من أن الجمجمة لا تزال عرضة للخطر.
    2. استخدام H 2 O 2 إلى حل بعيدا السمحاق لفضح خيوط منالجمجمة. الآن وبعد أن bregma وخيوط مرئية، تأكد من ضبط الإطار التجسيمي للتأكد من أن الجمجمة هي المستوى.
    3. محاذاة نصائح إبرة الحقن مع bregma وتسجيل إحداثيات bregma. حساب إحداثيات حيث تسير الإبر التي ستدرج لاحقا.
      1. للطائرة منقاري-Cauldal (RC)، إضافة 1.6 ملم إلى إحداثيات bregma RC سجلت (+1.6 من Bregma). للطائرة ظهري، بطني (DV)، طرح 2.4 ملم من الإحداثيات bregma DV سجلت (-2.4 من Bregma).
      2. وأخيرا، لطائرة الإنسي الوحشي (ML)، إضافة 2.6 ملم إلى إحداثيات bregma ML سجلت (+2.6 من Bregma). لجميع الإحداثيات تأكد من تسجيل كل من الإحداثيات الأيمن والأيسر، وهذا هو حقن الثنائي.
    4. جلب الإبر إلى الإحداثيات المطلوبة. بمناسبة أماكن حيث الإبر تسير لإدراجها مع وجود حفر، حفر المناطق ملحوظ.
    5. مع القطن طرف قضيب وايالمؤسسة العامة بعيدا من أي فائض الدم أو العظام شظية.
    6. جلب الإبر في الجمجمة حيث نصائح من الإبر ولمس سطح الدماغ. ثم خفض الإبر إلى إحداثيات المطلوب خفضها ببطء.
    7. وبمجرد أن الإبر في الإحداثيات المطلوبة، وضخ ببطء محتويات الحقنة قبل التواء المكبس من إبرة 0.1 ميكرولتر في الدقيقة الواحدة على مدى 5 دقائق (في مجموع 0.5 ميكرولتر).
    8. مرة واحدة وقد تم إجراء حقن مغادرة حقنة في القشرة لمدة 5 دقائق أخرى.
  3. إغلاق أعلى / رعاية
    1. إزالة الإبر من القشرة الماوس بشكل مطرد وببطء. ثم إزالة الماوس من الإطار التجسيمي.
    2. تطبيق cyanoacrylate (لاصق الجلدي) إلى اللوحات قاعدة من الجلد من شق ثم مع ملقط انتزاع اللوحات من الجلد ووضعها معا.
    3. السماح للcyanoacrylate حتى يجف. ضع الماوس في قفص على وسادة التدفئة (سادة التدفئة اختيارية إذا كان عياداتيتم الاحتفاظ جناح كال تحت RT من 37 درجة مئوية - على خلاف ذلك لم يكن ضروريا). تأكد من وضع الماوس على منشفة ورقية للتأكد من أن الفراش لا تلتزم موقع الجراحة.
    4. اعتمادا على المدة التي تستغرقها الإجراءات الجراحية، تأكد من أن الفئران هي من التخدير خلال 30 - 60 دقيقة بعد الإجراء. بعد الجراحة، يتم وضع الحيوانات في قفص خاص بها ومراقبتها حتى يصبح واعيا قبل أن يعود إلى غرفته لاسترداد. لا تستخدم المسكنات بعد العملية، لأنها قد تغير نتائج تجاربنا عن طريق تعديل بعض المسارات البيوكيميائية دماغ. ومع ذلك، يتم مراقبة الحيوانات حتى يشفى من التخدير في يوم من الجراحة، واليومية بعد العملية لعلامات العدوى وتقييم الألم / الشدة.

تجربة 3. رئيس نشل الاستجابة

  1. اقامة
    1. تنفيذ جميع التجارب السلوكية 10:00 حتي 02:00، 2 - بعد 3 أيام stereotaحقن CTIC من الجسيمات الفيروسية.
    2. حل (±) -1- (2،5-dimethoxy-4-iodophenyl) هيدروكلوريد -2-aminopropane (دوى) في محلول ملحي 0.9٪ إلى 2.0 ملغ / كغ. أيضا إعداد محلول ملحي 0.9٪.
    3. إعداد قفص المنزل (28 × 18 × 15 سم) ودون أي فراش وباستخدام جراب الثلاثية، وضبط الكاميرا بحيث ترى كاميرا الفيديو مباشرة فوق القفص المنزل.
    4. روض الفئران إلى غرفة لمدة 4 على الأقل ساعة قبل بداية التجربة.
