قياس حجم حلقات الضغط في الماوس

ملخص

توضح هذه المخطوطة بروتوكول مفصلة لجمع البيانات حجم الضغط من الماوس.

الملخص

فهم أسباب وتطور مرض القلب يمثل تحديا كبيرا للمجتمع الطب الحيوي. المرونة الوراثية من الفأرة توفر إمكانات كبيرة لاستكشاف وظيفة القلب على المستوى الجزيئي. حجم الفأر الصغير يفعل بعض التحديات في ما يخص أداء phenotyping القلب تفصيلا. جعلت التصغير والتطورات الأخرى في مجال التكنولوجيا العديد من طرق تقييم القلب ممكن في الماوس. من هذه، وجمع في وقت واحد من البيانات الضغط والحجم ويقدم صورة تفصيلية عن وظيفة القلب غير متوفرة من خلال أي طريقة أخرى. هنا يتم وصف إجراءات تفصيلية لجمع البيانات حلقة حجم الضغط. وشملت هو مناقشة المبادئ التي يقوم عليها القياسات والمصادر المحتملة للخطأ. وتناقش إدارة التخدير والنهج الجراحية بقدر كبير من التفصيل لأنها على حد سواء حرجة إلى الحصول على قياس الدورة الدموية جودة عاليةالصورة. وتطرق إلى مبادئ التنمية بروتوكول الدورة الدموية والجوانب ذات الصلة من تحليل البيانات.

المقدمة

لا يزال مرض القلب والأوعية الدموية لتكون سببا هاما من أسباب الوفيات والمراضة في جميع أنحاء العالم ^1. أمراض القلب تمثل تحديات صعبة للغاية في تطوير علاجات جديدة. التقدم في مجال علم الوراثة تنص على إمكانية تحديد عدد وافر من المساهمين وراثية محتملة لتطور أمراض القلب. تتطلب طبيعة التكاملية لنظام القلب والأوعية الدموية التي يمكن التحقق من صحة هذه الأهداف الوراثية في النماذج الحيوانية سليمة. وقد أدت تكاليف المرونة ومساكن منخفضة الوراثية من الفأرة ضعها في صدارة لتقييم دور الفسيولوجية لجين معين. صغر حجم الماوس يعرض بعض التحديات الفريدة لتقييم وظيفة القلب. وهناك العديد من الطرائق التي يمكن أن توفر معلومات بشأن وظيفة القلب، ولكن فقط للقياس في وقت واحد ضغط البطين وحجم يسمح حجم الضغط (PV) تحليل حلقة وظيفة البطين. PV حلقات فقطوظيفة القلب آه ليتم تحليل مستقل لارتباطه الأوعية الدموية. عامل مهم في تحديد الدور الوظيفي للعنصر وراثي معين.

وقد استخدم تقييم حلقات الضغط حجم كلا تجريبيا وسريريا لسنوات عديدة ودراسات واسعة النطاق موجود فيما يتعلق بتحليل هذه البيانات يحدد ^2،3. وقد تم تطويع التكنولوجيا حلقة PV على الماوس تقدما هاما لفهم علم وظائف الأعضاء القلب الفئران ^4-6. القسطرة على أساس التقنيات الكهروضوئية حلقة زوجين محول الضغط واستخدام تصرف لتقدير حجم البطين. يتم تحديد حجم البطين من خلال دراسة التغيرات في حقل الكهربائية المولدة عن طريق القسطرة. يتم احتساب هذه النماذج طريقة البطين على شكل أسطوانة، ويعرف ذروة التي كتبها المسافة بين الأقطاب على القسطرة وفي دائرة نصف قطرها من التوصيل من مجال كهربائي عن طريق الدم فيالبطين ^7-9. إشارة تصرف تقاس القسطرة اثنين من المكونات. الأول هو التوصيل عن طريق الدم. هذا يختلف مع حجم البطين ويشكل إشارة الأولية المستخدمة لتحديد حجم البطين. النتائج العنصر الثاني من التوصيل من خلال وعلى طول جدار البطين. وهذا ما يسمى تصرف الموازي ويجب إزالتها من أجل تحديد حجم البطين المطلق. هناك نوعان من النظم المتاحة تجاريا لجمع البيانات حجم الضغط في مختبر البحوث والطريقة المستخدمة لحساب وإزالة تصرف مواز هو الفرق الأساسي بينهما ^6،10،11. تتطلب القسطرة تصرف حقن محلول ملحي مفرط التوتر لحساب تصرف الموازي. هذه الحقن يتغير عابر التوصيل من الدم في البطين، بينما يبقى التوصيل الجدار مستمر. من هذه البيانات فمن الممكن لتحديدمكون من إشارة تصرف الذي ينشأ من الدم وما يأتي من جدار البطين. يفترض هذا النهج أن تصرف مواز لا تختلف خلال دورة القلب. يعتمد أسلوب القبول على التغييرات المرحلة في المجال الكهربائي لتقييم مساهمة جدار البطين للإشارة حجم الشاملة. ويعتمد هذا الأسلوب على مجموعة متنوعة من ثوابت محددة سلفا لالموصلية من الدم وعضلة القلب لتحديد الحجم النهائي، ولكن يجعل التدابير المستمرة للتصرف الموازي خلال دورة القلب. كل من هذه الأنظمة توفر تقديرات جيدة من حجم البطين الأيسر والخلافات بينهما وليس من المرجح أن تكون كبيرة من الناحية الفسيولوجية. نموذج أسطواني من البطين وافتراضات أخرى تجعل هذه النهج القائم على القسطرة ليست دقيقة مثل طرائق أخرى، ولكن يتم توفير هذه البيانات على أساس ضربات تلو ضربات التي لا غنى عنها لتقييم التدابير الحمل مستقلة من وظيفة القلب.

