تصف هذه المخطوطة بروتوكولا بسيطا وقابلا للتكرار لعزل الشرايين داخل المخ (مجموعة من الأوعية الدموية تشمل الشرايين المتني والشرايين المخترقة والشرايين قبل الشعيرات الدموية) من الفئران ، لاستخدامها في تصوير عضل الضغط ، والتألق المناعي ، والكيمياء الحيوية ، والدراسات الجزيئية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
العزلة وكيفية تركيب الكانيولا من الشلل متني الشرايين
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الشرايين متني داخل المخ (PAS)، والتي تشمل الشرايين متني، الشرايين اختراق والشرايين قبل الشعيرات الدموية، والأوعية الدموية مقاومة عالية تتفرع من الشرايين والشرايين حنوني والغوص في لحمة الدماغ. الفردية السلطة الفلسطينية يروي أرض أسطواني منفصلة من لحمة والخلايا العصبية الموجودة داخل. هذه الشرايين هي لاعب رئيسي في تنظيم تدفق الدم الدماغي سواء على الصعيد العالمي (تنظيم ذاتي الدماغية) ومحليا (احتقان وظيفي). المناطق المحمية هي جزء من وحدة وعائية عصبية، هيكل الذي يطابق تدفق الدم الإقليمي في النشاط الأيضي في الدماغ وتشمل أيضا الخلايا العصبية، interneurons والخلايا النجمية. نضح من خلال المناطق المحمية يرتبط ارتباطا مباشرا على نشاط الخلايا العصبية في تلك المنطقة خاصة والزيادات في الصدارة استقلاب الخلايا العصبية إلى زيادة في التروية المحلية الناجمة عن اتساع تغذية السلطة الفلسطينية. تنظيم المحمية يختلف من تميز أفضلالشرايين حنوني. تضيق الأوعية التي يسببها ضغط أكبر في المناطق المحمية وآليات توسيع الاوعيه الدمويه تختلف. وبالإضافة إلى ذلك، لا المحمية لا تتلقى تعصيب خارجي من الأعصاب المحيطة بالأوعية - تعصيب هو جوهري وغير المباشر في الطبيعة من خلال الاتصال مع endfeet نجمي الخلايا. وهكذا، البيانات المتعلقة تنظيم مقلص التي تراكمت الدراسات التي تستخدم الشرايين حنوني لا يترجم مباشرة لفهم وظيفة السلطة الفلسطينية. وعلاوة على ذلك، فإنه لا يزال غير معروف كيف الحالات المرضية، مثل ارتفاع ضغط الدم ومرض السكري، وتؤثر على بنية السلطة الفلسطينية والتفاعل. هذه الفجوة المعرفية هي في جزء منه نتيجة للصعوبات التقنية المتعلقة عزل السلطة الفلسطينية وإقناء؛ إدخال القنية. في هذه المخطوطة نقدم بروتوكول لعزل وإقناء؛ إدخال القنية من المناطق المحمية القوارض. وعلاوة على ذلك، وتبين لنا أمثلة من التجارب التي يمكن القيام بها مع هذه الشرايين، بما في ذلك انقباض الناجم عن ناهض للتفاعل عضلي. على الرغم من أن التركيز على هذه المخطوطة على إقناء؛ إدخال القنية السلطة الفلسطينية وتخطيط العضل الضغط وعزل السلطة الفلسطينيةالصورة يمكن أن تستخدم أيضا لدراسة الكيمياء الحيوية، والفيزيائية الحيوية والجزيئية والتصوير.
المقدمة
وينظم الدورة الدموية الدماغية على نحو فريد لدعم مطالب التمثيل الغذائي للخلايا العصبية المركزية، والخلايا التي حدت من مخازن الطاقة وبالتالي فهي حساسة جدا للتغيرات في ضغط الأكسجين وتوريد المواد الغذائية الضرورية. كما معينة القطعان العصبية تصبح نشطة عندما يتم تنفيذ مهام محددة، والأوعية الدموية يعزز زيادة موضعية شديدة في نضح لمنع نقص الأكسجة المحلي واستنزاف المواد الغذائية 1. هذا هو شكل من أشكال احتقان وظيفي المعروفة باسم اقتران الوعائية العصبية، وتعتمد على حسن سير العمل في وحدة وعائية عصبية، يتكون من الخلايا العصبية نشطة، النجمية، والشرايين الدماغية 2. الشرايين متني داخل المخ، مجموعة من الأوعية الدمو....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. قنية وإعداد غرفة
- إدراج الشعيرات الدموية الزجاج البورسليكات نظيفة (القطر الخارجي: 1.2 مم؛ القطر الداخلي: 0.69 ملم و 10 ملم في الطول) في الأخاديد من مجتذب ماصة مع خيوط البلاتين (القطر: 100 ميكرون).