    5. تشكيل لكاميرا الفيديو لتسجيل نشل الرأس.
  2. تجربة
    1. وضع الكاميرا بحيث تكون مباشرة على قفص المنزل. معايرة الكاميرا بحيث قفص المنزل بأكمله في مجال الرؤية.
    2. وزن الماوس وحقن الفأر البريتونى مع الجرعة المناسبة من أي 0.9٪ المالحة أو دوى (0.01 مل / ز). ملاحظة: إذا كان الماوس يزن 25 غراما، وإدارة الجرعة إلى إجمالي حجم 0.25 مل.
    3. وضع كل الماوس مرة أخرى في قفص وطنهم FOص 10 دقيقة. بعد 10 دقيقة، ومكان الماوس في وسط قفص المنزل فارغ والتحقق من أن عدم وجود البقع العمياء في مجال الرؤية للكاميرا. سجل اضغط على كاميرا الفيديو. غادر الغرفة.
      ملاحظة: حركات الماوس ومختلف الاستجابات السلوكية فيه (... رئيس نشل، الصفر الأذن، وما إلى ذلك يرجى الرجوع إلى الجدول البيانات التكميلية 1 من غونزاليس مايسو وآخرون عام 2007 لقائمة كاملة من الاستجابات السلوكية الناجمة عن دوى) 3، وسوف يتم تسجيلها ل 30 دقيقة. ولذلك، من المهم عدم وجود البقع العمياء في مجال الرؤية المسجلة.
    4. بعد إيقاف 30 دقيقة تسجيل على الكاميرا ومكان الماوس مرة أخرى في قفص الموطن الأصلي. كرر هذه العملية لكل الماوس.
  3. مراجعة
    1. لدينا كل مراجعة الحكم الأشرطة الطرف عن الظروف التجريبية من الماوس (أي.، الأدوية المستخدمة خلال رئيس نشل التجربة أو فيروس المستخدمة أثناء الحقن داخل الجمجمة)). تسجيل يدويا كل رئيس نشل ماراالحوت الفيديو.
      ملاحظة: يتم تحديد رئيس نشل كحركة رئيس الهز السريعة التي أجراها الماوس (فيديو التكميلي).
    2. لكل الماوس، ومتوسط ​​الاستجابة HTR النهائية من المجاميع ثلاثة من الحكام أعمى. ثم تجميع هذه القيم عن طريق حالة تجريبية وإجراء تحليل إحصائي (أي، اختبار t أو ANOVA).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتبين النتائج السابقة أن رئيس نشل استجابة سلوكية الفئران وموثوق بها وبقوة التي تسببها حبوب الهلوسة، وينعدم في 5-HT الفئران 2A -KO 3. وعلاوة على ذلك، فقد تبين أن استجابة رئيس نشل التي تسببها والهلوسة 5-HT منبهات 2A دوي وLSD وانخفضت بشكل ملحوظ في mGlu2-KO الفئران 5. ومع ذلك، على الرغم من النتائج السابقة تبرهن بشكل مقنع أن 2A 5-HT وmGlu2 يتم تجميعها كما مجمع مغايرة التغصن في المختبر في خل...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جنبا إلى جنب مع النتائج السابقة في mGlu2-KO الفئران 5، النتائج مع mGlu2 وmGlu2 / mGlu3 يبني خيالية التي لا تشكل 5-HT مجمع 2A -mGlu2 مستقبلات في الخلايا المستزرعة تشير إلى أن 2A 5-HT -mGlu2 مغايرة التغصن مجمع مستقبلات في وهناك حاجة الماوس القشرة الأمامية للحث على سلوك رئيس نشل من قبل الهلوسة 5-HT منبهات 2A مستقبلات مثل LSD. وجود قيود على هذا الأسلوب هو أنه لا قياس القرب الجزيئي وثيق على المستوى التحت خلوية في أنسجة الأم. وبالإضافة إلى ذلك...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

شارك المعاهد الوطنية للصحة R01MH084894 في تمويل هذه الدراسة. ونود أن نشكر الدكاترة. ياسمين هيرد وسكوت روسو في كلية جبل سيناء للطب للتبرع من الفئران واستخدام مرافق الجراحة وسلوكهم أثناء تصوير هذا العمل.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
mGlu2 ناقل فيروس الهربس البسيط (HSV) mGlu2  CoremGlu2 و mGlu2DTM4N في ناقل فيروس HSV-GFP ثنائي النمط p1005 + HSV الذي يعبر عن GFP تحت سيطرة محفز CMV. تم إنتاج الجسيمات الفيروسية بواسطة مرفق النواة الفيروسية في معهد ماكغفرن (MIT). لمزيد من المعلومات ، يرجى الاتصال بالمدير ، الدكتورة راشيل نيف (rneve@mit.edu)