يتم استخدام الإجراء المذكورة هنا في مختبري وقدمت بيانات لعدد كبير من الدراسات دراسة الآليات الفيزيولوجية المرضية الأساسية من التصنع عضلة القلب ^12-18. الإجراء المبين أدناه هو واحد من اثنين من التي يمكن استخدامها للحصول على بيانات PV حلقة. في حين أن العديد من المبادئ قابلة للتطبيق لكلا النهجين، وسوف يركز هذا البروتوكول على نهج قمي الصدر المفتوح؛ وقد وردت تفاصيل بروتوكول الصدر مغلقة في أي مكان آخر ^19،20. في حين سيتم وصف الإجراء بالتفصيل، والمبادئ الشاملة الهامة لفضح القلب بأقل ضرر إما إلى القلب أو الرئتين. في جميع أنحاء بروتوكول من المهم أن نتذكر أن هذا الإجراء غير البقاء على قيد الحياة وأن وجود التعرض جيدة للقلب من الأهمية بمكان لتحديد المكان المناسب للقسطرة.

البروتوكول

قبل تنفيذ أي من الإجراءات الموضحة في هذا البروتوكول، والحصول على موافقة من قبل لجنة رعاية الحيوان واستخدام المؤسسية المحلية.

1. إعداد جهاز الحفر التجريبي

ملاحظة: يتم تنفيذ هذا الإجراء على الحيوانات تخدير ونوعية البيانات يتناسب مع نوعية الدعم مخدر المقدمة للحيوان. هذا القسم الأول سيأتي تفصيل المعدات والإجراءات اللازمة لتوفير التخدير على الماوس أثناء أداء هذا البروتوكول.