- باستخدام الإعدادات المناسبة، وسحب الشعرية لتوليد قنية مع طرف طويلة ورقيقة (الشكل 2) باستخدام مجتذب micropipette. الإعدادات المستخدمة هي: الحرارة - 700، سحب - 100، السرعة - 50، الزمان - 10.
- إدراج قنية في حامل من غرفة الضغط مخطاط ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ويبين الشكل 5A انقباض تمثيلية من المناطق المحمية الماوس إلى 60 ملي بوكل ACSF لتقييم سلامة إعداد. يجب المحمية تقليص الفترة ما بين 15 - 30٪ في ظل وجود 60 ملي بوكل. إذا كان انقباض هو أقل من 15٪، تجاهل السلطة الفلسطينية ويقني؛ يدخل القنية واحد آخر، لأنه يشير إلى أن شرين تضررت أثناء عملية العزل وإقناء؛ إدخال القنية.
ويوضح الشكل .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الشرايين متني الدماغية هي الشرايين مقاومة عالية مع قليل من مفاغرة والفروع التي يروي السكان العصبية واضح. هذه الأوعية الدموية المتخصصة لاعبين المركزي في تنظيم ذاتي الدماغية واقتران الوعائية العصبية من خلال بوساطة نجمية توسع الأوعية 1. وقد عرف أهمية هذه الأوعية الدموية المتخصصة في أمراض الأوعية الدموية الدماغية لحوالي 50 عاما، عندما وصف العمل الرائد الدكتور ميلر فيشر التعديلات الهيكلية في الشرايين متني داخل أراضي عوائق الجوبي في أدمغة مرضى ارتفاع ضغط الدم بعد الوفاة
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
بتمويل من NHLBI R01HL091905 (SE) ، ومنحة أبحاث CADASIL لمؤسسة حثل الكريات البيضاء المتحدة (FD) و AHA 15POST247200 (PWP). يود المؤلفون أن يشكروا سامانثا ب. أهتشاي على تقديم الصورة في الشكل 1 ، والدكتور جيري هيريرا ، دكتوراه ، لتقديم تعليقات نقدية على المخطوطة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
Isolation / Cannulation < / strong> أنظمة أجهزة التحكم في الضغط أنظمة أنظمة وحدة
< td colspan = "4" >
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوي>السائل الدماغي الشوكي الاصطناعي< / قوي> | |||
| كلوريد الصوديوم | فيشر Scientific | S-640 | |
| KCl | فيشر Scientific | P217 | |
| MgCl اللامائي | سيجما ألدريتش | M-8266 | |
| NaHCO3< / sub> | فيشر Scientific | S233 | |
| NaH 2< / sub>PO4< / sub> | Sigma-Aldrich | S9638 | |
| D- (+) - الجلوكوز | سيجما - ألدريتش | G2870 | |
| CaCl 2< / sub> | Sigma-Aldrich | C4901 | |
| ألبومين مصل الأبقار | Sigma-Aldrich | A9647 | |
| مجهر ستيريو | أوليمبوس | SZX7 | |
| ملقط فائق الدقة | أدوات العلوم الدقيقة | 11252-00 | |
| Vannas Spring مقص | أدوات العلوم الدقيقة | 15000-00 | |
| Wiretrol 50 & mu ؛ ل | VWR العلمي | 5-000-1050 | |
| 0.2 & مو ؛ m مرشح حقنة معقمة | VWR Scientific | 28145-477 | |
| Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-97 | |
| زجاج البورسليكات OD: 1.2 مم ، معرف: 0.68 مم | Sutter Instruments | B120-69-10 | |
| المعيشة | الخيط النايلون الأخضر الداكن | THR-G | |
| المحاذاة الخطية أنظمة المعيشة غرفة السفينة الواحدة | أجهزة | CH-1-LIN | |
| مع المضخة التمعجية | أنظمة المعيشة الأجهزة | PS-200 | |
| محلل أبعاد الفيديو | المعيشة الأجهزة | VDA-10 | |
| مسجل رباعي القنوات مع برنامج التسجيل والتحليل | المعيشة أجهزة | DAQ-IWORX-404 | |
| التدفئة | وارنر إنسترومنتس | 64-0102 | |
| جهاز التحكم في درجة الحرارة الأوتوماتيكي | وارنر إنسترومنتس | TC-324B |
المراجع
- Dunn, K. M., Nelson, M. T. Neurovascular signaling in the brain and the pathological consequences of hypertension. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 306, H1-H14 (2014).
- Iadecola, C. Neurovascular regulation in the normal brain and in Al....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