mGlu2 & Delta. ناقل فيروس الهربس البسيط TM4N bicitronic (HSV) CoremGlu2 و mGlu2DTM4N في ناقل فيروس HSV-GFP ثنائي النمط p1005 + HSV الذي يعبر عن GFP تحت سيطرة محفز CMV. تم إنتاج الجسيمات الفيروسية بواسطة مرفق النواة الفيروسية في معهد ماكغفرن (MIT). لمزيد من المعلومات ، يرجى الاتصال بالمدير ، الدكتورة راشيل نيف (rneve@mit.edu) ناقل
فيروس الهربس البسيط (HSV) GFP   ؛CoremGlu2 و mGlu2DTM4N في ناقل فيروس HSV-GFP ثنائي النمط p1005 + HSV الذي يعبر عن GFP تحت سيطرة محفز CMV. تم إنتاج الجسيمات الفيروسية بواسطة مرفق النواة الفيروسية في معهد ماكغفرن (MIT). لمزيد من المعلومات ، يرجى الاتصال بالمدير ، الدكتورة راشيل نيف (rneve@mit.edu)
زيلازين  .لويدرقم 4811-20 مل ، NADA # 139-236 ، رمز (رموز) NDC: 61311-481-101.35 مل من الكيتامين (100 مجم / مل) + 0.75 مل من الزيلازين (20 مجم / مل) مخفف في 12.0 مل من محلول ملحي 0.9٪
كيتامين   ؛VedcoKetaVed-10ml ، NADA # 200-029 ، رمز (أكواد) NDC: 50989-161-061.35 مل من الكيتامين (100 مجم / مل) + 0.75 مل من الزيلازين (20 مجم / مل) مخفف في 12.0 مل من محلول ملحي 0.9٪
جل العيونفيشر ScientificNC0550805
مقاطع Burretفيشر ScientificNC9268369
شفرة جراحيةFisher ScientificNC9032736
Hydrogen بيروكسيدفيشر العلمي19-898-919 
حقنة هاميلتونفيشر العلمية14815203
هاميلتون & التجارة ؛ إبر قابلة للإزالة ذات محور صغير (33 جا)فيشر ساينتفيك14816206
الحفر الصغير اللاسلكيفيشر NC9089241
Dermabond DermabondDermal Adhesive Fisher ScientificNC0690470
(±)-1- (2،5-ثنائي ميثوكسي -4-يودوفينيل) -2-أمينوبروبان هيدروكلوريد (DOI)سيجما ألدريتش42203-78-1مذاب في محلول ملحي 0.9٪ بتركيز 2.0 مجم / كجم
تم استنساخ MIT تم استنساخ MIT تم استنساخ MIT قائمة العلمي

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fribourg, M., et al. Decoding the Signaling of a GPCR Heteromeric Complex Reveals a Unifying Mechanism of Action of Antipsychotic Drugs. Cell. 147 (5), 1011-1023 (2011).
  2. Gonzalez-Maeso, J., et al. Identification of a serotonin/glutamate receptor complex implicated in psychosis. Nature. 452 (7183), 93-97 (2008).
  3. Gonzalez-Maeso, J., et al. Hallucinogens Recruit Specific Cortical 5-HT(2A) Receptor-Mediated Signaling Pathways to Affect Behavior. Neuron. 53 (3), 439-452 (2007).
  4. Gonzalez-Maeso, J., et al. Transcriptome fingerprints distinguish hallucinogenic and nonhallucinogenic 5-hydroxytryptamine 2A receptor agonist effects in mouse somatosensory cortex. J Neurosci. 23 (26), 8836-8843 (2003).
  5. Moreno, J. L., Holloway, T., Albizu, L., Sealfon, S. C., Gonzalez-Maeso, J. Metabotropic glutamate mGlu2 receptor is necessary for the pharmacological and behavioral effects induced by hallucinogenic 5-HT2A receptor agonists. Neurosci Lett. 493 (3), 76-79 (2011).
  6. Moreno, J. L., et al. Identification of Three Residues Essential for 5-HT2A-mGlu2 Receptor Heteromerization and its Psychoactive Behavioral Function. J Biol Chem. 287, 44301-44319 (2012).
  7. Geyer, M. A., Vollenweider, F. X. Serotonin research: contributions to understanding psychoses. Trends Pharmacol Sci. 29 (9), 445-453 (2008).