1. حدد بروتوكول مخدر. التخدير المستنشق لها العديد من الخصائص المفيدة لإجراء تحليل PV-حلقة، على الرغم من بعض البروتوكولات حقن استخدمت كذلك. الاطلاع على المناقشات لمزيد من المعلومات حول اختيار نظام مخدر.
2. تأمين خزانات الأكسجين المضغوط إلى طاولة الجراحة أو الجدار بالقرب من موقع الجراحة.
3. في حالة استخدام التخدير المستنشق، واستخدام المرذاذ لضمانالجرعات المناسبة. معايرة المبخر سنويا للتأكد من أنها توفر الجرعة المناسبة من الغاز المخدر. ربط المبخر لتدفق متر والذي يسمح السيطرة على المعدل الذي يدخل الغاز الدائرة مخدر. وضعت في 0،5-1،0 لتر / دقيقة.
4. استخدام متعددة للسماح بتدفق موجهة من الغاز المخدر إلى 1) غرفة تحريض، 2) قناع، و 3) التنفس الصناعي. مسح غاز مخدر مهم للغاية ويجب أن يقوم بها النظام النشط إما أن فتحات في غطاء الدخان (أو غيرها من البنى التحتية بناء مماثلة) أو من خلال اسطوانة مصممة لإزالة غازات التخدير.
   ملاحظة: تحقق مع مسؤولي الصحة المهنية المحلية لضمان الامتثال لجميع اللوائح المحلية.
5. الحفاظ على درجة حرارة الجسم الأساسية باستخدام منصات التدفئة و / أو مصابيح الاحترار. مراقبة مستمرة درجة حرارة الجسم مع ميزان حرارة المستقيم. وهذا سوف يسمح لزيادة استباقية أو النقصان في تسخين لضمان درجة حرارة الجسم الفسيولوجية (ͭ6؛ 37 ° C) خلال جمع البيانات الدورة الدموية.
6. تقديم الدعم السوائل لمواجهة فقدان الدم وفقدان حجم مدرك.
   1. يعد حل 10٪ من الألبومين في كلوريد الصوديوم 0.9٪ عن طريق اتخاذ 1 مل من 25٪ الزلال وإضافة 1.5 مل من كلوريد الصوديوم 0.9٪ في حقنة.
   2. إعداد انخفاض حجم المتبقي القسطرة داخل الأوعية الدموية.
      1. استخدام كماشة لسحق محور البلاستيك 0.5 بوصة 30 إبرة قياس. عن طريق أصحاب الإبرة، فهم إبرة وإزالة المحور. كشط لاصقة المتبقية من الإبرة باستخدام مرقئ. إدراج نهاية حادة من الإبرة إلى طول أنابيب microbore. استخدام أقل من 20 بوصة من طول الأنبوب.
   3. استخدام ضخ حقنة للسماح للكميات دقيقة ليتم تسليمها.
7. ضمان التهوية المناسبة لجمع البيانات الكهروضوئية عالية الجودة. وهناك مجموعة متنوعة من مراوح الماوس متاحة للشراء. توفر المراوح التي تسيطر عليها ضغط في بيئة مغلقة اللازمة لالمستنشق لالغازات nesthetic وتوفير مراقبة أفضل للتهوية أثناء العملية.
   1. تأكد من أن الضغوط الشهيق تقتصر على <15 سم H ₂ O لمنع الضغطي. تعيين جهاز التنفس الصناعي لإيصال نبض الشهيق خلال 35٪ من دورة التنفس. استخدام إيجابي ضغط نهاية الزفير (اللمحة) عند مستوى 4 - 5 سم H ₂ O تحسن كثيرا من التهوية من الفأرة، عن طريق منع انخماص الرئة ودعم تبادل الغازات.
   2. لحد من القاصي الفضاء الميت إلى Y-المفصل في الدائرة التنفس الصناعي. هذا أمر بالغ الأهمية لأن حجم المد والجزر الماوس، صغير جدا وأي مساحة ميتة يطرح من إيصال الهواء من وحي جديد.
   3. إنشاء القصبة الهوائية الحجم (ET) أنبوب الماوس عن طريق قطع غيض الخروج من عيار 20 الساكن القسطرة داخل الأوعية الدموية. وهذا يوفر نقطة مدبب لتسهيل الإدراج. وضع نهاية قطع في Y-مفصل من الدائرة مخدر.
   4. استخدام أنابيب مرنة في الجهاز التنفسيالدارة الكهربائية. فإن أي ذاكرة الهيكلية في أنابيب خلق قوى خارجية أن لديها القدرة على سحب الأنبوب الرغامي من مجرى الهواء الفأر.
   5. دع الماوس تحديد معدل التنفس باستخدام أدنى معدل الكابت للمحرك التنفس الذاتية. تبدأ في معدل التنفس البطيء نسبيا من حوالي 60 نفسا في الدقيقة.
      ملاحظة: مع التهوية المناسبة الماوس ينبغي أن القليل جدا من الجهد للتنفس. ومع ذلك، إذا التهوية غير كافية، فإن تراكم ثاني أكسيد الكربون ₂ في الدم بدء جهد الجهاز التنفسي عن طريق الماوس. إذا لوحظ هذا، وزيادة معدل التنفس هو الطريق المستقيم إلى الأمام لزيادة التهوية السنخية. غالبا ما يكون من الضروري زيادة معدل التنفس ردا على المرتفعات في عبء العمل القلبية المرتبطة تحفيز مستقبلات بيتا الأدرينالية.
   6. بعد الانتهاء من إعداد دائرة التنفس، وضغط اختبار النظام عن طريق توصيل غيض من القصبة الهوائية (ET) أنبوبمع إصبع. ضمان ضغط الهواء من ≈10 CMH ₂ O. يجب أن يتم تنفيذ هذا الاختبار قبل كل إجراء.

2. المنهج الجراحي

1. استخدام ملقط ومقص صغير وغيرها من المعدات من الجدول 1. جميع أدوات صغيرة جدا للسماح لسهولة استخدامها في مجال العمليات الجراحية المكبرة. استخدام مجهر تشريحي جراحي لتوفير التكبير كافية لعدة جوانب من العملية الجراحية.
2. استخدام الكي لتحقيق أقصى قدر من الارقاء أثناء العملية.
   ملاحظة: هناك زوجين من فئات واسعة من الكي. مكواة مع ارتفاع درجات الحرارة عنصرا معدنية رقيقة من شأنها أن تخترق الأنسجة العضلية ووقف النزيف. هذه النظم هي البداية غير مكلفة نسبيا. لكن من المهم أن نلاحظ أن النصائح الأسلاك هي هشة ومكلفة نسبيا. نظم كهربي هي أكثر تكلفة لشراء في البداية، ولكن نصائح وقوي جدا، وسوف لا تحتاج إلى استبدالد.
3. الحث والتحضير الجراحي
   1. الحصول على وزن جسم الفأر.
   2. ضع الماوس في غرفة الاستقراء مليء 5٪ الأيزوفلورين.
      ملاحظة: الفأر لا يمكن البقاء على قيد الحياة أكثر من بضع دقائق في هذه البيئة. هناك حاجة ثانية 60 لالماوس ليفقد المنعكس المقوم (الجهود لاقلب عند وضعه على ظهره أو الجانب) - فقط 45.
   3. مرة واحدة يتم فقدان المنعكس المقوم، والحد من تركيز الأيزوفلورين إلى 2٪ وفتح الغاز المخدر إلى قناع.
   4. بسرعة نقل الماوس على طاولة العمليات ووضعه في الاستلقاء الظهري مع أنفها داخل القناع.
   5. في حالة استخدام كهربي، واستخدام المياه المالحة غارقة الشاش لزوجين كهربائيا الماوس إلى لوحة أسس لنظام كهربي.
   6. تأمين أطرافه مع الشريط الجراحية. يوفر هذا الشريط خصائص لاصقة حتى عندما تكون رطبة.
   7. إدراج thermoprobe المستقيم لهيئة الرصد الأساسيةدرجة الحرارة. آمنة مع الشريط.
   8. تطبيق مزيل الشعر في الرقبة والصدر من الفأرة. الانتظار 2-3 دقائق لمزيل الشعر للعمل، ومن ثم إزالة الفراء من هذه المناطق باستخدام قضيب من القطن ذات الرؤوس و / أو مناديل المختبر.
      ملاحظة: ليس مطلوبا اللف الحقل الجراحي، وهذا هو إجراء غير البقاء على قيد الحياة، ولكن قد يكون المطلوب للحد من التعرض الجراح إلى لوحة أسس الكي، إذا ما استخدمت.
   9. بمجرد هيأهم الماوس لإجراء عملية جراحية، وتقييم طائرة الجراحية من الماوس عن طريق إجراء أخمص القدمين قرصة. بعد ان تتأكد من عمق التخدير المناسب الماوس على استعداد لشق الأول.
4. الحصول على السيطرة على مجرى الهواء من خلال إدخال أنبوب عن طريق الفم أو القصبة الهوائية. القصبة الهوائية هو نهج مريحة التي هي بسيطة نسبيا لأداء.
   ملاحظة: طوال هذا الوصف الإجرائي كل الاتجاهات والتوجهات ستكون نسبة إلى الجراح.
   1. إجراء شق في لوفيل الشق القصية تمتد من ≈ الحق 5 ملم من خط منتصف إلى ≈ 5 ملم تبقى من خط الوسط.
   2. جعل شق ثان يمتد على طول الحافة اليمنى من شق الأولى، وتمتد rostrally إلى مستوى ≈ 2 ملم الذيلية إلى نهاية الفك السفلي.
   3. جعل شق ثالث تمتد من نهاية منقاري من الشق الثاني لأكثر من ≈ 5 ملم تبقى من منتصف خط. التراجع الناجم رفرف الجلد إلى اليسار لفضح الأنسجة الكامنة.
   4. فصل الغدد اللعابية النكفية وتحت الفك السفلي في خط الوسط من خلال تشريح حادة. هذا وسوف يعرض الجهاز العضلي الكامنة التي تغمر القصبة الهوائية.
   5. بصراحة فصل الحق والعضلات القصية اللامية اليسرى لفضح القصبة الهوائية.
   6. تمرير قطعة ≈10 سم من 3-0 خياطة الحرير تحت القصبة الهوائية، مع الحرص على عدم تضمين المريء.
   7. تحديد موقع لالقصبة الهوائية: فقط الذيلية إلى الحنجرة هناك فجوة قبل الحلقة القصبة الهوائية الأولى، وهذا هو فكرةل موقع لأداء القصبة الهوائية.
   8. ضبط متعددة لتوفير الغاز المخدر إلى التنفس الصناعي وتشغيل جهاز التنفس الصناعي.
   9. تحقق من وجود تسرب عن طريق توصيل طرف الأنبوب الرغامي (ET) مع إصبع. ضمان ضغط الهواء من ≈10 cmH2O.