  8. Nichols, D. E. Hallucinogens. Pharmacol Ther. 101 (2), 131-181 (2004).
  9. Hanks, J. B., Gonzalez-Maeso, J. Animal models of serotonergic psychedelics. ACS Chem Neurosci. 4 (1), 33-42 (2013).
  10. Fiorella, D., Rabin, R. A., Winter, J. C. Role of 5-HT2A and 5-HT2C receptors in the stimulus effects of hallucinogenic drugs. II: Reassessment of LSD false positives. Psychopharmacology (Berl). 121 (3), 357-363 (1995).
  11. Vollenweider, F. X., Vollenweider-Scherpenhuyzen, M. F., Babler, A., Vogel, H., Hell, D. Psilocybin induces schizophrenia-like psychosis in humans via a serotonin-2 agonist action. Neuroreport. 9 (17), 3897-3902 (1998).
  12. Moreno, J. L., Sealfon, S. C., Gonzalez-Maeso, J. Group II metabotropic glutamate receptors and schizophrenia. Cell Mol Life Sci. 66 (23), 3777-3785 (2009).
  13. Kurita, M., et al. HDAC2 regulates atypical antipsychotic responses through the modulation of mGlu2 promoter activity. Nat Neurosci. 15 (9), 1245-1254 (2012).
  14. Kurita, M., et al. Repressive Epigenetic Changes at the mGlu2 Promoter in Frontal Cortex of 5-HT2A Knockout Mice. Mol Pharmacol. 83 (6), 1166-1175 (2013).
  15. Rives, M. L., et al. Crosstalk between GABAB and mGlu1a receptors reveals new insight into GPCR signal integration. Embo J. 28 (15), 2195-2208 (2009).
  16. Milligan, G. The Prevalence, Maintenance and Relevance of GPCR Oligomerization. Mol Pharmacol. (84), Epub ahead of print 158-169 (2013).
  17. Ferre, S., et al. G protein-coupled receptor oligomerization revisited: functional and pharmacological perspectives. Pharmacol Rev. 66 (2), 413-434 (2014).
  18. Gonzalez-Maeso, J. GPCR oligomers in pharmacology and signaling. Mol Brain. 4 (1), 20(2011).
  19. Gonzalez-Maeso, J. Family a GPCR heteromers in animal models. Front Pharmacol. 5, 226(2014).
  20. Dragulescu-Andrasi, A., Chan, C. T., De, A., Massoud, T. F., Gambhir, S. S. Bioluminescence resonance energy transfer (BRET) imaging of protein-protein interactions within deep tissues of living subjects. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (29), 12060-12065 (2011).
  21. Calebiro, D., et al. Single-molecule analysis of fluorescently labeled G-protein-coupled receptors reveals complexes with distinct dynamics and organization. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (2), 743-748 (2013).
  22. Fonseca, J. M., Lambert, N. A. Instability of a class a G protein-coupled receptor oligomer interface. Mol Pharmacol. 75 (6), 1296-1299 (2009).
  23. Hern, J. A., et al. Formation and dissociation of M1 muscarinic receptor dimers seen by total internal reflection fluorescence imaging of single molecules. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (6), 2693-2698 (2010).
  24. Hlavackova, V., et al. Sequential inter- and intrasubunit rearrangements during activation of dimeric metabotropic glutamate receptor 1. Sci Signal. 5 (237), 59(2012).
  25. Irannejad, R., et al. Conformational biosensors reveal GPCR signalling from endosomes. Nature. 495 (7442), 534-538 (2013).
  26. Calebiro, D., Nikolaev, V. O., Persani, L., Lohse, M. J. Signaling by internalized G-protein-coupled receptors. Trends Pharmacol Sci. 31 (5), 221-228 (2010).
  27. Celada, P., Puig, M. V., Diaz-Mataix, L., Artigas, F. The hallucinogen DOI reduces low-frequency oscillations in rat prefrontal cortex: reversal by antipsychotic drugs. Biol Psychiatry. 64 (5), 392-400 (2008).
  28. Béïque, J. -C., Imad, M., Mladenovic, L., Gingrich, J. A., Andrade, R. Mechanism of the 5-hydroxytryptamine 2A receptor-mediated facilitation of synaptic activity in prefrontal cortex. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (23), 9870-9875 (2007).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

GPCR HeteromersHSV Transgene ExpressionFrontal Cortex InjectionHead Twitch ResponseStereotactic SurgerymGlu2 Knockout Mice5 HT2A ReceptorBehavioral PhenotypesImmunocytochemistryWestern Blot

Related Articles