   10. باستخدام إبرة قياس 20 كما مشرط، شق القصبة الهوائية. جعل شق واسع نسبيا، حيث أن أنبوب ET سوف تملأ الكثير من تجويف القصبة الهوائية.
   11. تتحرك بسرعة، وإزالة القناع وبعناية إدراج أنبوب ET إلى القصبة الهوائية. لا قوة لها كما أنسجة هشة جدا ويمكن اختراق جدار القصبة الهوائية تؤدي إلى استرواح الصدر.
       ملاحظة: فور الإدراج، يجب الرحلات الصدر أصبح واضحا.
   12. تأمين الدوائر التهوية مع شريط لمنع أنبوب ET من التي انسحبت.
   13. ربط عقدة الذراع واحدة في خياطة 3-0 على شكل خاتم حول أنبوب ET.
       ملاحظة: في هذا excursi الصدر نقطةيجب أن يكون واضحا بشكل واضح الإضافية. إن لم يكن هو عادة المواقع من أنبوب ET داخل القصبة الهوائية هذه هي المشكلة. سحب أنبوب ET الظهر ومحاولة إعادة وضعها، مع التركيز على اتجاه القصبة الهوائية كدليل.
5. إعداد الوريد الوداجي الموقع
   1. التراجع الغدد اللعابية ترك تعريض منقاري-أفقيا الوريد الوداجي الخارجي.
   2. تقسم العضلات رقيقة (sternomastoideus) تغطي الوريد مع تشريح حادة. هذا وسوف يعرض على السطح الخارجي من حبل الوريد.
   3. مسح بعناية من أي قطع كبيرة من الأنسجة، وعلى الرغم من الحذر يجب أن تستخدم جدران الوريد هي رقيقة جدا. مرة واحدة هذه المهمة كاملة، تغطية حبل الوريد مع الغدد اللعابية للحفاظ عليها لإقناء؛ إدخال القنية في وقت لاحق.
6. بضع الصدر. دخول الفضاء الجنبي دون الإضرار القلب أو الرئتين
   1. إزالة جزء كبير من الجلد الذي يغطي الصدر تمتد الحافة اليمنى للشق الجلد الأصلي وصولا الى مستوى عملية الخنجري، ثم عبر خط الوسط إلى ≈ 1.5 سم تبقى من خط الوسط.
      ملاحظة: يجب توخي الحذر عند قطع طريق السفن الثديية الخارجية، والتي يمكن أن تكون مصدرا كبيرا من النزيف. وكية هذه السفن قبل قطع منها منع إلى حد كبير هذا النزيف.
   2. عن طريق تشريح حادة، يتراجع رفرف الجلد أفقيا لفضح العضلات الأساسية.
   3. عزل الإدراج من كبرى الصدرية على الجانب الأيمن بالقرب من الجانب الذيلية من القص باستخدام ملقط سفينة معلقا. كوى وقطع العضلات.
   4. قطع طريق رئيسي الصدرية على طول حرصه على القص. يكوي حواف قطع لضمان الارقاء.
   5. التالي تقويض الظهرية العريضة على نفس الجانب، والتي هي ورقة كبيرة من العضلات التي تغطي الجانب الوحشي من الفأرة. كوى وقطع هذه العضلات ومن ثم التراجع عن خفض نهاية cranially. وهذا قد يتطلب بعض كليلةتشريح.
      ملاحظة: الأضلاع الآن جلية والقلب قد يكون واضحا في بعض سلالات الفأر. في معظم الفئران، ودخول الصدر في النصف الذيلية من الفضاء وربي الرابع سيوفر سهولة الوصول إلى القلب. الفضاء وربي الرابع هو ثاني أكبر مساحة الذيلية.
   6. للدخول إلى صدره، واستخدام زوج من الملقط حادة لتشريح بعناية إلى الأسفل من خلال طبقات العضلات بين الضلوع.
   7. مرة واحدة وقد تم فتح الفضاء الجنبي، إدراج بعناية الموسعات سفينة ذات الرؤوس صريحا. باستخدام موسعات الأوعية لتوفير قوة التصاعدي لطيف على جدار الصدر، استخدم حادة مقص نهاية الربيع لشق بعناية ما تبقى من العضلات بين الضلوع.
   8. أولا قطع أفقيا، والحرص على عدم قطع الفص الرئة تحتها. بجانب توسيع شق إعلامي، ولكن البقاء 3-4 ملم الجانبي من خط الوسط لتجنب الشريان الثديي الداخلي.
      ملاحظة: الأوعية الداخلية الثديية موازية لعظمة القصويمكن أن يؤدي إلى فقدان ملحوظ للدم إذا قطع طريق الخطأ.
   9. بعناية يكوي قطع حافة العضلات بين الضلوع، وذلك باستخدام القطن الصغيرة يميل قضيب للفة الأنسجة أعلى للسماح للاتصال الكي مع قطع الأنسجة دون ملامسة الرئتين أو القلب.
   10. وضع المالحة غارقة القطن الصغيرة يميل قضيب من خلال شق لافتا نحو خط الوسط. توفير الجر التصاعدي لطيف لسحب جدار الصدر بعيدا عن الهياكل. تبدأ كية جدار الصدر على حافة وسطي من شق وتنتهي ≈ 1 سم الوحشي من خط الوسط على الجانب الأيسر.
   11. دفع قضيب إلى اليسار بحيث يكون دائما محل الطرف الكي.
   12. بمجرد أكتوي الأنسجة بدقة، واستخدام مقص لقطع بعناية من خلال القص. وينبغي أن تكون قمة القلب واضحة للعيان في هذه المرحلة.
   13. عن طريق تشريح حادة، وتعطيل التأمور والتعرف على الوريد الأجوف الذيلية.
   14. تحقق من وجود دليل على وجود نزيف وكوى عليه الآن. مرة واحدة وقد تم تناول جميع النزيف، وإزالة بعناية أي اللف، لوحة الكي التأريض، والمياه المالحة غارقة الشاش.
7. وضع قسطرة الوريد الوداجي
   1. ربط القسطرة في الخطوة 1.6.2 إلى حقنة تحتوي على 10٪ الألبومين عن طريق الانزلاق بعناية الأنبوب على إبرة قياس 30.
   2. يبدأ غرس الزلال عن طريق القسطرة.
   3. توجيه القسطرة بحيث إبرة تقع على حبل الوريد من تلقاء نفسها، مع الإبرة شطبة تصل. إذا لزم الأمر، واستخدام حامل إبرة لتدوير إبرة في أنابيب لنقل شطبة إلى التوجه السليم.
   4. عندما القسطرة يتم مسح بالكامل وقف ضخ.
   5. فهم إبرة القسطرة مع ملقط. مع جهة أخرى، واستخدام ملقط الأنسجة لسحب الغدة اللعابية للسماح التصور من حبل الوريد. تطبيق الجر لطيف إلى الأنسجة المحيطة الوداجي القاصيالوريد خلق التوتر على جدار الوعاء الدموي. باستخدام زاوية الضحلة النهج، إدراج بعناية الإبرة في الوريد. دفع رأس الإبرة 3-4 ملم في الإناء.
   6. قبل الافراج عن إبرة القسطرة تأمين أنابيب القسطرة مع قطعة من الشريط، وهذا سوف يحد من أي حركة إبرة أفرجت مرة واحدة.
   7. الافراج عن إبرة وسحب بلطف مرة أخرى على المكبس حقنة لتأكيد أن القسطرة في التجويف للسفينة، من خلال وضع تصور الدم في الخط.
   8. مرة واحدة في وضع آمن بشكل صحيح القسطرة مع الغراء الجراحية إرفاق الإبرة إلى الغدد اللعابية الأساسية.
   9. حساب الحجم الكلي لأن أكسب. إذا لم يكن هناك فقدان الدم كبيرة وبلغ حجم التداول 5 ميكرولتر / غرام من وزن الجسم سوف يكون كافيا. إذا كان هناك فقدان الدم كبيرة غرس 6-6،5 ميكرولتر / ز قد تكون مطلوبة. ضبط معدل تدفق مثل هذا التسريب كله سيكون في كامل 10-15 دقيقة.
8. PV القسطرة التنسيب فيالبطين الايسر
   1. أثناء إجراء العمليات الجراحية المذكورة أعلاه، وضع القسطرة الكهروضوئية في حقنة تحتوي على محلول ملحي للسماح لها تتوازن.
   2. فقط قبل وضعها، نقل حقنة والقسطرة بجانب الماوس. مع طرف القسطرة تقريبا في نفس الارتفاع القلب، الصفر قراءة ضغط.
   3. باستخدام المياه المالحة غارقة القطن الصغيرة يميل قضيب، والمناورة القلب للسماح التصور للقمة.
   4. باستخدام إبرة قياس 25، وجعل شق طعنة أقرب إلى مركز للقمة ممكن.
   5. بعد إزالة الإبرة، وبسرعة إدراج القسطرة من خلال شق. لأنها لا تأخذ الكثير من القوة لادخال القسطرة، لذلك التحلي بضبط النفس عند دفع قسطرة في البطين. في بعض الأحيان يكون من الضروري إجراء شق طعنة إضافية. إذا كان ذلك ضروريا، في محاولة لإجراء شق لاحق بالقرب من المكان الأول للحد من الأضرار التي لحقت القلب.
      ليسالبريد: بمجرد تقدم قسطرة في البطين وضع النهائي هو في غاية الأهمية. سوف تتبع الضغط البطيني يكون واضحا من خلال الضغط المنخفض الانبساطي (<10 مم زئبق)، وضغط الدم الانقباضي العالي (> 80 مم زئبق عند هذه النقطة). من الناحية المثالية، سوف تركز القسطرة في البطين مع الأقطاب الخارجية فقط داخل البطين. تعديلات دقيقة في موقف القسطرة يمكن أن يؤديها من خلال مراقبة البيانات PV-حلقة، وتبحث عن تعقب على شكل مربع مع ≈ زوايا 90 درجة بين الجانبين.

3. التفاصيل الإجرائية

ملاحظة: مرة واحدة القسطرة في مكان فترة استقرار قصيرة (10-15 دقيقة) هو ضروري للسماح للحيوان للتعافي من بعض الإجهاد الجراحي الحاد ولإتاحة الوقت لضخ السوائل. بعد هذه الفترة الاستقرار بروتوكول الفعلي يمكن أن تبدأ.

1. مرة واحدة يتم وضع القسطرة الكهروضوئية وتوقف التلاعب الجراحية،رفض والأيزوفلورين إلى ≈ 1٪ كما قلل من الحاجة إلى طائرة الجراحية العميقة من التخدير.
   1. خلال هذه الفترة، ترصد بدقة الماوس لضمان الحفاظ على مستوى مناسب من التخدير. تقييم أي حركة بعناية. حركة عضلات الجهاز التنفسي يشير الى مستوى من نقص التهوية ويمكن معالجتها عن طريق زيادة معدل التنفس من التنفس الصناعي. حركة الأطراف أو حركة الشوارب هي دلائل على أن الفأر هو الحصول خفيفة جدا ويتطلب المزيد من مخدر.
      ملاحظة: هناك مجموعة متنوعة واسعة من التباديل من العلاجات التي يمكن استخدامها في تركيبة مع هذا البروتوكول. وكثير من هذه العلاجات تتطلب ضخ المخدرات. ومن الضروري لإدارة حجم القتلى في الفضاء على نحو فعال. مفاتيح الحل لا يمكن أن يتحقق عن طريق تحريك أنبوب القسطرة من إبرة واحدة ضخ حقنة إلى أخرى. القيام بذلك قبل نهاية ضخ سابق قريبا يسمح للأنابيب القسطرة ليتم تحميلهامع المخدرات القادمة. ومن الضروري معرفة حجم داخل أنابيب القسطرة لتحديد توقيت التبديل الحل. إدخال فقاعة الهواء الصغيرة في خط يسمح توقيت دقيق للالتبديل ضخ يتم تحديده لاحقا. هذه الفقاعة التي غرست في الدورة الدموية الوريدية جيد التحمل.
2. تغيير ظروف التحميل من القلب عن طريق خفض التحميل المسبق وزيادة بعد التحميل.
   1. تقليل التحميل المسبق من خلال منع عودة الوريدي إلى القلب. في هذا الإعداد، تصور وانسداد الوريد الأجوف الذيلية لأنها تمر من الحجاب الحاجز للقلب. تنفيذ هذا الانسداد بشكل سلس وسريع نسبيا، لن تطول أكثر من 2-3 ثانية. زيادة اليسرى بعد التحميل البطين عابر طريق إجراء ضغط البطن لطيف دائم 1-2 ثانية.
   2. خلال هذه التغييرات في تحميل من القلب، وقفة التنفس للقضاء على أي قطعة أثرية قدمه جهاز التنفس الصناعي.
3. معايرة إشارة الصوت باستخدام الالبريد القسطرة تصرف. هذه الإجراءات ليست ضرورية مع القسطرة باستخدام التكنولوجيا القبول.
   1. بعد بروتوكول تجريبي حقن 5-10 ميكرولتر من محلول ملحي مفرط التوتر (20٪ كلوريد الصوديوم) لحساب تصرف الموازي.
   2. جمع الدم عن طريق إزالة القسطرة وسحب الدم من البطين الأيسر إلى حقنة heparinized. وضع هذا الدم إلى cuvettes من حجم المعروفة واستخدام القسطرة لقياس تصرف.
   3. استخدام التدابير كفيت تصرف لتحويل إشارة تصرف لحجم وتصرف مواز ضروري لتحديد حجم مطلق تقاس القسطرة.
4. وبمجرد أن البروتوكول هو كاملة، الموت ببطء الماوس عن طريق إزالة القلب بعد transection من الوريد الأجوف والمرفقات الأبهري.

النتائج

المتعارف عليه أن يتم رسم وحدة التخزين على المحور السيني والضغط على Y-محور كما في الشكل 1. الحلقات حجم الضغط الناجم عن الضغط بالتآمر ضد وحدة التخزين يجب أن تشبه المستطيل، الحواف العمودية تمثل التغييرات isovolumic في الضغط (أي، عندما يتم إغلاق كل من الصمام التاجي والصمام الأورطي). ويمثل الخط الأفقي السفلي البطين ملء عبر الصمام التاجي والجزء الأفقي العلوي يمثل البطين تفريغ من خلال الصمام الأبهري. في الضغوط البطين صحي النوع ال...

المناقشة

هناك ثلاث خطوات حاسمة في هذا الإجراء: 1) وضع الأنبوب الرغامي والتهوية المناسبة، 2) وضع القسطرة الرابع الوريد، و3) تحديد المكان المناسب للقسطرة الكهروضوئية في البطين الأيسر. تحديد معدل التنفس المناسب هو جزء مهم من تقديم الدعم التنفس الصناعي. الفئران واعية عموما الحفاظ على التهوية السنخية مع الأنفاس الضحلة السريع. بصفة عامة، فإن الفئران التهوية لديها كميات المد والجزر أكبر من ذلك بكثير. وبالتالي لا بد من معدل التنفس أبطأ. هذا أمر مهم لأن تهوية ضئيلة جدا سوف يؤدي إلى الحماض التنفسي و...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
Dumont 5/45 (2)	أدوات العلوم الدقيقة	11251-33
ملقط توسيع الوعاء	أدوات العلوم الدقيقة	18153-11
Castroviejo Micro Dissecting Spring Scissor	Roboz Instruments	RS-5668
ملقط ثماني - أدوات العلوم الدقيقة مسننة / منحنية		11041-08
ملقط ثماني - مسننة / مستقيمة	أدوات العلوم	11040-08
مقص التشريح - أدوات العلوم الدقيقة ذات الشفرة الثقيلة		14082-09
الشريط الجراحي Transpore	3M	1527-1
3-0 خياطة الحرير	أدوات العلوم الدقيقة	18020-30
جهاز التنفس	TOPO كينت العلمي	TOPO
Martin ME 102 وحدة الجراحة الكهربائية	جهاز	هارفاردPY2 72-2484
مضخة حقنة	Lucca Technologies	GenieTouch
مجهر مجسم مع حامل ذراع الرافعة	نيكون	SMZ-800N
ميزان حرارة	مزدوج كول بارمر	EW-91100-40
T / مضخة إعادة تدوير الماء الدافئ	كينت Scientific	TP-700
ADVantage نظام ضغط وحجم	عبر الصوت	ADV500
الحصول على البيانات وتحليلها	DSI	Ponemah ACQ-16